大鼠深度烫伤后局部组织中PDGFmRNA表达水平

目的：研究深度烫伤后局部组织中ＰＤＧＦｍＲＮＡ表达水平及其意义。方法：应用α－ ３２ＰｄＡＴＰ标记的ＰＤＧＦ－ ＡＡ和－ ＢＢ的ｃＤＮＡ 探针和斑点杂交测定大鼠深度烫伤后不同时相局部组织中ＰＤＧＦｍＲＮＡ的表达水平。结果：烫伤后组织中ＰＤＧＦ－ ＡＡ和－ ＢＢｍＲＮＡ的表达,较之对照组都有所升高,且在烫伤早期出现高峰,尤其是－ ＢＢｍＲＮＡ表达水平在深度烫伤后期又有持续升高,且绐终高于－ ＡＡｍＲＮＡ的表达水平。结论：ＰＤＧＦ在大鼠深度烫伤后的炎症反应和修复愈合过程中起着一定的作用。     

烫伤大鼠组织脂多糖结合蛋白mRNA表达的动态变化

目的探讨烫伤后不同组织脂多糖结合蛋白（ＬＢＰ）ｍＲＮＡ的动态表达及其与内毒素血症的关系。方法采用大鼠３５％体表面积Ⅲ度烫伤模型，实验动物随机分为正常对照组、烫伤组和多粘菌素Ｂ治疗组。血浆内毒素水平测定采用改良过氯酸预处理血浆、偶氮显色法鲎实验定量测定，组织ＬＢＰｍＲＮＡ含量采用ＲＴ－ＰＣＲ法。结果烫伤后门静脉及体循环内毒素水平均显著升高，８小时达峰值。给予多粘菌素Ｂ治疗可不同程度地降低血浆内毒素水平。正常组织可表达少量ＬＢＰ，烫伤后２小时不同组织ＬＢＰｍＲＮＡ表达较对照值有显著升高（Ｐ＜０．０５～０．０１），８小时达峰值，约为对照值的２～２．５倍，且一直持续至伤后２４小时。给予多粘菌素Ｂ抗内毒素治疗，可不同程度抑制肺、肠、肾组织ＬＢＰｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．０５～０．０１）。相关分析显示，门静脉内毒素水平与肺组织ＬＢＰｍＲＮＡ呈显著正相关（ｒ＝０．４１２，Ｐ＜０．０５），但与肝、肠、肾组织无显著相关性。结论组织ＬＢＰｍＲＮＡ表达在烧伤后显著增多，肠源性内毒素血症可能是刺激组织ＬＢＰ基因表达的重要因素之一     

Gi2／Gq蛋白在重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的表达

目的 观察重症急性胰腺炎（severe acute panereatitis,SAP）大鼠胰腺组织Gi2和Gq蛋白表达量的改变,探讨在SAP发病过程中血小板活化因子（platelet activating factor,PAF）的细胞信号转导机制.方法 Wistar雄性大鼠60只,随机分为阴性对照组和SAP模型组（SAP组）.以5%牛磺胆酸钠逆行注入主胰管制成SAP模型,阴性对照组开腹后仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次关腹.制模后于相应时相点处死动物,取血取组织,ELISA方法检测血浆PAF含量,Western印迹法检测胰腺组织Gi2/Cq蛋白质的动态变化.结果 SAP组Gi2和Gq蛋白表达量均较阴性对照组显著增加（P＜0.05）.结论 PAF可能通过Gi2和Gq蛋白,经cAMP-PKA和IP3-Ca2＋途径完成细胞信号转导,导致炎性反应延续并放大.     

NF-κB在高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织中的表达及其意义

目的：探讨高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织中NF-κB的变化规律及其意义。方法：雄性Wistar大鼠240只,分别在1517m和3848m两个海拔高度随机分为延迟复苏组（DFR,n=50）、即时复苏组（IFR,n=60）和对照组（CG,n=10）,建立30%Ⅲ度烫伤模型,分别于伤后1、6、12、24、72和168h取材,观察肺组织病理学改变及NF-κB的表达。结果：随着海拔高度增加,肺组织病理变化越明显,且DFR组较IFR组差异显著。NF-κB阳性表达位于肺泡上皮细胞核或胞浆,高海拔组表达强度高于低海拔组,实验组高于对照组,各海拔高度DFR高于IFR组（P〈0.05）。结论：NF-κB表达强度变化与高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织损伤有关。     

