UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性光损伤模型的建立

目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第4~8代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察不同剂量UVA照射后第1、2、3天HDFs的形态变化;CCK-8法检测照射后HDFs的增殖活性。慢性光损伤HDFs模型采用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24h,随后以含8-MOP的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基,行9J/cm~2 UVA照射,照射完成后换Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(含10%胎牛血清)避光传代培养,21d后显微镜下观察HDFs形态;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法计算衰老细胞率。结果:单次UVA照射导致HDFs增殖率下降,与UVA剂量呈正相关。UVA在剂量为≤10J/cm~2时,细胞存活率保持在85%;而UVA剂量≥15J/cm~2时细胞存活率明显降低;≥20 J/cm~2时存活率为50%左右,至25 J/cm~2时仅为约25%。慢性光损伤HDFs诱导组(即UVA+MOP组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增加等细胞老化的特征性改变;SA-β-Gal染色细胞的阳性率95%。结论:UVA单次照射可成功建立HDFs急性光损伤模型,UVA联合8-MOP构建HDFs慢性光损伤模型。     

UVA诱导人皮肤成纤维细胞光老化模型中miR-222的调节作用北大核心CSCD

目的探讨miR-222在长波紫外线(UVA)诱导的光老化模型中的调节作用。方法分离并培养人皮肤成纤维细胞(HDFs),用0,2.5,5.0和7.5J不同剂量UVA辐射诱导光老化模型,用实时定量PCR和Western-blot分别检测miR-222和基质金属蛋白酶1(MMP1)的表达情况。用miR-222的功能模拟物和miR-222的功能抑制物分别转染HDFs,检测MMP1表达情况。对HDFs细胞分别转染miR-222功能模拟物、miR-222阴性对照物、miR-222功能抑制物和miR对照的功能抑制物,转染24h后予UVA辐射诱导光老化模型,检测MMP1表达情况。结果 HDFs经不同剂量UVA辐射后,MMP1表达与对照组相比显著升高(P<0.01),同时miR-222表达与对照组相比显著降低(P<0.01)。miR-222转染HDFs后再予UVA辐射,miR-222转染组MMP1表达显著低于miR对照组(t=5.616,P<0.05),而miR-222抑制物转染组MMP1表达与miR对照组相比无显著的改变。结论人皮肤成纤维细胞光老化模型中UVA辐射可导致miR-222表达降低,从而上调MMP1表达。     

UVA诱导人皮肤成纤维细胞光老化模型中miR-222的调节作用

目的探讨miR-222在长波紫外线(UVA)诱导的光老化模型中的调节作用。方法分离并培养人皮肤成纤维细胞(HDFs),用0,2.5,5.0和7.5J不同剂量UVA辐射诱导光老化模型,用实时定量PCR和Western-blot分别检测miR-222和基质金属蛋白酶1(MMP1)的表达情况。用miR-222的功能模拟物和miR-222的功能抑制物分别转染HDFs,检测MMP1表达情况。对HDFs细胞分别转染miR-222功能模拟物、miR-222阴性对照物、miR-222功能抑制物和miR对照的功能抑制物,转染24h后予UVA辐射诱导光老化模型,检测MMP1表达情况。结果 HDFs经不同剂量UVA辐射后,MMP1表达与对照组相比显著升高(P0.01),同时miR-222表达与对照组相比显著降低(P0.01)。miR-222转染HDFs后再予UVA辐射,miR-222转染组MMP1表达显著低于miR对照组(t=5.616,P0.05),而miR-222抑制物转染组MMP1表达与miR对照组相比无显著的改变。结论人皮肤成纤维细胞光老化模型中UVA辐射可导致miR-222表达降低,从而上调MMP1表达。     

