鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠脊髓水平p-Shc表达的影响

目的:探讨神经病理性疼痛大鼠脊髓背角水平p-Shc的表达变化及鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对其表达的影响。方法:实验1:雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组和CCI组。CCI组又分为术后1 d组(D1组)、3 d组(D3组)、7 d组(D7组)和14 d组(D14组),分别于术后1、3、7、14 d测定热缩足潜伏期(thermal withdraw latency,TWL)和机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)后处死并取其脊髓背角,采用Western blot方法测定Shc/p-Shc蛋白表达情况。实验2:雄性SD大鼠分为sham组、D14组、D14+PBS组、D14+GDNF组。与实验1相同的时间点测定TWL和MWT,并于第14 d处死并取其L4~5脊髓背角,采用Western blot方法检测Shc/p-Shc的表达变化。结果:与sham组相比,CCI组大鼠TWL和MWT明显降低(P<0.01);与D14组和D14+PBS组相比,D14+GDNF组大鼠TWL和MWT明显升高(P<0.01)。CCI组脊髓背角内p-Shc表达水平于术后3 d开始升高(P<0.05),一直持续到术后14 d(P<0.01);D14+GDNF组p-Shc表达水平较D14组和D14+PBS组显著下降(P<0.05)。结论:大鼠脊髓背角内接头蛋白Shc可能参与了神经病理性疼痛的发生,鞘内注射GDNF减轻神经病理性疼痛可能与降低脊髓背角Shc的磷酸化水平有关。     

鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠脊髓水平p-Akt表达的影响

目的:探讨神经病理性疼痛大鼠脊髓水平p-Akt的表达变化及鞘内给予胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)后对其表达的影响。方法:实验1:SD雄性大鼠分为对照组和CCI组。CCI组又分为术后1 d组(D1组)、术后3 d组(D3组)、术后7 d组(D7组)和术后14 d组(D14组)。分别于术后1、3、7、14 d测定热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)后处死并取其脊髓背角,采用Western blot方法测定Akt(p-Akt)蛋白表达情况。实验2:SD雄性大鼠分为对照组、D14'组、D14'+PBS组、D14'+GDNF组。与实验1相同时间点测定TWL,并于第14 d处死,取其脊髓背角,采用Western blot和免疫组化法检测p-Akt表达变化。结果:与对照组相比,CCI组大鼠TWL明显降低(P<0.01);与D14'组和D14'+PBS组相比,D14'+GDNF组大鼠TWL明显升高(P<0.01)。CCI组脊髓组织中p-Akt表达水平于术后3 d开始升高,一直持续到术后14 d(P<0.01);D14'+GDNF组p-Akt表达水平较D14'组和D14'+PBS组显著下降(P<0.05)。结论:大鼠脊髓组织中Akt信号通路可能参与了神经病理性疼痛的发生,鞘内注射GDNF减轻神经病理性疼痛与降低脊髓组织p-Akt的水平有关。     

慢性坐骨神经结扎神经痛大鼠脊髓nNOS阳性神经元的表达

目的:探讨慢性坐骨神经结扎(CCI)神经病理性疼痛大鼠脊髓背角nNOS阳性神经元的表达。方法:SD大鼠40只,随机分为五组,每组8只,即naive组、sham组、CCI5d组、CCI10d组;CCI15d组;测定各组大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);同时sham组大鼠在术后5d、CCI各组分别在术后5d、10d、15d断头处死取脊髓腰膨大,采用免疫组化法测定脊髓背角nNOS阳性神经元的表达。结果:CCI大鼠在手术后形成稳定的痛敏,与naive组和sham组大鼠比较有显著差异;naive组大鼠和sham组大鼠脊髓背角仅见少量nNOS阳性神经元的表达,且两组间无统计学意义;CCI各组大鼠脊髓背角nNOS阳性神经元的表达明显增多,与naive组和sham组比较差异显著。结论:慢性坐骨神经结扎(CCI)神经痛大鼠脊髓背角nNOS阳性神经元的表达增加,脊髓背角nNOS可能参与了CCI大鼠神经病理性疼痛的形成。     

