黄芪提取物对支气管哮喘小鼠气道阻力 及肺功能的影响及其机制

〔摘 要〕 目的：研究黄芪提取物对支气管哮喘小鼠气道阻力及肺功能的影响及其机制。 方法：采用卵清蛋白法建立支 气管哮喘 BALB/c 小鼠模型，分为低剂量黄芪提取物处理组（L-ASE 组，采用 5 mg·mL^-1 黄芪提取物灌胃）、高剂量黄芪 提取物处理组（H-ASE 组，采用 10 mg·mL^-1 黄芪提取物灌胃），选择建模成功支气管哮喘小鼠模型为模型组，选择正常 小鼠为对照组。检查并比较四组小鼠 2 min 咳嗽次数、特殊气道阻力（sRaw）、气道阻力（RI）、潮气量（TV）、每分钟 通气量（MV）、静态肺顺应性（Cst）、血清肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）、白细胞介素 -1β（IL-1β）、IL-6 水平差异。 结果：模型组小鼠 2 min 咳嗽次数、0 mg·mL^-1 、5 mg·mL^-1 、10 mg·mL^-1 、15 mg·mL^-1 浓度乙酰甲胆碱时 sRaw、RI、Cst、 血清 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平显著高于对照组，TV 和 MV 显著低于对照组，差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）。L-ASE 组和 H-ASE 组小鼠 2 min 咳嗽次数、0 mg·mL^-1 、5 mg·mL^-1 、10 mg·mL^-1 、15 mg·mL^-1 浓度乙酰甲胆碱时 sRaw、RI、 Cst、血清 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平显著低于模型组，TV 和 MV 显著高于模型组，差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）。H-ASE 组 2 min 小鼠咳嗽次数、0 mg·mL^-1 、5 mg·mL^-1 、10 mg·mL^-1 、15 mg·mL^-1 浓度乙酰甲胆碱时 sRaw、RI、Cst、血清 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平显著低于 L-ASE 组，TV 和 MV 显著高于 L-ASE 组，差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）。 结论：黄芪提取物可显著改善支气管小鼠气道阻力和肺功能，其机制可能与下调支气管哮喘小鼠炎症反应有关。     

藻酸双酯钠对类缺血再灌注神经元NF-κB表达的影响

 目的研究藻酸双酯钠对神经元类缺血再灌注损伤的NF-κB表达的影响。方法 利用免疫细胞化学法应用β-Tubulin及Gap-43对培养的皮质神经元进行鉴定，利用流式细胞仪对经藻酸双酯钠处理后的培养的类缺血再灌注损伤后的皮质神经元NF-κB表达情况进行研究。结果 ①在培养的神经元上β-Tubulin及Gap-43表达大概为80%左右；②再灌注30 min时，藻酸双酯钠浓度从0.01～0.1 mg·mL^-1时，检测的NF-κB阳性细胞比率明显增加，当藻酸双酯钠浓度达1 mg·mL^-1时，阳性细胞数明显减少。结论不同浓度的藻酸双酯钠对培养的小鼠皮质神经元在类缺血再灌注时NF-κB的表达有较大影响，小剂量时有促进作用，大剂量时有抑制作用。     

散结镇痛胶囊对小鼠子宫平滑肌收缩的影响及其机制研究＊

目的 研究散结镇痛胶囊（Sanjie Zhentong capsule,SJZTC）对小鼠子宫平滑肌收缩及钙离子的影响。方法 未孕小鼠皮下注射雌二醇5 mg·kg^-1,分离子宫置于装有20 mL乐氏液恒温浴槽中,给 1.0 g的负荷,待肌条自发收缩稳定后,采用加倍累加给药法（浓度分别为0.0625 mg·mL^-1、0.125 mg·mL^-1、0.25 mg·mL^-1、0.5 mg·mL^-1、1.0 mg·mL^-1）,观察SJZTC对子宫自发收缩及诱导剂（PGF_2α 1 mg·L^-1、Ach 1 μM、Oxytocin 5IU·L^-1、BayK8644 1 μM）引起子宫收缩的影响。培养子宫平滑肌细胞,观察SJZTC对缩宫素引起子宫平滑肌细胞钙离子释放的影响。结果 不同浓度SJZTC均能减小子宫自发收缩及诱导剂引起子宫收缩幅值,随着浓度的增加,对子宫收缩幅值抑制作用越明显;与溶媒组比较,SJZTC不同浓度组 （0.0625 mg·mL^-1、0.125 mg·mL^-1、0.25 mg·mL^-1、0.5 mg·mL^-1、1.0 mg·mL^-1）对子宫收缩幅值的抑制率均有显著差异（P < 0.01）。与模型组比较,SJZTC能显著抑制缩宫素诱导子宫平滑肌细胞内钙离子（P < 0.05或P < 0.01）含量。结论 SJZTC对小鼠子宫平滑肌收缩具有显著抑制作用,其机制与抑制钙离子释放有关。     

