慢性不可预知性应激对大鼠海马CA1区星形胶质细胞的影响

目的:研究慢性不可预知性应激(CUS)模型大鼠海马CA1区内星形胶质细胞的改变,探讨星形胶质细胞在抑郁症中的作用.方法:选用雄性SD大鼠,随机分为空白对照组和抑郁模型组,利用CUS刺激制备大鼠抑郁模型,利用糖水偏好实验(SPT)筛选出成模大鼠.随后每组随机抽取5只大鼠,利用免疫组织化学方法结合现代体视学对大鼠海马CA1...     

高脂饮食诱导胰岛素抵抗小鼠血浆microRNA 表达谱及其与TLR4 的关系

目的:筛选高脂饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠,以及应用Toll 样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)抑制剂TAK-242 干预的胰岛素抵抗小鼠血浆差异表达的微小RNA(microRNA,miRNA),探讨胰岛素抵抗、TLR4 和差异表达miRNAs 的关系。方法:血浆标本来自前期实验的3 组小鼠,即以普通基础饲料喂养(Low fat diet,LFD)的正常对照组、给予TAK-242 的高脂饮食组(Treated high fat diet,HFD-T)和单纯高脂饮食组HFD-C,应用小鼠miRNA 芯片检测血浆miRNA 表达谱,筛选差异表达的miRNAs;采用实时荧光定量PCR 方法验证芯片结果。应用生物信息学方法,以TLR4 及其信号传导通路为中心,预测差异表达miRNAs 的靶基因,并对靶基因分别进行GO 和KEGG 富集分析,以判定差异miRNAs 主要影响的生物学功能或者通路。结果:miRNA 基因芯片筛查结果显示,单纯高脂饮食组与正常饮食组比对,筛选出差异显著的miRNAs 共计185 种,其中6 种miRNAs 表达上调,179 种miRANs 表达下调;给予TAK-242 的高脂饮食组与正常饮食组比对,筛选出差异显著的miRANs共计171 种,均表达下调;给予TAK-242 的高脂饮食组与单纯高脂饮食组比对,筛选出差异表达的miRNAs 共计13 种,均为下调。生物信息学分析结果显示,以TLR4 为中心挖掘与其互作的蛋白质,共发现有10 种蛋白;在TAK-242 给予的高脂饮食组与单纯高脂饮食组中差异表达倍数均在1 000 以上的4 种miRNAs (mmu-miR-3095-3p、mmu-miR-5113、mmu-miR-709 和mmu-miR-335-3p),可在TLR4 的互作蛋白质或Toll 样受体信号通路中找到其作用的靶基因,发现这些靶基因74% 属于生物过程基因,其中转录调控因子占82%。实时荧光定量PCR 检测mmu-miR-3095-3p、mmu-miR-5113、mmu-miR-709 和mmu-miR鄄335鄄3p水平,变化趋势与芯片结果一致。结论:胰岛素抵抗发生时,血浆miRNAs 表达谱存在改变,此变化与TLR4 及其信号通路相关。该研究结果丰富了胰岛素抵抗发生的机制,为寻找胰岛素抵抗血浆miRNAs 诊断标志物提供了实验依据。     

皮质酮与慢性不可预见性应激诱导的两种抑郁症模型比较

目的从行为学及分子水平比较皮质酮(CORT)与慢性不可预见性应激(CUMS)诱导的抑郁症模型的异同,为抑郁症发病机制研究及抗抑郁药物的筛选与评价模型提供一定的参考。方法将30只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组(Ctrl)、慢性不可预见应激组(CUMS)和皮质酮注射应激组(CORT)组,制作应激模型21d,期间每3d对小鼠进行称重。21d模型制作结束后,对小鼠进行行为学测试,并于第22天,通过眼眶取血收集动物血清,并用ELISA法测定血清皮质酮含量。眼眶取血后脱颈椎处死动物,取出动物的胸腺和脾脏进行称重,计算脏器指数;取出脑组织,置于液氮罐保存,尼氏(Nissl)染色法观察小鼠大脑海马区神经元损伤情况;采用Western blotting、RT-PCR方法测定抑郁症相关蛋白及基因的表达。结果与对照组相比,两种抑郁症模型组开场实验中的行为学指标均改变,强迫游泳和悬尾实验的累积不动时间显著升高。两个模型组的胸腺指数无明显变化,而CORT组的脾脏指数较对照组下降。CUMS和CORT组小鼠血清皮质酮含量高于对照组,CORT组与CUMS组相比有升高趋势,但差异无显著性。CUMS和CORT两种模型均使海马CA1、CA3和DG区神经元密度降低,CORT模型变化更明显。两模型组的促肾上腺素释放激素(CRH)的mRNA和蛋白的表达量均显著性增加,脑源性神经营养因子(BDNF)、磷酸化转录因子环磷腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的蛋白表达水平均呈现明显地抑制,但CUMS和CORT两组之间差异无显著性。结论 CORT模型和CUMS模型均能成功构建抑郁症模型,且与下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴紊乱有关,两种模型在小鼠海马结构改变及大脑BDNF-pCREB和ERK信号通路激活等方面差异无显著性。提示,CORT模型可用于抑郁症机制的研究及抗抑郁药的筛选与评价,尤其可用于以HPA轴功能紊乱所引起的抑郁症分子机制探讨。     