腹腔注射右美托咪啶对神经病理性疼痛大鼠镇痛的实验研究

目的:评价右美托咪啶对神经病理性疼痛大鼠行为学、痛敏及脊髓背角神经元磷酸化胞外反应激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,p ERK)、磷酸化c AMP反应元件结合蛋白(phosphorylated c AMP response element bound protein,p CREB)、c-fos蛋白表达的影响。方法:健康成年雄性Wistar大鼠54只,6~8周龄,体重180~220 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=18):假手术组(S组)、慢性神经病理性疼痛组(C组)和右美托咪啶组(D组)。S组仅分离坐骨神经但不结扎,C组和D组采用结扎坐骨神经的方法制备大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)的神经病理性疼痛模型,D组于术后即刻开始至处死前1d腹腔注射右美托咪啶50μg/kg,1次/d,S组和C组注射等容量生理盐水。于术前1 d、术后3、7、14 d时以缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)测定大鼠机械痛阈和辐射热的缩足潜伏期(paw withdrawl latency,PWL)测定大鼠的热痛阈,并于术后测定痛阈后灌注处死大鼠,取L4~6脊髓组织,采用免疫组织化学法检测脊髓背角神经元p ERK、p CREB、c-fos的表达水平。结果:与S组比较,C组和D组术后3、7、14 d时MWT降低,TWL缩短,脊髓背角p ERK、p CREB、c-fos表达上调(P<0.05);与C组比较,D组术后3、7、14 d时MWT升高,TWL延长,脊髓背角p ERK、p CREB、c-fos表达下调(P<0.05)。与术前1 d比较,C组和D组术后3、7、14 d时MWT降低,TWL缩短;与术后3 d时比较,C组和D组7、14 d时MWT降低,TWL缩短,脊髓背角p ERK、p CREB、c-fos表达上调(P<0.05)。结论:右美托咪啶可减轻大鼠慢性神经病理性疼痛,抑制p ERK、p CREB、c-fos的表达可能是其作用机制之一。     

鞘内注射维生素B_6对大鼠慢性神经痛的镇痛作用及对DRG神经元p-ERK表达的影响

目的:观察维生素B_6(VitB_6)对神经病理性疼痛大鼠机械痛敏、热痛敏及L4～L5背根神经节(DRG)磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)表达的影响.方法:选择6只正常SD大鼠作为对照组(control),另选择鞘内置管3天后无神经损伤症状的SD雄性大鼠54只,随机分为3组(n=18):假手术组(sham):只分离坐骨神经;CCI组:结扎坐骨神经;CCI+Vit B6组:坐骨神经结扎后鞘内注射VitB_610mg/kg/d,连续两周.各组术前2天和术后1、3、5、7、10、14天测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT).除control组外其余各组分别在术后3d、7d和14d处死大鼠,采用免疫组织化学法观察L4～5 DRG和p-ERK的表达.结果:与sham组比较,CCI组术后各天TWL、MWT明显降低(P＜0.01);与CCI组比较,CCI+VitB_6组术后3、5、7、10、14天TWL明显增高(3天P＜0.05,5、7、10、14天P＜0.01),而术后各天MWT无明显差别.术后3、7、14天,CCI组结扎侧L4,5背根节p-ERK阳性细胞率明显高于sham组(P＜0.01),CCI+Vit B_6组结扎侧L4,5背根节p-ERK阳性细胞率明显低于CCI组(P＜0.01).结论:背根神经节ERK活化参与神经病理性疼痛信号传递,鞘内注射Vit B_6抑制CCI大鼠热痛敏,其机制可能包括通过上游机制抑制ERK激活.     

舒芬太尼对神经病理性疼痛大鼠脊髓背角P2X3受体表达的影响

目的:研究舒芬太尼对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X3受体表达的影响。方法:SD雄性大鼠36只,随机分成3组:假手术组(Sham组);对照组(CCI组);舒芬太尼组(CCI+Suf组)。CCI和CCI+Suf组制备坐骨神经慢性压迫模型(chronic constriction injury,CCI)。Sham组和CCI组术后每天腹腔注射生理盐水(0.1 ml/100 g),CCI+Suf组术后每天腹腔注射舒芬太尼(0.02 ml/100 g)。每组分别在术前、术后1、3、7、14天给药30分钟后,测定热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。于术后第7、14天TWL测定后,随机选取6只大鼠L4-5节段脊髓,应用免疫组化法检测脊髓P2X3受体表达水平。结果:与Sham组比较,CCI组和CCI+Suf组TWL缩短,P2X3受体表达上调(P<0.05)。与CCI组比较,CCI+Suf组TWL延长,P2X3受体表达下调(P<0.05)。结论:舒芬太尼可以抑制脊髓P2X3受体的表达上调,并减轻大鼠神经病理性痛。     

