内皮祖细胞移植对肺动脉高压大鼠一氧化氮、内皮素的影响

目的研究同种异体内皮祖细胞（EPCs）移植对野百合碱（monocrotaline,MCT）所致肺动脉高压（Pulmonary Artery Hypertensinn,PAH）大鼠的影响,并观察肺动脉血一氧化氮（NO）、内皮素（ET）的变化,探讨其治疗PAH的机制。方法体外培养并鉴定大鼠EPCs,MCT诱发肺动脉高压模型组由尾静脉注入标记的EPCs。在移植EPCs后第21天,测定肺血流动力学参数,计算平均肺动脉压（mPAP）,分别用硝酸还原酶法,放射免疫法测定NO及ET-1值。结果与模型组（29．33±3．01）mm—Hg相比,EPCs治疗组（21．89±2．69）mmHg平均肺动脉压明显下降,肺动脉血的NO值明显增加,（49．28±5．31 vs 21．64±3．06）μmol／L（P〈0．05）,ET-1值由（354．40±36．35）pg／ml降至（259．20±29．08）pg／ml（P〈0．05）。结论同种异体EPCs移植可有效降低肺动脉压力,作用机制可能与其分化为血管内皮细胞,修复损伤的肺血管内皮,调节NO与ET-1的含量有关。     

过表达c-Met蛋白诱导内皮祖细胞分布于肺动脉高压大鼠肺组织

目的探讨过表达c-Met蛋白对内皮祖细胞(EPCs)在低氧性肺动脉高压(HPAH)大鼠中的分布情况。方法复制HPAH模型,原代培养大鼠骨髓源性EPCs并鉴定,构建带有c-Met基因的腺病毒并转染EPCs,细胞分为对照组、空载病毒组和c-Met过表达组,用real time PCR和Western blot检测c-Met mRNA和蛋白表达,用CM-Dil活细胞染色剂标记EPCs,通过尾静脉将各处理组EPCs输注到HPAH大鼠模型体内,1周后观察EPCs在主要脏器中的分布。结果对照组、空载病毒组和c-Met过表达组c-Met mRNA表达量分别为:0.19、0.17和1.85;c-Met蛋白的表达量分别为:0.24、0.17和0.82。正常EPCs组中细胞在肺脏、肝脏、脾脏和肾脏的阳性率分别是:1.7%、0.5%、7.9%和9.4%,空载病毒组细胞阳性率分别是:1.5%、0.4%、8.3%和8.5%,c-Met EPCs组细胞阳性率分别为9.3%、0.2%、1.3%和0.3%。c-Met EPCs组中肺脏的细胞阳性率明显升高,在肾脏和脾脏的分布明显下降(P0.001)。结论过表达c-Met蛋白促进EPCs优势分布于HPAH模型的肺组织。     

人血中内皮祖细胞研究现状

人循环血液中存在内皮祖细胞，可以分化成内皮细胞和／或平滑肌细胞并促进血管新生。目前，确定内皮祖细胞还没有一个统一的标准，相对认可为内皮祖细胞的是CD34、AC133和FLK-1等标志阳性细胞。其来源于骨髓，可通过内皮特异性标志VEGFR-2、Ⅷ因子来鉴定，可用密度梯度离心法分离单核细胞，或用免疫磁珠吸附分离法或两种方法结合应用分离出目标细胞，可分化为内皮细胞、平滑肌细胞，用于治疗心肌梗死、肢体缺血、基因载体和组织工程血管重建，本文对此进行了综述。     

内皮祖细胞的研究进展

骨髓含有内皮祖细胞, 能够迁移至外周血并分化为成熟内皮细胞,参与胚胎时期的血管生成、出生后的微血管新生以及肿瘤组织的发生。体内内皮祖细胞数量和活性受多种生理性及病理性因素的的影响。体外扩增后回输体内可以修复受损组织、器官的血管,促进器官功能恢复;抑制其活性,在一定程度上可以抑制肿瘤组织的生长。内皮祖细胞为缺血性疾病以及肿瘤的治疗提供了另一新的靶点。     

内皮祖细胞在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmo?nary disease,COPD)以不完全可逆的气流受限为特征,通常与显著暴露于有害颗粒或气体而发生的异常炎症反应有关[1],其发病率及死亡率均很高,是重要的全球性公共卫生问题之一[2-3].在COPD发病过程中,由香烟烟雾或炎症介质引起的血管内皮...     