氟西汀对抑郁症模型小鼠Treg细胞的影响

目的:探讨CUMS抑郁症模型小鼠经氟西汀治疗后Treg细胞的改变。方法:采用慢性不可预知温和应激(CUMS)建立抑郁小鼠模型,糖水偏好和摄食比作为抑郁行为学的评估指标。通过免疫组化、流式细胞术检测抑郁小鼠中Treg细胞数的变化。结果:免疫组化结果显示CUMS模型组脾脏Treg细胞数量与对照组相比明显升高,经氟西汀治疗后Treg细胞数量下调(P<0.05);流式细胞术检测结果显示相比CUMS模型组及对照组氟西汀治疗后Treg细胞占CD4⁺T细胞明显降低。结论:CUMS模型小鼠抑郁症状可通过氟西汀治疗后改善,并伴随着Treg细胞亚群比例的降低。     

宁夏无果枸杞芽提取物对慢性温和不可预见性应激小鼠学习、记忆的影响

目的:探讨宁夏无果枸杞芽提取物(fruitless lycium-sprout extracts,FLE)对成年慢性应激小鼠学习、记忆功能,血清和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)含量及脑组织中神经细胞粘附分子(NCAM)表达的影响。方法:将40只成年昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、FLE低剂量组(FLE1组)和高剂量组(FLE2组),每组10只;采用慢性温和不可预见性应激(chronic mild unpredictable stress,CUMS)方法建立小鼠抑郁模型。在造模完成后灌胃给药,1次/d,连续灌胃6周,FLE1组、FLE2组分别用质量体积百分比为10%、20%的FLE每日0.2 ml/10 g灌胃,正常对照组及模型组灌胃等量生理盐水。用Morris水迷宫实验检测各组小鼠的学习记忆能力,黄嘌呤氧化酶法测定血清和脑组织SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA水平,免疫组化染色法检测脑组织中N-CAM蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠的目标象限停留时间减少,隐藏平台象限获得时间延长,血清SOD活性降低,MDA水平提高,脑组织中N-CAM表达下调(P0.01);与模型组比较,FLE2组的目标象限停留时间延长,隐藏平台象限获得时间缩短,血清和脑组织中SOD活性均增加,MDA含量均降低(P0.05),脑组织中N-CAM表达均上调(P0.001)。结论:FLE可以提高CUMS小鼠学习和记忆的能力,其机制可能与抗氧化作用有关。     

Toll样受体4在慢性阻塞性肺疾病中作用的研究进展

Toll样受体(TLRs)是一类最早发现的固有免疫受体,其中TLR4是介导来源于革兰阴氏菌细胞壁外膜脂多糖反应中的主要信号转导分子,参与多种疾病炎症过程.TLR4参加对抗细菌感染是常见的慢性阻塞性肺疾病(COPD)的防御机制之一.把TLR4作为靶点将是COPD临床治疗中一种新的潜在的治疗方法.     

高脂饮食诱导胰岛素抵抗小鼠胰岛IRc/IRS-1低表达

目的:观察高脂饮食诱导的胰岛素抵抗模型小鼠胰岛上胰岛素受体(IRc)/胰岛素受体底物-1(IRS-1)表达的变化。方法:20只雄性昆明小鼠随机分为高脂饲料模型组和普通饲料对照组,每组各10只。喂养20周后,观察两组小鼠大体情况,称量体重(BW),酶法测空腹血糖(FBG),酶联免疫法测空腹胰岛素(FIns)浓度,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色观察胰岛组织学变化;免疫组织化学染色分析胰岛IRc/IRS-1的表达。比较两组各检测指标的统计学差异。结果:模型组FBG、HOMA-IR明显高于对照组(P均0.01);胰岛边界欠完整,内部结构紊乱,伴炎性细胞浸润;IRc/IRS-1的表达较对照组明显降低(P均0.05)。结论:高脂饮食可成功诱导小鼠外周胰岛素抵抗,且胰岛上IRc/IRS-1的表达降低。     

银杏二萜内酯改善慢性不可预知性温和刺激(CUMS)大鼠抑郁样行为并影响细胞因子和神经递质水平

目的:探讨银杏二萜内酯对慢性不可预知性温和刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)大鼠抑郁样行为的作用及其机制。方法:40只SD大鼠随机分为对照组、慢性应激组,以及慢性应激+银杏二萜内酯低剂量(1.5 mg·kg -1·d -1)组、中剂量(3 mg·...     

