子宫颈病变中Nrf2和Keap1蛋白的表达及与预后的关系

目的 探讨氧化应激蛋白核因子E2相关因子(nuclear factor E2-related factor,Nrf2)和Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-related protein 1,Keap1)在子宫颈病变中的表达及与预后的关系.方法 收集20例子宫颈上皮内病变和67例子宫颈癌(Ia期...     

左归丸对成骨细胞氧化应激损伤的保护作用

背景:最新研究发现氧化应激在骨质疏松症中发挥着重要作用,衰老、雌激素缺乏、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1与活性氧的产生和骨质疏松发病有着重要的关系。目的:分析左归丸对成骨细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法:实验方案经哈尔滨医科大学附属第二医院伦理委员会批准。分离培养SD乳鼠颅骨成骨细胞,实验分为空白组、模型组(300μmol/L H2O2)、左归丸组(300μmol/L H2O2+10%左归丸含药血清)。用H2O2建立成骨细胞氧化应激损伤模型;在成骨细胞氧化应激损伤同时,用左归丸含药血清培养成骨细胞,空白组不做任何处理。测定各组成骨细胞中丙二醛和超氧化物歧化酶含量;Western blot检测成骨细胞中核因子E2相关因子2和血红素加氧酶1蛋白表达。结果与结论:①与空白组比较,模型组中丙二醛含量明显升高,超氧化物歧化酶的含量明显降低;与模型组比较,左归丸组中丙二醛含量明显降低,超氧化物歧化酶的含量明显升高;②与空白组比较,模型组成骨细胞中血红素加氧酶1和核因子E2相关因子2表达明显增加;左归丸组成骨细胞中血红素加氧酶1和核因子E2相关因子2表达明显高于模型组;③结果说明,左归丸对成骨细胞氧化损伤具有保护作用。     

柿叶提取物对HEK293-APPswe 转基因细胞模型的抗氧化作用及对Nrf2 / HO-1 途径的影响

目的:观察柿叶提取物(PLE)对阿尔茨海默病细胞模型HEK293-APPswe(20E2)的抗氧化应激的影响,并从 核因子E2 相关因子2(Nrf2) / 血红素加氧酶1(HO鄄1)信号通路研究其作用机制。方法:Western blot 检测APP 蛋白表达水平, ELISA 检测各组细胞上清Aβ_1-40 的量,确定细胞模型是否建立成功。用CCK-8 检测不同浓度的柿叶提取物对细胞活性的影 响,选定干预最佳浓度。设分组:SH-SY5Y 为空白对照组(NC 组),20E2 为模型组(20E2 组),用柿叶提取物干预为加药组 (20E2+PLE 组)。DCFH-DA 荧光探针检测各组细胞内ROS 的变化,ELISA 检测各组细胞上清Aβ_1-42的量,Western blot 检测胞 核、胞浆Nrf2 和全细胞HO鄄1 蛋白的表达水平变化。结果:与模型组相比,加药组ROS 表达减少,细胞外Aβ_1-42浓度降低,细胞 核内Nrf2 表达增多, HO-1 蛋白含量增加。结论:柿叶提取物能有效降低模型组氧化应激的水平,可能是通过降低Aβ_1-42的聚 集,激活Nrf2/ HO-1 信号途径,促进Nrf2 合成和核转位,从而促进下游抗氧化蛋白HO鄄1 的表达来减弱氧化应激的损伤。     

E2F-1诱导细胞凋亡研究进展

E2Fs转录因子具有调控细胞增殖、分化和凋亡相关基因转录的重要作用。迄今为止,在哺乳动物中已确定的E2F转录因子家族成员有7个,即E2F-1、E2F-2、E2F-3、E2F-4、E2F-5、E2F-6和E2F-7,每个E2F家族成员都有特定的功能。近年来,许多研究表明E2F-1具有特异性地诱导细胞凋亡的功能,其诱导凋亡作用与P53、P73、APAF-1、CASPASE-3、CASPASE-7、BCL-2家族、DIP、SIVA和NF-κB等因子有关。根据诱导细胞凋亡是否依赖于P53,E2F-1诱导凋亡机制分为P53依赖性和P53非依赖性方式。因此,E2F-1已成为肿瘤基因治疗的新靶点。     