新的组织工程种子细胞——内皮祖细胞

内皮祖细胞作为一种在血管领域的干细胞在组织工程中有着广阔的应用前景。内皮祖细胞取材方便，参与新生血管的形成，具有成熟内皮细胞相似的特性。因此，内皮祖细胞可能是组织工程血管、血管植入物再内皮化以及构建组织工程器官血管网络的种子细胞的理想来源。简单介绍了内皮祖细胞的来源、特性以及体外扩增技术，并对其在组织工程中应用的研究进展做一回顾。     

血管内皮祖细胞研究进展

血管内皮祖细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ，ＥＰＣ）是血管内皮的前体细胞 ,亦称为血管母细胞(ａｎｇｉｏｂｌａｓｔｓ)。新近研究表明 ,血管内皮祖细胞不仅参与胚胎期的血管发育 ,也存在于成年机体的骨髓及外周血 ,在成体血管新生中起重要作用。这一目前血管发育生物学的重大发现 ,不仅为揭开血管新生机制之谜提供了重要线索 ,也为缺血性疾病及恶性肿瘤的治疗提供了新的靶点。本文报告其有关进展。１血管内皮祖细胞的来源在胚胎期 ,随着卵黄囊所提供养分的耗尽 ,胚胎须从母体获得营养。因此在人胚胎的第１３…     

内皮祖细胞研究进展

自从1997年Asahara等首次从外周血液中分离出内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs）以来，EPC的分离、纯化、扩增、功能和应用已成为近来研究的热点，动物试验和早期临床试验都表明EPC具有改善缺血肢体血供、促进心梗后侧枝循环的形成及加快血管损伤后的内皮修复、抑制内膜增生等作用，并且发现有多种细胞因子和药物调节其从骨髓至外周循环的动员、迁移、分化、增殖和归巢等步骤，本文对此作一综述。     

内皮祖细胞的研究进展

出生后骨髓中存在着一群祖细胞能够迁移到外周循环中,并且可以分化为成熟的内皮细胞,这一群细胞被定义为内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）.在胚胎发育的过程中,EPCs参与了最初的血管形成（vasculogenesis）.     

内皮衍生因子（ET／NO）与低氧性肺动脉高压

内皮衍生因子（ＥＴ／ＮＯ）与低氧性肺动脉高压冯晓东，蔡英年（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＨｙｐｏｘｉｃＰｕｌｍｏｎａｒｙｖａｓｏｃｏｎｓｔｒｉｃｔｉｏｎａｎｄｐｕｌｍｏｎａｒｙｖａｓｃｕｌａｒｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ...     

同型半胱氨酸影响内皮祖细胞机制的探讨

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）影响内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的可能机制。 方法：采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养4 d后,收集贴壁细胞,加入不同浓度Hcy（10 μmol/L、30 μmol/L、100 μmol/L和200 μmol/L）干预,或先予以1 μmol/L 阿托伐他汀预处理1 h,然后再用200 μmol/L Hcy干预。采用SA-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老细胞,细胞增殖ELISA试剂盒和集落生成能力测定实验检测EPCs的增殖能力和集落形成能力,端粒重复序列扩增法(TRAP)-ELISA定量检测端粒酶活性,Western blotting检测EPCs Akt Ser473磷酸化水平。结果：Hcy呈浓度依赖性增加SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞数量,200 μmol/L最为显著,较对照增加了2倍（15.2±9.8 vs 51.9±13.5,P<0.01）,而阿托伐他汀能显著减少Hcy诱导的衰老细胞的数量。此外,Hcy干预后伴随EPCs增殖和集落形成能力的显著损害。Hcy随着浓度的增加而显著降低EPCs端粒酶活性。进一步研究发现Hcy显著减少Akt磷酸化。结论：Hcy加速EPCs衰老,伴随EPCs增殖和集落形成能力的损害,提示细胞衰老也许是Hcy损害EPCs的机制之一。Hcy加速EPCs衰老可能跟EPCs端粒酶活性下降以及Akt磷酸化水平的下降有关。阿托伐他汀可以预防Hcy对EPCs的损害效应。     

