血红蛋白双重杂合子对不同糖化血红蛋白检测系统结果的影响

目的观察Hb Q-H和Hb J-Bangkok合并β地中海贫血(简称"地贫")双重杂合子患者糖化血红蛋白A1c(HbA1c)对不同糖化血红蛋白检测系统结果的影响。方法收集20例表观健康成年人和20例2型糖尿病(T2DM)患者标本,用于5个糖化血红蛋白检测系统间的结果比对。收集1例Hb Q-H患者标本和1例Hb J-Bangkok合并β地贫双重杂合子患者标本,用Capillarys2行血红蛋白毛细管电泳,用gap-PCR、PCR-RDB和基因测序方法鉴定2例异常标本的珠蛋白基因。同时用BioRad VARIANTⅡ(VⅡ)、BioRad VARIANTⅡTurbo2.0(VⅡ-T2.0)、Capillarys 2 Flex Piercing(C2FP)、Primus Ultra2(Ultra2)、Roche PPI 800(PPI 800)5个糖化血红蛋白检测系统检测所有标本的HbA1c结果,其中对于双重杂合子标本,每个检测系统检测3次,保存图谱和检测结果并对比分析。结果 Hb Q-H标本的基因型为--α~(QT)/--SEA;β~N/β~N,珠蛋白α1链发生HbA1 CD74GC突变,形成Hb Q-Thailand血红蛋白变异体,无正常的α珠蛋白肽链。Hb J-Bangkok合并β地贫的基因型为:αα/αα;β~(CD56)/β~(CD41-42),珠蛋白β链第56位密码子发生GGCGAC点突变,形成Hb J-Bangkok血红蛋白变异体,无正常的β珠蛋白肽链。对于Hb Q-H标本,5个HbA1c检测系统中有3个检测系统报告了HbA1c结果;VⅡ和VⅡ-T2.0系统图谱与正常图谱存在明显区别,未报告HbA1c结果;C2FP系统图谱与正常图谱相似,HbA1c结果为3.7%;Ultra2系统和PPI系统报告了HbA1c结果,分别为5.3%和5.7%,不存在异常提示。对于Hb J-Bangkok合并β地贫标本,5个HbA1c检测系统中有3个检测系统报告了HbA1c结果;VⅡ系统图谱与正常图谱存在明显区别,未报告HbA1c结果;VⅡ-T2.0系统图谱与正常图谱存在区别,存在84.9%的P4峰,报告了HbA1c结果为4.7%;C2FP系统图谱与正常图谱存在明显区别,未报告HbA1c结果。Ultra2系统和PPI系统均报告了HbA1c结果,分别为4.7%和3.8%,不存在异常提示。结论 Hb Q-H患者与Hb J-Bangkok合并β地贫患者标本均不含正常的HbA,应无HbA1c结果。对于二者,VⅡ系统及VⅡ-T2.0系统的结果图谱存在明显异常,提示结果不可报告;Hb Q-H对C2FP系统存在明显干扰,报告了HbA1c结果,而Hb J-Bangkok合并β地贫标本C2FP系统未报告HbA1c结果;二者对PPI及Ultra2系统存在明显干扰。     

异常血红蛋白NewYork合并β地中海贫血的临床表型分析

正血红蛋白病是一类常染色体隐性遗传病,可分为地中海贫血(简称地贫)和异常血红蛋白病2类。常见的地贫可分为α地贫和β地贫,其特征是珠蛋白肽链的合成减少或缺如,而异常血红蛋白病则表现为珠蛋白肽链结构的异常。地贫和异常血红蛋白病携带率高,防控非常重要。迄今为止,在我国已经发现多种α和β链异常血红蛋白病,其中南方地区最常见者包括Hb Q-Thailand、Hb G-Chinese、Hb E、Hb NewYork和Hb Bangkok[1-2]。其     

