分泌性IgA能介导抗体依赖性细胞介导细胞毒性

虽然已知分泌性IgA可阻止微生物粘附于粘膜表面,但是以前没有证明抗原特异性分泌性IgA在与抗原相互直接作用后,能介导细胞毒性。本文报导作者从超免疫血清和免疫肠道分泌物分别提纯抗志贺氏菌脂多糖(LPS)IgG和分泌性IgA。用LPS包被鸡红细胞(CRBC),并用与提纯的IgG和IgA部分的血凝反应检验。应用酶联免疫吸附试     

BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗的免疫佐剂作用

目的探讨免疫佐剂BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗的作用。方法将不同剂量(5、10、100μg)的免疫佐剂BCG-CpG-DNA与A群脑膜炎球菌多糖疫苗直接混合后,皮下免疫小鼠,与未添加佐剂疫苗比较,ELISA法检测抗原特异性IgG抗体水平,并分析抗体亚类IgG1和IgG2a的水平。结果BCG-CpG-DNA能提高A群脑膜炎球菌多糖疫苗特异性抗体IgG水平,并能促进抗原特异性抗体亚类的产生,其中佐剂中、高剂量(10、100μg)实验组IgG、IgG2a水平与未加入免疫佐剂疫苗之间差异有统计学意义。结论BCG-CpG-DNA对A群脑膜炎球菌多糖疫苗有免疫佐剂作用。     

用含A蛋白的葡萄球菌提取人血清IgG的初步探讨

自从1966年Forsgren阐明葡萄球菌A蛋白(SPA)能与人IgG分子的Fc段结合之后,开拓了其在免疫学中应用的新途径。1972年Hjelm采用IgG-Sepharose亲和层析柱分离SPA以及用SPA-Sepharose层析柱提纯IgG,由此简化了IgG的提纯方法。加之Sjholm证明和SPA结合的IgG可     

APS IgG通过非Fc受体途径诱导血液单核细胞表达TF活性

目的：探讨抗磷脂综合征(Antiphospholipid Syndrome，APS)患者血清IgG体外诱导血液单核细胞表达组织因子(Tissue Factor，TF)活性的作用及其作用途径。方法：利用纯化的APS血清IgG及其F(ab‘)2片段，以及抗磷脂结合蛋白(如β2-glucoproteinI，β2 GPI)单克隆抗体RP-1分别刺激新鲜分离的外周血单核细胞，通过因子Xa的生成量，判断单核细胞TF活性的表达。结果：与健康人血清IgG比较，APS患者血清IgG以及RP-1显著增强单核细胞的TF活性；外源性β2GPI可加强APS IgG的这一诱导作用；从APS IgG中纯化出的F(ab)’2片段具有与完整IgG分子相同的刺激效应。结论：抗磷脂抗体，主要为抗β2GPI，以与抗原特异结合方式，通过非Fc受体途径诱导血液单核细胞表达TF活性，成为APS患者血栓形成的机理之一。     

血清IgG4、CA19-9 水平对IgG4 相关性胆管炎的诊断及鉴别诊断价值

目的:探讨血清IgG4、CA19-9 及自身抗体对IgG4 相关性胆管炎(IgG4-SC)的诊断及鉴别价值。方法:选取41例IgG4-SC 患者、162 例非IgG4-SC 患者及40 例健康对照血清样本,采用免疫比浊法和直接化学发光法检测IgG4 和CA19-9水平、采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、抗平滑肌抗体(SMA)和抗线粒体抗体(AMA),并进行结果统计分析。结果: IgG4-SC 患者的ANA、ANCA、SMA 和AMA 阳性率分别为41.46%、7.32%、0 和2.44%。其中,ANA 阳性率与正常对照组、ANCA 阳性率与原发性硬化性胆管炎(PSC)组、SMA 和AMA 阳性率与非IgG4-SC组均存在差异,且具有非常显著统计学意义(P<0.01)。于血清IgG4(n =36/41)和CA19-9(n =21/41)升高情况与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);其ROC 曲线下面积(AUC)分别为0.979 和0.646,P<0.05。结论:血清IgG4 和CA19-9水平的高表达和自身抗体检测,对于IgG4-SC 的鉴别诊断具有准确性和重要临床价值。     

