丙泊酚抑制NF-κB p65的磷酸化缓解葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应

为探讨丙泊酚对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应的影响,构建DSS诱导的结肠炎小鼠模型,将小鼠随机分为5组:对照组、模型组、丙泊酚低剂量组、丙泊酚中剂量组和丙泊酚高剂量组。采用疾病活动指数评分检测小鼠体质量变化和结肠长度,H-E染色检测病理损伤程度并进行组织病理学评分,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)染色检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10 mRNA水平,ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平,Western blotting检测p65、p-p65蛋白表达。结果显示,与对照组比较,模型组小鼠体质量显著降低(P0.05),结肠长度显著缩短(P0.05),病理学评分显著升高(P0.05),结肠细胞凋亡率显著增加(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平显著升高(P0.05),IL-10 mRNA水平显著降低(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P0.05),p-p65/p65比值显著升高(P0.05);与模型组比较,丙泊酚中、高剂量组小鼠体质量显著升高(P0.05),结肠长度显著增加(P0.05),病理学评分显著降低(P0.05),结肠细胞凋亡率显著降低(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平显著降低(P0.05),IL-10 mRNA水平显著升高(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(P0.05),IL-10水平显著升高(P0.05),p-p65/p65比值显著降低(P0.05)。该研究提示,丙泊酚通过抑制NF-κB p65的磷酸化缓解DSS诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应。     

富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及TLR4/Myd88/NF-κB信号分子的影响

目的探讨富氢液(HRS)对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及其对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路表达的影响。方法 SD大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒症组(SEP组)和富氢液处理组(C组),每组10只;Sham组仅开腹,暴露盲肠,C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢水和等量生理盐水;三组均于模型建立后4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;ELISA检测血浆中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸和炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10浓度;Western blot检测肠组织TLR4、Myd88和NF-κB表达。结果富氢液可以减轻脓毒血症大鼠肠黏膜损伤,降低血浆中I-FABP、D-乳酸含量,降低炎症因子TNF-α、IL-6表达,促进IL-10升高(P0.05),抑制肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达(P0.05)。结论富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,可能与TLR4/Myd88/NF-κB信号通路有关。     

蛇床子素对失血性休克所致肺损伤大鼠的保护作用及机制

目的探讨蛇床子素(Osthole)对失血性休克所导致的肺损伤大鼠的保护作用及其治疗机制。方法将SPF级SD大鼠50只,体重200-250g,随机分为假手术组(Sham组)、失血性休克组(HS组)、蛇床子素组(Ost组)、NF-κB抑制剂组(PDTC组)、蛇床子素联合NF-κB抑制剂组(Ost+PDTC组),每组10只。利用股动脉放血法制作大鼠失血性休克模型,自体血回输复苏;Sham组不放血,Ost组于建模后腹腔注射蛇床子素25mg/kg,于HS发生后4h处死大鼠。HE染色观察大鼠肺组织病理变化;检测大鼠各组肺湿/干重比;检测肺组织SOD和MDA水平;ELISA法检测大鼠血清中IL-1β, IL-6, TNF-α;Western Blot法检测各组大鼠肺组织中NF-κB p65, IκB-α, p-IκB-α蛋白表达水平。结果 HS组大鼠肺损伤严重,肺组织中SOD水平降低、MDA水平升高(P0.05),血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平升高(P0.05),蛇床子素可以抑制失血性休克引发的肺损伤;Ost组大鼠肺湿/干重比显著降低;肺组织SOD水平升高、MDA水平降低(P0.05);血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均降低(P0.05);同时, NF-κBp65、 p-IκB-α蛋白表达降低, IκB-α蛋白表达升高(P0.05),且加入NF-κB抑制剂后,蛇床子素对炎症因子的改善作用受到抑制,对NF-κB信号通路相关蛋白的调控也受到抑制。结论蛇床子素有效减轻失血性休克导致的急性肺损伤,与抑制NF-κB信号通路介导的炎症反应相关。     