N-乙酰天冬氨酰谷氨酸肽酶抑制剂对神经病理性疼痛大鼠脊髓水平瞬时感受器电位香草酸受体1表达的影响

目的:研究鞘内注射N-乙酰天冬氨酰谷氨酸(N-acetylaspartylglutamate,NAAG)肽酶抑制剂(2-PMPA)对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及脊髓水平瞬时感受器电位香草酸受体l(TRPV1)表达的影响。方法:取鞘内置管成功的雄性SD大鼠24只,体重200²50 g,随机分为3组(n=8):假手术组(sham组)、坐骨神经慢性压迫性损伤组(CCI组)和2-PMPA治疗组(2-PMPA组)。sham组只暴露坐骨神经,但不结扎,术后鞘内注射生理盐水;CCI组坐骨神经结扎后鞘内注射生理盐水;2-PMPA组坐骨神经结扎后鞘内注射2-PMPA 100μg。所有组每次给药剂量均为10μl,每日1次,连续7 d。分别于术前及术后7 d时,以热缩足潜伏期(TWL)和机械缩足阈值(MWT)测定大鼠痛阈,然后处死大鼠,采用免疫荧光和Western blot法测定脊髓水平TRPV1的表达。结果:三组大鼠术后7 d TWL和MWT值分别为(17.8±1.1)、(5.5±1.0)、(12.0±1.4)s和(13.1±1.2)、(4.3±0.9)、(10.5±1.0)g。与sham组比较,CCI组术后7 d时TWL和MWT值均降低,脊髓TRPV1表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与CCI组比较,2-PMPA组术后7 d时TWL和MWT值均升高,脊髓TRPV1表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鞘内注射NAAG肽酶抑制剂可以有效地治疗神经病理性疼痛,其作用机制可能与抑制脊髓水平TRPV1的表达有关。     

白藜芦醇通过抑制海马NF-κB减轻慢性坐骨神经挤压损伤大鼠神经病理性疼痛

目的评价白藜芦醇对大鼠神经病理性疼痛的治疗效应。方法雄性SD大鼠32只,随机分为4组(n=8):假手术+二甲基亚砜组(sham+DMSO)、假手术+白藜芦醇组(sham+Res)、慢性坐骨神经挤压损伤(CCI)+DMSO组、CCI+白藜芦醇组(CCI+Res)。假手术组仅暴露坐骨神经不做结扎,其他各组采用坐骨神经结扎术制备神经病理性痛模型,CCI术后5 d,分别经侧脑室注射DMSO 5μl和30μg Res(溶于DMSO 5μl),注射时间20 s,留针5 min。手术前,给药前,及侧脑室给药后1、7、14 d应用热辐射仪测定热缩足潜伏期(TWL),同时测定海马星型胶质细胞和NF-κB p65的表达变化。结果与sham+DMSO组相比,CCI+DMSO组各时间点TWL缩短,热痛阈(WTL)降低(P0.05),CCI+Res与CCI+DMSO组相比TWL延长;同时海马星型胶质细胞活化受到抑制,NF-κB p65表达下调(P0.05)。结论白芦藜醇可以减轻大鼠CCI神经病理性痛,其机制可能与抑制海马星型胶质细胞活化,抑制NF-κB p65表达有关。     

杏仁核损毁对神经病理性疼痛大鼠疼痛症状及脊髓小胶质细胞活化的影响

目的:探讨损毁基底外侧杏仁核(Basolateral amygdala,BLA)对神经病理性疼痛大鼠疼痛症状及脊髓小胶质细胞活化的影响。方法:选择60只200~250 g纯种雄性SD大鼠,采用坐骨神经慢性缩窄手术(Chronic constriction injury,CCI)制备神经病理性疼痛模型,随机分为3组(n=20):模型组(Model),模型+BLA损毁组(Model+BLA lesions)和模型+假手术组(Model+sham),模型+BLA损毁组于CCI术后7天采用立体定位辅助下将损毁电极插入BLA行阳级损毁。同时选取20只同周龄大鼠作空白对照组(Blank),模型+假手术组则仅行立体定位并插入未通电的损毁电极。观察各组CCI术前2 d、术后1、4、7、11、14、17及21 d固定时间点的自发性痛行为,采用von Frey纤维和热辐射法分别测量以上时间点的机械性缩足反射阈值(Withdrawal mechanical threshold,MWT)和热刺激爪退缩阈值(Thermal withdrawal latency,TWL);采用荧光免疫组化法检测术后21天脊髓大麻素受体2(Cannabinoid receptor 2,CB2)及特异表达补体C3受体(Complement receptor 3,OX-42)的荧光积分光密度(Integral optical density,IOD)来评价脊髓小胶质细胞的活化情况;酶联免疫吸附法检测脊髓血浆肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平来评价炎症反应情况。结果:与空白组相比,模型组的MWT和TWL水平降低,脊髓小胶质细胞CB2和OX-42的IOD增强及脊髓TNF-α和IL-1β水平升高;BLA损毁后可改善以上异常,模型+BLA损毁组的MWT和TWL水平升高,脊髓小胶质细胞CB2和OX-42的IOD的增强及脊髓TNF-α和IL-1β水平的升高均被抑制,均优于模型组和模型+假手术组(P<0.05),但与空白组的差异仍有统计学意义(P<0.05)。结论:损毁BLA可改善神经病理性疼痛大鼠的疼痛症状,同时对脊髓小胶质细胞活化有抑制作用并降低炎症反应。     