不同海拔高度大鼠严重烫伤延迟复苏心肌组织ET-1和HSP70的变化

目的：探讨高原地区不同海拔高度（3840m，1517m）大鼠严重烫伤后延迟复苏心肌组织内皮素-1（ET-1）与热休克蛋白70（HSP70）的变化规律。方法：雄性Wistar大鼠240只随机分为延迟复苏组（DFR，n=100）、即时复苏组（IFR，n=120）和对照组（CG，n=20），建立总体表面积30％的Ⅲ度烫伤模型，分别于伤后1、6、12、24、72和168h取材。应用免疫组化方法检测心肌组织ET-1和HSP70的含量。结果：ET-1在心肌细胞浆及血管内皮组织表达高于对照组，随海拔梯度上升ET-1表达增高，海拔高组高于海拔低组，DFR组高于IFR组（P〈0．01）；HSP70表达在海拔低者差异早于海拔高者（P〈0．01）。结论：高原地区大鼠严重烫伤后随海拔升高，心肌保护物质消耗增多，ET-1／HSP70调节变化更加显著。     

高原不同海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肾组织细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达

目的 探讨高原不同海拔地区大鼠严重烫伤延迟复苏后肾脏组织Bcl-2蛋白的表达及其与肾组织细胞凋亡的关系.方法 雄性Wistar大鼠240只,分别在1 517m和3 848m两个海拔高度建立30%TBSAⅢ度高原烫伤模型,随机分为即时复苏组(IFR组,伤后即刻腹腔注射等渗盐水4ml/kg,n=60)、延迟复苏组(DFR组,伤后6h开始按4ml/kg补液,n=50)和假烫对照组(NC组,n=10),分别于伤后1、6、12、24、72和168h取材.采用组织芯片技术和原位末端标记法(TUNEL)检测肾组织细胞的凋亡,免疫组织化学染色与图像分析技术检测肾组织Bcl-2蛋白的表达.结果 随着海拔梯度上升,肾小管上皮细胞发生水肿、颗粒变性、坏死及崩解;肾小球毛细血管出现不同程度扩张、充血,内皮细胞变性及坏死,肾间质充血、水肿及炎性细胞浸润.病变程度DFR组较IFR组加重,高海拔地区较低海拔地区加重.肾组织细胞凋亡率和Bcl-2蛋白表达水平DFR组高于IFR组,高海拔地区高于低海拔地区(P＜0.001),且二者呈明显正相关(r=0.516,P＜0.001).结论 高原严重烧伤导致的肾损伤与肾小管细胞凋亡有关,而凋亡抑制因子Bcl-2的高表达反映了损伤过程中细胞自我保护机制的增强.     

血必净注射液对烫伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达的影响及意义

目的 观察中药血必净注射液(简称血必净)对烫伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达及炎症反应的影响.方法 采用大鼠30% TBSA三度烫伤延迟复苏模型.78只雄性Wistar大鼠随机分为假烫伤组(n=18)、烫伤组(n=30,伤后2h静脉注射生理盐水4ml/kg)和血必净组(n=30,伤后2h静脉注射血必净4ml/kg),于伤后8、24、72h活杀动物,留取肺组织,采用RT-PCR和Western blot检测HMGB1基因和蛋白的表达,酶学分光光度法测定髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 与假烫伤组比较,烫伤组肺组织HMGB1基因和蛋白表达在伤后8～72h显著增强(P＜0.05或0.01),MPO活性在伤后8h及24h明显增高(P＜0.01).与烫伤组比较,血必净组大鼠肺组织HMGB1表达在伤后24h及72h显著下调(P＜0.05或0.01),MPO活性在24h时间点显著降低(P＜0.01).结论 HMGB1作为晚期炎症因子参与了烫伤后肺组织炎症反应的病理过程,血必净治疗可明显下调肺组织HMGB1表达,并减轻烫伤延迟复苏所致急性肺损伤.     

rhGM-CSF联合胰岛素对1型糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面组织中CD31、HIF-1α及VEGF表达的影响