金黄色葡萄球菌分泌蛋白LukG抑制巨噬细胞炎症反应

目的利用同源重组法构建金黄色葡萄球菌LukG(leukotoxin G)基因敲除株,探究LukG缺失对金黄色葡萄球菌刺激巨噬细胞炎症反应的影响。方法用双荧光素酶报告基因检测LukG蛋白对NF-κB通路的作用;利用USA300野生株和LukG敲除株(ΔLukG/USA300)感染小鼠原代腹腔巨噬细胞,实时荧光定量PCR法检测TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA转录水平,Western blot检测IκB-α及p-p65表达水平;利用USA300和ΔLukG/USA300气管插管感染小鼠肺部,观察生存率差异,稀释涂板法测定肺部荷菌量,HE染色法观察肺组织病理学变化,ELISA法检测肺组织匀浆炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达量。结果分泌蛋白LukG能够明显抑制NF-κB通路的激活;感染原代腹腔巨噬细胞后;相对于USA300感染组,ΔLukG/USA300感染组TNF-α、IL-6和IL-1β的转录水平升高(P0.05),IκB-α表达下调,p-p65表达上调;气管插管感染小鼠后,相对于USA300感染组,ΔLukG/USA300感染组生存率提高(P0.05),肺组织荷菌量降低(P0.05),病变程度减轻,炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达量升高(P0.05)。结论金黄色葡萄球菌可能通过分泌LukG蛋白抑制巨噬细胞NF-κB通路进而下调炎性细胞因子的表达,达成免疫逃逸进而成功感染宿主。     

姜黄素通过上调miR-124抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的:探究姜黄素(Cur)对牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)炎症反应及微小RNA-124(miR-124)的影响。方法:将HGFs分为对照(control)组、LPS组(10 mg/L LPS)及LPS+Cur(20、40和80μmol/L)组(10 mg/L LPS+对应剂量Cur)。各组处理24 h,CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测上清液中炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;RT-qPCR法检测细胞中miR-124的水平;Western blot检测胞浆和胞核中核因子κB(NF-κB)p-p65蛋白水平;激光共聚焦显微镜检测NF-κB p-p65蛋白的入核情况。转染mimic-NC和miR-124 mimic,检测细胞中miR-124及胞浆和胞核中NF-κB p-p65蛋白水平。结果:LPS组细胞活力、miR-124水平和胞浆NF-κB p-p65蛋白水平低于control组(P0.05),上清液IL-1β和TNF-α水平及胞核NF-κB p-p65蛋白水平高于control组(P0.05)。LPS+Cur(40和80μmol/L)组细胞活力、miR-124水平及胞浆NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组(P0.05),上清液TNF-α水平和胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组(P0.05)。LPS+80μmol/L Cur组细胞上清液IL-1β水平低于LPS组(P0.05)。miR-124 mimic组细胞miR-124和胞浆中NF-κB p-p65蛋白水平高于LPS组和mimic-NC组(P0.05),胞核NF-κB p-p65蛋白水平低于LPS组和mimic-NC组(P0.05)。结论:Cur可抑制Pg LPS诱导的HGFs炎症反应,可能是通过上调miR-124进而抑制NF-κB p-p65入核实现的。     

虎杖苷对严重烧伤小鼠早期肠损伤及SIRT1 / NF-κB 通路的影响

目的:研究虎杖苷(PD)对严重烧伤小鼠早期肠损伤及沉默信息调节因子1(SIRT1)/核转录因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:建立严重烧伤小鼠模型,实验分为假烧伤组、烧伤组、低、中、高剂量PD组、谷氨酰胺组。观察各组小鼠一般情况,测定各组小鼠回肠黏液含量,回肠组织病理学观察,蛋白印迹法(WB)测定各组小鼠回肠组织中SIRT1、NF-κB p65表达水平,酶联免疫法(ELISA)检测各组小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)表达水平。结果:造模后可见小鼠烧伤部位有渗血、感染、水肿发生。与假烧伤组相比,烧伤组回肠黏膜水肿、充血,大量杯状细胞分泌,淋巴细胞浸润,绒毛断裂坏死,回肠黏液含量、SIRT1、IL-10水平显著降低,NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、NO、iNOS、MDA水平显著升高(P0.05);与烧伤组相比,低、中、高剂量PD给药治疗后,小鼠烧伤创面有褐色痂壳形成,创面皱缩,随后出现创面上皮爬行、干燥,高剂量组治疗结束后痂壳脱离,创面平整、红润,基本愈合,回肠黏液含量、SIRT1、IL-10水平显著升高,NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、NO、iNOS、MDA水平显著降低(P0.05)。谷氨酰胺组症状缓解情况与高剂量组相当。结论:PD可能通过抑制炎症和氧化应激反应以缓解严重烧伤小鼠早期肠损伤症状,可能与SIRT1/NF-κB通路相关。     

