细菌脂多糖通过MAPK / ERK1 / 2 信号通路影响成骨细胞活性和凋亡

目的:探讨细菌脂多糖(LPS)通过丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK1/2)信号通路对成骨细胞活性和凋亡的影响。方法:将小鼠前体成骨细胞MC3T3-E1随机分为对照组、LPS组、LPS+U0126组,对照组不给予LPS处理,LPS组给予10 mmol/L LPS处理,LPS+U0126组给予10 mmol/L LPS和25μmol/L ERK1/2激酶抑制剂U0126处理。采用噻唑蓝(MTT)测定细胞活性,采用流式细胞术测定细胞凋亡,采用硝基苯磷酸二钠基质动力学方法测定碱性磷酸酶(ALP),采用放射免疫法测定骨钙素(BGP)活性,采用Hochest 33258染色观察细胞核形态,采用Western blot测定活化型细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3型(C-Caspase 3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平。结果:与对照组比较,LPS组和LPS+U0126组MC3T3-E1细胞活性、ALP和BGP活性降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),C-Caspase 3、Bax、p-ERK1/2蛋白水平升高(P0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P0.05);与LPS组比较,LPS+U0126组MC3T3-E1细胞活性、ALP和BGP活性升高(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05),C-Caspase 3、Bax、p-ERK1/2蛋白水平降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P0.05)。对照组细胞核正常;LPS组细胞凋亡形态数量明显增多;LPS+U0126组凋亡形态细胞数量较LPS组减少。结论:LPS可通过抑制MAPK/ERK1/2信号通路抑制成骨细胞活性,诱导成骨细胞凋亡。     

雷公藤红素通过调控GINS2表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨雷公藤红素对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)活力和凋亡的影响及其分子机制。方法:采用低、中、高剂量的雷公藤红素处理KFB。采用CCK-8实验和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡。RT-qPCR和Western blot检测GINS复合物亚基2(GINS2)的表达。将KFB分为si-NC组、si-GINS2组、Exp+pcDNA组和Exp+pcDNA-GINS2组,按照上述方法检测细胞活力和凋亡的变化。结果:雷公藤红素处理后KFB活力降低,细胞凋亡率升高,GINS2表达降低,并呈显著的剂量依赖关系(P<0.05)。敲减GINS2表达后,KFB活力降低,细胞凋亡率升高(P<0.05);过表达GINS2可部分逆转雷公藤红素对KFB活力和凋亡的影响(P<0.05)。结论:雷公藤红素通过下调GINS2可抑制KFB活力,促进细胞凋亡。     

柴胡皂甙D通过调控TGF-β1/Smads信号通路抑制人胚肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白产生

目的研究柴胡皂甙D(SSD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖、转分化以及TGF-β1/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白家族(Smads)信号通路的影响。方法体外培养HELF,设立正常对照组、 1 ng/mL TGF-β1处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合0.5μmol/L SSD处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合1μmol/L SSD处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合2μmol/L SSD处理组。采用CCK-8法检测HELF的增殖情况,荧光定量PCR法检测Smad2、 Smad3、 Smad7的mRNA水平, Western blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 1型胶原蛋白(Col1)、 Smad2、 Smad3、磷酸化的Smad2(p-Smad2)、 p-Smad3、 Smad7的蛋白水平。结果与正常对照组比较, TGF-β1处理组细胞增殖明显, Col1、α-SMA蛋白水平增加, Smad2和Smad3 mRNA和蛋白磷酸化水平显著增加, Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低;与TGF-β1处理组比较,不同浓度SSD处理组细胞增殖降低,可逆转以上各指标的改变,呈一定的量效关系。结论 SSD通过调控TGF-β1/Smads信号通路,发挥抗肺纤维化的作用。     

环状RNA-42398通过调控TGF-β1/Smads信号通路抑制肝星状细胞活化

目的:探讨小鼠环状RNA-42398(mmu_circ₄2398)对肝星状细胞活化的影响及机制是否与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。方法:小鼠肝星状细胞株JS1,分成正常对照组、空载体阴性对照组(vector组)和mmu_circ₄2398过表达组(mmu_circ₄2398组),体外构建mmu_circ₄2398过表达载体,通过脂质体瞬时转染法转入JS1细胞,48 h后RT-qPCR检测mmu_circ₄2398的表达变化,PCR产物经一代测序验证其环化位点,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达。结果:与vector组相比,mmu_circ₄2398组的mmu_c...     