MRL/lpr小鼠中CD4~+CD25~+调节性T细胞对B细胞影响的研究

目的探讨MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)对B淋巴细胞的影响。方法磁珠分选法选出MRL/lpr小鼠及Balb/c小鼠脾脏中的Treg与效应性T细胞(Teff细胞),以尼龙毛柱法分离B细胞;用2种小鼠的Treg细胞分别与MRL/lpr小鼠的B淋巴细胞(加或不加Teff细胞)组成共培养体系,5 d后用酶联免疫吸附法检测上清液中IgA及IgG的水平,计算抑制率;将两种小鼠的Treg细胞注入MRL/lpr小鼠,对照组注入生理盐水,3周后流式细胞法检测小鼠脾脏中CD19+CD27++浆细胞含量。结果两种小鼠Treg细胞对B细胞分泌IgA及IgG均有直接抑制作用,与Teff细胞共培养也能对B细胞IgA及IgG的分泌起抑制作用(总抑制作用),两种小鼠Treg细胞的直接抑制率无显著性差异,总抑制率均大于直接抑制率,且MRL/lpr小鼠的Treg细胞总抑制率显著降低;输注同系Treg细胞的MRL/lpr小鼠,3周后浆细胞的含量显著低于对照组及输入Balb/c小鼠Treg细胞组。结论 Treg细胞可直接或间接抑制MRL/lpr小鼠的B细胞分泌IgA和IgG,MRL/lpr小鼠体内Treg细胞对B细胞的抑制力低于正常对照。输注同系Treg细胞可减少MRL/lpr小鼠浆细胞的生成。     

乙脑病毒prME蛋白与BALB/c鼠IgG Fc段编码基因联合构建DNA免疫研究

目的 研究IgG Fc编码基因对流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)DNA疫苗免疫增强效应的影响.方法 巢式RT-PCR法从BALB/c鼠脾组织获取IgG Fc段编码基因,用限制性内切酶从含流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)prME蛋白基因重组子获取prME蛋白基因,分别插入同-真核表达载体pcDNA3.1(+)不同酶切位点,构建蘑组子pJME/IgG Fc并经酶切及DNA测序分析.脂质体法将pJMrY/IgG Fc转染CHO细胞.免疫荧光、Western blot法检测转染的CHO细胞中融合蛋白分布与表达.将pJME/IgG Fc肌注免疫BALB/c鼠,检测小鼠脾特异性细胞毒T细胞(CTL)杀伤活性和中和抗体滴度.结果 pJME/IgG Fc经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ/Not Ⅰ酶切释出的插入子大小,(2001 bp,2730 bp)分别与预期结果相符合.所编码的融合蛋白相对分子质量(Mr)为101×103,主要分布于胞浆,少最分布于胞膜,pJME/IgG Fc转染CHO细胞经32次传代仍可表达融合蛋白.pJME/IgGFc免疫组中和抗体滴度与CTL活性较pJME及灭活疫苗组均升高(P<0.05).结论 pJME/IgG Fc成功构建,转染的CHO细胞可稳定表达融合蛋白,IgG Fc段编码基因能够增强JEV DNA疫苗的细胞和体液免疫应答.     