鞘内注射米贝地尔抑制慢性坐骨神经结扎大鼠机械痛敏和热痛敏

目的:观察脊髓水平T型钙通道阻滞剂米贝地尔(mibefradil)对坐骨神经慢性松结扎(CCI)大鼠机械和热痛阈的影响,探讨脊髓T型钙通道在伤害性信息传递中的作用.方法雄性SD大鼠48只,随机分为6组(n=8):假手术组(Sham),CCI组,CCI 生理盐水组,CCI 米贝地尔50 μg、100 μg、200 μg组.CCI组和Sham组在术前、术后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21d测定大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);其余各组大鼠在手术前5天先进行鞘内置管,在术前测定基础MWT和TWL,CCI手术后5 d鞘内注射不同剂量的米贝地尔,测定给药前、给药后0.5 h、1 h、2 h、4h、8 h大鼠MWL和TWL.结果:CCI组从术后3 d开始直到本实验观察的术后21 d,MWT和TWL均明显降低,与Sham组相比具有显著性意义(P＜0.01);CCI加生理盐水组大鼠在各个时间点上与给药前相比MWT和TWL无明显改变(P＞0.05);CCI加米贝地尔各个剂量组大鼠在给药后MWT和TWL均逐渐增加,具有剂量依赖性,并随时间的延长又逐渐恢复到给药前水平,CCI 米贝地尔200μg在给药后1 h时作用最明显,与给药前和盐水组相比P＜0.01,并一直持续到给药后4h.结论:鞘内注射米贝地尔能明显减轻慢性坐骨神经松结扎大鼠机械痛敏和热痛敏,提示T型钙通道在脊髓水平参与疼痛信息传递.     

过氧乙酸与乙醇对体温计浸泡消毒效果的比较

使用后的体温计表面普遍污染有细菌。经0．5％过氧乙酸或75％乙醇溶液浸泡30min,杀菌率均达99％以上、用过氧乙酸浸泡的消毒效果明显优于乙醇。     

电镜技术在测定消毒剂对乙型肝炎病毒灭活效果中的应用

在电镜下观察了消毒剂作用后乙型肝炎病毒颗粒破坏情况，并与用ＳＰＲＩＡ法检测ＨＢｓＡｇ抗原性破坏结果作比较。结果，含二氯异氰尿酸钠、碘伏与戊二醛的３种消毒液，破坏ＨＢＶ颗粒结构的最低有效浓度均高于破坏ＨＢｓＡｇ抗原性者。     

大鼠PAG内Nogo-A在痛觉调制过程中角色的探索

目的:用脑内核团微量注射和免疫组化等方法,观察大鼠中脑导水管周围灰质( periaqueductal gray,PAG)内“勿动蛋白”-A(Nogo-A)、P物质(substanceP,SP)和降钙素基因相关肽(calcitoningene-related peptide,CGRP)表达的变化,研究探讨Nogo-A在痛觉调制过程中的角色,以及它在大鼠PAG内与CGRP、SP和内源性阿片系统在痛觉调制过程中的相互作用.方法:选用雄性SD大鼠32只,随机等分为4组:空白对照组8只,分别向PAG内注射0.9％生理盐水1μl;模型对照组、吗啡组和纳洛酮组各8只,首先单侧后爪掌心皮下注射1％的福尔马林0.1 ml复制炎症痛敏大鼠模型,3d后分别向PAG内注射等量0.9％生理盐水、吗啡或纳洛酮各1 μl,60 min后取大鼠大脑PAG区脑组织,采用免疫组化法观测各组大鼠PAG内Nogo-A、SP和CGRP免疫反应阳性神经元的表达差异.结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PAG内Nogo-A的表达量显著降低(P＜0.01),CGRP及SP显著增高(P＜0.01);与模型对照组比较,吗啡组大鼠PAG内Nogo-A的表达量显著增高(P＜0.01),CGRP及SP显著降低(P＜0.05),而纳洛酮组PAG内Nogo-A的表达量显著降低(P＜0.05),CGRP及SP显著增高(P＜0.05).结论:(1)炎症痛敏大鼠PAG内Nogo-A的表达量比正常降低,而CGRP及SP显著增高;(2)阿片肽可增加PAG内Nogo-A的表达,并降低CGRP及SP的表达.     