中药单体调控TGF-β1/Smads信号通路抗纤维化的研究

肝纤维化是多种慢性肝病的共同结局,是肝硬化的必经阶段。因此,抗纤维化治疗十分迫切,当前缺乏有效的抗纤维化治疗。中药单体可通过多种途径、多个靶点干预肝纤维化的进展。转化生长因子β1（TGF-β1）/Smads 信号通路在肝纤维化的发生发展中扮演着至关重要的角色。本文就中药单体调控TGF-β1/Smads信号通路抗纤维化的研究作一综述。     

TGF-β1 作用后老龄大鼠心肌成纤维细胞p38 MAPK通路和JNK通路的变化

目的:探讨转化生长因子β₁(TGF-β₁)作用后老龄大鼠心肌成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路和c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路的变化。方法:提取乳鼠及老龄大鼠心肌成纤维细胞,以TGF-β₁(5μg/L)刺激,分为乳鼠PBS对照组(N1组)、乳鼠TGF-β₁干预组(N2组)、老龄鼠PBS对照组(A1组)和老龄鼠TGF-β₁干预组(A2组)。采用MTT比色法测定细胞增殖;Western blotting检测各组成纤维细胞总p38、phospho-p38、JNK及phospho-JNK水平。结果:TGF-β₁刺激后老龄鼠心肌成纤维细胞增殖能力低于乳鼠心肌成纤维细胞。加入TGF-β₁后,N2组和A2组的phospho-p38和phospho-JNK分别较N1组和A1组明显升高;N2组与A2组总p38及JNK水平无显著差异;加入TGF-β₁后,与N2组相比,A2组phospho-p38及phospho-JNK表达水平显著减弱(P<0.05)。结论:老龄导致心肌成纤维细胞的TGF-β₁/p38及TGF-β₁/JNK信号通路相关蛋白磷酸化水平受损。     

褪黑激素通过TGF-β1/Smads信号通路对LPS诱导新生大鼠脑炎的影响

目的 探究褪黑激素治疗脂多糖（LPS）诱导新生大鼠脑炎的效果,及其对于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路的影响。方法 通过产前对孕鼠腹膜内注射LPS制备新生大鼠脑炎模型;注射Ibotenate诱导幼鼠（产后第4天）发生兴奋毒性病变。免疫荧光染色法观察褪黑激素对幼鼠小胶质细胞活化及凋亡的影响;Western blot检测内质网应激和自噬相关蛋白、TGF-β1、Smads蛋白表达;qRT-PCR检测相关mRNA的表达。结果 褪黑激素可以减轻新生脑炎大鼠的兴奋性毒性损伤;免疫荧光染色结果显示,褪黑激素可以降低新生脑炎大鼠小胶质细胞的活化和凋亡的表达。褪黑激素干预并不能逆转新生大鼠脑炎内质网应激及自噬相关蛋白的变化。LPS下调了Smads蛋白的表达,上调了TGF-β1 mRNA的表达,褪黑激素可以逆转这些变化。结论 褪黑激素可能通过TGF-β1/Smads信号通路治疗LPS诱导的新生大鼠脑炎。     