狼疮肾炎患者血清和肾组织IgG4检测及其与疾病活动指标的相关性分析

探讨狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者血清IgG4水平和肾脏IgG4沉积情况与疾病活动指标的相关性,初步明确IgG4在LN发病中的作用,为LN的防治提供新的线索。入组LN患者146例(WHO分型包括II型18例,IV型86例,V型9例,V+IV型33例),并以70例正常人为对照;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IgG4水平,并分析其与临床指标(血肌酐、总胆固醇、血尿素氮、血清白蛋白、血尿酸和24h尿蛋白等)的相关性;直接免疫荧光法检测LN患者肾脏组织IgG各亚型(IgG1、2、3和4)的沉积情况。结果显示:LN患者血清IgG4水平较正常人显著升高(P0.05);LN患者血清IgG4水平与血肌酐、总胆固醇和24h尿蛋白定量呈负相关(r=0.24,P0.05;r=0.35,P0.05;r=0.28,P0.05),与血清白蛋白水平呈正相关(r=0.22,P0.05),但与血尿素氮、血尿酸无相关。IgG及其亚型在LN组织中沉积普遍,以毛细血管壁和系膜区为主。其中IV、V、(V+IV)型IgG1、IgG2和IgG3的沉积强度显著强于II型;V型IgG4沉积强度显著强于IV(P0.05);IV型LN组织沉积IgG1/IgG4的比值显著高于V型(P0.05);V型LN组织沉积IgG4/总IgG的比值显著高于IV型(P0.05)。IgG4在LN的发病中可能起保护作用,有望为LN的防治提供新的策略。     

抗CEA抗体C2-45重链恒定区的置换与活性鉴定

目的:将抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体(mAb)C245(IgG4)转变成IgG1,增强其在抗肿瘤免疫中的作用。方法:采用PCR从C245(IgG4)基因中克隆VH和Vk基因,并插入到含有人IgG1恒定区(CH)基因的杆状病毒表达载体pAckCH3中。用构建的重组基因感染Sf9昆虫细胞,将获得的高滴度重组病毒用于最终表达重组蛋白。应用免疫亲和层析法,纯化培养上清中表达的重组蛋白C245(IgG1),并鉴定其与CEA结合的能力和CH的生物学功能CDC及ADCC。结果:经CH置换形成的重组蛋白C245(IgG1),既保留了对于表达CEA的肿瘤细胞的结合,又比原抗体C245(IgG4)的补体依赖的细胞毒作用(CDC)和抗体依赖的淋巴细胞的细胞毒作用(ADCC)强得多。结论:成功地应用基因工程的方法制备了置换CH的抗CEA的人抗体C245(IgG1),使其在肿瘤的免疫治疗中具有更广泛的应用价值。     

人肿瘤抗原分子分析的一种新技术

新近发展起的“血清学鉴定重组表达抗原克隆技术(serologicalidentificationoftumorantigensbyrecombinantexpressioncloning-SEREXapproach)”已成功在人恶性黑色素瘤,肾细胞癌,成胶质细胞瘤以及何杰金氏病,食道癌、肝细胞癌等证明多种新的肿瘤抗原,并从分子水平得到确定。本文介绍该技术的原理、程序。1.原理:利用病人自身血清含有肿瘤抗原的相应IgG抗体,筛选出自身肿瘤cDNA文库中与高滴度IgG抗体反应克隆,提交到PBK-CMV噬菌体内剪切后测定cDNA插入片段核苷酸的顺序。此法在致免疫的肿瘤蛋白与病人自身血清反应的基础上可直接确…     

甘肃省SARS抗体血清流行病学调查

目的 了解甘肃省严重急性呼吸综合征(SARS)患者、密切接触者和正常人群血清SARS冠状病毒特异性IgG抗体水平。方法 利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测SARS病毒IgG抗体水平。检测对象包括甘肃省9例SARS患者的急性期和(或)恢复期系列血清，l109例直接护理SARS患者的医生、护士、实验室检测人员、疾控人员和曾与患者有接触的人员以及978例正常人血清。结果 9例临床诊断病例SARS冠状病毒特异性IgG抗体中6例为阳性，疾病恢复后12个月血清抗体仍为阳性；密切接触者1例特异性IgG抗体阳性；正常人3例特异性IgG抗体阳性。结论 病例抗体阳性符合临床诊断，密切接触者和正常人的抗体阳性数较低，提示可能不存在隐性感染。     