8-甲氧补骨酯素对三种不同光源的光斑贴试验结果比较

目的通过借助经典光毒剂8-甲氧补骨酯素(8-MOP)研究UVA、UVB、UVA+UVB3种不同光源对光毒性斑贴试验结果的影响。方法豚鼠138只,健康受试者22名。光源为PhilipsUVA,PhilipsUVB,SUV1000日光模拟器。试验物为2%8-MOP。①豚鼠对8-MOP+UVA(PUVA)和8-MOP+UVB(PUVB)的反应。②豚鼠对8-MOP+UVA(PUVA)和8-MOP+UVA+UVB(PUVA+UVB)的反应。③人体对8-MOP+UVA(PUVA)和8-MOP+UVA+UVB(PUVA+UVB)的反应。结果PUVA组的反应率和单纯UVA照射组有显著差异(P<0.01),PUVB组的反应率和单纯UVB照射组的差异无显著性(P>0.05)。PUVA+UVB组试验区域3d皮肤反应评分变化趋势的斜率大于PUVA组。人体试验结果同动物试验结果相一致。结论在以8-MOP为受试物的光斑贴试验中,UVB检测效果较差,而UVA和PUVA+UVB均能检测出8-MOP的光毒性,但UVA+UVB要优于UVA。因而UVA+UVB是一种理想的光斑贴试验光源。     

双氢青蒿素对UVB诱导的人皮肤HaCaT细胞凋亡的保护作用

目的:明确双氢青蒿素(DHA)对UVB诱导人皮肤HaCaT细胞凋亡的保护作用。方法:将体外培养的HaCaT细胞分为空白对照组,UVB照射组和UVB+DHA(20、40、60、80μmol/L)组,采用MTT法检测细胞系的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR法检测抗凋亡基因survivin和促凋亡基因caspease-3(激活型)mRNA水平,Western检测相关蛋白表达水平。结果:30 mJ/cm~2 UVB照射24 h后,UVB组和UVB+DHA(20、40、60、80μmol/L)组细胞的增殖率分别为空白对照组的(50.13±2.42)%,(60.23±2.30)%,(69.24±3.19)%,(79.37±2.47)%和(70.41±2.24)%。UVB组和UVB+60μmol/L DHA组中HaCaT细胞凋亡率分别为(46.7±3.2)%和(23.71±1.2)%。与UVB组比较,UVB+60μmol/L DHA组中HaCaT细胞caspase-3 mRNA及蛋白表达降低、survivin mRNA及蛋白表达升高。结论:DHA可抑制UVB所致HaCaT细胞的凋亡,其机制可能与survivin和caspase-3有关。     

柴达木枸杞多糖对UVB诱导人HaCaT细胞氧化损伤及凋亡相关蛋白的影响

目的观察枸杞多糖对中波紫外线(UVB)辐射后人角质形成(HaCaT)细胞的氧化损伤及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)表达的影响。方法超声辅助水提法制备枸杞多糖(LBP)粉末,体外培养HaCaT细胞,随机分为空白对照组、UVB照射组(UVB 30m J/cm~2辐射40min)、UVB+LBP组(UVB 30m J/cm~2辐射40min+LBP 1mg/m L),照射前12h加入LBP,照射结束后继续培养20h,倒置显微镜观察细胞形态;MTS法检测各组细胞吸光度值(A值);酶生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶(CAT)活力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量和丙二醛(MDA)含量;Western blot法测定各组细胞p38MAPK,caspase-8,caspase-3和Bcl-2的表达水平。结果与对照组相比,UVB照射组细胞形态明显异常,漂浮的死细胞明显增多;与UVB照射组相比,UVB+LBP组细胞的形态趋于正常,漂浮的死细胞明显减少。UVB照射组较对照组细胞吸光度(A值)明显降低(P0.05);UVB+LBP组细胞吸光度较UVB照射组明显升高(P0.05)。UVB照射组SOD活力、CAT活力、GSH-Px含量较对照组降低,MDA含量较对照组升高(P0.05);UVB+LBP组细胞SOD活力、CAT活力、GSH-Px含量较UVB照射组升高,MDA含量较UVB照射组降低(P0.05)。UVB照射组p38MAPK,caspase-8,caspase-3蛋白表达量明显高于对照组,Bcl-2表达量明显低于对照组(P0.05);与UVB照射组相比,UVB+LBP组HaCaT细胞p38MAPK,caspase-8,caspase-3表达水平降低,Bcl-2表达水平升高(P0.05)。结论枸杞多糖可抑制UVB辐射后HaCaT细胞的氧化损伤,并下调p38MAPK,caspase-8,caspase-3及上调Bcl-2的表达水平。     