珠蛋白生成障碍性贫血的基因诊断

珠蛋白生成障碍性贫血(thalassemia,Th)又称地中海贫血,是一类常见且严重的遗传性血液疾病。该病由于珠蛋白基因突变,使组成血红蛋白(Hb)分子的α珠蛋白肽链或β珠蛋白肽链的合成缺乏或减少而导致溶血性贫血[1]。若α珠蛋白肽链合成缺乏,称α-Th,若β珠蛋白肽链合成受到抑制,称β-Th。     

Hb E/Hb Hope双重杂合子的血液学特征和分子诊断

目的分析1个傣族血红蛋白(Hb)E复合Hb Hope家系的血液学特征。方法采用全血细胞计数和毛细管Hb电泳检测该家系成员的血液学特点,采用PCR-流式荧光杂交法检测常见的α、β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变,用Sanger DNA测序方法检测α、β珠蛋白基因中的罕见突变。结果该家系中先证者的基因型为Hb E复合Hb Hope双重杂合子,血常规检测呈现小细胞低色素,Hb电泳检出含量为71.1%的异常电泳区带HbX,25.2%的Hb E区带,HbA2含量为3.7%,未检出HbA;先证者父亲为Hb Hope杂合子,血常规结果正常,检出含量约为40%的HbX,校正后的HbA2含量为2.9%;先证者母亲为Hb E杂合子,检出24.9%的Hb E带,HbA2高于3.5%。结论 Hb E复合Hb Hope异常血红蛋白病可呈现出较单独的杂合突变更为复杂的血液学表型,结合基因检测有助于揭示复杂血液学结果的分子机制,从而明确诊断,避免误诊和漏诊。     

珠蛋白生成障碍性贫血筛查指标的应用评价

目的找出珠蛋白生成障碍性贫血筛查中各常用实验指标的截断点(cut off point),并探讨其联合应用价值。方法对经基因诊断确诊的146例α珠蛋白生成障碍性贫血、278例非α珠蛋白生成障碍性贫血、98例β珠蛋白生成障碍性贫血和326例非β珠蛋白生成障碍性贫血标本进行Hb电泳与血细胞分析。用ROC曲线找出血红蛋白A2(HbA2)、MI(Mentzer指数)、红细胞平均体积(MCV)和红细胞平均血红蛋白含量(MCH)的截断点并将HbA2与另3个指标进行联合应用,统计各自的灵敏度、特异度、正确率、阳性预测值和阴性预测值。结果单项指标以HbA2诊断α珠蛋白生成障碍性贫血的诊断准确性最好(截断值:2.49%),与MI、MCV和MCH的平行联合试验可将灵敏度提高至91%以上,系列联合试验可明显提升诊断准确性;单项HbA2含量升高(截断值:3.60%),足以满足β珠蛋白生成障碍性贫血筛查的需要。结论 HbA2含量是β珠蛋白生成障碍性贫血筛查的理想指标;在α珠蛋白生成障碍性贫血的筛查诊断中,可通过HbA2含量与MI、MCV和MCH的联合试验来达到筛查或诊断的目的。     

血红蛋白Cagliari(β60[E_4]缬→谷)一种新的地中海贫血性不稳定血红蛋白病

本文报导一例具有中间型地中海贫血样表型的病例。其父母均为正常。对病人珠蛋白基因的核苷酸序列分析,查明是由于β珠蛋白基因第60位密码子上自发突变引起T→A 替代,导致形成一种新的异常Hb。同源β珠蛋白基因和α珠蛋白基因的核苷酸序列正常。β肽链上靠近血红素袋的角处由极性氨基酸(谷氨酸)替代非极性氨基酸(缬氨酸),使水能进入血红素袋,造成Hb 的不稳定。这种新的异常Hb 以先证者的出生地命名为Hb Cagliari。病人于     