644例住院患者免疫血液学检测及其临床意义分析

目的 分析住院患者免疫血液学检测结果及其临床意义。方法 采用微柱凝胶法(MGT)对患者血标本进行ABO、 RhD血型鉴定及不规则抗体筛选。对抗体筛选阳性血标本再采用试管盐水法(NS)及间接抗球蛋白法(IAT)进行抗体特异性鉴定和抗体类型测定,检测患者红细胞上是否含有相应抗原和直接抗球蛋白试验(DAT)。对需输血患者筛选不含相应抗原的供血者红细胞与患者血清采用NS、手工凝聚胺法(MPT)及IAT进行交叉配血试验。结果 在644例患者中,男247例(38.35%),女397例(61.65%)。单特异性不规则抗体551例(85.56%),不规则抗体合并自身抗体39例(6.06%),自身抗体54例(8.39%),其中DAT阳性或弱阳性93例(14.44%)。在590例不规则抗体中,IgG型404例(62.73%), IgM型183例(28.12%), IgG型+IgM型3例(0.47%)。温自身抗体类型多为IgG型,冷自身抗体多为IgM型。不规则抗体效价为1∶4～1∶64,凝集强度为1+～4+。结论 不规则抗体绝大多数为IgG型抗体,少部分为IgM型或IgM型+IgG型抗体,该抗体可影响免疫血...     

IgG核心岩藻糖基化水平检测方法的建立及应用

为建立IgG核心岩藻糖基化水平检测方法,研究血清IgG核心岩藻糖基化水平与慢性乙肝(CHB)、肝硬化(LC)中IgG异常增高的关系.应用特异性结合核心岩藻糖的LCA凝集素亲和柱分离纯化血清中具有的核心岩藻糖基化蛋白,并对CHB、LC患者的血清总蛋白(TP)和免疫球蛋白G(IgG)的核心岩藻糖基化水平进行检测和对比分析....     

RFC—SpA法在检测EHF病人血清中IgG抗体的研究

葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal pr-otein A,SpA)具有与人及多种哺乳动物血清中IgG结合的能力,据此将IgG致敏SpA菌体可用于多种病原微生物的鉴定、疾     

甲型和乙型肝炎的比较免疫学

一、正常病程肝炎的免疫学甲型肝炎病毒(HAV)潜伏期为10—14天,感染后有数日可从血中分离出该病毒,排毒可达数周。当临床上出现肝炎症状时,在血清中可检测到抗HAV抗原(目前仅知此抗原)的抗体,该种抗体属IgM类,故血清中IgM浓度相应增高。在数天内抗体种类发生转换一一变为IgG类抗体,IgG滴     

利用外源性IgG显示大鼠脊髓撞击伤后血-脊髓屏障变化

血-脑(脊髓)屏障损伤范围的观察方法多为注射外源性示踪剂,我们曾在大鼠实验中采用内源性血浆IgG作为示踪剂,取得很好的效果。本研究在大鼠脊髓撞击伤模型中以静脉注射的兔IgG为外源性示踪剂,用免疫荧光双标显示并比较了大鼠与兔两种IgG在脊髓内的分布。用图像阈值分割技术处理图像后,分析了损伤后不同时间点(0h,1d,3d,5d,7d,14d)两者的异同,发现在血-脊髓屏障已恢复的部位仍有残留的内源性IgG,而外源性IgG可精确地反映注射当时血-脊髓屏障的改变。这种方法可有效地用于诸如不同药物保护血-脑屏障的时程研究。     