Nrf2基因对中波紫外线诱导角质形成细胞光损伤的保护作用

目的研究Nrf2基因对中波紫外线(UVB)诱导人永生化角质形成细胞(HaCaT)光损伤的保护作用。方法将培养的HaCaT细胞分为正常组、UVB组、Si-RNA组(Nrf2基因沉默组)和Si-RNA组+UVB组。以30 J/cm~2剂量的UVB照射细胞,观察Nrf2基因沉默后的HaCaT细胞经UVB照射后细胞形态的变化,用CCK-8方法检测细胞生存率,用流式细胞仪定量ROS检测,免疫印迹试验(Western-blot)检测Nrf2蛋白的表达情况。结果 CCK-8法检测结果显示,UVB组与正常组比较,细胞生存率降低;在Nrf2基因沉默后,HaCaT经UVB照射后细胞活力降低程度更显著,与UVB组比较,P 0.05。流式细胞仪检测Nrf2基因沉默后,HaCaT的ROS水平增加,其中Si RNA+UVB组ROS与Si RNA组和UVB组比较增加幅度更明显。Western-blot显示UVB组Nfr2蛋白表达较正常组降低(P 0.01),Si RNA组和Si RNA+UVB组的Nfr2蛋白表达显著降低,基因沉默表达,其中Si RNA+UVB组较Si RNA组,Nrf2蛋白表达降低(P 0.01)。结论 Nrf2基因沉默后,UVB诱导HaCaT细胞的氧化损伤和凋亡明显增加,表明Nrf2基因具有显著的光保护功效,其作用机制与增强细胞抗氧化能力、加速清除氧自由基有关。     

黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达

目的:明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaC aT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法:体外培养HaC aT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射12 h后Western blot检测各组HaC aT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果:与对照组(6.12±1.19)%比较,UVB组HaC aT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑果枸杞水提取物组为(57.52±2.93)%,差异有统计学意义(P0.05)。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑果枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义(Ps0.05)。结论:黑果枸杞水提取物可抑制UVB引起的HaC aT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

蒿甲醚对紫外线照射后HaCaT细胞表达Fas和Bcl-2的影响

目的:为探讨蒿甲醚治疗光敏性皮肤病的机制,观察一定剂量的中波紫外线(UVB)照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞活性的影响及其表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响.方法:采用45.00 mJ/cm2剂量UVB照射培养的永生化HaCaT角质形成细胞,以羟氯喹及不同浓度的蒿甲醚进行干预处理,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及免疫组化检测紫外线照射及经羟氯喹和篙甲醚处理后HacaT细胞活性变化及其Fas和Bcl-2蛋白水平的变化.结果:①羟氯喹及小剂量(≤50mg/L)蒿甲醚对细胞活性影响不明显,而≥100mg/L蒿甲醚增加细胞活性.但浓度超过200mg/L,可见大量细胞悬浮于培养液上;②与未照射组相比UVB照射可使HaCaT细胞表达Fas增加;③与UVB组相比,UVB 羟氨喹(Q)组、UVB 25 mg/L蒿甲醚(H1)组、UVB 50mg/L蒿甲醚(H2)组、UVB 100mg/L蒿甲醚(H3)组使HaCaT细胞表达Fas减少;④与未照射组相比,UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;⑤与UVB组相比,UVB Q组、UVB H1组、UVB H2组、UVB H3组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加.结论:小剂量(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)蒿甲醚可以抑制HaCaT细胞凋亡,具有一定的保护作用.蒿甲醚可能通过影响与凋亡相关的Fas和Bcl-2表达,减少紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡.     