钙卫蛋白在肾脏缺血再灌注损伤大鼠中的表达及其作用

目的:探讨钙卫蛋白(CALP)在肾脏缺血再灌注损伤(IRI)大鼠中的表达及其在炎症反应中的作用。方法:50只雄性SD大鼠随机分为IRI组和假手术组(sham组),每组25只。各组分别于缺血再灌注后6 h、12h、24 h、48 h和72 h观察肾脏病理改变,检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)水平,ELISA法检测大鼠血清CALP、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,免疫组织化学法和Western blot法分别检测大鼠肾脏CALP、Toll样受体4(TLR4)和NF-κB p65蛋白表达水平。结果:IRI组大鼠肾脏呈现不同程度的肾小管上皮细胞和间质损伤,伴炎细胞浸润。血清BUN、SCr、CALP及促炎细胞因子TNF-α、IL-6的含量在各时点均显著高于sham组(P0.05)。CALP、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在IRI组呈高表达,在各时点各因子的表达与sham组相比均显著增强(P0.05)。结论:肾脏IRI大鼠的血清CALP、TNF-α和IL-6水平升高,CALP、TLR4和NF-κB p65在肾组织中表达增强。CALP在大鼠肾脏IRI的炎症反应中可能起重要作用。     

一氧化碳释放分子2对心肺复苏大鼠复苏后肠屏障功能的影响

目的:探讨一氧化碳释放分子2(CORM-2)对心肺复苏(CPR)后大鼠肠黏膜上皮屏障功能的影响。方法:采用冰氯化钾停跳联合窒息4 min、人工胸外心脏按压3 min的方法建立大鼠心脏骤停(CA)-CPR后肠缺血再灌注损伤模型。32只健康雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组、CPR组、CORM-2组及灭活型CORM-2(i CORM-2)组,每组8只。假手术组仅置入相关导管,不行CPR术,其余各组均置入相关导管并经历CA-CPR。假手术组使用4 m L/kg生理盐水、CPR组使用4 m L/kg 2%二甲基亚砜、CORM-2组及i CORM-2组使用4 mg/kg相应干预药物,于术前12 h腹腔注射。各组复苏(或置管)后连续监测4 h血流动力学,并于复苏(或置管)后4 h留取回肠组织及血清。HE染色及透射电镜观察回肠组织病理形态及超微结构。ELISA法测定血清肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)含量。Western blot检测回肠组织紧密连接蛋白claudin-3、occludin和ZO-1及促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:假手术组和复苏各组之间置管后即刻平均动脉压(MAP)的变化差异均无统计学显著性;CPR组、CORM-2组和i CORM-2组复苏后各时点MAP均明显低于置管后即刻,并持续至复苏后4 h(P 0.05);复苏各组复苏后各时点MAP均显著低于假手术组置管术后同一时点MAP(P 0.05);CORM-2组复苏后各时点MAP均显著高于CPR组及i CORM-2组(P 0.05)。CPR组大鼠肠道组织病理形态和超微结构损伤严重;CORM-2组大鼠肠黏膜病理形态和超微结构完整性明显优于其它复苏各组。与假手术组比较,CPR组和i CORM-2组的I-FABP水平明显升高(P 0.05);CORM-2组的I-FABP水平与假手术组比较差异无统计学显著性,但显著低于CPR组及i CORM-2组(P 0.05)。与假手术组比较,CPR组和i CORM-2组的claudin-3、occludin和ZO-1蛋白表达均降低(P 0.05),CORM-2组仅claudin-3和ZO-1蛋白表达降低(P 0.05);CORM-2组上述蛋白表达均高于CPR组及i CORM-2组(P 0.05)。与假手术组比较,CPR组和i CORM-2组的促炎因子TNF-α蛋白表达均升高(P 0.05);CORM-2组TNF-α蛋白表达与假手术组比较差异无统计学显著性,但显著低于CPR组及i CORM-2组(P 0.05)。结论:心脏骤停-心肺复苏可造成大鼠肠机械屏障损伤。CORM-2可上调肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白表达,降低肠黏膜通透性,从而有效维持心肺复苏大鼠肠屏障完整性。     