抗磷脂抗体与狼疮性肾炎的相关性研究北大核心CSCD

目的:探讨抗心磷脂抗体(aCL)IgG、IgM、抗β2-糖蛋白1(β2-GP1)抗体IgG、IgM及其他指标与狼疮性肾炎(LN)和系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法:检测LN及无肾脏累及的SLE患者aCL(IgG、IgM)、抗β2-GP1抗体(IgG、IgM)、C3、C4、抗ds-DNA抗体、肌酐、尿蛋白等指标,判断其与LN和SLE疾病相关程度。结果:LN组与无肾脏累及的SLE组患者肌酐、尿蛋白定量和IgG型抗β2-GP1差异有统计学意义(P=0.005、P=0.000、P=0.003);IgG、IgM型aCL、IgM型抗β2-GP1抗体阳性率、抗ds-DNA抗体、C3、C4水平差异无统计学意义(P>0.05)。进一步对SLEDAI评分分组,LN组IgG型aCL(P=0.048,r=0.318)与LN疾病活动呈弱正相关,而C3(P=0.005,r=-0.439)与LN疾病活动呈中等程度的负相关;LN组IgM型aCL、IgG、IgM型抗β2-GP1抗体浓度、尿蛋白定量、抗ds-DNA抗体、C4、肌酐水平与疾病活动程度无相关性(P>0.05)。无肾脏累及的SLE组以上各项指标与疾病活动程度均无相关性(P>0.05)。结论:LN患者血清中C3、IgG型aCL与疾病进展相关,可作为LN疾病诊治过程中的辅助诊断指标。     

抗人IgG单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备高效价的抗人IgG单克隆抗体(mAb),并用于肾脏免疫性疾病的免疫荧光诊断。方法:以人IgG全长分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,经筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗IgGmAb的杂交瘤细胞株。用ELISA及Westernblot鉴定mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)。以纯化的mAb建立免疫荧光染色法,并用于肾小球肾炎的诊断。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人IgGmAb的细胞株,腹水效价为1×10-6,Ig亚类为IgG2a(κ),相对亲和力达到1×10-5,Westernblot显示在相对分子质量(Mr)为53×103处出现特异性的条带,说明mAb能与IgG的γ链特异性结合。免疫荧光染色的结果显示,IgG分子在肾小球肾炎的活检组织中表达。结论:获得1株能特异性识别人IgG的mAb,可用于肾脏免疫性疾病的病理诊断。     

孕妇产前血型抗体水平与新生儿溶血病的关系

目的:探讨O型血孕妇IgG血型抗体效价与新生儿溶血病(HDN)发生率的关系及药物干预作用。方法:200例O型血RhD阳性孕妇从妊娠16周开始检测其血清中IgG抗A(B)效价,≥1∶64者给予茵栀黄口服液治疗,≥1∶256者加用静脉推注高渗糖和复合维生素,4周后复查抗体效价,观察孕妇效价变化及足月顺产儿HDN的发生情况,分析孕期IgG抗A(B)效价与HDN发生率的相关性及药物干预效果。结果:200例孕妇末次IgG抗A(B)效价1∶64、1∶64、1∶128、1∶256、≥1∶512占比分别为46.00%(92例)、20.50%(41例)、18.50%(37例)、9.50%(19例)、5.50%(11例)。效价≥1∶64的108例孕妇分娩的新生儿中,有24例发生HDN,发生率为22.2%,抗体效价升高与HDN发生率明显正相关(r=0.577,P0.01),药物干预可使IgG抗A(B)效价明显降低。结论:O型血孕妇血清IgG抗A(B)抗体效价越高,HDN的发生率也越高;药物干预能显著降低IgG抗A(B)效价。     

进出口植物产品中甲霜灵残留量酶联免疫检测试剂盒的研究

目的本研究采用直接竞争ELISA法对进出口植物产品中甲霜灵残留量进行快速筛选.方法将甲霜灵转化成甲霜灵酸,利用适当的方法将其与辣根过氧化物酶(HRP)进行偶联,制备酶标半抗原.采用传统的盐析法提取IgG并建立了甲霜灵直接竞争ELISA快速检测方法.结果抑制试验表明其检测范围在(0.78～50.0)ng/mL之间,可用于进出口植物产品中甲霜灵的定量检测.该方法与气相色谱检测符合率为94%.样品的平均回收率为94%.交叉反应显示该抗体仅与甲霜灵、甲霜灵酸起反应,不与结构相似的毒草胺、甲草胺、异丙甲草胺、新燕灵和己酰甲草胺起交叉反应.结论本试剂盒具有操作简便、快速、灵敏等特点.