吉马酮改善H_2O_2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用

该文主要研究吉马酮对过氧化氢(H_2O_2)诱导的脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。使用500μmol·L~(-1)H_2O_2诱导脐静脉内皮细胞3 h,从而建立氧化损伤模型,再用不同浓度吉马酮(20,40,100,150,200μmol·L~(-1))保护24 h。利用MTT法检测吉马酮对H_2O_2损伤HUVECs细胞活力的影响;ELISA法检测PGI2,TXB2,ET-1,t-PA,PAI-1,TNF-α和IL-6;硝酸还原酶法检测NO;比色法检测NOS及GSH-Px;再分别采用TBA法、WST-1法和微量酶标法检测MDA,SOD和LDH的含量等;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达。结果表明500μmol·L~(-1)H_2O_2作用3 h细胞损伤率达到52%,而在20~200μmol·L~(-1)随着吉马酮浓度的增大被损伤细胞活性不断增强。与正常组比较,H_2O_2损伤使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA降低,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA增加;与模型组比较,吉马酮(200,100,50μmol·L~(-1))使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA增加,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3mRNA减少。Hoechst 33258荧光染色与正常组比较,模型组细胞膜与细胞核呈浓缩致密的强蓝色荧光,细胞数量明显减少;与模型组比较,给药组的蓝色荧光强度降低等。以上研究结果表明,吉马酮可能通过抗氧化及抑制细胞凋亡等作用,从而改善H_2O_2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用。     

复方银杏叶颗粒对H_2O_2致H9c2细胞损伤的保护作用

目的观察复方银杏叶颗粒(YXY)对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。方法采用H2O2建立心肌损伤模型,给予YXY 25、50、100、200μg/m L预处理24 h,MTT法测定细胞生存率,相差显微镜观察细胞形态学改变;试剂盒法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶-MB(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平;共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子浓度及线粒体膜电位。结果 H2O2 500μmol/L作用6 h可显著降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤;YXY预处理可提高细胞生存率,改善损伤细胞形态学改变,减轻LDH、CK外漏,降低细胞上清中MDA、NO水平,增加SOD活性,减少H9c2细胞内ROS生成,降低细胞内钙离子浓度、减轻线粒体膜电位的下降。结论 YXY对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤有保护作用。     

木豆叶提取物对H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究木豆叶提取物(ECCL)对H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,于H2O2刺激前加入PI3K信号通路阻断剂LY294002(LY)预处理10 min,加入20、50μg/m L ECCL预处理24 h。MTT法检测细胞存活率,比色法测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,Western blotting检测细胞内p-Akt、p-e NOS蛋白表达。结果与模型组比较,ECCL可明显增加H9c2细胞H2O2损伤后细胞存活率(P0.01),增加SOD活力,降低MDA、LDH水平,增加p-Akt和p-e NOS蛋白表达(P0.05、0.01),LY可阻断ECCL对H9c2的上述作用。结论 ECCL能够减轻H2O2所致的H9c2细胞损伤,可能是通过激活PI3K通路促进其下游因子Akt和e NOS磷酸化发挥作用。     

氧化苦参碱对H_2O_2诱导L02细胞损伤的抑制作用及其机制的研究

该文研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)抑制H2O2诱导的L02细胞损伤的作用及其机制。以人正常肝实质细胞L02为研究对象,采用H2O2诱导氧化应激建立肝损伤模型进行实验,通过CCK-8检测OMT对L02细胞活性的影响;CSFE荧光实验检测OMT对L02细胞增殖的影响;流式细胞术检测OMT对H2O2诱导的L02细胞凋亡率的影响;DCFH-DA荧光探针检测OMT对H2O2诱导的L02细胞内ROS含量;微板比色法检测OMT对GSH-PX和SOD活性的影响。结果显示,OMT在6.25~100 mg·L-1通过诱导NADPH的产生,增强L02细胞内GSH-PX酶和SOD酶的活性,进而促进GSH介导的活性氧ROS的清除,从而抑制H2O2诱导的L02细胞凋亡的发生,达到抑制H2O2诱导L02细胞损伤的作用。     

萱草花总黄酮改善肝细胞HL-7702氧化损伤的研究

目的研究萱草花总黄酮(HCTF)对氧化应激引起的肝细胞损伤的改善作用,并探讨其作用机制。方法采用CCl4诱导小鼠肝氧化损伤和H2O2诱导体外肝细胞损伤2种模型,HCTF给药后检测肝组织抗氧化指标,HE染色观察肝组织形态学改变,应用MTT法测定肝细胞存活率,ELISA法检测肝细胞中丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blotting法检测LXRα、FAS m RNA及蛋白的表达。结果 HCTF可以明显降低CCl4肝损伤小鼠肝组织内MDA水平,提高肝组织GSH-Px和SOD活性,保护肝组织;HCTF可以明显提高H_2O_2损伤的HL-7702细胞存活率(P0.01):使HL-7702细胞中MDA水平降低(P0.05、0.01),GSH-Px和SOD活性升高(P0.01),ALT、LDH、AST活性降低(P0.05、0.01),LXRα和FAS m RNA及蛋白的表达水平下降(P0.05、0.01)。结论 HCTF可能通过提高机体抗氧化能力而起到对CCl_4肝损伤小鼠的保护作用;同时可能通过降低氧化反应、减少LXRa和FAS的转录及蛋白表达,从而抑制H_2O_2对HL-7702细胞的损伤。     