变异血红蛋白对2种基于HPLC原理的糖化血红蛋白检测系统的影响

目的比较亲和层析-高效液相色谱(AC-HPLC)系统和离子交换-高效液相色谱(IE-HPLC)系统测定血红蛋白(Hb)结构不同的血液样本中HbAlc的结果,评价变异Hb对2种检测系统的影响。方法分别用2种HPLC系统同时检测HbA1c含量在5%~11%、Hb结构正常的血液样本和含有不同浓度胎儿Hb(HbF)的血液样本以及α-地中海贫血(α-MA)和β-地中海贫血(β-MA)患者血液样本中的HbA1c浓度。结果对于Hb结构正常、HbA1c含量在5%~11%的血液样本,2种HPLC检测系统的测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。AC-HPLC法不受血液样本中HbF的干扰;若血液样本中HbF的含量超过8.8%,IE-HPLC法测定结果存在一定的偏倚,当HbF含量达70%时甚至无法测出结果。对于α-MA和轻型β-MA患者的血液样本,IE-HPLC法的结果明显高于AC-HPLC法(P<0.01、P<0.05),而重型β-MA患者的样本用IE-HPLC法甚至无法测得结果。结论用IE-HPLC法检测含变异Hb、HbF的样本中的HbA1c,结果可能受干扰;而用AC-HPLC法则不受干扰。     

变异血红蛋白对2种基于HPLC原理的糖化血红蛋白检测系统的影响

目的 比较亲和层析-高效液相色谱(AC-HPLC)系统和离子交换-高效液相色谱(IE-HPLC)系统测定血红蛋白(Hb)结构不同的血液样本中HbAlc的结果 ,评价变异Hb对2种检测系统的影响.方法 分别用2种HPLC系统同时检测HbA1c含量在5%～11%、Hb结构正常的血液样本和含有不同浓度胎儿Hb(HbF)的血液样本以及α-地中海贫血(α-MA)和β-地中海贫血(β-MA)患者血液样本中的HbA1c浓度.结果 对于Hb结构正常、HbA1c含量在5%～11%的血液样本,2种HPLC检测系统的测定结果 差异无统计学意义(P>0.05).AC-HPLC法不受血液样本中HbF的干扰;若血液样本中HbF的含量超过8.8%,IE-HPLC法测定结果 存在一定的偏倚,当HbF含量达70% 时甚至无法测出结果 .对于α-MA和轻型β-MA患者的血液样本,IE-HPLC法的结果 明显高于AC-HPLC法(P<0.01、P<0.05),而重型β-MA患者的样本用IE-HPLC法甚至无法测得结果 .结论 用IE-HPLC法检测含变异Hb、HbF的样本中的HbA1c,结果 可能受干扰;而用AC-HPLC法则不受干扰.     

高效液相色谱法检测血红蛋白在珠蛋白生成障碍性贫血诊断中的应用

目的 评估高效液相色谱法(HPLC)检测血红蛋白对珠蛋白生成障碍性贫血诊断的效能.方法 应用根据HPLC原理的D-10离子交换层析仪,对56例临床疑诊为珠蛋白生成障碍性贫血的患者进行血红蛋白分析;同时应用单管多重PCR法和PCR/RDB技术分别检测其α,β珠蛋白基因突变.结果 基因分析共检出32例阳性(27例β珠蛋白基因突变,5例α珠蛋白基因缺失),以HbA2 > 4.0%或HbF>10.0%(1岁～成人)作为血红蛋白分析对β珠蛋白生成障碍性贫血的诊断标准,以HbA2<1.5%作为对α珠蛋白生成障碍性贫血的筛查标准,则血红蛋白分析与基因分析对β珠蛋白生成障碍性贫血诊断一致率迭92.2%;β基因突变中纯合子(双重杂合予)与杂合子HbF含量有显著性差异.结论 采用HPLC技术的血红蛋白分析,与基因分析有良好的符合性,可用于珠蛋白生成障碍性贫血的筛查诊断.     