Activin A通过JNK/ERK信号通路调控皮肤成纤维细胞肌动蛋白重组的研究

目的探讨Activin A对成纤维细胞微丝肌动蛋白的作用以及其信号机制。方法出生24 h内的C57BL/6乳鼠皮肤成纤维细胞分离培养。实验分为PBS组、Activin A组以及JNK特异性抑制剂SP600125组、ERK特异性抑制剂SL327组、p38特异性抑制剂SB202190组。3~5代成纤维细胞,提取细胞总蛋白,Western blot检测JNK、ERK、p38的磷酸化活性并且通过Phallotoxins染色观察成纤维细胞肌动蛋白变化。结果 Activin A可诱导成纤维细胞肌动蛋白聚集,给予JNK特异性抑制剂SP600125后,成纤维细胞肌动蛋白聚集现象完全被抑制;给予ERK特异性抑制剂SL327后,成纤维细胞肌动蛋白聚集现象减弱,但是尚未完全被抑制;而p38特异性抑制剂SB202190处理后,成纤维细胞肌动蛋白聚集未被抑制。结论 Activin A通过JNK和ERK信号通路诱导成纤维细胞肌动蛋白重组聚集。     

视黄醇X受体激动剂通过调控Smad2通路抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞胶原合成

目的:探讨视黄醇X受体(RXR)激动剂9-顺式视黄酸(9-cis-RA)干预对缺氧条件下转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(CFs)胶原合成的影响和分子机制。方法:心肌组织块干涸法培养大鼠CFs,持续通氮气法建立细胞缺氧环境,评价9-cis-RA和TGF-β1对CFs胶原合成的影响;ELISA法测CFs上清液Ⅰ、Ⅲ型胶原水平,Western blot法检测胞浆、胞核和细胞的Smad2及p-Smad2水平,细胞免疫化学法观察p-Smad2的亚细胞定位。结果:TGF-β1(0.01~10μg/L)在缺氧条件下呈浓度依赖性地诱导CFs合成Ⅰ型和Ⅲ胶原,当浓度达到5μg/L时,Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成水平显著增高(P0.01)。9-cis-RA(10-9~10-6mol/L)则呈浓度依赖性抑制TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs胶原合成,当浓度为10-7mol/L时,Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成水平显著降低(P0.01)。Smad2抑制剂(20 nmol/L)亦可显著抑制TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成。免疫杂交和细胞免疫化学结果显示,与TGF-β1干预相比,TGF-β1和9-cis-RA联合干预组的CFs其胞浆内p-Smad2的水平显著增加,但胞核内p-Smad2的水平明显降低(P0.05)。结论:RXR激动剂9-cis-RA显著下调TGF-β1在缺氧条件下诱导的CFs Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成,其机制与其抑制TGF-β1诱导的p-Smad2细胞核转位有关。     

TGF-β/Smad、MAPK/ERK、NF-κB信号通路对肝纤维化的影响

肝纤维化是肝脏对各种慢性肝损伤的自身病理修复过程,是发展为肝硬化的必经阶段。本文介绍了TGF-β/Smad信号通路、MAPK信号通路、NF-κB信号通路在肝纤维化发生发展过程中的重要作用。     

LncRNA CCAT1通过MAPK/ERK通路影响子宫内膜癌细胞的侵袭转移

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)CCAT1对子宫内膜癌细胞侵袭迁移和丝裂原活化激酶/胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路影响,阐明CCAT1在子宫内膜癌侵袭迁移中的作用及可能机制.方法:将KLE细胞分为空白对照组(BC组)、阴性对照组(NC组)、CCAT1-siRNA组和CCAT1-siRNA+EGF...     

TGF-β/Smads信号传导通路与肿瘤关系研究进展

转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是以大分子无活性的蛋白前体形式由正常细胞和转化细胞分泌的,需激活后才能发挥其生物学活性。激活的TGF-β与TβRⅡ结合形成二聚体使TSR Ⅰ磷酸化,随后R-Smad亦被磷酸化并诱导其复合物转至细胞核内。TGF-β对许多类型的细胞发挥广泛的生物学作用,对细胞的生长具有双重作用。但这些细胞因受体表达下降或缺失、Smad突变而致的信号传导异常、激活潜态TGF-β能力的丧失及调控TGF-β转录传导的功能性基因丢失而失去对TGF-β的反应性,从而导致肿瘤的发生。同时,TGF-β在G1期发挥它调节细胞周期的作用。     