芪参益气方对H_2O_2损伤的心肌细胞线粒体结构和功能的保护作用及机制探讨

目的制备H_2O_2诱导的心肌H9c2细胞损伤模型,通过线粒体结构、功能改变的多指标综合评价方法探讨芪参益气方对H9c2细胞的保护作用及作用机制。方法体外培养H9c2细胞,分为对照组、模型组(H_2O_2)、模型阳性对照羰基-氰-对-三氟甲氧基苯腙组(5μmol/L)、芪参益气方组(0.2 mg/mL),每组3个复孔,加入相应药物孵育24 h,H_2O_2诱导2 h制备心肌细胞损伤模型。采用Operetta高内涵成像系统评价H9c2细胞线粒体功能及形态纹理的改变;海马生物能量测定仪检测线粒体能量代谢的变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果芪参益气方能够明显降低H_2O_2损伤的H9c2细胞线粒体质量,增加线粒体膜电位和纹理的量化数值,同时增加线粒体基础耗氧率、ATP相关耗氧率、最大耗氧率以及储备能力,明显降低细胞早期及晚期凋亡率,增加活细胞率。结论基于细胞的线粒体结构和功能评价,证实芪参益气方通过改善线粒体功能及能量代谢减轻细胞凋亡保护H9c2细胞。     

海康灵含药血清在体外对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

 目的观察海康灵含药血清(HKL-serum)对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用。方法采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞过氧化氢(H₂O₂)损伤模型。通过观察细胞形态,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,检测HKL-serum对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用。结果同造模组比较,10%,15%HKL-serum能减轻H₂O₂引起的SH-SY5Y神经细胞的损伤,明显提高细胞的存活率,减少LDH的释放量。结论结果显示,HKL-serum对SH-SY5Y神经细胞损伤具有明显的保护作用。     

槲皮素保护H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤的作用机制

目的:探讨在H_2O_2诱导的氧化应激损伤中槲皮素对H9C2心肌细胞存活率、活性氧分子(ROS)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶、细胞凋亡等关键因子的影响,初步阐明槲皮素对心肌细胞的保护机制。方法:H_2O_2刺激H9C2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,分为正常组、模型组、槲皮素组,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞活力,活性氧检测试剂盒检测槲皮素处理后ROS变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞氧化应激反应、细胞凋亡机制相关分子[NADPH氧化酶-4(NOX-4),NADPH氧化酶亚单位p22phox,B淋巴细胞瘤-2原瘤基因(Bcl-2),Bcl-2相关X基因(Bax),半胱胺酸蛋白酶-8(Caspase-8)]基因和蛋白表达水平。结果:10μmol·L-1槲皮素具有显著的抗氧化、抗凋亡作用。与模型组比较,槲皮素组细胞存活率明显提高(P0.05),ROS水平与细胞凋亡率明显降低(P0.05,P0.01)。此外,槲皮素组中Bcl-2,NOX-4基因表达上调(P0.05);p22phox,Bax,Caspase-8基因表达明显下调(P0.05)。同时槲皮素能够抑制Bax,p22phox蛋白的表达(P0.05),上调磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:10μmol·L-1槲皮素能有效减少H_2O_2介导的心肌细胞氧化损伤,进而抑制心肌细胞凋亡。该机制可能是通过调节NADPH氧化酶亚型NOX-4与p22phox,减少ROS生成,激活PI3K表达,升高Bcl-2实现。     