有氧运动可改善糖尿病肾病模型小鼠肾脏的氧化应激损伤

文题释义：核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)：属于转录因子亮氨酸拉链转录激活因子(CNC)家族成员,为细胞防御多种应激损伤的关键因子。Nrf 2 是诱导Ⅱ相酶基因表达的必需调节因子。 有氧运动：是指人体在氧气充分供应的情况下进行的耐久性运动,其特点是强度低、时间长、不中断、有节奏,能够改善胰岛素抵抗、降低血糖,对糖尿病具有一定的疗效。 背景：研究证实,长期有规律的有氧运动能够有效降低血糖,改善胰岛素抵抗,是治疗糖尿病肾病的重要措施,但有关其具体机制不明。 目的：探讨有氧运动对糖尿病肾病小鼠肾脏氧化应激损伤的影响及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)信号通路的关系。 方法：雄性C57/BL6小鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病组及有氧运动治疗组,每组8只。除正常对照组外,其他2组小鼠均采用多次小剂量腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg,连续注射5 d)建立糖尿病小鼠模型(4周后24 h尿蛋白含量>30 mg提示糖尿病肾病造模成功)。糖尿病小鼠造模成功8周后,有氧运动治疗组小鼠进行为期8周的跑台有氧运动,1 h/d,5 d/周。治疗8周后,测量尾动脉收缩压、24 h尿微量白蛋白排泄率、血糖、血脂及血肌酐、血尿素氮水平;取肾脏组织匀浆,测定丙二醛水平及总超氧化物歧化酶活性;观察肾脏组织肾小球系膜区细胞外基质积聚情况,并检测肾脏组织活性氧水平及核因子E2相关因子2核蛋白和血红素氧合酶1蛋白表达。实验方案经河南省中医药研究院动物实验伦理委员会批准(批准号为HPHT2015019)。 结果与结论：①与正常对照组比较,糖尿病肾病组小鼠24 h尿微量白蛋白排泄率、血糖、血肌酐、尿素氮、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白-胆固醇以及尾动脉收缩压等指标水平显著增加,肾脏肾小球系膜区细胞外基质显著积聚,活性氧水平和丙二醛水平显著增加;与糖尿病肾病组比较,有氧运动治疗组上述各项指标显著降低;②与糖尿病肾病组比较,有氧运动治疗组小鼠总超氧化物歧化酶活性增强,肾小球系膜区细胞外基质积聚显著减少,肾脏组织细胞核蛋白核因子E2相关因子2和总蛋白血红素氧合酶1的表达上调;③结果说明,有氧运动能够降低糖尿病肾病小鼠肾脏氧化应激损伤,可能与Nrf2/HO-1通路激活有关。 ORCID: 0000-0003-1328-3575(刘晓晨) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