姜黄素降低Ⅲ型CP/CPPS模型鼠炎性反应因子的表达

目的研究姜黄素对Ⅲ型慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)模型鼠炎性反应因子表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、CP/CPPS模型组(model)、姜黄素50及100 mg治疗组(cur-50 mg,cur-100 mg)和p38抑制剂组(SB203580),连续腹腔给药12 d后,real-time PCR检测前列腺组织中TNF-α、p38、COX-2的mRNA表达;免疫组化检测TNF-α,COX-2的蛋白表达;Western blot检测p38、p-p38和NF-κB蛋白的表达。结果 CP/CPPS模型组的NF-κB、p-p38、TNF-α和COX-2蛋白,TNF-α、COX-2和p38的mRNA表达较假手术组升高(P0.01);cur-100 mg组和SB203580组可显著缓解模型组的变化(P0.01);cur-100 mg组中的COX-2蛋白和mRNA均比SB203580组明显下降(P0.05);相较模型组,姜黄素2个组、SB203580组p-p38与NF-κB的表达呈正相关(P0.01)。结论姜黄素能够降低CP/CPPS模型鼠NF-κB、TNF-α和COX-2及p-p38等炎性反应因子的表达。     

硫化氢对烧伤大鼠肠道组织干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α含量的影响

目的实验研究硫化氢(H2S)对烧伤大鼠肠道组织干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,探讨H2S在烧伤大鼠肠道黏膜屏障功能中发挥的作用。方法将104只健康雄性SD大鼠随机分为烧伤组(96只)和正常对照组(8只),其中烧伤组又分为单纯烧伤组(n=32)、炔丙基甘氨酸(PPG)干预组(n=32)、硫氢化钠(NaHS)干预组(n=32)。各烧伤组分别于伤后2d、7d、14d、21d四个时相点取8只SD大鼠回肠组织,匀浆后取上清液用ELISA方法检测各组大鼠肠道组织中IFN-γ、TNF-α的含量变化情况。正常对照组适应性饲养1周后取回肠组织,检测IFN-γ、TNF-α的含量。结果与正常对照组相比,单纯烧伤组、NaHS干预组、PPG干预组各时相点TNF-α和IFN-γ水平均明显升高(P<0.05),在烧伤后2d TNF-α水平最高,烧伤后14d IFN-γ水平达到最高值,之后呈逐渐下降趋势。NaHS干预组各时相点TNF-α水平较单纯烧伤组均明显降低(P<0.05),而IFN-γ水平明显升高;PPG干预组各时相点TNF-α水平较单纯烧伤组均升高,差异有统计学意义(P<0.05),而IFN-γ均降低。结论 H2S可以显著降低烧伤大鼠肠道组织TNF-α水平,升高IFN-γ的水平,表明H2S可减轻肠道炎性反应,保护肠道黏膜屏障作用,为烧伤后应用外源性H2S加强肠道黏膜屏障功能提供了新思路。     