3种剂量9-硝基喜树碱大鼠单次灌胃给药后的药动学研究

 目的建立测定血浆中9-硝基喜树碱的反相高效液相色谱法,研究其在大鼠体内的药动学规律及特点。方法SD大鼠单次灌胃9-硝基喜树碱后于不同时间点自眼眶后静脉丛取血,用HPLC测定其血药浓度,用DAS(1.0)软件计算药动学参数。结果血药达峰浓度c_max随给药剂量的递增而递增(2 mg·kg^-1组为653.02 ng·mL^-1,3 mg·kg^-1组为832.9 ng·mL^-1,5 mg·kg^-1 组为2 731.15 ng·mL^-1),达峰时间t_max不随给药剂量增加而延长(2 mg·kg^-1组为0.32 h,3 mg·kg^-1组为0.45 h,5 mg·kg^-1组为0.3 h),药时曲线下面积AUC_0-∞随剂量递增而增加(2 mg·kg^-1组为856.49μg·h·L^-1,3 mg·kg^-1组为1 485.69μg·h·L^-1, 5 mg·kg^-1组为3 995.39μg·h·L^-1)。结论3种剂量9-硝基喜树碱大鼠单次灌胃后的药动学参数显示其在大鼠体内转化或消除均较快,呈一房室模型,药物的体内过程表现为线性药动学特征。     

回心草对脐静脉内皮细胞的保护作用及对分泌一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的:研究回心草水提取液及其含药血清对人脐静脉内皮活细胞数、内皮细胞一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NO合酶)的影响,探讨回心草抗动脉硬化的药理作用机制。方法:采用H₂O₂建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤模型。采用MTT法测定回心草提液对H₂O₂损伤的内皮细胞的吸光度(OD);采用经典Griess Reagent检测各剂量组细胞上清液中NO浓度,采用一氧化氮荧光检测探针DAF-FMDA(3-amino,4-aminomethyl-2′,7′-difluorescein,diacetate)检测细胞内NOS的活性。结果:H₂O₂12.5mmol·L^-1为最合适的细胞刺激浓度;回心草药液与H2O2损伤的血管内皮细胞共同孵育24h后,2.50mg·mL^-1、3.33mg·mL^-1浓度组与模型组比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);回心草水提液作用于内皮细胞,进行NO,NOS含量的测定,其中回心草2.50mg·mL^-1剂量组有显著作用(P<0.05)。结论:12.5mmol·L^-1的H₂O₂作用24h,可成功建立内皮细胞氧化应激损伤模型;回心草水提液直接作用于H₂O₂损伤的内皮细胞,2.50,3.33mg·mL^-1两个浓度组可以减轻内皮细胞的损伤;回心草2.50mg·mL^-1可增加NOS活性,促进NO的分泌。     

凝血酶时间法的改进及对四物汤类方筛选研究

目的:改进凝血酶时间(TT)法,使其更适合体外凝血酶抑制剂筛选。并用此方法测定比较四物汤类方及方中代表性成分的抗凝血酶活性。方法:建立凝血酶浓度对lgTT延长率(%)的标准曲线,对影响凝血酶活性的相关因素进行考察,如血浆的储存条件;药物溶媒的选择;药物与凝血酶预温时间。并且测定比较四物汤(SW)、少腹逐瘀汤(SF)、香附四物汤(XF)、桃红四物汤(TH)、芩连四物汤(QL)的抗凝血酶活性。对方中代表性成分的抗凝血酶活性进行测定。结果:获得改进凝血酶时间法的适宜条件;筛选结果显示四物汤类方均有明显的抗凝血酶活性,抑制性的强弱顺序为QL(IC₅₀=1.30mg·mL^-1)>SF(IC₅₀=1.39mg·mL^-1)>XF(IC₅₀=3.55mg·mL^-1)>SW(IC₅₀=8.14mg·mL^-1)>TH(IC₅₀=10.94mg·mL^-1);活性成分槲皮素也具有显著抗凝血酶活性。结论该研究建立了一种凝血酶抑制剂筛选的便捷方法,证实了四物汤类方及成分具有直接抗凝血酶的活性,为深入解析活血化瘀方中靶向凝血酶的活性物质奠定了基础。     