右美托咪定减轻酒精诱导的小鼠急性肝损伤

目的:探讨右美托咪定(DEX)对酒精诱导的小鼠急性肝损伤的作用及机制。方法:50只昆明小鼠随机分为5组(n=10):生理盐水对照(NS)组、酒精性肝损伤模型(E)组、DEX低剂量(10μg/kg)治疗(E+L)组、DEX中剂量(50μg/kg)治疗(E+M)组和DEX高剂量(100μg/kg)治疗(E+H)组。各组动物乙醇灌胃后6 h处死,采集血和肝组织标本。测定各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及甘油三酯(TG)浓度;测定各组肝组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;ELISA测定小鼠肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的浓度;Western blot检测肝组织细胞色素P4502E1(CYP2E1)和核因子κB(NF-κB)的表达;HE染色观察肝组织病理学改变并进行肝损伤评分。结果:与NS组比较,E组血清的AST、ALT水平及TG含量升高,与E组比较,E+M组和E+H组血清AST、ALT水平及TG含量降低;与NS组比较,E组肝组织MDA含量升高,GSH含量和SOD活性降低,与E组比较,E+M组和E+H组肝组织MDA含量降低,GSH含量及SOD活性升高;与NS组比较,E组肝组织TNF-α和IL-1β含量升高,与E组比较,E+M组和E+H组肝组织TNF-α和IL-1β含量降低;与NS组比较,E组肝组织CYP2E1和NF-κB表达升高,与E组比较,E+M组和E+H组肝组织CYP2E1和NF-κB表达降低;肝组织病理学检查可见,DEX中、高剂量可明显减轻肝细胞变性和坏死及炎性细胞浸润程度。结论:右美托咪定通过抗炎及抗氧化作用对急性酒精性损伤的肝脏具有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制CYP2E1和NF-κB的表达有关。     

雌二醇对去卵巢大鼠抑郁行为的影响及其可能的作用机制

目的 通过观察雌二醇(E2)干预对去卵巢(OVX)大鼠杏仁核促炎因子白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨E2改善OVX大鼠抑郁样行为的可能机制。方法 将39只健康成年雌性SD大鼠随机分为3组,分别为假手术组(SO)、OVX组(OVX)及OVX+E2治疗组(OVX+E2)。E2治疗6周通过旷场实验(OFT)及糖水偏爱实验(SPT)评估大鼠抑郁样行为;ELISA法测定杏仁核IL-6及TNF-α水平,免疫组织化学染色法检测大鼠杏仁核中BDNF表达。结果 SPT实验结果显示,OVX使大鼠糖水摄入量及糖水偏好率均显著下降,而E2干预能够显著增加OVX大鼠的糖水摄入量及糖水偏好率;OFT结果显示,OVX使大鼠中央格时间、跨格次数及直立次数显著下降,E2干预能够显著增加OVX大鼠的中央格时间、跨格次数及直立次数;ELISA及免疫组织化学检测发现,与SO组比较,OVX大鼠杏仁核区促炎因子IL-6及TNF-α水平增加,BDNF阳性细胞平均吸光度(AA)显著下降(均P<0.01);与OVX组比较,OVX+E2组大鼠杏仁核区促炎因子...     

骨巨细胞瘤中Skp2、p27及E2F-1的表达及意义

目的研究骨巨细胞瘤中Skp2(S期激酶相关蛋白2)、p27(周期素依赖性蛋白激酶抑制因子)及E2F-1(细胞周期相关性转录因子家族成员)的表达并探讨其与放射学分期、肿瘤复发等关系。方法运用免疫组化SP法检测44例骨巨细胞瘤中Skp2、p27及E2F-1的表达情况。结果 Skp2、p27及E2F-1的阳性率分别为65.91%3、8.64%和63.64%,在影像学分期1型、2型3、型中的阳性率分别为50%、64.29%、100%(P<0.05),60%、28.57%、10%(P<0.05),50%、71.43%、80%(P>0.05)。Skp2、p27及E2F-1在复发组与未复发组的阳性率分别为91.67%、56.25%(P<0.05),8.33%、50%(P<0.05),75.00%、59.38%(P>0.05)。Skp2、骨皮质破坏或软组织浸润、手术方式以及p27对复发均有明显影响,其中前两者是骨巨细胞瘤复发的危险因素,后两者(截骨的手术方式、p27)则是骨巨细胞瘤复发的保护因素。Skp2与p27的表达呈负相关(P<0.05)。结论在骨巨细胞瘤中,Skp2与p27的表达均与骨巨细胞瘤的复发有关,二者在骨巨细胞...     