目的探讨重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)联合胰岛素对1型糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面组织中VEGF、HIF-1α及CD31表达的影响。方法选取50只健康雄性SD大鼠,按照随机数表法随机分为A组(10只)、B组(10只)、C组(10只)、D组(10只)、E组(10只),其中A组大鼠建立普通深Ⅱ度烫伤模型,并予以创面覆盖浸有5.0 m L生理盐水的纱布治疗;B组大鼠建立1型糖尿病深Ⅱ度烫伤模型,并予以创面覆盖浸有5.0 m L生理盐水的纱布治疗;C组大鼠建立1型糖尿病深Ⅱ度烫伤模型,并予以创面覆盖浸有5 U诺和灵30R+5.0 m L生理盐水的纱布治疗;D组大鼠建立1型糖尿病深Ⅱ度烫伤模型,并予以创面覆盖浸有25μg rhGM-CSF+5.0 m L生理盐水的纱布治疗;E组大鼠建立1型糖尿病深Ⅱ度烫伤模型,并予以创面覆盖浸有5 U诺和灵30R+25μg rhGM-CSF+5.0 m L生理盐水的纱布治疗。分别于烫伤后第3、7、11、15、21天观察各组大鼠的创面愈合情况,并采集创面组织,检测创面组织中VEGF、HIF-1α、CD31及HIF-1αmRNA的表达情况。结果烫伤后第3、7、11、15、21天各组大鼠创面均逐渐缩小或愈合,愈合率逐渐升高,其中尤以A组、E组大鼠创面组织中成纤维细胞及新生毛细血管生长速度最快,愈合最快,B组大鼠创面变化最慢,且烫伤后第11、15天,各组大鼠创面愈合率两两对比,除A组与E组及C组与D组对比,P0.05,差异无统计学意义外,其余各组组间两两对比,P均0.05,差异具有统计学意义。烫伤后第3、7、11、15、21天,各组大鼠创面组织中VEGF、HIF-1α、CD31的相对阳性表达量及HIF-1αmRNA的表达水平均呈先逐渐升高后降低的趋势,各组大鼠创面组织中VEGF、HIF-1α、CD31的相对阳性表达量及HIF-1αmRNA的表达水平两两对比,其中烫伤后第3、7、11、15、21天,E组大鼠创面组织中VEGF的相对阳性表达量分别与B组、C组及D组对比,P均0.05,差异具有统计学意义;烫伤后第7、11、15、21天,E组大鼠创面组织中HIF-1αmRNA的表达水平分别与B组、C组及D组对比,P均0.05,差异具有统计学意义。结论胰岛素联合rhGM-CSF治疗1型糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面,可显著提高大鼠创面组织中VEGF的表达水平、改善局部缺氧状态,从而加快新生毛细血管再生,有效减轻创面组织炎症反应程度,促进创面坏死组织清除,缩短创面愈合时间。     

运动训练和心理应激对大鼠下丘脑神经肽Y mRNA的影响

目的:探讨运动训练及心理应激对大鼠下丘脑神经肽Y(NPY)mRNA表达的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为对照组、中等负荷运动组、急性心理应激组、慢性心理应激组、中等负荷运动+急性心理应激组、中等负荷运动+慢性心理应激组。实验期为10周。实验后对各组大鼠进行称重,并检测其下丘脑NPY mRNA表达。结果:(1)慢性心理应激大鼠体重显著低于对照组;急/慢性心理应激组大鼠下丘脑NPY mRNA水平均显著高于对照组。(2)中等负荷运动组大鼠体重显著高于对照组,且其下丘脑NPY mRNA水平显著高于对照组。(3)中等负荷运动+急/慢性心理应激组大鼠体重分别显著高于急/慢性心理应激组大鼠,其NPY mRNA水平与对照组相比无显著差异。结论:心理应激作为一种应激源,可能会引起大鼠神经肽分泌紊乱;中等负荷运动对提高机体抗应激能力有一定作用。     

不同+Gz暴露后大鼠脑皮层HSP70mRNA表达水平的变化

目的 观察不同大小的 Gz暴露对大鼠脑皮层HSP70mRNA表达水平的影响，探讨 Gz暴露致脑损伤的机理。方法 80只SD大鼠随机分为对照组， 2Gz暴露组， 6Gz暴露组， 10Gz暴露组，各组在 Gz暴露后的5h、10h、1d、2d、4d处死，采用原位分子杂交方法观察大鼠脑皮层HSP70mRNA表达情况、并对实验结果进行统计分析。结果 三个 Gz暴露组，HSP70mRNA表达水平表现出相同的变化趋势：在 Gz暴露后5h，HSP70mRNA表达水平开始增加，10h达峰值，4d时基本恢复正常。而对照组没有这一变化趋势．不同 Gz值之间的比较表明， 6Gz组HSP70mRNA表达水平最高，且分布较广泛， 10Gz组最低，且分布较局限，主要位于靠近颅底部的皮层中。结论 Gz暴露对大鼠脑皮层HSP70mRNA表达水平有着显著的影响。     