紫外线诱导HaCat转铁蛋白受体表达机制的初步探讨

目的探讨紫外线诱导转铁蛋白受体(TFR)表达的机制。方法以紫外线(UVB)照射HaCat,流式细胞仪检测TFR的表达,realtime-PCR检测TFRmRNA表达。结果UVB可增强TFR的表达,并呈剂量依赖性和时间依赖性。10mJ/cm2的UVB就能促进TFR表达,在紫外线照射后6h开始表达。UVB以剂量依赖性方式诱导TFR的mRNA表达,在UVB照射后8h,TFRmRNA表达水平达高峰,16h开始下降。结论UVB可增强TFR的表达。     

芒果苷抑制中波紫外线诱导人成纤维细胞提前衰老的相关研究

【摘要】 目的 研究芒果苷是否对反复亚毒性剂量中波紫外线（UVB）诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰起抑制作用及其可能的机制。 方法 实验分成空白对照组（不做处理）,UVB-应激诱导的提前衰老（SIPS）组（单纯照光）,芒果苷4.0 mg/L组（单纯加药）,UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组（UVB照射联合药物处理）。成纤维细胞经5次UVB 10 mJ/cm2照射后,用细胞计数法（CCK8法）检测细胞增殖活性,β半乳糖苷酶染色（SA-β-Ga1）计算衰老细胞百分比,流式细胞仪测定细胞周期,蛋白印迹检测衰老相关蛋白p53、p21、p16含量,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达。采用单因素方差分析进行数据统计分析。 结果 UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组以及UVB-SIPS组细胞增殖活性（A450）依次为0.322 9 ± 0.011 3、0.336 1 ± 0.016 3、0.342 6 ± 0.014 4、0.288 2 ± 0.020 7（F = 110.08,P < 0.05）,β半乳糖苷酶染色阳性率依次为（88.83 ± 4.54）%、（46.33 ± 5.51）%、（32.17 ± 6.05）%、（93.67 ± 3.75）%（F = 283.54,P < 0.05;与UVB-SIPS组比较,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组外,其他两组均P < 0.05）;G1期细胞阻滞率依次为（72.19 ± 3.42）%、（60.99 ± 2.70）%、（49.80 ± 2.10）%、（82.09 ± 0.89）%（F = 156.01,P < 0.05）。与UVB-SIPS组相比,UVB + 各浓度芒果苷组细胞MMP1和MMP3 mRNA表达降低（F = 69.41、106.41,均P < 0.05）,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达增加（F = 66.41、46.81,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组P > 0.05外,其他各组均P < 0.05）,衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达降低（F = 265.60、151.82、329.85,均P < 0.05）,衰老相关蛋白p53、p21和p16的合成减少（F = 160.51、158.53、75.38,均P < 0.05）,各指标检测值的变化与芒果苷浓度之间呈一定依赖性。 结论 芒果苷可能通过下调p53、p21、p16基因的表达来抑制UVB诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰。     

nicastrin基因沉默的HaCaT细胞基因表达谱分析

【摘要】 目的 通过沉默人永生化角质形成细胞HaCaT细胞中nicastrin（NCSTN）基因的表达,研究其下游细胞增殖及分化相关信号通路的改变。方法 将HaCaT细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组：干扰组转染特异性NCSTN-siRNA,阴性对照组转染阴性对照siRNA,空白对照组转染等量转染试剂。实时PCR及Western印迹检测各组NCSTN mRNA和蛋白表达验证转染效率。运用Agilent人类全基因组表达谱芯片技术研究干扰组HaCaT细胞基因表达谱与阴性对照组之间的差异,以表达上调或者下调倍数 ≥ 2.0且P ≤ 0.05为标准,将差异基因用GO分析进行富集,筛选出表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的基因,用实时PCR验证结果。结果 干扰组HaCaT细胞NCSTN mRNA及蛋白相对表达量分别为0.287 ± 0.090、0.443 ± 0.085,明显低于阴性对照组（0.969 ± 0.127、1.047 ± 0.114）以及空白对照组（1.000 ± 0.151、1.000 ± 0.111）,差异均有统计学意义（F值分别为30.787、31.139,P值均为0.001）。表达谱芯片显示,与阴性对照组相比,干扰组表达下调基因605条,上调基因444条。GO分析显示,干扰后差异表达基因富集到上皮发育、上皮细胞分化、角质形成细胞分化、角化4种生物学过程。对表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的Sprouty相关蛋白2基因、表皮生长因子7基因、胰岛素样生长因子结合蛋白5基因、人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2基因和骨形成发生蛋白6基因通过实时PCR验证,验证结果与芯片结果显示的差异趋势一致。结论 NCSTN基因功能缺失有可能通过调节其下游细胞增殖及分化相关信号通路的表达,影响角质形成细胞的正常增殖和分化。     