转录因子NRF3结构、功能及其表达调控的研究进展

正"帽领"(Cap'n'collar,CNC)家族包括果蝇CNC1,线虫Skn-1,脊椎动物核因子E2样蛋白1(nu-clear factor E2-like protein 1,NFE2L1)/核因子E2相关因子1(nuclear factor E2-related factor 1,NRF1)、NFE2L2/NRF2和NFE2L3/NRF3,以及相似性较低的BACH1和BACH2蛋白[1]。在信号传递过程中,CNC因子与小Maf家族蛋白形成异源二聚体,以进一步识别并结合多种反应元件如NFE2、Maf识别元件(Maf recognition element,MARE)、     

TRAF4通过泛素化E2F1调控乳腺癌细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)是否通过E2F1转录因子(E2F1)调控乳腺癌细胞凋亡.方法 流式细胞分析检测TRAF4对乳腺癌细胞凋亡的调控情况以及E2Fl在其中的作用;Western blot检测TRAF4、精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)和E2F1之间的调控关系;免疫荧光及免疫共沉淀检测TRAF...     

基于Nrf2/ARE信号通路探讨白藜芦醇治疗非酒精性脂肪性肝炎大鼠的作用机制

目的　基于Nrf2/ARE信号通路探讨白藜芦醇治疗非酒精性脂肪性肝炎大鼠的作用机制。 方法　利用高脂饮食法进行非酒精性脂肪性肝炎大鼠造模。大鼠分为对照组（CD组）、高脂饮食组（HCD组）、白藜芦醇组（HCD + RSV组）及（白藜芦醇+ OAD85）组（HCD + RSV + OAD85组）,每组8只。CD组始终喂养普通饲料,其他组自由高脂饮食。（HCD + RSV）组及（HCD + RSV + OAD85）组在喂养第4周开始灌胃给予10 mg/kg RSV或（10 mg/kg RSV + 100 μg/kg OAD85）,连续灌胃给药28 d（OAD85为Nrf2/ARE抑制剂齐墩果酸衍生物）。HE染色观察肝组织病理学改变,肝组织冰冻切片油红O染色观察脂肪量变化,试剂盒检测ALT、AST、TC、TG、HDL、LDL和FFA,Western-blot和qRT-PCR检测Keap1、Nrf2、ARE、NQO1、HO-1蛋白和mRNA表达。 结果　与CD组相比,HCD组肝脂肪变性、小叶炎症、门静脉炎症、肿胀程度NASH评分、脂肪含量及血清中ALT、AST升高（P<0.05）,与HCD组相比,（HCD + RSV）组上述指标均降低（P<0.05）,HCD组与（HCD + RSV + OAD85）组差异无统计学意义（P>0.05）。与CD组相比,HCD组NQO1、HO-1、Nrf2、ARE蛋白及mRNA表达均明显升高（P<0.001）,Keap1蛋白表达降低（P<0.001）,与HCD组对比,（HCD + RSV）组NQO1、HO-1、Nrf2、ARE蛋白及mRNA表达亦明显增加（P<0.001）,Keap1蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.001）,HCD组与（HCD + RSV + OAD85）组差异无统计学意义（P>0.05）。 结论　白藜芦醇治疗非酒精性脂肪性肝炎大鼠可能是基于Nrf2/ARE信号通路激活机制,从而改善氧化应激水平,可减轻肝病理损伤。     