总丹酚酸和银杏叶提取物对血管平滑肌细胞保护作用的比较

 目的对丹参水溶液提取物总丹酚酸和银杏叶提取物EGb761对血管平滑肌细胞损伤的保护作用进行了比较研究。方法选用培养的10～20代大鼠血管平滑肌细胞用于实验研究。细胞用H₂O₂2(100μmol·L^-1)处理1h造成细胞氧化损伤模型，采用MTT方法观察总丹酚酸和EGb761对H₂O₂损伤细胞生存率的影响，同时以乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)3种物质变化作为指标，观察了总丹酚酸和EGb761对H₂O₂损伤血管平滑肌细胞的保护作用。结果总丹酚酸100，10 μg·mL^-1能显著提高细胞的存活率，而总丹酚酸1μg·mL^-1和EGb761 100，10，1μg·mL^-1对细胞的存活率没有明显的升高作用；总丹酚酸100 μg·mL^-1，EGb761 100，10，1 μg·mL^-1均能显著降低H₂O₂损伤细胞上清液中LDH 的量，总丹酚酸10，1 μg·mL^-1作用不显著；EGb761 100，10 μg·mL^-1能明显降低细胞上清中MDA的量，EGb761 1 μg·mL^-1及总丹酚酸100，10，1μg·mL^-1作用不明显；总丹酚酸100，10，1 μg·mL^-1和EGb761 100，10 μg·mL^-1明显降低H₂O₂损伤引起NO的释放。结论总丹酚酸和EGb761对H₂O₂损伤的血管平滑肌有保护作用，但作用机制似乎有所不同，需要做进一步研究。     

复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的观察复方通络胶囊对缺氧-复氧所致人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs,建立缺氧-复氧模型,倒置显微镜观察细胞形态,采用MTr法测定细胞存活力,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果复方通络胶囊能明显减轻缺氧．复氧所致细胞形态学的改变、抑制内皮细胞损伤、明显减少LDH的释放（P〈0．05,P〈O．01）。结论复方通络胶囊对HUVECs损伤有明显的保护作用。     

银杏中黄酮类化合物生物合成、调控机制及其影响因素的研究进展

银杏叶片提取物对多种疾病具有治疗效果,并已被广泛应用于临床实践。黄酮类化合物是银杏叶片提取物的主要活性成分之一,所以研究银杏黄酮的合成途径具有非常重要的意义。该综述首先回顾了植物黄酮生物合成途径的总体研究概况,并介绍了目前已经发现的银杏黄酮合成相关基因;其次,介绍了高通量测序技术在银杏研究中的几个实际应用。另外,作为银杏的重要研究方向之一,该综述讨论了外界条件对银杏细胞、整株及采摘后叶片的黄酮含量及相关基因表达的影响,并着重介绍了笔者实验室的最新实验结果。最后,该综述对银杏黄酮领域未来的研究方向做了展望。     

INDENA SPA公司的银杏叶制剂专利网

意大利INDENA SPA公司是一家专营植物提取物制造与销售的跨国公司,该公司在银杏叶制剂领域依据自身研发优势,并通过在竞争对手专利网的外围构建自身的专利网,有效地保护了产品的市场。该文通过对INDENA公司银杏叶制剂专利网的申请时机、法律状态、技术发展路线、专利网布局等多角度的分析,为我国企业的银杏叶制剂开发提供了参考,建议我国申请人在研究中充分吸收借鉴他人的专利技术和布局经验,提高科研及专利保护的水平。     

银杏提取物抗大鼠阿霉素性心衰的作用及机制研究

目的:探讨银杏提取物(extract of Ginkgo biloba,EGB)对大鼠阿霉素性心衰的保护作用及ghrelin多肽机制的研究.方法:Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组,心衰模型组和银杏组.模型组和银杏组尾静脉注射阿霉素(ADR)复制心衰模型,银杏组给予银杏提取物水溶液灌胃(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),3周后测定各组大鼠的心功能;用放免法检测血浆及心肌组织中的ghrelin水平,高压液相法检测心肌组织中的三磷酸腺苷(ATP)与磷酸肌酸(CrP)含量,RT-PCR法检测心肌组织的ghrelin基因表达.结果:与正常组比较,模型组心功能明显降低,银杏组心功能指标较模型组显著改善.模型组血浆中的ghrelin水平明显高于正常组,但心肌组织中ghrelin水平显著低于正常组,心肌组织中的ATP含量及ghrelin mRNA的表达均明显低于正常组.与正常组和模型组比较,银杏组血浆中的ghrelin水平显著增高;心肌组织中的ATP含量及ghrelin mRNA的表达均明显高于模型组,接近正常组.结论:心肌细胞能量代谢障碍是阿霉素性心衰发病的主要原因之一,EGB干预治疗可改善阿霉素性心衰大鼠的心功能及心肌能量代谢,这可能与EGB增强了促能量代谢正平衡的ghrelin多肽的表达与生成有关.     