半枝莲多糖抗补体活性研究

目的:研究半枝莲多糖的抗补体活性。方法:采用细胞溶血法。结果:半枝莲多糖抑制补体活性的经典途径和旁路途径的CH₅₀为(1.2±0.1)mg·mL^-1、AP₅₀为(4.9±0.2)mg·mL^-1。结论:半枝莲多糖有较好的抗补体活性。     

麻黄碱对脑缺氧缺血后新生大鼠神经可塑性影响的研究

目的：研究麻黄碱对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经可塑性的影响。方法：7日龄SD大鼠60只,制成HIBD模型,随机分为麻黄碱组(1.5 mg·kg^-1)、D-苯丙胺(D-AMPH,1.0 mg·kg^-1)组、三磷酸胞苷二钠(CTP,70 mg·kg^-1)组、神经节苷脂(GM1,20 mg·kg^-1)组和自然康复组。用免疫组织化学方法检测海马CA₃区生长相关蛋白-43(GAP-43)、突触素(SYP)表达的变化,术后4周进行5 d的Morris水迷宫学习和记忆的测试。结果：①麻黄碱组海马CA₃区GAP-43和SYP表达水平高于自然康复组(P＜0.05),与D-AMPH,CTP组的表达无显著性差异；②各组平均逃避潜伏期明显短于自然康复组(P＜0.05),原平台穿过次数各组明显多于自然康复组(P＜0.01)。麻黄碱组逃避潜伏期长于GM1组,原平台穿过次数麻黄碱组少于GM1组,但与CTP和D-AMPH组比无差异。结论：麻黄碱能提高新生HIBD大鼠年长后的空间定向能力和学习记忆能力。这种保护作用和麻黄碱减少HIBD后神经元的丢失、促进参与神经元重塑的蛋白分子GAP-43和SYP的表达有关。麻黄碱对HIBD的保护作用和D-AMPH及CTP起同样的效果,而改善新生HIBD大鼠年长后的空间定向能力和学习记忆能力的效果稍差于GM1,这可能和麻黄碱的剂量有关。     

来氟米特活性代谢产物对白蛋白诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性及TNF-αmRNA表达的影响

 目的探讨来氟米特的活性代谢产物对白蛋白诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性及TNF-αmRNA表达的影响。方法培养的肾小管上皮细胞为空白对照;对照组加去脂的小牛血清白蛋白(BSA)30mg·mL^-1共同培养;干预组先加不同浓度来氟米特的活性代谢产物(A771726)或同一浓度不同时限,0.5h后再加入BSA30mg·mL^-1,EMSA法及RT-PCR检测各组NF-κB活性及TNF-αmRNA表达的变化。结果A771726在不同浓度及时限均可抑制白蛋白诱导的肾小管上皮细胞内NF-κB活性及TNF-αmRNA表达,呈剂量与时限依赖性。结论来氟米特活性代谢产物可抑制白蛋白诱导的肾小管上皮细胞内NF-κB的活性及TNF-αmRNA的表达。     

升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α所致大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。方法：建立大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养方法，将细胞分为空白组、模型组、升麻苷组、5-O-甲基维斯阿米醇苷组，并采用细胞计数法和免疫化学方法分别对平滑肌细胞的生长特性和纯度进行测定。用MTT法观察升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷各剂量组拮抗肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导平滑肌细胞增殖的作用，用流式细胞技术测定升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对平滑肌细胞周期的影响。结果：升麻苷(50，100，200 mg·L^-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50，100，200 mg·L^-1)均能明显抑制TNF-α引起的平滑肌细胞增殖，与TNF-α组相比有极显著差异(P<0.01)。升麻苷(50，100，200 mg·L^-1)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(50，100，200 mg·L^-1)均使G₁/G₀期细胞比例增加，S期、G₂/M期细胞比例减少，与TNF-α组相比差异极显著(P<0.01)。结论：升麻苷与5-O-甲基维斯阿米醇苷对TNF-α引起的平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用。     