富血小板血浆联合髓芯减压调控激素性股骨头坏死模型兔氧化应激反应

背景:氧化应激在股骨头坏死损伤中发挥重要作用,富血小板血浆富含生长因子,可以加快骨折愈合,配合髓芯减压术能促进非创伤性股骨头坏死的恢复。目的:探讨富血小板血浆联合髓芯减压术能否通过Keap1/Nrf2/HO-1信号通路抑制兔激素性股骨头坏死模型氧化应激反应。方法:将40只实验新西兰兔随机分为正常组、模型组、对照组和富血小板血浆组,每组10只。除正常组外其他3组兔在无菌环境下建立激素性股骨头坏死模型,术后4周向富血小板血浆组动物股骨头内髓芯减压后注射植入0.4 mL 3%的富血小板血浆,对照组兔只进行髓芯减压术治疗,对照组与模型组兔正常饲养。14周后苏木精-伊红染色观察各组兔股骨头骨髓腔内病理学变化和骨陷窝空缺率,检测各组兔血清中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、还原型谷胱甘肽及丙二醛等氧化应激指标活性,TUNEL检测股骨头组织内骨细胞凋亡情况,免疫荧光检测股骨头组织内Keap1、Nrf2分布,Western Blot检测股骨头组织内Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达。实验方案经青海大学附属医院动物实验伦理委员会批准(批准号为qhdx-201908374)。结果与结论:①与正常组相比,模型组骨组织内骨小梁变细,结构紊乱;对照组较模型组有所改善,骨小梁结构得到恢复,空骨陷窝减少(P<0.05),富血小板血浆组经富血小板血浆联合髓芯减压治疗较对照组得到进一步改善,骨小梁结构更加完善,空骨陷窝进一步减少(P<0.05),与正常组无显著差异(P>0.05);②模型组血清中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和还原型谷胱甘肽的含量均显著低于正常组(P<0.05),而丙二醛浓度显著高于正常组(P<0.05);对照组以上指标稍有改善,但与模型组比较差异不显著(P>0.05);富血小板血浆以上氧化应激指标较模型组和对照组明显改善(P<0.05);③模型组股骨头组织内Keap1蛋白表达显著低于正常组(P<0.05),Nrf2、HO-1蛋白表达显著高于正常组(P<0.05);富血小板血浆组股骨头组织内Keap1的表达较模型组和对照组低(P<0.05),Nrf2、HO-1的表达显著高于模型组和对照组(P<0.05);④结果提示,富血小板血浆能有效抑制兔激素性股骨头坏死过程中氧化应激反应,该作用可能是通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路活性而发生的。     

Nrf2-ARE信号通路在间歇性低氧胰腺组织中的作用及银杏叶提取物的干预机理

目的 观察Nrf2-ARE信号通路对慢性间歇性低氧胰腺组织的影响及银杏叶提取物对其的干预机理。方法 选取C57BL/6雄性小鼠、Nrf2基因敲除型雄性小鼠各54只,随机分为常氧对照组1、2,间歇性低氧组1、2,Nrf2激活剂组,抗体阻断组,银杏叶提取物（EGB）低、中、高浓度组,每组6只。除常氧对照组外,其余各组小鼠循环给予氮气和氧气建立间歇性低氧模型。Nrf2激活剂组腹腔注射莱菔硫烷,抗体阻断组腹腔注射抗Nrf2抗体,EGB低、中、高浓度组分别予EGB50、100、200 mg/（kg·d）灌胃,常氧对照组予等量生理盐水干预。干预10周后用Western-Blot和RT-PCR分别检测胰腺组织中Nrf2、HO-1、NQO1、γ-GCS蛋白和mRNA的表达水平。结果 野生型小鼠中,与间歇性低氧组比较,Nrf2、HO-1、NQO1和γ-GCS在Nrf2激活组、EGB高浓度组中蛋白和mRNA表达均升高,在抗体阻断组中蛋白和mRNA表达均降低（P＜0.05）;基因敲除型小鼠中,与间歇性低氧组比较,HO-1在Nrf2激活组、EGB高浓度组中蛋白和mRNA表达均升高（P＜0.05）;NQO1在EGB中浓度组中蛋白和mRNA表达均升高（P＜0.05）;γ-GCS在EGB中、高浓度组中蛋白和mRNA表达均升高（P＜0.05）。结论 间歇性低氧导致的氧化应激参与了OSAS的发生发展过程,可能是OSAS胰腺组织损伤的主要病理生理机制。EGB通过促进Nrf2-ARE信号通路介导的抗氧化反应,保护胰腺组织免受间歇性低氧诱导的损伤。     