复方银杏叶制剂对非酒精性脂肪肝的干预作用及机制

目的:探究复方银杏叶制剂(CGB)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的干预作用机制.方法:采用高脂饮食诱导C57BL/6小鼠NAFLD模型,于造模第2周起以600,200mg·kg-1 ·d-1的CGB灌胃8周,观察小鼠血清生化指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)、血清内毒素(LPS)水平、肝组织病理变化与肝脏TNF-α表达;电镜观察小肠上皮细胞紧密连接变化,测定ZO-1,Occludin,Claudin-1紧密连接蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠肝脏发生明显脂肪变性,TNF-α表达显著增高(P＜0.01);血清ALT,AST,TG,CHOL与LPS水平均显著增高(P＜0.01,P＜0.05);肠上皮紧密连接结构受损,ZO-1,Occludin,Claudin-1表达显著降低(P＜0.01).与模型组比较,CGB高、低剂量组明显减轻肝组织脂肪变性,TNF-α表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05);血清AST,TG,CHOL与LPS水平均显著降低(P＜0.01,P＜0.05);肠道紧密连接破坏程度减轻,ZO-1,Occludin表达显著增高(P＜0.05).结论:CGB可以保护肠道紧密连接,减少LPS肠渗漏,缓解肝脏脂肪变性和炎症,防治NAFLD的发生发展.     

银杏萜内酯提取与纯化技术

银杏萜内酯的独特药理作用引起了国内外学者的关注,其提取纯化成为研究的重要内容.对银杏萜内酯的提取与纯化技术包括溶剂萃取法、柱提取法、溶剂萃取-柱提取法、超临界提取法及色谱或柱层析纯化法进行了介绍.     

银杏叶对照提取物中7种黄酮醇苷类化合物的定量研究

从银杏叶提取物中提取分离得到6种黄酮醇苷单体化合物,并对其进行标化,在4种分析条件下,用标定后的单体化合物,对2批银杏叶对照提取物中该6个化合物及芦丁进行标定。芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖-2-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖-2-O-(6-O-对羟基反式桂皮酰)-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖-2-O-(6-O-对羟基反式桂皮酰)-葡萄糖苷含量测定结果的RSD为1.1%~4.6%,槲皮素-3-O-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷的测定结果RSD大于5%。结果表明,用银杏叶对照提取物替代相应的对照品,可用于同时测定银杏叶制品中芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖-2-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-鼠李糖-2-O-(6-O-对羟基反式桂皮酰)-葡萄糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖-2-O-(6-O-对羟基反式桂皮酰)-葡萄糖苷5个黄酮醇苷成分的含量。因此使用对照提取物代替单体对照品测定银杏叶制品具有可行性。     

银杏叶中双黄酮成分的提取与测定

目的分离纯化银杏Ginkgo biloba叶中的双黄酮类成分,考察银杏叶变黄前后黄酮类成分质量分数的变化。方法从自然脱落的银杏叶中提取分离双黄酮类成分,对其乙醇提取物的二氯甲烷部位进行了分离,通过硅胶柱色谱和半制备液相方法对目标成分进行制备,采用HPLC法对银杏叶中的双黄酮进行了测定。结果分离的4个化合物分别为去甲银杏双黄酮、银杏双黄酮、异银杏双黄酮和金松双黄酮。对变黄前后银杏叶中4种双黄酮进行测定,结果表明,自然黄叶前3周内,银杏叶中双黄酮量逐渐降低,质量分数差别达30%左右。结论 HPLC法可用作银杏叶中双黄酮的测定,方法简便、可靠,能用于银杏叶的质量控制。同时,制备条件可对快速制备双黄酮对照品提供依据。     

不同天数银杏叶发酵液提取物的体外抗氧化活性比较

目的： 考察银杏叶培养基经过冠突散囊菌发酵不同时间后乙酸乙酯提取物的体外抗氧化活性。 方法： 将冠突散囊菌接种于银杏叶培养基中分别发酵4,7,11,14 d后,真空抽滤得到滤液,利用溶剂分级萃取得到提取液,以未发酵银杏叶乙 酸乙酯提取液作为对照。结合酶标仪,通过清除DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）自由基、ABTS 自由基,以及铁还原能力,比较不同发酵天数乙酸乙酯提取物的抗氧化能力。 结果： 测定了不同天数银杏叶发酵液乙酸乙酯提取物的抗氧化活性,发现11 d发酵液提取物抗氧化活性最强,DPPH半数抑制浓度（IC₅₀）105.60 mg·L^-1,ABTS IC₅₀ 102.09 mg·L^-1更接近维生素C（VC）的IC₅₀值,同时,11 d组铁还原实验的吸光度在不同浓度梯度下均为最大值。 结论： 初步确定银杏叶培养基发酵11 d后,发酵液中的抗氧化活性成分积累量最大。     

不同产地银杏叶中总银杏酸的含量比较

目的:比较不同产地银杏叶中总银杏酸的含量.方法:采用HPLC测定银杏叶中总银杏酸的含量.色谱条件为依利特Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-1％冰醋酸水溶液(90∶ 10),流速1.0 mL· min-1,检测波长310 nm,柱温35℃,进样量20 μL,外标法计算含量.结果:各产地银杏叶中总银杏酸含量差异较大,山东郯城总银杏酸含量最高(2.38％),江苏邳州最低(1.28％).结论:不同产地银杏叶中总银杏酸含量差异明显,应选择使用.