食管黏膜上皮癌变过程中hMLH1的表达及意义

目的探讨hMLH1在食管黏膜上皮癌变过程中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测正常食管黏膜上皮及食管不同病变组织中hMLH1表达情况,并分析其与临床病理参数的相关性。结果食管鳞癌组织中hMLH1蛋白阳性表达率(14.29%)显著低于正常食管黏膜(95.00%)、非典型增生(71.43%)和原位癌(68.00%),组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。hMLH1阳性表达率与肿瘤的分化程度密切相关(P<0.001)。结论hMLH1蛋白异常表达与食管鳞状上皮癌变有关,并可能为一种早期事件。     

hMLH1和Bax基因在食管不同病变组织中的表达及意义

目的探讨Bax基因及错配修复基因hMLH1在食管不同病变组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法,检测正常食管黏膜上皮及食管不同病变组织中hMLH1和Bax的表达情况,并与临床病理参数作相关性分析。结果hMLH1在食管鳞状细胞癌中的阳性表达率显著低于正常食管黏膜组织、非典型增生组织和原位癌组织(P<0.05)。Bax在食管原位癌和食管鳞癌组之中的阳性表达率显著高于正常食管黏膜(P<0.05)。hMLH1和Bax在食管癌中的表达有明显相关性(P<0.05)。结论hMLH1基因突变与食管鳞状上皮癌变有关;Bax基因突变可能与食管鳞癌浸润有关。     

蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2基因的克隆、表达及活性鉴定

【目的】获取人蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2（PTP4A2）基因并高效表达纯化,对于产物的体外活性进行测定。【方法】用RT-PCR技术,从肝癌细胞系HepG2的总RNA中,获得编码PTP4A2基因功能片段的DNA。测序后,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达载体,并导入大肠杆菌E.coliBL21中,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白。对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化,western印记进行鉴定,质谱检测蛋白分子量。通过其对底物磷酸多肽的去磷酸化反应,鉴定其活性。【结果】获得编码肝癌细胞PTP4A2（全长氨基酸）的基因序列,测序结果与已发表的基因序列相一致。重组GST融合蛋白经western分析,在相对分子质量Mr=45000处,有特异的蛋白条带。重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,质谱检测其分子量为45470.6。底物多肽去磷酸化反应表明纯化产物具有较强活性。【结论】成功克隆人PTP4A2基因,并在E.coliBL21中高效表达,亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白,质谱检测分子量与预期结果一致,纯化产物具有蛋白磷酸酯酶活性。     

喉鳞癌中三磷酸腺苷酶家族蛋白2、抗磷酸化致癌基因和张力蛋白同源的磷酸酶基因的表达及意义

目的：检测喉鳞癌中三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)、抗磷酸化致癌基因(C-MYC)和张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)的表达,分析其临床价值。方法收集2012年3月~2014年2月经宁波市鄞州第二医院诊断并行喉鳞癌根治术的患者99例,选择术中留取的癌组织标本作为观察组,选择其中78例患者癌旁正常组织标本为对照组。采用免疫组化检测二组中ATAD2、C-MYC和PTEN的表达。结果观察组中ATAD2(63.64%比12.82%)和C-MYC(70.71%比16.67%)表达的阳性率明显高于对照组,PTEN的表达明显低于对照组(20.20%比82.50%),差异有高度统计学意义(P<0.01)。观察组中ATAD2、C-MYC和PTEN表达的阳性率与肿瘤体积、淋巴结转移、脉管浸润和Ki67的表达有关(P<0.05)。相关性分析显示观察组中ATAD2与C-MYC的表达呈正相关(r=0.43,P<0.05),ATAD2与PTEN的表达呈负相关(r=-0.46,P<0.05)。结论喉鳞癌组织中ATAD2、C-MYC高表达、PTEN低表达,对肿瘤的发生和进展有促进作用,ATAD2与C-MYC、PTEN可能具有一定的协同作用。     

