4种血浆游离DNA提取方法的比较

目的比较4种方法对血浆游离结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA和质粒DNA的提取效率。方法MTBDNA和重组质粒DNA经紫外分光光度法准确定量并梯度稀释,建立标准品。构建含有一定浓度MTBDNA和质粒DNA的血浆,分别采用4种方法提取血浆游离DNA,采用实时荧光PCR技术定量检测模拟血浆中MTBDNA和质粒DNA的含量,比较各种方法的提取效率。结果4种方法中,磁珠法对MTBDNA和质粒DNA的提取效率最高,分别为52.8%和69.2%;相对丢失率最低,分别为40.1%和31.8%;重复性最好,其变异系数分别为26.7%和26.0%。结论在4种方法中,磁珠法对血浆游离DNA的提取效率最高,尤其适合于小片段DNA的提取。     

全血DNA提取试剂盒改良法

目的建立简便、快捷、高纯度、高浓度的DNA提取方法。方法对原美国生产的EZNABloodDNAKit试剂盒方法进行改良(简称全血DNA提取试剂盒改良法),并与原试剂盒法、经典酚氯法改良法(微量法)[1]进行比较。取EDTA2Na抗凝血,分别用3种方法提取DNA,用琼脂糖凝胶电泳对其进行定性测定,并用紫外分光光度法定量测定。结果DNA提取的纯度A260/A280试剂盒改良法、原试剂盒法和微量法分别为1.8083±0.1655、2.0877±0.3230、1.7734±0.1152,前两法有显著性差异(P<0.05),试剂盒改良法提取DNA的纯度明显高于原试剂盒法,与微量法无显著性差异(P>0.05);改良法提取DNA的浓度分别为75.2476±18.0259、45.2771±14.973、123.8758±74.7367,与前两法的DNA提取浓度有显著性差异(P<0.05),明显高于原试剂盒法;DNA电泳图显示试剂盒改良盒法与微量法均很清晰,原试剂盒法有明显的拖尾现象。结论试剂盒改良法提高了DNA提取的纯度和浓度,可作为分子生物学研究DNA提取较好的选用方法。     

传统消毒法与喷雾式消毒法对静脉输液处皮肤消毒效果的比较

静脉输液在临床上应用广泛 ,而输液处皮肤所用的消毒液种类繁多 ,一类为传统棉球棒浸湿碘伏、碘酊、酒精消毒的方法 ;另一类为近几年采用的喷雾式消毒液 ,如立好、肤必净、杰雪等。采取不同消毒方法的消毒效果如何 ,将直接影响病人的生命安全。本文就传统棉球棒浸湿消毒液的消毒法 (以下简称传统消毒法 )与喷雾式立好消毒液的消毒法 (以下简称立好消毒法 )对静脉输液处皮肤消毒效果进行比较研究 ,现介绍如下。材料与方法1.实验试剂与实验材料。传统的消毒液 :2 %碘酊 (四川天康制药有限公司生产 )和 75 %酒精 (泸州医学院附属医院药剂科配制…     

6种胃液游离microRNAs对胃腺癌的诊断价值

目的:探讨6种胃液游离microRNAs(以下简称miRNAs)对胃癌的潜在诊断价值。方法:选择2013年于复旦大学附属中山医院进行胃镜检查的53例患者为研究对象。提取胃液并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其中6种游离miRNAs表达量。按疾病诊断情况将患者分为胃癌组(24例胃腺癌患者)和对照组(16例胃溃疡患者和13例慢性胃炎患者),采用非参数Mann-Whitney检验比较两组患者胃液游离miRNAs的表达差异,采用ROC曲线下面积计算诊断效能。结果:与对照组相比,胃癌组患者胃液中miR-17、miR-18a、miR-20a、miR-21和miR-378的表达差异均有统计学意义(P0.05)。miR-17、miR-18a、miR-21和miR-378具有中等诊断效能,miR-20a和miR-106b有较低诊断效能。结论:胃液6种游离miRNAs对于胃癌具有潜在诊断价值。     

真菌DNA提取方法的建立和比较

目的:DNA的提取效率,尤其是DNA的纯度严重影响实验结果,同一标本采用不同方法或不同标本采用相同方法提取DNA,其纯度和提取率有很大差异。以丝状真菌为材料.进行DNA提取.对真菌DNA的提取方法进行优化,探讨其最佳DNA提取方法方法:实验于2004-06/2006-12在吉林大学基础医学院真菌实验室进行以临床常见致病真菌标本为材料,采用玻璃珠-盐析法、CTAB法、Gene TLE~(TM)法3种不同方法提取DNA,通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取DNA的效率。结果:同等菌体量下,A_(260)和A_(280)的比值采用Gene TLE~(TM)法获得的样品最高,表明其蛋白质含量相对最少.3种提取的基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图都在相应的多重PCR体系中扩增出目的片段,Gene TLE~(TM)DNA抽提法带型最清楚、明亮。结论:Gene TLE~(TM)法提取DNA效率高、质量好,操作简单.适于DNA的提取。     