天麻素对大鼠皮层缺氧神经细胞NR1亚基mRNA表达的影响

目的:观察天麻素对体外培养大鼠皮层缺氧神经细胞N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基mRNA表达的影响,探讨天麻素在神经保护方面的可能作用机制。方法:体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞,以缺氧无糖培养建立神经细胞损伤模型,采用不同质量浓度的天麻素(13,26,52 mg.L^-1)处理细胞,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测神经细胞NR1 mRNA的表达。结果:神经细胞缺氧损伤后,NR1 mRNA的表达显著增高;加入不同质量浓度的天麻素后均能显著降低神经细胞NR1 mRNA的表达。其中以26,52 mg.L^-1的抑制作用最佳。结论:天麻素可能通过拮抗由缺氧引起的神经细胞NMDA受体NR1亚基mRNA表达的增加,发挥其神经保护作用。     

李氏5号方对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响

目的 :观察李氏 5号方在细胞水平上对神经细胞生长的影响 ,寻找最佳药物浓度。方法 :不同浓度的李氏 5号方作用于人神经母细胞瘤株SY5Y ,利用MTT测定细胞的存活率 ,制定浓度 药效曲线得出最佳药物浓度。以MTT代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积为观察指标。结果 :李氏 5号方在 0 .12 5～ 0 .75g·L^-1浓度范围内均可增加SY5Y细胞的存活率。与正常对照组相比 ,加药组SY5Y细胞轴突长度和胞体面积均增加 ,MTT代谢率升高、LDH漏出率降低。结论 :李氏 5号方具有营养神经细胞、促进神经细胞存活的作用。     

步长脑心通含药血清抗缺氧诱导的皮质神经元凋亡的实验研究

目的运用中药血清药理学方法研究步长脑心通抗缺氧诱导的原代皮质神经元凋亡的作用。方法培养出生24h内SD乳鼠大脑皮质神经元,第7天以不同浓度步长脑心通含药血清处理后制造缺氧模型,定性定量检测细胞凋亡：MTT法观察神经元活力;Hoechst33258染色分析细胞核形态的变化;琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂,进一步验证和检测细胞凋亡。结果步长脑心通含药血清处理后缺氧神经元活力增加,缺氧所致神经元凋亡明显减少。结论步长脑心通对缺氧引起的皮质神经元凋亡有抑制作用。     

梓醇对地黄根际土壤微生物的影响

目的 通过梓醇对土壤细菌生长的影响实验,考察其是否具有抑制土壤细菌的活性.方法 采用纸片琼脂扩散法,考察不同浓度下梓醇对土壤细菌生长的影响情况.结果 各浓度梓醇对土壤细菌生长均无抑制作用.相反,从培养平板上细菌的生长状况看,浓度为0.1mg·ml(-1)的低浓度梓醇对部分供试土壤细菌生长具有明显的促进作用,约占供试土壤...     

不同内皮细胞条件培养液对皮层神经元线粒体功能的影响及通络救脑注射液的保护作用

目的探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对损伤神经元线粒体功能的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法制备（1）正常内皮细胞条件培养液（N—CM）：正常培养的内皮细胞不作任何处理;（2）正常用药内皮细胞条件培养液（NT—CM）：通络救脑注射液按1μl／ml浓度作用10h;（3）缺氧损伤内皮细胞条件培养液（I-CM）;（4）缺氧损伤用药内皮细胞条件培养液（IT—CM）：于损伤前4h,加入通络救脑注射液1μl／ml;分别作用于糖氧剥夺损伤的神经元模型,通过测定神经元线粒体活性、线粒体膜电位（MMP）及细胞色素C（CytC）,分析各个条件培养液对损伤神经元线粒体功能的影响。结果（1）与模型组比较,N—CM组与NT—CM组（P〈0．05）均可阻抑损伤神经元线粒体活性的下降,尤其是NT—CM保护作用更为明显。（2）与正常组比较,模型组MMP明显下降;I-CM使受损神经元的线粒体功能进一步下降;I-CM组可进一步降低受损神经元MMP,IT—CM可逆转神经元MMP下降,明显改善这种损伤状态。（3）N-CM组与NT—CM组均可降低损伤神经元的CytC释放,分别与模型组、I—CM组比较,差异均有显著性（P〈0．05）。结论脑微血管内皮细胞的旁分泌功能对损伤神经元的存活有重要的调节作用,该作用的实现可能与维持神经元线粒体功能有关,通络救脑注射液可促进该作用的发挥。     