松脂醇二葡萄糖苷对光老化HDF细胞ER/TGF-β1/Smads信号通路的调控机制

目的从分子生物学水平探讨杜仲中松脂醇二葡萄糖苷(PDG)对光老化人真皮成纤维细胞(HDF)ER/TGF-β1/Smads信号通路的调控机制。方法建立以长波紫外线模型损伤HDF细胞。给予不同浓度PDG和通路阻断剂进行干预,用MTT检测细胞增殖率,Real time-PCR和Western blot法检测各组细胞内含有的信号转化生长因子(TGF-β1)、转导分子(Smad3)、I型胶原(COL1A1)对应mRNA和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组增殖率及TGF-β1、Smad3、COL1A1 mRNA和蛋白表达均显著降低(P 0.01);与模型组比较,各给药组增殖率和TGF-β1、Smad3、COL1A1mRNA和蛋白表达均显著升高(P0.01);与PDG高浓度组比较,TGF-β1、Smad3、ER三个阻断剂组相对应的TGF-β1、Smad3和COL1A1相应mRNA和蛋白表达均显著降低(P 0.01)。结论 PDG能增加HDF细胞TGF-β1、Smad3、COL1A1对应mRNA和蛋白表达,对光老化HDF细胞胶原合成有促进作用;但这种作用能被TGF-β1、Smad3和ER阻断剂所抑制, PDG促进胶原合成的作用机制可能与ER/TGF-β1/Smads信号通路有关。     

石蒜碱通过调控MAPK/ERK信号通路抑制人结肠腺癌LoVo细胞生长

目的:探讨石蒜碱(lycorine)对人结肠腺癌LoVo细胞活力、凋亡和迁移侵袭能力的影响及其作用机制。方法:不同浓度(1～8μmol/L) lycorine处理LoVo细胞,CCK-8法检测细胞活力;划痕愈合和Transwell小室实验检测迁移和侵袭能力;Hoechst染色及流式细胞术实验检测凋亡改变;萤光素酶报告基因系统检测MAPK/ERK信号通路活化情况;同时采用Western blot法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关标志物、凋亡相关蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白水平的变化。结果:与空白对照组相比,lycorine处理组LoVo细胞的活力和迁移侵袭能力受到显著抑制(P<0.05),同时EMT相关标志物基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase-7, MMP-7)和N-cadherin表达下调,E-cadherin表达上调(P<0.05),而凋亡细胞数及cleaved casp...     

RNA干扰对人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1刺激后胶原合成的影响

目的 体外构建结缔组织生长因子(CTGF)序列特异性小干扰RNA表达载体,转染导人后研究其对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKFs)胶原蛋白分泌的影响.方法 体外构建CTGF序列特异性小干扰RNA质粒表达载体,Dosper脂质体转染人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,观察加入10 ng/mL剂量的转化生长因子(TCF-β1)刺激前后胶原蛋白水平的变化.结果 转染小干扰RNA质粒后,胶原蛋白分泌水平降为正常表达的51.6%;经TGF-β1刺激后,蛋白表达仍无明显变化.结论 小干扰RNA质粒表达载体可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原蛋白分泌,为临床上瘢痕疙瘩的基因治疗提供理论依据.     

化瘀固本中药方对慢性盆腔炎大鼠盆腔粘连及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 基于转化生长因子β1(TGF-β1)及信号转导蛋白（Smads）信号通路探讨化瘀固本中药方对慢性盆腔炎（CPID）大鼠盆腔粘连的影响。方法 动物实验分为假手术组、模型组、对照组和实验组,模型组、对照组、实验组SD雌性大鼠采用向卵巢推注0.06 m L的25%苯酚树胶构建慢性盆腔炎大鼠模型,假手术组大鼠推注等剂量的生理盐水。对照组和实验组分别以2 mL剂量的康妇炎胶囊和化瘀固本中药方进行灌胃给药,假手术组和模型组以等剂量的生理盐水进行灌胃处理,每日1次,每组分别连续灌胃2周。处死大鼠剥离子宫。观察大鼠子宫,并对其盆腔粘连进行评分。免疫组化检测子宫组织中细胞间黏附分子-1intercell(ICAM-1)的表达。Western blot检测TGF-β1、p-Smad2/3的表达。结果 与假手术组相比,模型组、对照组、实验组大鼠子宫粘连评分、子宫组织中ICAM-1、TGF-β1、p-Smad2/3的表达明显升高,差异均具有统计意义（P<0.05）;与模型组相比,对照组、实验组大鼠子宫粘连评分、子宫组织中ICAM-1、TGF-β1、p-Smad2/3的表达明显降低,差异均具有统计意...     