红细胞RhD膜蛋白提取与固相化方法的研究

目的提取红细胞RhD膜蛋白并将其固化至乳胶微球以获得固相化RhD蛋白靶分子。方法采集3份志愿者全血标本,分别使用Yared MA法提取浓缩红细胞、试剂盒法提取浓缩红细胞及血影细胞膜蛋白的方法提取标本红细胞RhD膜蛋白,通过蛋白质定量检测及免疫印迹试验评价不同方法的提取效果。将不同方法提取出的RhD蛋白固化至乳胶微球,并通过流式细胞仪分析其抗原活性。结果 RhD膜蛋白浓度(mg/m L)分别为(n=3):0.24±0.04(Yared MA法提取浓缩红细胞)、4.82±0.09(试剂盒法提取浓缩红细胞)和4.31±0.39(试剂盒法提取血影细胞)与浓缩红细胞上的RhD膜蛋白浓度(mg/m L)。免疫印迹试验:Yared MA法从浓缩红细胞提取的RhD蛋白仅有1条RhD特异性条带;试剂盒法从浓缩红细胞提取的RhD蛋白无特异性条带,从血影细胞提取的RhD蛋白有2条RhD特异性条带。流式分析(n=3):Yared MA法提取的浓缩红细胞样品与试剂盒法提取的血影细胞样品、浓缩红细胞样品的荧光强度分别为:98.00±12.53、92.67±10.69、50.00±13.89。结论 Yared MA法提取出的RhD膜蛋白固化于乳胶微球可获得RhD蛋白纯度及抗原性较佳的固相靶分子。     

三黄片中黄芩苷提取工艺的实验研究

目的:通过实验研究了水煎煮法提取黄芩中黄芩苷工艺的最佳条件。方法:采用正交试验,以黄芩苷含量为指标,考察了提取用水量、水的起始温度、调节pH后沉淀时间、洗涤的pH等因素。用高效液相色谱法(HPLC)测定黄芩苷含量。结果:确定水煎煮法提取黄芩中黄芩苷工艺的最佳条件:水量为10倍,水起始温度为100℃,调节pH1.5～2.0后沉淀时间为24h,洗涤的pH为5.0～6.0。结论:试验结果表明:以水煎煮法采用本实验结果提取黄芩苷适应产业化生产,是一种既经济又可靠的方法。     

大黄蒽醌类成分随提取时间变化规律初探

目的:探讨大黄蒽醌类成分在单次和多次水提取过程中的变化规律。方法:对大黄药材进行单次和多次提取,采用分光光度法测定不同时间提取液中结合蒽醌、游离蒽醌含量。结果:第一次提取,第45min时,结合蒽醌含量最高;第二次提取时,第30min结合蒽醌的含量最高,而游离蒽醌含量都随着提取时间的增加而增加。结论:为避免结合蒽醌因受热时间过长而解离增加,大黄单次提取时,提取时间以45min为宜,两次提取时,第二次以30min为宜。     

纳米磁珠提取法在手足口病病原RNA提取中的应用

目的介绍纳米磁珠提取手足口病病原RNA的方法。方法手足口病患儿临床肛拭标本240份,分别以纳米磁珠提取法和经典的Trizol提取法提取RNA,以实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)特异核酸片段。结果纳米磁珠法检测EV71阳性率27.5%,CA16阳性率23.3%;Trizol法EV71阳性率26.6%,CA16阳性率22.1%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论纳米磁珠提取法操作简单,快速高效,适合临床实验室应用于手足口病快速诊断。     

用核酸净化设备和实时检测PCR的HBV DNA及HCV RNA高处理量检测系统分析输血后肝炎

背景 建立一种HBV DNA及HCV RNA高处理量检测系统。方法 联合使用自动实时PCR系统(PRISM 7700,PEBiosystems,Foster City,CA)和自动病毒核酸提取仪(BioRobot9604,Qiagen,Hilden,德国)作为高处理量检测系统。同时发展了HBV DNA检测内质控。结果 5小时内检测了全部的96份样品。本系统的灵敏性几乎相当于手工巢式PCR法。附加的     