清心开窍方对Aβ25-35所致大鼠原代神经元细胞损伤的保护作用

目的：了解清心开窍方对Aβ25-35所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用及其机制。方法：制备17d胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,分为正常对照组、模型组、清心开窍方低、中、高剂量组（6.25、12.5、25 mg·mL-1）。支持培养7 d,除正常组、模型组外,用不同剂量清心开窍方预处理24 h后,连同模型组和终浓度10 umol·L-1的Aβ25-35共同培养,造成神经细胞损伤模型。作用24 h后,以MTT值、培养液乳酸脱氢酶（LDH）水平作为细胞的损伤指标,以线粒体膜电位改变作为凋亡早期指标。结果：清心开窍方可以明显减少LDH漏出,增加MTT值,使低线粒体膜电位细胞的比例减少,抑制细胞凋亡,与模型组比较差异显著（P〈0.05）。结论：清心开窍方对Aβ25-35损伤的大鼠原代神经细胞具有保护作用,其机制可能与清心开窍方干预Aβ25-35诱导的细胞线粒体膜电位下降有关。     

Neuroprotection of n-Butanol Extract from Roots of Potentilla anserina on Hypoxic Injury in Primary Hippocampal Neurons

Objective To investigate the protective effect of n-butanol extract from the roots of Potentilla anserina (NP) on hypoxic hippocampal neurons in neonatal rats. Methods Primary cultured hippocampal neurons were pretreated with different concentration of NP (0.25, 0.0625, and 0.0156 mg/mL) before incubation in a low oxygen (0.1%) environment for 4 h. Cell viability was evaluated by Trypan blue staining assay. Lactate dehydrogenase (LDH) released by neurons into the medium was measured. The activity of superoxide dismutase (SOD) in cell cytosol was determined using nitroblue tetrazolium. Morphological changes and mitochondrial function were observed by transmission electron microscopy. Results Hypoxic injury could decrease the cells viability of neuron, enhance LDH release (P < 0.05), decrease SOD activity, and increase mitochondrial injury. Pretreatment with NP significantly increased cell viability, decreased LDH release (P < 0.05), promoted SOD activity (P < 0.05), and remarkably improved cellular ultra-microstructure compared with the model group. Conclusion NP could protect the primary hippocampal neurons from hypoxic injury by attenuating mitochondrial cell death.     

红景天苷通过Nrf2-HO-1保护Aβ25-35诱导的原代皮层神经元损伤

目的探讨红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元损伤的保护作用。方法:随机将培养成熟的原代皮层神经分为5组:正常对照组、模型组、红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、激动剂组。后3组分别使用5μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1TBHQ培养24 h,余组正常换液。然后除正常对照组,将余组更换为终浓度为20μmol·L^-1Aβ25-35并维持各药物组终浓度的培养液,24 h后使用CCK8试剂盒测细胞活性、LDH试剂盒测细胞LDH释放量、免疫组化和Western Blot测Nrf2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2等蛋白的表达水平。结果红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够提高Aβ25-35损伤后细胞的活性、减少LDH的释放改善细胞损伤,红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够增加Nrf2、HO-1的表达水平,下调Caspase-3蛋白表达水平、上调Bcl-2/Bax的蛋白表达水平。锌原卟啉ZnPP可逆转红景天苷及TBHQ对Aβ25-35诱导的皮层神经元的保护作用。结论红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元细胞的保护作用,可能主要通过改善凋亡相关蛋白、上调Nrf2/HO-1信号通路表达实现。     

地黄的炮制对梓醇和5-羟甲基糠醛含量的影响

目的：研究地黄炮制过程对梓醇(catalpol)和5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量变化的影响。方法：鲜地黄制成干地黄后分别以10%和50%的乙醇为液体辅料并分别在90 ℃和100 ℃的条件下反复蒸制得熟地黄,各条件下制得的样品经30%甲醇超声波提取2 h,利用反相HPLC分别在204,284 nm,流速1.0 mL·min^-1,流动相3%乙腈条件下测定梓醇和5-HMF的含量。结果：随着蒸制次数的增加,梓醇的含量减少,5-HMF的含量增加。液体辅料乙醇的体积分数和蒸制温度都对梓醇和5-HMF的含量有影响,10%乙醇,100 ℃的条件下炮制的熟地黄最优,在此条件下蒸7次以上的熟地黄中5-HMF的含量符合大韩药典标准。结论：分析了地黄炮制对梓醇和5-HMF含量的影响,为进一步研究地黄提供了依据。