运动对2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因表达的影响

目的 :研究运动对 2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因 (obesegene ,obgene)表达水平的影响 ,在基因转录水平上探讨 2型糖尿病大鼠obmRNA表达水平的变化 ,以及运动改变 2型糖尿病大鼠obmRNA表达的机制。方法 :4 0只自发发病的 2型糖尿病模型 :OLETF大鼠分成 4组 ,分别为基础饲料非运动组、基础饲料运动组、高脂饲料非运动组和高脂饲料运动组 ;15只LETO大鼠(与OLETF大鼠同系 ,但不同株 ,系不发病对照组 )用基础饲料饲养 ,随机分为两组 :非运动组和运动组 ,分别进行 9周的运动和高脂饮食干预 ,9周后用实时荧光定量RT -PCR法检测每只大鼠腹膜后脂肪组织obmRNA的表达水平。结果 :基础饲料饲养的OLETF大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数分别为 4 0 2 4× 10 6 ± 5 4 67× 10 5/ μgRNA和 1 2 5 8× 10 6 ± 3 862× 10 5/ μgRNA ;高脂饲料饲养的OLETF大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数为 4 832×10 6 ± 1 0 34× 10 6 / μgRNA和 1 5 74× 10 6 ± 6 783× 10 5/ μgRNA ;而基础饲料饲养的LETO大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数分别为 1 979× 10 6 ± 6 4 77× 10 5/ μgRNA和 1 82 4×10 6 ± 4 0 89× 10 5/ μgRNA。OLETF大鼠脂肪组织obmRNA表达水平运动     

递增负荷运动过程中促性腺激素释放激素受体基因表达的变化

目的探讨运动性动情周期紊乱进程及恢复过程中雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴各环节促性腺激素释放激素受体(GnRHR) mRNA水平变化的规律及意义。方法对不同训练周期及恢复过程的大鼠,采用RT-PCR检测其下丘脑、垂体、卵巢、子宫GnRHR mRNA的表达,采用液相平衡竞争放射免疫分析法检测其血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平。结果运动7周组大鼠下丘脑、垂体GnRHR mRNA表达及血清E2、P水平均显著降低(P<0.05~0.01);运动9周组大鼠下丘脑、垂体、卵巢GnRHR mRNA表达及血清E2、P水平均显著低于同期对照组(P<0.05~0.01);恢复2期组大鼠下丘脑、垂体GnRHR mRNA表达,血清E2及P水平仍低于同期对照组(P<0.05);恢复3期组大鼠E2、恢复4期组大鼠P水平及各运动及恢复组大鼠子宫GnRHR mRNA,与同期对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。结果提示递增负荷运动大鼠HPO轴各环节GnRHR mRNA表达的变化与较低浓度的血清性腺类固醇水平,特别与E2水平密切相关,其表达水平的降低可能是运动性月经失调病理过程的重要一环。     

阿魏酸钠对肝星状细胞中I型前胶原和CTGF mRNA表达的影响

目的　考察阿魏酸钠对氧化应激条件下 ,肝星状细胞中I型胶原及其相关调控因子CTGFmRNA表达的干预作用。方法　以 5 0 μmol·L-1H2 O2 处理的HSC -T6细胞为氧化应激模型组 ,采用RT -PCR方法检测并分析 12 5 μmol·L-1和 5 0 0 μmol·L-1SF对细胞中I型前胶原及其相关调控因子CTGF表达的影响。结果　肝星状细胞在氧化应激条件下I型前胶原mRNA和CT GFmRNA表达水平都明显上调 ,而阿魏酸钠可以下调二者的表达水平。结论　阿魏酸钠从转录水平调控胶原表达可能对肝纤维化有重要防治作用     