对氧磷酶3基因过表达对急性中毒小鼠肝损伤的保护作用及机制

目的 探讨对氧磷酶3（PON3）对急性中毒肝损伤的保护作用及作用机制。 方法 将40只Balb/c小鼠随机分为4组,正常对照（NC）组、敌敌畏（DDVT）对照组、绿色荧光蛋白慢病毒（Lv-GFP）组和重组PON3慢病毒（Lv-PON3）组,每组10只。LV-GFP组和Lv-PON3组小鼠经尾静脉分别注射2×10⁷ TU的Lv-GFP、Lv-PON3慢病毒,3 d后腹腔注射敌敌畏（DDVT）溶液9 mg/kg,DDVT组只需腹腔注射同等剂量DDVT,NC组注射同等剂量生理盐水。各组于DDVT染毒后12 h麻醉处死10只小鼠取肝组织,ELISA法检测各组血清乙酰胆碱酯酶（AChE）、肝功能指标谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）和肝组织氧化应激指标丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）,HE染色法观察肝组织形态学改变,Real-time PCR检测肝组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）、血红蛋白加氧酶（HO-1）和转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2） mRNA的表达。 结果 与NC组比较,DDVT组和Lv-GFP组肝组织MDA、ALT、AST水平,HO-1和Nrf2 mRNA表达量明显升高,AChE、CAT、SOD、GSH水平和Keap1 mRNA表达量均明显降低（P<0.05）。与DDVT组比较,Lv-PON3组肝组织MDA、ALT、AST水平,Keap1 mRNA表达量降低,AChE、CAT、SOD和GSH水平均明显著升高,HO-1和Nrf2 mRNA表达量显著上升（P<0.05）。正常对照组肝细胞结构清晰,未出现肝细胞坏死和脂肪病变的情况,DDVT组和Lv-GFP组出现肝细胞坏死和脂肪变性等病理改变,Lv-PON3组肝脏病变组织肝细胞坏死和脂肪变性细胞数有一定的减少。 结论 PON3可通过Keap1-Nrf2/HO-1途径缓解氧化应激反应,改善肝功能,对敌敌畏急性中毒小鼠肝损伤有一定的保护作用。     

PI3K/Nrf2通路在内毒素休克兔肾损伤中的作用

 目的: 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/核因子E2相关因子2(PI3K/Nrf2)信号通路在内毒素休克兔急性肾损伤中的作用。方法: 健康清洁级雄性新西兰大白兔50只,随机分为5组(每组10只):对照组(C组)、内毒素休克模型组(L组)、渥曼青霉素+内毒素休克组(WL组)、渥曼青霉素组(W组)和二甲基亚砜组(D组)。W组、WL组经耳缘静脉注射渥曼青霉素0.6 mg/kg,D组注射二甲基亚砜0.08 mL/kg,C组和L组注射等容量生理盐水。30 min后,L组和WL组静脉注射脂多糖5 mg/kg(溶于2 mL生理盐水),C组、W组和D组注射等容量生理盐水。注射脂多糖或生理盐水后6 h处死兔,取肾组织进行肾损伤评分(HSK),测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿α1-微球蛋白(α1-MG)浓度,检测肾组织MDA含量及SOD活性,检测肾组织Nrf2和HO-1的mRNA总Akt蛋白、p-Akt蛋白、总Nrf2蛋白、p-Nrf2蛋白、核Nrf2蛋白和HO-1蛋白水平。结果: 与C组、W组及D组比较,L组和WL组HSK、BUN、Cr、α1-MG及MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织Nrf2和HO-1的mRNA、p-Akt蛋白、Nrf2总蛋白、p-Nrf2蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白的水平上调(P<0.05)。C组、W组和D组之间上述指标差异无统计学显著性。与L组比较,WL组HSK、BUN、Cr、α1-MG及MDA含量升高,SOD活性降低,肾组织Nrf2和HO-1的mRNA、p-Akt蛋白、Nrf2总蛋白、p-Nrf2蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白的水平降低(P<0.05)。结论: PI3K/Nrf2通路激活是内毒素休克诱发兔急性肾损伤时机体的适应性调节反应机制之一。     