血红蛋白病的生化基础和临床检验

近二十年来,血红蛋白分子的研究,较为透彻深入,进展迅速。由它的量和质异常引起的血红蛋白病也是从分子水平研究其发病机理最早和最充分的一类遗传性“分子病”。世界上约有一亿多人带有血红蛋白病的基因,我国南方也不少。现就此病的生化基础和临床检验扼要综述如下。血红蛋白的结构与合成血红蛋白(Hb)分子是由4条多肽链(或称亚单位珠蛋白链)各结合一个血红素所组成的四聚体。人类Hb主要有4种多肽链:α链含141个氨基酸,非α链(β、γ和δ链)各含     

地中海贫血的规范化输血治疗

1 地中海贫血的发生率和地域分布 地中海贫血(Mediterranean anemia,简称地贫),又称海洋性贫血(thalassemia)、珠蛋白生成障碍性贫血,是由于珠蛋白肽链基因缺陷(突变、缺失等)所致的1种或多种珠蛋白肽链的生物合成降低或完全被抑制,导致珠蛋白肽链间的平衡被破坏,正常成人型血红蛋白(HbA,α_2β_2)合成降低的1种遗传性溶血性贫血;作为人类最常见的单基因遗传病,地贫属常染色体不完全显性遗传.     

血常规及血红蛋白电泳联合检测对珠蛋白生成障碍性贫血的产前筛查

目的探讨血常规及血红蛋白(Hb)电泳对珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率,分析联合检测在产前筛查的临床意义。方法收集该院就诊的922例育龄期确诊的珠蛋白生成障碍性贫血患者,分析红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白(MCH)、(HbA2)单独及联合检测对珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率。结果 MCV、MCH、Hb电泳单独检测对α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型的漏检率高,分别为66.55%、44.24%、61.87%;对α-珠蛋白生成障碍性贫血轻型的漏检率分别为14.67%、13.78%、19.56%;对β-珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率为15.70%、16.25%、2.48%;而对α-和β-复合珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率为16.67%、16.67%、5.56%。MCV与MCH联合检测对α-珠蛋白生成障碍性贫血静止型、轻型、β-珠蛋白生成障碍性贫血、α-和β-复合珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率分别是39.21%、13.78%、15.70%、16.67%;MCV与HbA2联合检测对上述各型珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率分别为42.45%、14.67%、0.28%、5.56%;MCH与HbA2联合检测对各型珠蛋白生成障碍性贫血的漏检率最低,分别为27.34%、13.78%、0.28%、5.56%。结论 MCH与Hb电泳联合检测可降低珠蛋白生成障碍性贫血患者的漏检率,可用于该疾病的产前筛查。     

特殊α-珠蛋白基因结构合并东南亚缺失的α 地中海贫血1例

摘要:目的：探讨1例特殊α-珠蛋白基因结构合并东南亚缺失的α-地贫患者的分子遗传学机制。 方法：用血红蛋白（Hb）电泳分析该患者Hb含量,裂口PCR(gap-PCR)法检测缺失型α-地贫基因,反向斑点杂交技术（RDB）检测非缺失型α-地贫基因和β-地贫基因突变。 结果：Hb电泳结果显示,该患者HbA含量为93.43%,HbA2为6.57%;缺失性α-地贫的电泳结果出现1 900、1 700、1 200 3条罕见条带;非缺失型α-地贫基因检测未发现Hb^CS、Hb^WS、Hb^QS突变;β-地贫基因突变为β^41-42M/β^N基因型。 结论: 该患者为α-珠蛋白基因结构（α2-α2α1）合并东南亚缺失导致的非Hb H病,且存在β 地贫,临床症状不明显。     

深圳地区9569例妊娠期妇女血红蛋白电泳结果分析

目的：评估全自动毛细管血红蛋白（Hb）电泳技术在深圳地区妊娠妇女产前珠蛋白生成障碍性贫血（地贫）筛查及异常 Hb 检查的临床应用价值。方法采用 Sebia capillary2flex 型全自动毛细管电泳仪对深圳市龙岗区妇幼保健院产前门诊孕妇进行 Hb 电泳检测,分析 HbA2水平及异常 Hb 电泳条带及水平。结果检出951例异常 Hb 电泳结果（异常率9．9％）包括 HbA2＞3．5％;HbA2＜2．5％;HbF ＞10％及其他异常 Hb（包括 HbCS 、HbE 、HbD 、Hb NewYork 和 Hb Q-Tailand 等）。结论全自动毛细管 Hb 电泳在地贫产前筛查及异常 Hb 检测中具有重要意义,可为进一步分子确诊及产前诊断提供指导。     