血管内皮生长因子对外周血内皮祖细胞功能的影响

目的: 观察不同浓度血管内皮生长因子(VEGF）对体外培养人外周血内皮祖细胞（EPCs）生物学功能的影响，探讨VEGF促进EPCs分裂生长的合适浓度。方法: 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞（MNCs），接种至人纤维连接蛋白（HFN）包被的培养板上，培养4 d后收集贴壁细胞，换用配有不同浓度（对照组、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L）VEGF的培养基继续培养3 d后进行细胞免疫组化鉴定EPCs，采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验，观察EPCs的增殖、迁移和黏附能力。结果: 从人外周血能成功分离EPCs细胞，并能分化为血管内皮细胞；从冠心病患者分离的EPCs增殖能力较非冠心病患者弱；VEGF在较低浓度（10 μg/L和20 μg/L）时即能显著促进EPCs生长的各项生物学指标，但高浓度（50 μg/L）时并不能进一步增强这一效应；低浓度（10 μg/L）下VEGF对冠心病患者作用较非冠心病患者弱，高浓度时对两者促进作用相近。结论: 冠心病患者EPCs功能显著减弱，较低浓度的VEGF即可显著增强EPCs的各项生物学功能，可能对损伤血管的再内皮化有益。     

Paracrine mechanisms of endothelial progenitor cells in vascular repair

Endothelial progenitor cells (EPCs) play an important role in repairing damaged blood vessels and promoting neovascularization. However, the specific mechanism of EPCs promoting vascular repair is still unclear. Currently, there are two different views on the repair of damaged vessels by EPCs, one is that EPCs can directly differentiate into endothelial cells (ECs) and integrate into injured vessels, the other is that EPCs act on cells and blood vessels by releasing paracrine substances. But more evidence now supports the latter. Therefore, the paracrine mechanisms of EPCs are worth further study. This review describes the substances secreted by EPCs, some applications based on paracrine effects of EPCs, and the studies of paracrine mechanisms in cardiovascular diseases--all of these are to support the view that EPCs repair blood vessels through paracrine effects rather than integrating directly into damaged vessels.     

红景天苷对内皮祖细胞的辐射防护作用

 目的: 探讨红景天苷对内皮祖细胞(EPCs)的辐射防护作用,并分析其机制。方法: 体外培养正常人外周血EPCs,观察红景天苷对辐射后EPCs活性、黏附、迁移及凋亡的影响。应用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blotting法检测细胞内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路中Akt蛋白表达水平。结果: 4 Gy [⁶⁰Co]γ射线辐射可导致EPCs损伤,不仅细胞活性、黏附和迁移能力下降,而且细胞凋亡增加;与辐射对照组比较, 红景天苷则能部分逆转辐射对EPCs的损伤,提高EPCs的活性、黏附和迁移能力,减少辐射导致的细胞凋亡,增加细胞内磷酸化Akt蛋白的水平。但这些作用可被PI3K特异性抑制剂LY294002削弱。结论: 红景天苷对内皮祖细胞辐射损伤具有一定的防护作用,其机制可能与增强PI3K/Akt通路的作用有关。     

内皮祖细胞与高血压病的应用研究进展

BACKGROUND: Structural and functional changes of endothelial cells are the common pathological basis of cardiovascular disease. Severe structural and functional damage of endothelial cells are found in patients with hypertension or coronary heart diseases.     

人外周血内皮祖细胞的分离、培养和扩增

目的:改进从人外周血中分离、培养和体外扩增血管内皮祖细胞(EPC)的方法。方法:采用不同淋巴细胞分离液,用密度梯度离心法从外周血分离EPC;用CD34免疫磁性活化细胞分选系统(MACS)分离CD34 细胞;分别培养在包被和不包被有人纤维连接蛋白(HFN)的培养板内;采用细胞免疫化学法检测内皮细胞表面标志CD31、CD34和vWF的表达。结果:从成人外周血可分离获得EPC;不同的分离条件可影响获得EPC的数量和质量,HFN对EPC的生长有促进作用。结论:进一步改进从人外周血分离获取EPC并行体外扩增的方法,为EPC的研究奠定了基础。     