积雪草苷通过抑制NF-κB/p38通路减轻小鼠低氧性肺动脉高压

目的:观察积雪草苷对小鼠低氧性肺动脉高压的影响,并测定小鼠肺组织p38和NF-κB的变化,研究积雪草苷是否通过抑制NF-κB/p38信号通路防治低氧性肺动脉高压。方法:将30只BALB/c小鼠随机分为常氧(normoxia,N)组、低氧(hypoxia,H)组和低氧+积雪草苷组。低氧造模结束后检测右心室收缩压(RVSP)、平均颈动脉压(mCAP)、右心室/(左心室+室间隔)[RV/(LV+S)]、右心室/体重(RV/BW)、血管壁面积/血管总面积(WA/TA)和血管壁直径/血管壁总直径(WT/TT);测量肺组织中p38、p-p38、NF-κB和p-NF-κB的相对表达量以及p-p38和p-NF-κB的荧光强度,同时检测血清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。结果:与N组相比,H组的RVSP、RV/(LV+S)、RV/BW、WA/TA和WT/TT显著升高(P0.05),而低氧+积雪草苷组的RVSP、RV/(LV+S)、RV/BW、WA/TA和WT/TT显著降低(P0.05)。同时H组的p-p38和p-NF-κB蛋白水平较N组显著升高,IL-6和TNF-α浓度亦较N组显著升高(P0.05),而低氧+积雪草苷组的p-p38和p-NF-κB蛋白水平及IL-6和TNF-α浓度均较H组显著降低(P0.05)。结论:抑制p38/NF-κB信号通路和减轻炎症反应可能是积雪草苷减轻低氧性肺动脉高压的重要机制之一。     

PPARγ激动剂罗格列酮通过抑制炎症反应减轻肝移植大鼠围术期肠损伤

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对自体原位肝移植大鼠围术期肠组织中PPARγ表达、NF-κB激活及肠损伤的影响。方法:SD大鼠40只,随机分为对照(control)组、假手术(sham)组、原位自体肝移植(OALT)组、罗格列酮(0.3 mg/kg,iv)预处理(ROS+OALT)组。建立自体原位肝移植模型,在肝脏再灌注后8 h时取肠组织,观察肠组织病理学变化,检测肠组织PPARγ蛋白表达、NF-κB核转运激活情况、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)浓度以及血清二胺氧化酶(DAO)和脂肪酸结合蛋白2(FABP2)水平。结果:与sham组相比,OALT组大鼠肠黏膜存在明显的病理学损伤,肠黏膜病理Chiu’s评分明显增高,血清DAO和FABP2升高(P0.05)。罗格列酮预处理后,大鼠肠黏膜损伤减轻,肠黏膜病理Chiu’s评分降低,血清DAO和FABP2降低,肠组织PPARγ表达明显上调,NF-κB p65亚基核转位减少,肠组织IL-6和TNF-α浓度降低。结论:自体原位肝移植大鼠围术期炎症反应明显,存在明显的肠道损伤;PPARγ激动剂罗格列酮明显上调PPARγ表达,抑制肠道的炎症反应,减轻自体原位肝移植大鼠围术期的肠损伤。     

淫羊藿苷改善重症急性胰腺炎模型大鼠肺损伤

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)通过抑制炎性反应减轻重症急性胰腺炎(SAP)模型大鼠肺损伤及机制。方法 将大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(SAP组,将5%牛黄胆酸钠按0.1 mL/kg通过微泵逆行泵入胆管)和实验组(ICA组,造模前2 h给予淫羊藿苷80 mg/kg干预)。每组6只大鼠,造模24 h后收集下腔静脉血、胰腺组织和肺组织。HE染色观察胰腺和肺脏病理损伤;ELISA测定血清淀粉酶活性、IL-6、IL-1β和TNF-α含量;免疫组织化学染色测定肺组织中炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α含量;Western blot测定肺组织中磷酸化JNK/JNK和磷酸化NF-κB/NF-κB比值。结果 SAP组胰腺和肺脏的病理评分显著高于sham组(P<0.01),ICA组胰腺和肺脏的病理评分较SAP组明显降低(P<0.01);SAP组血清淀粉酶活性、血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量以及肺组织中IL-6、IL-1β和TNF-α表达量较sham组明显升高(P<0.01),而ICA组血清淀粉酶活性、血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量以及肺组织中IL-6...     