Heme oxygenase 1 plays role of neuron-protection by regulating Nrf2-ARE signaling post intracerebral hemorrhage

The NF-E2 related factor 2 (Nrf2) could be activated in intracerebral hemorrhage (ICH), and trigger the expression of ARE regulated heme oxygenase 1 (HO-1) subsequently. This study aims to explore neuroprotection of HO-1 protein in regulating the Nrf2-ARE signaling pathway in ICH. In this study, the femoral artery injection method was used to establish the ICH model. The zinc porphyrin-9 (ZPP-IX) was used to inhibit the HO-1 expression in ICH rats. The ICH rats were randomly divided into 3 groups, ICH group, ZPP-IX (10 mg/kg) + ICH group and DMSO (10 mg/kg) + ICH group. Neurological scores were evaluated for the 3 groups. Double immunofluorescence staining method was employed to observe the co-expression of HO-1, Nrf2, NF-κB and TNF-α and CD11b in glia cells. Western blot and RT-PCR assay were used to detect the total Nrf2, binding Nrf2, HO-1, NF-κB and TNF-α expression. The results indicated that ZPP-IX could aggravate the neurological dyafunstions of ICH rats. The HO-1 level in ZPP-IX group was significantly decreased compared to the ICH group (P < 0.05). The binding-Nrf2 protein was significantly increased in ZPP-IX group compared to ICH group (P < 0.05). The NF-κB and TNF-α level were significantly increased in ZPP-IX group compared to ICH group (P < 0.05). The ZPP-IX significantly inhibited the HO-1 and Nrf2, and enhanced NF-κB and TNF-α co-expressing with the CD11b compared to the ICH group (P < 0.05). In conclusion, HO-1 protein regulates the Nrf2-ARE pathway in ICH model by inhibiting the Nrf2 entering nucleus and activating the NF-κB and TNF-α expression.     

丹参酮IIA对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 研究丹参酮IIA(tanshinone ⅡA, Tan ⅡA)对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的抗氧化、保护作用及其可能的作用机制。 方法 将C57BL/6J小鼠随机分成正常组、CCl4组以及Tan ⅡA保护组(Tan ⅡA 20 mg/kg+CCl4),每组10只。腹腔注射CCl4构建小鼠急性肝损伤模型。计算各组小鼠的肝脏指数,检测血清AST和ALT活性,测定肝组织SOD活性及GSH、MDA含量,HE染色观察肝组织病理变化,免疫组织化学法和Western blot检测肝组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。 结果 与CCl4组相比,Tan ⅡA保护组肝脏指数显著下降(P<0.01),血清AST(P<0.01)和ALT活性降低(P<0.05),肝组织SOD活性(P<0.01)及GSH含量升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),肝组织病理变化得到显著改善。同时,Tan ⅡA使肝组织p-PI3K和p-Akt表达水平明显升高(P<0.01),显著诱导Nrf2转位入核(P<0.01),促使其下游靶蛋白HO-1表达水平明显升高(P<0.01)。 结论 Tan ⅡA能够显著改善CCl4诱导的急性肝损伤,其机制可能与PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路有关。     