内皮祖细胞移植对血管内膜修复的影响

目的： 从脾源性单个核细胞中分离并扩增血管内皮祖细胞（EPCs）,研究EPCs移植对血管损伤后内膜修复的影响。 方法: 大鼠脾源性单个核细胞贴壁培养法定向扩增EPCs，检测其内皮细胞特性。荧光标记EPCs从尾静脉移植到颈动脉内皮损伤的大鼠体内。 结果: 脾源性单个核细胞体外可诱导出内皮祖细胞，表现为表达内皮细胞特异性标志。移植后，EPCs可归巢至血管损伤部位。EPCs移植组在球囊损伤2周后血管新生内膜明显减少，血管腔狭窄程度显著减轻。EPCs移植组新生内膜/中膜比值显著低于单纯球囊损伤组及M199组(0.82±0.09 vs 1.52±0.21, 1.48±0.19,P＜0.01)。EPCs移植组PCNA 阳性表达细胞明显少于单纯球囊损伤组及M199组（19.25±3.96 vs 31.42±5.23, 29.37±3.16, P＜0.05）。 结论: EPCs能有效移植到内皮损伤血管段，参与损伤血管的内膜修复过程。     

雷公藤内酯醇对外周血内皮祖细胞的影响

目的： 观察雷公藤内酯醇对人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）的影响。方法: 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞，接种至人纤维连接蛋白包被的培养板，培养7 d后收集贴壁细胞进行细胞免疫化学鉴定。实验加入不同浓度雷公藤内酯醇（2.5 μg/L，5.0 μg/L，10.0 μg/L，20.0 μg/L）干预24 h,采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验，分别观察EPCs 的增殖、迁移和黏附能力。 结果: 雷公藤内酯醇显著影响EPCs的各项生物学功能，使EPCs的黏附能力显著减弱，迁移功能显著下降,增殖能力显著被抑制，这些改变均存在明显的浓度依赖性，20 μg/L浓度组达最大抑制；在雷公藤内酯醇低浓度组，冠心病患者EPCs细胞的各项功能明显低于非冠心病患者组，高浓度组两组相近。结论: 雷公藤内酯醇可能通过抑制EPCs增殖、迁移和黏附功能，抑制血管再内皮化和血管新生。     

从PBMCs及CD133免疫磁珠分选获得内皮祖细胞的体外研究

目的：比较从外周血单个核细胞(PBMCs)和CD133免疫磁珠分选体外培养人外周血内皮祖细胞(EPCs)的表型、分化、扩增、功能特点,为EPCs细胞治疗提供临床参考。方法： 健康成年人外周血,经Ficoll密度梯度离心法得PBMCs,经直接接种法或免疫磁珠分选CD133阳性细胞后置于M199培养基中培养,于第7、14 d比较2组细胞表型变化及细胞因子分泌、扩增、体外血管形成及趋化能力。结果：相同血量标本PBMCs组早期集落数高于CD133+组(P<0.01),随着培养时间的推移,流式细胞检测2组细胞均显示造血干细胞标志的表达下调和内皮细胞标志表达上升,但CD133+组内皮标志CD144表达率低于PBMCs组(P<0.01),ELISA法检测到在PBMCs组早期EPCs分泌VEGF的水平高于CD133+组(P<0.01),MTT法显示PBMCs组有较强的增殖能力,基质胶及Transwell实验表明PBMCs组细胞参与血管形成的能力较强。结论： CD133+来源的EPCs分化、分泌、增殖及血管形成能力相对较低,推断PBMCs中CD133-细胞可能在形成功能性的EPCs中发挥更重要的作用。     

促红细胞生成素促进内皮祖细胞增殖的体外研究及机制探讨

目的：研究人重组促红细胞生成素（rhEPO）对人内皮祖细胞（EPCs）数量和功能的影响并探讨其作用机制。方法: 以不同浓度rhEPO分别作用于15例处于肾衰竭期的患者以及15例健康志愿者EPCs，MTT法检测其增殖，Annexin-V法检测其凋亡，Western blotting法检测Akt蛋白激酶。结果: 100 U/L、600 U/L及1 200 U/L rhEPO均能提高实验组和对照组EPCs的数量及增殖能力，呈剂量依赖性，实验组EPCs数量及功能均显著低于对照组。1 200 U/L rhEPO能显著降低EPCs的凋亡率，提高 Akt蛋白激酶的表达。加入Wortmannin后能阻断这一效应。结论: rhEPO可以显著提高健康人群和肾衰竭患者EPCs的数量与功能，且这一效应与PI3K/Akt信号通路有关。