婴儿血管瘤长链非编码RNA与mRNA表达谱分析

【摘要】 目的 研究增殖期与消退期婴儿血管瘤（IH）长链非编码RNA（lncRNA）与mRNA的差异表达情况。方法 2019年1 - 3月在四川大学华西医院小儿外科收集行手术切除治疗的8例IH组织（增殖期与消退期各4例），运用基因芯片技术筛选差异表达（P < 0.05，差异倍数 ≥ 1.5）lncRNA和mRNA，并用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对芯片结果进行验证。同时，应用生物信息学方法，对差异基因进行GO功能和KEGG通路分析，并构建lncRNA-mRNA共表达网络，预测差异lncRNA的顺式作用靶基因。结果 通过基因芯片技术共筛选出405条差异lncRNA（108条下调，297条上调）与772条差异mRNA（107条下调，665条上调）。qRT-PCR验证4条lncRNA（n335248、ENST00000450864、n333319和n335185）与4条mRNA（EDNRA、IFI6、HK2与ITGA1）的表达，结果与基因芯片检测结果一致。GO与KEGG富集分析发现，差异mRNA主要参与血管凝固、轴突导向、血管生成和细胞黏附等生物过程，差异mRNA主要富集在代谢通路、细胞局部黏附、肌动蛋白细胞骨架调控、白细胞跨内皮迁移、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶等信号通路。lncRNA-mRNA共表达网络由度值 ≥ 15的23条mRNA和58条lncRNA共同构建组成。结论 增殖期与消退期IH组织中存在大量差异表达的lncRNA和mRNA，这些lncRNA可能通过调控相应的靶mRNA参与IH发生发展。     

UVB对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞自噬相关转录组学的影响

目的检测中波紫外线(UVB)照射对系统性红斑狼疮(SLE)患者的外周血单个核细胞(PBMC)自噬相关mRNA表达的影响并验证。方法分离15例SLE患者和15例正常对照的PBMC,各分为UVB照射组和未照射组,照射UVB后培养24 h,提取细胞总RNA,使用RNA-Seq测序,筛选出各组间自噬相关差异性表达mRNA,并通过qPCR及Western blot对部分基因(ATG7、p62/SQSTM1)的表达情况进行验证。结果RNA-Seq显示SLE患者未照射UVB组(SLE-C组)和正常人未照射UVB组(NC-C组)相比,共有266个基因上调,85个基因下调;SLE患者照射UVB组(SLE-UVB组)和正常人照射UVB组(NC-UVB组)相比,共有318个基因上调,146个基因下调;GO功能富集分析显示差异基因与自噬小体组装、巨自噬的正性调节、巨自噬的调节等有关。对ATG7和p62进行RT-qPCR和Western blot验证,结果显示ATG7和p62在SLE-UVB组的表达水平较SLE-C组和NC-UVB组高,与RNA-Seq的变化趋势一致。结论获得SLE患者PBMC照射UVB前后的自噬相关mRNA表达数据,为进一步阐明UVB对SLE发病的影响提供了理论基础。     