壮药五叶泡醇提物抗大鼠急性痛风性关节炎的作用机制

目的 探讨五叶泡醇提物抗大鼠急性痛风性关节炎的作用机制。方法 采用注射尿酸钠的方法建立大鼠急性痛风性关节炎模型,测定踝关节肿胀度,进行步态观察及评分,检测各组大鼠踝关节滑膜组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-6含量;qRT-PCR法检测大鼠踝关节滑膜组织核因子κB(NF-κB)P65、NF-κB抑制因子α(IκBα)mRNA的表达;观察大鼠踝关节滑膜组织病理学,运用免疫组化法检测大鼠滑膜NF-κB p65的表达。结果 与模型组比较,五叶泡醇提物中、高剂量组踝关节肿胀度、步态评分较模型组有显著降低（P<0.05或P<0.01）,滑膜组织TNF-α含量显著降低（P<0.05或P<0.01）;五叶泡醇提物高剂量组滑膜组织IL-1β、IL-6含量显著降低（P<0.05）,NF-κB P65 mRNA表达明显降低（P<0.05）;五叶泡醇提物中、高剂量组大鼠滑膜组织IκBα mRNA表达明显升高（P<0.05）。病理结果显示五叶泡醇提物能改善滑膜组织病理损伤;免疫组化结果显示五叶泡醇提物高剂量组比模型组阳性着色细胞减少,染色...     

红景天苷对重症肺炎大鼠肺组织炎症和NF-κB、p38信号影响

目的:研究红景天苷对重症肺炎大鼠肺组织炎症和活化B细胞κ轻链增强子的核因子(NF-κB)、p38信号的影响。方法:以肺炎克雷伯菌诱导构建重症肺炎大鼠模型。实验分成对照组(只用生理盐水)、模型组(重症肺炎大鼠模型)、红景天苷小剂量组(重症肺炎大鼠模型,给予20mg/kg红景天苷治疗)、红景天苷大剂量组(重症肺炎大鼠模型,给予40mg/kg红景天苷治疗)、地塞米松组(重症肺炎大鼠模型,给予0.8mg/kg地塞米松治疗),每组大鼠各9只。治疗6天后,血气分析仪分析大鼠血气指标动脉血氧分压(PaO_2)、血氧饱和度(SaO_2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO_2)。取大鼠肺组织,检测肺组织干/湿比重。收集肺泡灌洗液,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)含量,Griess法检测一氧化氮(NO)含量,计数炎性细胞数目。Western blot方法检测肺组织中p38、磷酸化p38(p-p38)、p65、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠PaO_2、SaO_2降低,PaCO_2升高,肺组织干/湿比重升高,肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-10、NO含量和炎性细胞数量均增加,肺组织中iNOS、p-p38/p38、p65蛋白表达水平均增加(P0.05)。与模型组比较,红景天苷小剂量组、红景天苷大剂量组、地塞米松组大鼠PaO_2、SaO_2升高,PaCO_2降低,肺组织干/湿比重降低,肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-10、NO含量和炎性细胞数量均减少,肺组织中iNOS、p-p38/p38、p65蛋白表达水平均降低(P0.05)。红景天苷大剂量组对大鼠血气指标PaO_2、SaO_2、PaCO_2和肺组织干/湿比重以及iNOS、p-p38/p38、p65蛋白表达和肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-10、NO含量的改善优于红景天苷小剂量组。结论:红景天苷改善重症肺炎大鼠肺组织炎症反应,减少炎性介质释放和炎性细胞浸润,且呈剂量依耐性,其作用与降低NF-κB和p38信号通路激活水平有关。     

匹诺塞林缓解大鼠肝细胞系BRL-3A低氧/复氧损伤

目的探讨匹诺塞林(PIN)对低氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法将大鼠肝细胞(BRL-3A细胞系)分为正常对照组、PIN实验组、低氧复氧损伤模型组和PIN预处理组。CCK-8检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞计量术检测细胞凋亡;检测细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)活性;ELISA检测TNF-α和IL-1β含量;Western blot检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65蛋白水平;RT-q PCR检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65mRNA表达。结果在H/R条件下细胞存活率明显降低(P0.01),细胞凋亡率增高(P0.001),ALT活性升高(P0.01),IL-1β和TNF-α含量增多(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平显著提高(P0.01)而IκB-α降低(P0.05);经PIN预处理后,细胞存活率显著提高(P0.01),细胞凋亡率显著减小(P0.001),ALT活性降低(P0.01),IL-1β和TNF-α含量降低(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平明显降低(P0.01)而IκB-α升高(P0.05)。结论 PIN对H/R诱导的BRL-3A肝细胞的损伤具有保护作用,且该作用可能是通过TLR4/NF-κB信号通路实现的。     