Comparison of automated nucleic acid extraction methods with manual extraction

Automated nucleic acid extractors can improve workflow and decrease variability in the clinical laboratory. We evaluated Qiagen EZ1 (Valencia, CA) and bioMérieux (Durham, NC) easyMAG extractors compared with Qiagen manual extraction using targets and matrices commonly available in the clinical laboratory. Pooled samples were spiked with various organisms, serially diluted, and extracted in duplicate. The organisms/matrices were Bordetella pertussis/bronchoalveolar lavage, herpes simplex virus II/cerebrospinal fluid, coxsackievirus A9/cerebrospinal fluid, BK virus/plasma, and Mycoplasma pneumoniae/endotracheal tube samples. Extracts were amplified in duplicate using real-time PCR assays, and amplification of the target at a cycle threshold of 35 using the manual method was used for comparison. Amplification efficiency of nucleic acids extracted by automated methods was similar to that by the manual method except for a loss of efficiency for M. pneumoniae in endotracheal tube samples. The EZ1 viral kit 2.0 gave better results for coxsackievirus A9 than the EZ1 viral kit version 1.0. At the lowest limit of detection (past a cycle threshold of 35), the easyMAG was more likely to produce amplifiable nucleic acid than were either the EZ1 or manual extraction. Operational complexity, defined as the number of manipulations required to obtain an extracted sample, was the lowest for the easyMAG. The easyMAG was the most expensive of the methods, followed by the EZ1 kit and manual extraction.     

Vacuum extraction

Vacuum extraction rivals forceps delivery in efficacy, is less traumatic to the mother and is as safe or safer than forceps delivery for the infant. Soft plastic cup extractors minimize the technical, maternal and fetal problems of vacuum extraction and have made this method of delivery ideal for the family physician who practices obstetrics.     

老年人全口残留牙一次性拔除的护理

在对32例患有心脏病、高血压、糖尿病等慢性疾病的老年病人行全口残留牙一次性拔除术时,根据老年人的心理特点,术前向病人反复耐心地进行心理疏导,消除矛盾、焦虑、恐惧心理;对伴有合并症的病人采取有效的防治措施,加强术后护理,防止并发症的发生是护理的关键.实践证明,老年人住院行全口残留牙一次性拔除较门诊拔牙安全,既节约了病人就医时间,又减少了病人的痛苦,缩短了病人口内无牙期,可尽早恢复咀嚼功能,改善老年人的进食条件,对老年人的身心健康是有利的.     

三种方法提取血清miRNA效果的比较

目的比较Trizol法、蛋白酶K消化+Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA的效果。方法分别选取2例健康人、2例肺炎患者和2例肺癌患者血清,以Let-7a-5p作为目标mRNA,线虫Cel-miR-39-3p作为内参,分别采用Trizol法、蛋白酶K消化+Trizol法及沉淀裂解法提取血清miRNA,以Let-7a-5p及Cel-miR-39-3p特异性引物进行反转录PCR,以反转录PCR产物为模板运用SYBGreenⅠ法进行荧光定量PCR检测。结果 Trizol法与蛋白酶K消化+Trizol法均能有效提取到血清miRNA,而沉淀裂解法由于没有对血浆中的RNA进行富集故提取效果不佳。Trizol法提取较蛋白酶K消化+Trizol法相比,可以减少蛋白酶K的消化时间且提取效果更好,并且血清与Trizol试剂的体积比为200∶600时效果相对较好。三种方法检测Cel-miR-39-3p的Ct值基本一致。Trizol法和蛋白酶K消化+Trizol法在提取过程中加入的内参丢失较少。结论 Trizol法作为总RNA提取的手段适用于血清miRNA提取,通过调整血清与Trizol试剂的用量可使提取到的血清miRNA能够满足试验需要。     

Thyroid hormone extraction by plasma exchange: a study of extraction rate.

How to obtain an optimal efficiency of plasma exchanges in the treatment of severe hyperthyroidism has not been defined. In order to evaluate how long the exchanges must be continued to be fully effective in extracting thyroid hormones, we evaluated the extraction rate by repeated plasma sampling in two hyperthyroid patients and three euthyroid subjects who underwent a total of seven exchanges. Plasma concentrations of thyroid hormones were also determined just before, just after, and 24 hours following the exchange. The hormonal removal rate did not fall dramatically during the exchange, so that its efficiency--in terms of hormone extraction--depends closely on its duration. The determination of plasma thyroid hormone concentrations after the exchange does not appear to be useful in evaluating the thyroid hormone loss since these concentrations may not change in spite of the hormonal extraction.