紫草素减轻低氧-复氧致大鼠心肌细胞系H9c2损伤

目的探索紫草素对低氧-复氧(H/R)损害的H9c2心肌细胞的保护作用。方法将心肌细胞系H9c2分为对照组、H/R组、紫草素(0.1、1和10μmol/L)干预组,每组3个平行孔;MTT法检测紫草素对H9c2细胞毒性;流式细胞计量术检测细胞凋亡和周期;DCFH-DA检测细胞活性氧水平;生化检测细胞中MDA、8-OHdG和GSH含量;qPCR检测细胞γ-GCS、HO-1和NQO1 mRNA表达;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Keap1和Nrf2蛋白表达;免疫荧光检测细胞Nrf2蛋白进核情况。结果紫草素呈浓度-时间依赖性抑制H9c2细胞增殖(P<0.05);H/R诱导H9c2细胞凋亡、细胞周期阻滞及促进Bax及cleaved caspase-3蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.05),紫草素呈浓度依赖性抑制细胞凋亡、解除细胞周期阻滞及cleaved caspase-3和Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达;紫草素可降低H/R所致活性氧水平、MDA及8-OHdG升高,增高H/R所致GSH含量以及γ-GCS、HO-1和NQO1 mRNA的表达下调,导致Nrf2蛋白的升高及Keap1下调,并促进Nrf2蛋白进核(P<0.05)。结论紫草素减轻低氧-复氧致H9c2心肌细胞的损伤。     

Nrf2/HO-1在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤中的作用

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧化酶-1 (HO-1)在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤过程中的表达变化及意义。 方法采用随机数字表法将45只成年雄性SD大鼠分为3组：假手术组(Sham组)、模型组(Control组)、远隔缺血后处理组(RIPost组),每组15只。Control组大鼠建立窒息性心肺复苏脑损伤模型,RIPost组大鼠在自主循环恢复后行肢体远隔缺血后处理。在自主循环恢复后24 h分别采用苏木精-伊红染色、酶联免疫吸附试验检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE),观察脑组织的损伤情况;Western Blotting、免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR检测脑组织Nrf2、HO-1蛋白及其mRNA表达情况。 结果与Sham组相比,Control组呈急性缺血性改变,海马区神经元有明显的损伤,血清NSE含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),而RIPost组病理学改变轻于Control组,血清NSE含量也较Control组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);Control组、RIPost组的Nrf2核蛋白和HO-1蛋白表达均高于Sham组,且RIPost组HO-1蛋白表达显著高于Control组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。实时荧光定量PCR显示Control组及RIPost组Nrf2 mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05);RIPost组HO-1 mRNA的表达较Control组升高更显著,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论远隔缺血后处理可减轻大鼠心肺复苏脑损伤,其作用机制可能与上调大鼠Nrf2 /HO-1通路有关。     

氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡相关蛋白及Nrf2信号通路的影响

目的:探讨氢分子对高糖状态下肾小球系膜细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3表达水平的影响及其可能的机制。方法:体外培养小鼠肾小球系膜细胞,实验分为正常对照组(C组,5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(G组,5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖)和高糖+富氢水组(HH组,25 mmol/L葡萄糖+富氢水),培养48 h。采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)的蛋白水平;RT-PCR检测HO-1和NQO-1的mRNA表达;超氧化物阴离子荧光探针二氢乙啶检测活性氧簇(ROS)的水平;总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-8法)检测SOD活性。结果:与C组比较,H组Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平增加,Bcl-2蛋白表达减少(P0.05),而HH组上述蛋白表达水平与C组的差异均无统计学显著性;与H组比较,HH组的Bax和cleaved caspase-3蛋白下调,Bcl-2蛋白上调(P0.05)。H组细胞内的ROS水平较C组明显增高,SOD活性较C组明显降低(P0.05),而HH组的SOD活性与C组比较差异无统计学显著性;HH组细胞内的ROS水平较H组明显降低,SOD活性明显高于H组(P0.05)。与C组比较,H组的Nrf2蛋白以及HO-1和NQO-1 mRNA及蛋白表达均减少(P0.05);HH组的Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白以及HO-1和NQO-1的mRNA表达均明显高于H组(P0.05)。结论:氢分子可抑制高糖状态下肾小球系膜细胞促凋亡蛋白的表达,同时诱导其抗凋亡蛋白的表达,其机制可能与激活Nrf2信号通路有关。