MCV,HbA2在珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的诊断价值

目的 探讨MCV及HbA2在珠蛋白生成障碍性贫血(thalassemia)筛查中的诊断价值.方法 收集已作GapPCR技术及反向斑点杂交基因诊断,确诊为α单纯轻型缺失型患者96例,β单纯突变型患者74例,对照组103例,进行MCV及HbA2检测,确定两者分别在α型及β型筛查中的最佳临界值(CT),并对其诊断价值作相关的统计学分析.结果 MCV在α型及β型的最佳临界值分别为:≤71.9fl和≤71.55fl,HbA2的最佳临界值则分别为:≤3.85％和≥5.25％;MCV在α型筛查中的诊断价值显著高于HbA2(x2=53.38,P＜0.05),在β型中与HbA2相比差异无统计学意义(x2=5.663,P＞0.05);MCV在两组的诊断价值差异无统计学意义(x2=0.053,P＞0.05),HbA2在α型的诊断价值显著低于β型(x2=82.559,P＜0.05).结论 MCV在α,β珠蛋白生成障碍性贫血筛查中诊断价值均较高;HbA2在a珠蛋白生成障碍性贫血中的诊断价值较低,在β珠蛋白生成障碍性贫血中的诊断价值较高.     

结合珠蛋白清除血红蛋白作用及机制

结合珠蛋白(Hp)又称触珠蛋白,是1种极丰富的急性时相血浆糖蛋白,结构上是α2球蛋白的一部分,1938年由Polonovski和Jayle[1]报道。在血管内溶血期间,游离血红蛋白(Hb)可释放入血循环,Hp与这部分Hb结合,Hp-Hb复合体通过与巨噬细胞表面的清道夫受体CD163结合,经内吞作用     

醣化血红蛋白的测定方法

在成人和六个月以上儿童的红细胞中,含有三种正常血红蛋白(Hb):HbA(α_2β_2)、HbA_2(α_2δ_2)和HbF(α_2γ_2)。其中以HbA为主,约占总Hb的90%;HbA_2和HbF只分别占2.5%和0.2%。将人红细胞溶血物用阳离子交换树脂柱作层折时,在HbA主要峰前,可出现三个带阴电荷的次要的Hb组分,即HbA_2a(又可分为HbA_1a_1和HbA_1a_2)、HbA_1b和HbA_1c,其含量分别约为1.6%、0.8%和4%。1968年Rehbar首先报告,在糖尿病人     

全自动毛细管电泳仪在珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用

目的评价法国Sebia公司Capillarys 2全自动毛细管电泳仪在珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用。方法采集2011年8～12月经血分析(红细胞平均体积小于80fL,红细胞平均血红蛋白浓度小于26pg的8岁以上患者)筛选后的292份标本用法国Sebia公司Capillarys 2全自动毛细管电泳仪对入选标本进行血红蛋白(Hb)毛细管电泳、血清铁、铁蛋白检查,同时作α-及β-珠蛋白生成障碍性贫血基因检查。结果 (1)共检测了292例临床标本,符合α-珠蛋白生成障碍性贫血表型者36例,β-珠蛋白生成障碍性贫血表型者135例。同时出现α-及β-珠蛋白生成障碍性贫血表型者2例。(2)高压毛细管电泳法用于α-珠蛋白生成障碍性贫血诊断的灵敏度为86.11%,特异度为98.37%,准确度为95.60%,阳性预测值为93.94%,阴性预测值为96.03%。(3)高压毛细管电泳法用于β-珠蛋白生成障碍性贫血诊断的灵敏度为97.04%,特异度为98.35%,准确度为97.66%,阳性预测值为98.50%,阴性预测值为96.75%。HbA2值大于4.0%时,β-珠蛋白生成障碍性贫血基因法检测阳性率达100.00%。结论法国Sebia公司Capillarys 2全自动毛细血管电泳仪对Hb区带分辨及定量准确度高,可为Hb病(包括珠蛋白生成障碍性贫血及异常Hb病)的初筛提供快速的诊断依据。     