柚皮素通过miR-22抑制NLRP3炎症小体并减轻溃疡性结肠炎大鼠模型肠屏障损伤

目的:探究柚皮素通过调控微小RNA-22(miR-22)的表达,对溃疡性结肠炎(UC)大鼠NLRP3炎症小体的影响以及对肠屏障的保护作用。方法:将SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组、低剂量柚皮素组、高剂量柚皮素组和柚皮素+miR-22 antagomiR组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠使用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC大鼠模型,并给予药物处理。观察大鼠体重变化和粪便稠度等情况,评估疾病活动性指数(DAI);检测血清中促炎因子白细胞介素1β(IL-1β)水平;HE染色观察肠组织病理学变化;透射电子显微镜观察肠上皮细胞;RT-qPCR技术检测肠组织中miR-22水平;Western blot法检测肠组织中紧密连接相关蛋白ZO-1、occludin和claudin-1表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-22与NLRP3靶向关系。结果:对照组大鼠肠组织结构正常;模型组大鼠肠组织黏膜结构破坏严重,有大量炎症细胞浸润,屏障受损,细胞间隙增宽;低、高剂量柚皮素组大鼠肠组织损伤减轻;柚皮素+miR-22 antagomiR组大鼠肠组织损伤较高剂量柚皮素组明显加重,炎症细胞浸润增加。与对照组相比,模型组大鼠DAI、肠黏膜损伤肉眼评分、IL-1β水平及NLRP3蛋白表达水平显著升高(P0.05),miR-22水平及ZO-1、occludin和claudin-1蛋白表达水平显著降低(P0.05);与模型组相比,低、高剂量柚皮素组大鼠DAI、肠黏膜损伤肉眼评分、IL-1β水平及NLRP3蛋白表达水平显著降低(P0.05),miR-22水平及ZO-1、occludin和claudin-1蛋白表达水平显著升高(P0.05);与高剂量柚皮素组相比,柚皮素+miR-22 antagomiR组大鼠DAI、肠黏膜损伤肉眼评分、IL-1β水平及NLRP3蛋白表达水平显著升高(P0.05),miR-22水平及ZO-1、occludin和claudin-1蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:柚皮素通过上调miR-22水平,抑制NLRP3炎症小体活化,发挥对UC大鼠肠屏障的保护作用。     

Herkinorin预处理减轻缺血性卒中模型大鼠脑损伤

目的 探讨Herkinorin预处理对短暂性大脑中动脉阻塞(tMCAO)大鼠脑组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)的调节及作用机制。方法 将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(tMCAO)、Herkinorin组(Herkinorin),Herkinorin组大鼠造模前腹腔给予Herkinorin(10 mg/kg)1周,每天1次。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能评分、TTC染色、TUNEL染色;Western blot检测IκBα、p65、p-p65、pro-IL-1β、IL-1β、pro-caspase1、caspase1 p20、NLRP3表达;免疫共沉淀(Co-IP)检测IκBα与β-抑制蛋白2(β-arrestin2)结合。结果 与sham组相比,tMCAO组大鼠神经功能评分增加(P<0.01),脑梗死百分比与脑水肿率增加(P<0.01),脑组织缺血半影区中细胞凋亡水平增加(P<0.01),IκBα、p65表达水平下降(P<0.01),p-p65、IL-1β、caspase1 p20、NLRP3表达水平增加(P<0.01),IκBα与β-...     

基于NF-κB/NLRP3/caspase-1通路研究白及多糖对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜炎症损伤的保护作用北大核心CSCD