紫外线对微生物检验室空气消毒效果的检测

为了解紫外线对密闭性较好的无菌室空气的消毒效果,用平板沉降15min采样,检测空气细菌总数。结果,经卫生清扫后,室内空气细菌总数很少超过标准（>200cfu/m3再经约为常规量2倍的紫外线照射30min,22h内空气细菌总数均未超过标准。说明此类无菌室可于每天下班前进行消毒处理,第二天上班即可使用。     

25例无精子症患者常染色体异常的临床分析

据现有对Y染色体遗传序列的研究证实，Y染色体的微缺失是引起男性不育的重要原因之一，在对男性不育做染色体检查时发现，除性染色体异常引起的生殖器官异常，进而导致男性精子生成障碍而不育外，我们对一些无精子症患者进行体细胞染色体分析时，发现常染色体异常导致的不育所占比例也很大。     

含氯消毒剂持续释放对农村井水消毒效果检测

在底端封闭的聚乙烯管 (长 12 8mm ,内径 15mm ,管盖下方管壁有直径 1 5mm释氯孔 )内装2 5片漂白粉精片 (36 0mg/片 ,主要成分为次氯酸钙 ) ,悬挂于手压式抽水井井筒内。对悬挂该管 30min的36口井 ,采水样检测 ,由释氯孔释入水中的有效氯可使其全部达到消毒标准 (细菌总数 <10 0cfu/ml,大肠菌群数 <3个 /L) ;而消毒前仅 1口井水的细菌总数未超标 ,其余均超标     

不同方法对采血车厢空气消毒效果的比较

采用平板沉降法采样,检测车厢空气中细菌总数与霉菌,以比较3种方法对采血车厢空气消毒的效果。结果,戊二醛熏蒸能使车厢空气达到消毒合格标准(细菌总数≤30cfu/平板,无霉菌),开始采血后能维持2.5h空气细菌总数不超标并且无霉菌;臭氧熏蒸或氯气加臭氧熏蒸均不能将霉菌全部杀灭。因此,3种方法中仅戊二醛法可用。     

THE ROLE OF SERUM COMPLEMENT IN CHEMOTAXIS OF LEUKOCYTES IN VITRO

By the use of chambers containing two compartments with an interposed micropore filter, chemotaxis of polymorphonuclear leukocytes (PMN's) in vitro was studied employing various agents that fixed serum complement (C'). Antigen-antibody complexes, zymosan, and aggregated human gamma globulin, in the presence of fresh rabbit, guinea pig, or mouse serum resulted in the migration of PMN's through the micropore filter. Pepsin-degraded rabbit antibody or unaltered duck serum containing antibody did not exhibit such activity after addition of antigen. Heating of the serum before treatment or the presence of EDTA prevented the generation of the chemotactic factor. The chemotactic factor could not be generated in whole serum from rabbits genetically deficient in C'. However, the defect in this rabbit serum could be corrected by addition of rabbit or human C'6. Serum of B10·D2 mice deficient in hemolytic C' also yielded poor chemotactic activity. Interaction of the first four reacting components of guinea pig C' did not result in significant chemotactic activity unless guinea pig euglobulin with heat labile components was also present. In rabbit serum, C'5 and C'6, when "activated" by interaction with the first four reacting components, behaved like a protein-protein complex and exhibited marked chemotactic activity. By employing conditions favoring dissociation of the complex, the individual components were isolated and shown to be chemotactically inactive. Upon recombination of the two components, however, activity reappeared. Using another approach, the C'5–C'6 complex was isolated intact, and shown to be chemotactically active while other fractions not containing these components were not active. It is postulated that the C'5–C'6 complex is the active chemotactic factor generated in serum after the addition of C'-fixing agents.     

重症肝炎并发DIC早期诊断中D-二聚体乳胶试验的应用

D-二聚体乳（D—Dimer）是交联纤维蛋白经纤溶酶水解产生的一种特异降解产物。利用抗D-二聚体单克隆抗体包被乳胶颗粒进行凝集试验，是对血中D-二聚体定性检测，定性阳性反映体内纤溶活性增强，有助于重症肝炎并发DIC早期诊断。     

医院应用中消毒液微生物污染检测

经检测,铁道部第五工程局局内医院应用中的消毒液,细菌总数超标率为7.32%～23.88%,真菌检出率为44.78%～80.00%。其原因多为使用时间较长所致。