脂质体转染反义寡核苷酸对重型β-地中海贫血红系细胞α-珠蛋白的调控作用

目的 研究脂质体转染反义寡核苷酸(ASON)对重型β-地中海贫血(β-地贫)患者红系细胞α-珠蛋白基因的调控作用,为基因治疗β-地贫提供新的思路.方法 将前期实验筛选获得的高效抑制α-珠蛋白基因表达的ASON以最佳浓度作用于体外培养的重型β-地贫患者红系细胞,并没空白对照组,经实时荧光定量RT-PCR分析ASON组和空白对照组中红系细胞α、β、γ-珠蛋白基因表达情况,观察ASON对相应珠蛋白基因表达的影响,通过高效液相色谱法(HPLC)检测ASON作用后血红蛋白水平,并经透射电子显微镜(电镜)观察ASON作用前后红系细胞内α-珠蛋白肽链沉积情况,了解ASON对β-地贫患者红系细胞内过剩α-珠蛋白肽链的影响.结果 实时荧光定量RT-PCR结果显示ASON组α-珠蛋白基因mRNA表达(9.04±0.29)较空白对照组(24.23±0.29)减低(P<0.01),α/(β+γ)珠蛋白比例失衡得到改善[ASON组、空白对照组分别为(0.79±0.02)、(2.26±0.06),P<0.01];HPLC检测表明ASON作用后α-珠蛋白基因表达下调,HbA2和HbF表达增加;透射电镜结果证实ASON作用后革型β-地贫患者红系细胞内过剩的α-珠蛋白肽链沉积减少,特别是在早期幼稚红细胞中,在空白对照组中沉积物无明显变化.结论 高效ASON可抑制体外培养的重型β-地贫患者红系细胞α-珠蛋白基因表达,有助于改善珠蛋白基因α/(β+γ)比例失衡,并减少过剩α-珠蛋白肽链在红系细胞内的沉积,为基因治疗β-地贫提供新的思路.     

红细胞相关参数与HbA2联合检测在α-珠蛋白生成障碍性贫血并发缺铁性贫血诊断中的应用

目的 探讨红细胞相关参数与血红蛋白A2(HbA2)联合检测在α-珠蛋白生成障碍性贫血并发缺铁性贫血诊断中的应用。方法 回顾性分析选取2017年1月～2018年6月α-珠蛋白生成障碍性贫血和缺铁性贫血患者,其中α-珠蛋白生成障碍性贫血组1 164例、缺铁性贫血组974例、α-珠蛋白生成障碍性贫血并发缺铁性贫血组765例,所有患者均经过地贫基因诊断和铁蛋白测定。另选同期健康体检者500例作为对照组。所有研究对象进行红细胞相关参数(包括Hb,MCV,MCH,MCHC,RDW)和HbA2检测并比较检测结果。结果 α-珠蛋白生成障碍性贫血组的HbA2,Hb,MCV,MCH,MCHC高于缺铁性贫血组,α-珠蛋白生成障碍性贫血并发缺铁性贫血组的HbA2水平低于缺铁性贫血组,MCV平均值高于缺铁性贫血组,差异均有统计学意义(P<0.05); 不同基因型珠蛋白生成障碍性贫血中HbA2,Hb,MCV,MCH,MCHC水平比较,在-α^3,7(4,2)/ αα,-^sea/αα,-α^3,7(4,2)/--^sea中依次降低。与对照组比较,其余各组红细胞指标与HbA2水平统计方差值F=53.3～1103.7,均P<0.01; 与αα^cs/αα比较,其余各基因型组红细胞指标与HbA2水平统计方差值F=71.8～903.2,均P<0.01。结论利用红细胞相关参数各项指标与HbA2相结合检测,能够有效地鉴别出缺铁性贫血和α-珠蛋白生成障碍性贫血以及α-珠蛋白生成障碍性贫血并缺铁性贫血。