幼龄期游泳运动对大鼠成年后体成分和脂肪组织相关基因表达的长期影响

目的:探讨幼龄期游泳运动对大鼠成年后内脏脂肪量的影响,分析幼龄期运动对体成分的长期效应和生物学机制。方法:3周龄断乳雄性SD幼鼠随机分为对照组(C,不运动),运动3周组(E3,前3周运动,后6周不运动),运动9周组(E9,连续9周运动)。12周龄时取内脏脂肪垫称重,制备脂肪组织切片,用IPP软件统计400倍视野下脂肪细胞数目,ELISA法测定血清Leptin量;Re-al-time PCR测定脂肪组织Leptin、PPAR-γ和TNF-αmRNA表达水平。结果:①12周龄时E9组大鼠体重、内脏脂肪垫重和脂体比均显著低于C组,E3组大鼠与C组体重差异无统计学意义,E3组内脏脂肪垫重和脂体比均显著低于C组,但与E9组比较差异无统计学意义。②E9组大鼠血清Leptin显著低于C组,E3组与C组血清Leptin比较差异无统计学意义,但显著高于E9组;③E9组与E3组脂肪组织Leptin mRNA表达均低于C组,但TNF-αmRNA表达均高于C组。E9组脂肪组织PPAR-γmRNA表达低于C组,但E3组与C组PPAR-γmRNA表达差异无统计学意义。E9组脂肪组织Leptin、PPAR-γ和TNF-αmRNA表达水平与E3组比较差异均无统计学意义。结论:幼龄期3周游泳运动使大鼠在12周龄时仍保持较低的体脂量,脂肪组织Leptin和TNF-α基因表达改变可能是其主要生物学机制。     

Expression of statherin mRNA and protein in nasal and vaginal secretions

Nasal secretion has been regarded as one of the most difficult body fluids to identify and is especially difficult to discriminate from vaginal secretions and saliva. At present, few specific markers are known for nasal secretions. The aim of this study is to find a new approach for the identification of nasal secretions. We examined expression levels of statherin and histatin, peptides which are commonly found in saliva, in nasal and vaginal secretions by real-time RT-PCR and ELISA assays. Statherin mRNA was highly expressed in all nasal samples (dCt value = −1.49 ± 1.10, n = 8) and was detected even in 1-day-old 0.1-μL stains. However, the stability of mRNA in nasal stains was significantly (P < 0.01) lower than in saliva. Low levels of statherin mRNA were detected in 4 of the 17 vaginal samples (dCt value = 11.65–14.72). Histatin mRNA was not detected in any nasal or vaginal samples, although it was highly expressed in all saliva samples. ELISA assays with anti-statherin goat polyclonal antibody showed that statherin peptide was detected in all nasal and saliva samples even after dilution of more than 1000-fold. The statherin peptide was not detected in any vaginal samples, including samples that expressed low levels of statherin mRNA. The amount of statherin peptide in vaginal samples might be less than the limit of detection of this assay.In the present study, statherin was highly expressed in nasal secretions, but histatin was not. These markers may be useful for discriminating nasal secretions from vaginal secretions and saliva. However, the usefulness of these markers in practical forensic case samples has not yet been examined. Therefore, further research is required to establish the utility of these assays for identification of nasal secretions.     

TLR4在非小细胞肺癌中的蛋白和基因表达

目的：探讨Toll样受体（TLR）4和在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理参数之间的相关性。方法：RT-PCR和Western blot法检测TLR4在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果：非小细胞肺癌组织中TLR4的表达高于癌旁正常组织。并且肿瘤细胞的分化程度与TLR4的表达水平呈正相关,而TLR4表达与患者的年龄、性别、吸烟情况、肿瘤组织学类型、淋巴结转移和肿瘤远处转移并没有相关性。结论：TLR4在肺癌组织中表达上调,表明其可能参与了肺癌的发生发展,为恶性肿瘤的治疗提供一种潜在的方法。     

注射活血生肌类中药对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后肌肉Ⅱb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的 :观察活血生肌类中药对骨骼肌钝挫伤后修复过程中IIb型肌球蛋白重链 (myosinheavychain ;MHC)及Ⅰ、Ⅲ型胶原 (Collagen -Ⅰ和Collagen -Ⅲ )mRNA表达的影响。方法 :采用打击装置造成 12 6只大鼠后肢肌群钝挫伤 ,用半定量逆转录 -聚合酶链式反应 (semi -quantitativeRT-PCR)分析mRNA的表达。结果 :(1)急性钝挫伤后 ,各组大鼠骨骼肌IIb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达量均显著增高 (P <0 .0 1)。 (2 )修复过程中 ,注射活血生肌类中药治疗组大鼠IIb型MHCmRNA表达水平的升幅显著高于生理盐水对照组 (P <0 .0 1) ,但低于注射IGF -I治疗组 (P <0 .0 5 )。 (3)修复过程中 ,注射活血生肌类中药治疗组大鼠Ⅰ型与Ⅲ型胶原mRNA的表达水平显著低于生理盐水对照组 (P <0 .0 1) ,与注射IGF -Ⅰ治疗组相比无显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :急性骨骼肌钝挫伤修复过程中 ,注射活血生肌类中药能有效地促进Ⅱb型MHCmRNA表达 ,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达 ,并促使Ⅰ型胶原mRNA水平迅速恢复到正常水平