TGF-β1 对肌成纤维细胞MMP-2激活的影响

目的：观察转化生长因子β1(TGF-β1)对鼠肌成纤维细胞（C2C12细胞）分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其激活的影响,探讨其内在机制。 方法：用不同浓度的TGF-β1（0、1、5、10 μg/L）干预C2C12细胞24 h,200 pmol/L Smad3基因短干扰RNA（siRNA-Smad3）转染C2C12细胞24 h,用ELISA 方法测定MMP-2及其活性型MMP-2。结果：(1) 0、1、5、10 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞24 h,ELISA检测总MMP-2的结果（μg/L）分别为177±20、180±15、171±18、179±28,方差分析无显著差异(P>0.05);活性型MMP-2分别为23.09±4.37、14.42±2.30、9.50±1.18、4.48±0.69,比较差异显著(P<0.01)。(2) 5 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞4 h、12 h和24 h,总MMP-2 ELISA值分别为160±16(对照组)/157±17（干预组）、174±6/174±16、187±12/189±18, 不同时点干预组总MMP-2 值比较无差异,P>0.05;活性型MMP-2 值分别为：16.92±1.26(对照组) /16.53±2.56（干预组）、22.70±3.03/8.00±2.02、23.15±2.66/9.39±2.60,干预组活性型MMP-2值比较有差异,P<0.01。（3）200 pmol/L siRNA-Smad3转染C2C12细胞24 h,再用5 μg/L TGF-β1干预C2C12细胞24 h, 活性型MMP-2值分别是20.80±1.53（siRNA-control,空白对照组)、9.82±2.18（siRNA-control+5 μg/L TGF-β1,内对照组）、20.09±2.27（siRNA-Smad3+5 μg/L TGF-β1,实验组）;实验组和内对照组比较差异显著（P<0.01),实验组和空白对照组比较无显著差异（P>0.05)。结论：TGF-β1并不影响C2C12细胞分泌MMP2,但显著抑制MMP-2的活化;siRNA-Smad3阻断Smad3信号转导可以消除TGF-β1对MMP-2活化的抑制作用。     

复方三七饮对博莱霉素致大鼠肺纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨复方三七饮(CPNG)对博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为6组:正常组、模型组、醋酸泼尼松组、CPNG大、中、小剂量组[CPNG(H、M、L)],每组10只.经气管内注入BLM(5mg/kg)制备大鼠肺纤维化模型.造模第2天,治疗组分别灌服醋酸泼尼松3.33 mg/(kg ·d)、CPNG大、中、小剂量(100、50、25) mg/(kg·d),正常组和模型组大鼠灌服等体积的蒸馏水,1次/d.28 d后处死大鼠,HE染色和Masson染色进行肺组织病理学观察;碱水法测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;Western blot法检测TGF-β1、Smad2、Smad7蛋白的表达水平.结果 与模型组大鼠比较,肺组织的病理组织学HE和Masson染色显示CPNG能明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化程度(P＜0.01);CPNG各剂量组大鼠肺组织中HYP降低(P ＜0.01);CPNG各剂量组TGF-β1、Smad2蛋白的表达水平降低(P＜0.01),Smad7蛋白表达水平升高(P＜0.01).结论 复方三七饮对博莱霉素致大鼠肺纤维化具有一定的防治作用,可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关.