口腔黏膜癌变过程中细胞周期素E蛋白表达及意义

目的: 了解细胞周期素E(Cyclin E)蛋白在口腔黏膜癌变过程中表达变化,探讨Cyclin E在口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生发展中的意义.方法: 正常口腔黏膜12例、不同程度上皮异常增生组织35例、不同分化口腔鳞状细胞癌69例,石蜡包埋组织.采用免疫组织化学方法检测Cyclin E蛋白表达,分析其在口腔黏膜癌变过程中的变化趋势及意义.结果: Cyclin E蛋白在正常口腔黏膜上皮无表达,但从轻度上皮异常增生组织开始出现Cyclin E蛋白阳性表达;Cyclin E在上皮异常增生组织中的阳性表达率42.86%(15/35),在OSCC的阳性表达率为65.22%(45/69),两组间差异有统计学意义(χ2=4.757,P＝0.029).Cyclin E阳性表达率及表达强度随上皮异常增生程度的增加及肿瘤分化程度的降低而增加,二者存在正相关关系(r＝0.409,P＜0.01).但Cyclin E蛋白表达与OSCC淋巴结转移、远处转移以及肿瘤临床分期无关(P＞0.05).结论: Cyclin E蛋白表达高调是口腔黏膜癌变过程中的早期事件,并可能与OSCC发生发展进程有关,但Cyclin E蛋白表达尚不能作为反映OSCC生物学特征有价值的标记物.     

磷酸酶及张力蛋白同源基因蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及其临床意义.方法 收集30例OSCC及30例距癌组织边界＞2 cm的癌旁组织,Western blot测定上述组织PTEN蛋白含量,qRT-PCR测定mRNA的表达水平,免疫组化(immunohistochemistry,IHC)定性测定PTEN蛋白在上述组织细胞中的组织学定位与表达情况,并根据PTEN表达结果分析其与OSCC临床病理关系.结果 ①癌旁组织均为PTEN蛋白阳性表达,PTEN蛋白阳性表达主要为细胞浆内棕黄色或棕褐色染色.OSCC组织多为阴性表达.②OSCC癌组织中PTEN(蛋白和mRNA)的表达明显低于2 cm外的癌旁组织(P＜0.05).③不同年龄、不同性别、不同发生部位OSCC的PTEN(蛋白和mRNA)表达差异无统计学意义(P＞0.05).④PTEN在高分化鳞癌中的表达明显较中低分化鳞癌高(P＜0.05).⑤无淋巴转移的较有淋巴转移的表达高(P＜0.05).⑥临床Ⅰ+Ⅱ期表达明显高于Ⅲ+Ⅳ期(P＜0.05).结论 PTEN在OSCC癌组织中存在不同程度的异常表达,可能是口腔鳞癌发生、发展、侵袭转移过程中的一个重要因素.     

p53基因蛋白在食道正常上皮及增生、癌变后表达的观察

目的：探讨p53蛋白在食管癌组织发生中表达的意义。方法：应用免疫组织化学技术检测72例食管鳞状上皮癌，19例增生鳞状上皮及17例正常食道鳞状上皮中p53蛋白的表达。结果：p53在食管癌组织中的阳性率为47.95%(35/72)，在增生鳞状上皮中的阳性率为36.84%(7/19)，在正常食道鳞状上皮中的阳性率为5.88%(1/17)，正常组与增生组和癌变组比较均有显著性差异（P＜0.05)。p53蛋白与癌的分化程度、淋巴结有无转移和浸润深度等指标均无明显关系。结论：p53蛋白与食管癌的发生、发展有关。     

PTEN、Rb基因蛋白在乳腺癌中的表达及其意义

目的:探讨张力蛋白同源物磷酸酯酶(PTEN)、视网膜母细胞瘤(Rb)基因蛋白异常表达在乳腺癌发生、发展中的作用及其意义。方法:应用免疫组织化学S-P法检测PTEN、Rb基因蛋白在150例乳腺癌标本及30例乳腺良性增生性病变中的表达,并分析其异常表达与乳腺癌若干临床病理参数的关系。结果:PTEN、Rb基因蛋白在乳腺癌组与乳腺良性病变组异常表达差异均有统计学意义(P<0.005)。PTEN基因蛋白的失表达与乳腺癌淋巴结转移、雌激素受体(ER)失表达有一定关系(P<0.05)。Rb基因蛋白的失表达与各临床病理参数均无关,只是在乳腺癌Ⅲ级中失表达率较高。ER的表达与Rb蛋白的表达具有相关性(P<0.05)。结论:PTEN、Rb基因蛋白在乳腺良性病变中有很高的表达率,在乳腺癌中表达率下降,表明其肿瘤抑制功能丧失,促进细胞的肿瘤性转化。PTEN蛋白的表达与淋巴结转移、ER失表达相关,对乳腺癌的预后判断有参考价值。     

蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2基因的克隆、表达及活性鉴定

 【目的】获取人蛋白酪氨酸磷酸酯酶4A2（PTP4A2）基因并高效表达纯化,对于产物的体外活性进行测定。【方法】用RT-PCR技术,从肝癌细胞系HepG2的总RNA中,获得编码PTP4A2基因功能片段的DNA。测序后,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达载体,并导入大肠杆菌E.coliBL21中,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白。对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化,western印记进行鉴定,质谱检测蛋白分子量。通过其对底物磷酸多肽的去磷酸化反应,鉴定其活性。【结果】获得编码肝癌细胞PTP4A2（全长氨基酸）的基因序列,测序结果与已发表的基因序列相一致。重组GST融合蛋白经western分析,在相对分子质量Mr=45000处,有特异的蛋白条带。重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,质谱检测其分子量为45470.6。底物多肽去磷酸化反应表明纯化产物具有较强活性。【结论】成功克隆人PTP4A2基因,并在E.coliBL21中高效表达,亲和层析后获得高纯度GST融合蛋白,质谱检测分子量与预期结果一致,纯化产物具有蛋白磷酸酯酶活性。     

食管癌组织中p16基因蛋白表达的意义

目的：了解多肿瘤抑制基因p16蛋白在人食管癌组织中的表达情况。方法：应用免疫组化SP法检测53例食管癌及相应癌远端正常组织中p16蛋白的表达。结果：食管癌及相应正常组织中p16蛋白表达阳性率分别为54．3％（24／53）和88．7％（47／53）（P＜0．05）;p16蛋白表达与食管癌组织学分级及淋巴结转移有关;与食管癌组织浸润深度无关。结论：p16基因蛋白的表达情况与食管癌的发生、发展有关,可作为临床诊断及判断恶性程度、估计预后的辅助指标。     

黏着斑激酶、磷酸酶和张力蛋白同源缺失基因在脑胶质瘤中的表达及相关性研究

目的：明确黏着斑激酶（FAK）和第十号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失基因（PTEN）在脑胶质瘤组织中的表达变化,以及与肿瘤的发生、侵袭性生长和临床病理学特征的关系.方法：应用EliVision免疫组织化学方法检测FAK、PTEN在6例正常脑组织及54例各级脑胶质瘤中的表达情况.结果：FAK在脑胶质瘤中的表达总阳性率为66.67%,其中Ⅰ～Ⅱ级为35.00%,Ⅲ级为81.25%,Ⅳ级为88.89%,Ⅰ～Ⅱ级阳性率均低于Ⅲ级和Ⅳ级（P〈0.01）,而Ⅲ级和Ⅳ级差异无统计学意义（P〉0.05）.PTEN在脑胶质瘤中总阳性率46.30%,其中Ⅰ～Ⅱ级为75.00%,Ⅲ级为 31.25%,Ⅳ级为27.78%.Ⅰ～Ⅱ级阳性率均高于Ⅲ级和Ⅳ级（P〈0.01）,而Ⅲ级和Ⅳ级差异无统计学意义（P〉0.05）.PTEN与FAK在脑胶质瘤中的表达呈负相关关系（P〈0.01）.结论：FAK的阳性率随着脑胶质瘤病理级别的增加而增加,而PTEN的阳性率随着脑胶质瘤病理级别的增加而降低.同时分析二者在肿瘤细胞中的表达,有助于判断脑胶质瘤的病理学分级、预后,以及进一步指导临床治疗.     

磷酸酶基因CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌中的表达

目的探讨磷酸酶基因（PTEN）CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达。方法应用甲基化特异性聚合酶链式反应检测32例BTCC和癌旁正常组织标本中PTEN基因启动子区甲基化状态,逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹法检测其mRNA和蛋白表达水平。结果PTEN基因在BTCC组织中甲基化率为65．6％,随着肿瘤分级、分期的增加,甲基化水平逐渐升高,而在正常膀胱组织中未发现甲基化。PTENmRNA和蛋白表达在正常组织和BTCC组织中分别为93．8％、62．5％和15．6％、6．3％,差异有统计学意义（P〈0．01）。在21例启动子异常甲基化的BTCC组织标本中,19例伴有PTEN基因表达缺失或下调,两者之间存在明显负相关（r=--0．564,P〈0．01）。结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其mRNA和蛋白表达减少甚至缺失,是膀胱癌发生、发展的原因之一。     