目的:探究白及多糖对溃疡性结肠炎(UC)大鼠核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)通路蛋白表达及对肠道屏障损伤的影响。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)+乙醇法建立UC模型,并将SD大鼠随机分为空白组、模型组、白及多糖低(100 mg/kg)、中(200 mg/kg)、高(400 mg/kg)剂量组、柳氮磺胺吡啶阳性组(0.67 g/kg),除空白组外,其余各组均建立UC模型。白及多糖低、中、高剂量组和阳性组分别灌胃给予相应剂量白及多糖和柳氮磺胺吡啶,空白组和模型组灌胃给予10 ml/kg生理盐水,各组大鼠连续给药2周,1次/d。末次给药12 h后,观察大鼠一般行为并对大鼠进行疾病活动指数(DAI)评分;取大鼠结肠组织,苏木精-伊红染色观察组织病理形态;ELISA检测结肠组织髓过氧化物酶(MPO)、炎症因子IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及肠道屏障功能受损指标二胺氧化酶(DAO)和肠型脂肪酸结合蛋白(i-FABP)水平;Western blot检测结肠组织通路蛋白NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠形体消瘦、大便稀溏、结肠组织可见黏膜溃疡、充血、扩张及炎症细胞浸润等病理损伤,DAI评分、结肠组织MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均升高(P<0.05),DAO和i-FABP含量均降低(P<0.05)。与模型组比较,白及多糖各剂量组及柳氮磺胺吡啶组大鼠DAI评分、结肠组织病理损伤程度、MPO、IL-1β及TNF-α含量、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、caspase-1、cleaved caspase-1蛋白表达均降低(P<0.05),DAO和i-FABP含量均升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,高剂量白及多糖改善效果与柳氮磺胺吡啶相近(P>0.05)。结论:白及多糖可抑制NF-κB/NLRP3/caspase-1通路激活,降低炎症反应和肠屏障损伤,改善UC症状和肠黏膜损伤。     

解毒清肺合剂对肺炎支原体感染大鼠肺组织NF-κB和p38 MAPK通路的影响

目的:观察解毒清肺合剂对肺炎支原体(MP)感染大鼠肺组织的治疗作用并探讨其作用机制。方法:SD大鼠40只,随机分为对照组、模型组、解毒清肺组和阳性对照组4组,每组10只。实验组大鼠鼻孔内缓慢滴入1×10~9CFU/L MP菌液连续4 d,各组在接种完成后第2天处死1只大鼠进行MP核酸检测,同时其余大鼠开始灌胃治疗,空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,解毒清肺组每天给予8 mL/kg的解毒清肺合剂,阳性对照组给予地塞米松磷酸钠(0.5 mg·kg·d~(-1)),连续治疗4周。实验结束后处死大鼠,收集血清和支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA法检测血清和BALF中白细胞介素12(IL-12)、IL-13和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;取右肺组织用于观察病理形态和HE染色,左肺组织用于NF-κB p50、I-κBα和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的mRNA及蛋白水平的检测。结果:MP核酸检测结果显示,除空白对照组外其余大鼠均感染了MP,表明MP感染大鼠造模成功。治疗第1天模型组和解毒清肺组肺组织病理评分显著高于空白对照组(P0.05),治疗结束后模型组的肺组织病理评分显著高于空白对照组、解毒清肺组和阳性对照组(P0.01)。MP感染后模型组血清和BALF中IL-12水平显著低于空白对照组(P0.05),解毒清肺组和阳性对照组血清和BALF中IL-12水平显著高于模型组(P0.05);模型组大鼠血清和BALF中IL-13和TNF-α水平显著升高,解毒清肺组和阳性对照组IL-13和TNF-α水平显著低于模型组(P0.05),解毒清肺组与阳性对照组无显著差异。RT-qPCR检测结果显示,模型组NF-κB p50和p38 MAPK的mRNA表达水平显著升高(P0.01),解毒清肺组和阳性对照组NF-κB p50和p38 MAPK的mRNA表达水平与模型组比较显著降低(P0.01);模型组I-κBα的mRNA表达水平较对照组显著降低,解毒清肺组和阳性对照组I-κBα的mRNA表达水平较模型组显著升高(P0.05),解毒清肺组NF-κB p50、p38、MAPK和I-κBα与阳性对照组比较差异无统计学显著性。Western blot检测结果显示肺组织中模型组的NF-κB p50和p38 MAPK蛋白表达水平显著高于空白对照组,治疗后表达水平显著降低;模型组I-κBα蛋白表达水平显著低于空白对照组,解毒清肺组其蛋白表达水平显著升高,解毒清肺组与阳性对照组无显著差异。结论:解毒清肺合剂可能通过NF-κB和p38 MAPK通路减轻肺炎支原体引起的肺组织炎症。