lncRNA LINC01206调控银屑病角质形成细胞的功能研究

 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)在银屑病细胞周期信号通路中发挥的功能及其作用机制。方法 通过GEO数据库收集银屑病转录组测序数据集进行分析,筛选差异表达的基因;通过细胞信号通路富集分析（KEGG）识别调控银屑病的关键信号通路;利用加权基因共表达网络分析（WGCNA）构建lncRNA与蛋白编码基因共表达网络;通过siRNA在人永生化表皮细胞（HaCaT细胞）中敲低LINC01206,流式细胞术检测细胞周期进程。结果差异表达基因富集分析研究发现细胞周期信号通路的失调参与银屑病发病。lncRNA与蛋白编码基因共表达网络分析表明,LINC01206、LINC01269、LINC01215和LINC02159等通过与细胞周期信号通路关键基因CCNA2、CCNB1和CCNE1的相互作用调控银屑病进程。细胞实验结果显示,siRNA在HaCaT细胞中敲低LINC01206,引起细胞周期G2/M的阻滞。结论lncRNA的表达变化引起银屑病细胞周期失调,细胞周期信号通路中的关键lncRNA有望成为银屑病治疗的靶标     

羟氯喹及没食子酸酯对HaCaT细胞光照射的影响

目的 探讨羟氯喹和绿茶活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)损伤永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)的保护作用及其机制。方法 采用UVB定时及定量照射培养的HaCaT细胞,分别加入羟氯喹和EGCG干预处理,以RT-PCR法检测各受试组p53、p21、c-fos基因表达水平。结果 UVB照射后可明显增加HaCaT细胞中p53,p21,c-fos mRNA表达,羟氯喹和EGCG可不同程度地下调上述基因表达水平。结论 羟氯喹和EGCG的光保护作用在HaCaT细胞可能与其抑制p53,p21,c-fos基因表达有关。     

Long non‐coding RNA TSIX is upregulated in scleroderma dermal fibroblasts and controls collagen mRNA stabilization

Long non‐coding RNAs (lncRNAs) are thought to have various functions other than RNA silencing. We tried to evaluate the expression of lncRNAs in patients with systemic sclerosis (SSc) and determined whether lncRNAs controls collagen expression in dermal fibroblasts. lncRNA expression was determined by real‐time PCR and in situ hybridization. Protein and mRNA levels of collagen were analysed using immunoblotting and real‐time PCR. We found TSIX, one of the lncRNAs, was overexpressed in SSc dermal fibroblasts both in vivo and in vitro, which was inhibited by the transfection of transforming growth factor (TGF)‐β1 siRNA. TSIX siRNA reduced the mRNA expression of type I collagen in normal and SSc dermal fibroblasts, but not the levels of major disease‐related cytokines. In addition, TSIX siRNA significantly reduced type I collagen mRNA stability, but not protein half‐lives. Furthermore, we first investigated serum lncRNA levels in patients with SSc, and serum TSIX levels were significantly increased in SSc patients. TSIX is a new regulator of collagen expression which stabilizes the collagen mRNA. The upregulation of TSIX seen in SSc fibroblasts may result from activated endogenous TGF‐β signalling and may play a role in the constitutive upregulation of collagen in these cells. Further studies on the regulatory mechanism of tissue fibrosis by lncRNAs in SSc skin lead to a better understanding of the pathogenesis, new diagnostic methods by their serum levels and new therapeutic approaches using siRNAs.     

中波紫外线对角质形成细胞MMP-1及TIMP-1的影响

目的：研究中波紫外线照射对永生化人角质形成细胞的影响。方法：绘制细胞生长曲线,用不同剂量UVB（30、60、90 mJ/cm2）照射永生化人角质形成细胞,用MTT方法测定UVB照射后细胞的增殖活性,用RT-PCR方法测定HaCaT细胞中MMP-1mRNA和TIMP-1mRNA的表达。结果：UVB照射后,HaCaT细胞的增殖活性受到抑制,MMP-1 mRNA表达增强,TIMP-1 mRNA表达下降,90 mJ/cm2照光组与未照光组比较,差异均有统计学意义。结论：UVB照射可诱导HaCaT细胞损伤和细胞凋亡,促使MMP-1mRNA表达增加,TIMP-1 mRNA表达减少,二者比例失调,这可能与光老化的发生有一定的关系。