Skp2蛋白和PTEN蛋白在子宫内膜疾病中的表达及相关性研究

目的 探讨Skp2和PTEN在子宫内膜组织中的表达及其在子宫内膜癌发生、发展过程中的作用及两者的关系.方法 采用免疫组织化SP法检测42例子宫内膜癌、35例子宫内膜不典型增生,23例复杂性增生及15例正常内膜中Skp2蛋白和PTEN蛋白的表达情况,并分析两者的相关性.结论 子宫内膜癌中Skp2蛋白表达水平显著高于正常子宫内膜、复杂增生及不典型增生的子官内膜,差异有显著性(P<0.05);PTEN蛋白的表达完全相反,且二者的表达呈负相关.结论Skp2蛋白和PTEN蛋白在子宫内膜癌的发生、发展中发挥重要作用,Skp2和PTEN的联合检测有助于判断子宫内膜癌的恶性程度和预后.     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对涎腺腺样囊性癌中PTEN基因表达的影响

目的:研究5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dc)对涎腺腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞中抑癌基因第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homology deleted on ...     

抑癌基因PTEN在泌尿系肿瘤发生发展中的作用

第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)具有磷酸酶活性及抑癌活性。PTEN的突变缺失是包括泌尿系肿瘤等各种肿瘤发生发展的基础。研究显示,由于PTEN的突变、缺失而丧失抑癌作用而致肾癌、膀胱癌、前列腺癌的发生,揭示了PTEN具有抑制泌尿系肿瘤发生的作用。但是,PTEN抑癌作用及丢失、突变的一些具体过程还不是很清楚,有待进一步的明确。     

PTEN、P27在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的:探讨抑癌基因PTEN与细胞周期调控因子P27在子宫内膜癌中的表达,探讨其临床意义。方法:采用免疫组化法对正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生各20例,子宫内膜癌50例及子宫内膜癌旁组织50例中PTEN及P27的表达进行检测。结果:PTEN在正常子宫内膜、子宫内膜增生过长、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌旁组织及子宫内膜癌中阳性表达率逐渐下降,P27在子宫内膜癌中阳性率为34%。PTEN、P27皆与组织学分级有关(P<0.01)。结论:PTEN基因失活和P27蛋白缺乏参与了子宫内膜癌的发生、发展,而且与癌细胞的分化有关。     

PTEN和Notch1在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物（PTEN）和Notch1在结直肠癌的发生、发展中的作用和机制以及二者的相互关系.方法：采用免疫组织化学法检测60例结直肠癌和30例癌旁非肿瘤性组织PTEN和Notch1表达,分析其与临床病理指标的关系及二者的相关性.结果：结直肠癌组织中PTEN蛋白阳性率为58.3％,明显低于正常结直肠组织的6.7％（P＜0.01）,且在分化程度、Dukes临床分期、浆膜浸润和淋巴结转移间差异均有统计学意义（P＜0.05）.结直肠癌组织中Notch1的阳性率为45.0％,明显高于正常结直肠组织的6.7％（P＜0.05）,且在分化程度、Dukes临床分期、浆膜浸润和淋巴结转移间差异均有统计学意义（P＜0.05）.结直肠癌组织中PTEN与Notch1表达呈负相关（P＜0.05）.结论：PTEN与Notch1的表达失调可能与结直肠癌的发生、发展相关,对PTEN和Notch1表达水平的联合检测可为早期发现和临床治疗结直肠癌提供理论依据.     

PTEN蛋白在前列腺癌中的表达及意义

目的 研究前列腺癌PTEN蛋白的表达及其与肿瘤转移、分级及分期的关系。方法 采用抗PTEN的多克隆抗体免疫组织化学技术染色法(Envision法)研究35例前列腺癌组织切片。结果 35例前列腺癌中有8例(22．9％)呈不同程度的阳性表达。转移者的PTEN表达率(5．9％)明显低于非转移者(38．9％，P＜0．01)；在A、B期的表达率明显高于C、D期(P＜0．05)；高、中分化组间表达率的差异虽无显著性，但高分化与低分化、中分化与低分化间PTEN阳性表达率的差异有显著性(P＜0．05)。PTEN蛋白在良性组织上皮细胞及肿瘤细胞胞质中表达，在胞核及基质中不表达，在癌旁增生组织上皮细胞中呈强弱不等的阳性表达。结论 PTEN可作为良好的前列腺癌进展的肿瘤标记物。