肝X受体激动剂对抑郁模型小鼠海马树突棘数目的影响

目的:探讨肝X受体(LXRs)激动剂GW3965对慢性不可预知性应激(CUS)诱导的抑郁症模型小鼠海马结构各亚区CA1、CA3和DG内树突棘数目变化的影响。方法:选取雄性C57BL/6J小鼠,经过适应性喂养和糖水基线调整后,被随机分为对照组(control)、对照+GW3965组(GW)、抑郁模型组(CUS)以及抑郁模型+GW3965组(CUS/GW)。CUS组和CUS/GW组小鼠接受连续10周的CUS干预,GW组和CUS/GW组小鼠在CUS干预的第7周开始接受4周的GW3965给药。第10周末进行行为学测试,之后应用免疫组化及现代体视学技术精准定量小鼠海马结构各亚区树突棘密度和总数目改变。结果:持续数周的应激使小鼠的体质量及糖水偏好百分比明显下降,强迫游泳不动时间显著增加。体视学结果显示CUS干预使小鼠CA1、CA3和DG区树突棘密度和数量明显减少。4周GW3965治疗改善了小鼠的抑郁样行为及逆转了DG区树突棘密度和总数目的下降。结论:LXRs激动剂GW3965对CUS模型小鼠DG区树突棘总数目的影响可能是其发挥抗抑郁作用的神经生物学基础之一。     

慢性轻度不可预见性应激对大鼠海马内甘丙肽表达的影响

目的:观察慢性轻度不可预见性应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)对大鼠海马甘丙肽(ga-lanin,Gal)蛋白及mRNA表达的影响,探讨Gal在大鼠实验性抑郁症发病过程中的作用机制。方法:将20只健康雄性SD大鼠,随机分为正常组和模型组,每组10只。孤养结合CUMS 21 d建造抑郁症模型,应用旷场试验和糖水偏好试验检测大鼠行为学变化,使用免疫荧光组织化学方法和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定Gal及Gal mRNA的表达。结果:造模后模型组大鼠运动总路程、中央路程、周边路程及糖水摄入量均较正常组偏低(P<0.05);模型组与正常组相比,海马内Gal及Gal mRNA的表达同样降低(P<0.05)。结论:慢性轻度不可预见性应激可使大鼠海马内Gal及Gal mRNA的表达量下降,推测Gal在抑郁发病过程中可能起到神经保护作用。     

硫辛酸改善高脂小鼠氧化应激和慢性炎症的研究

目的:探讨由长期喂饲高脂引发的小鼠机体氧化应激对细胞因子的分泌以及炎症相关基因表达的影响,评价通过添加抗氧化剂硫辛酸对长期氧化应激和慢性炎症的改善作用。方法:30只C57BL/6雄性小鼠,随机分为3组:对照组,高脂模型组(HFD),硫辛酸组(LA)。喂饲10周后测定血浆和脾脏的氧化应激指标。酶联免疫法检测血浆中IFN-γ、IL-4、IL-6、TNF-α、IL-10的含量。荧光定量PCR检测脾脏炎症相关基因C-Jun、NF-κB以及与抗氧化相关基因Mt-1的表达。结果:长期高脂喂饲可导致小鼠免疫器官抗氧化酶活性显著降低,MDA含量显著升高,形成氧化应激。机体长期处于氧化应激态可使血浆IL-4和IL-10显著降低,IFN-γ、IL-6和TNF-α水平显著升高,同时C-Jun和NF-κB炎症反应相关基因表达上调、Mt-1的表达水平下调。添加0.1%LA可有效地防止机体氧化应激的形成。结论:长期高脂喂饲导致的氧化应激可影响机体的免疫功能并诱发慢性炎症反应,LA通过直接清除自由基、恢复氧化还原平衡解除慢性氧化应激从而保护小鼠的免疫功能免受损伤。     

肝X受体激动剂对抑郁模型小鼠海马少突胶质细胞的影响

目的:探讨肝X受体(LXRs)激动剂(GW3965)对慢性不可预知性应激(CUS)诱导的抑郁症小鼠海马结构各亚区内少突胶质细胞数量的影响.方法:将51只4～6周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组(control)、慢性不可预知性应激组(CUS)和慢性不可预知性应激+GW3965处理组(CUS+ GW3965),...     

高脂饮食诱导肥胖小鼠白色脂肪组织中IL-33的表达及意义

目的:探讨细胞因子IL-33在高脂饮食诱导的肥胖小鼠体内不同类型白色脂肪组织的表达情况.方法:3T3-L1前脂肪细胞诱导分化10 d,ELISA检测细胞培养上清中IL-33的含量;Western blot和RT-PCR检测细胞中IL-33的表达.6～8周的C57BL/6雄性小鼠随机分为两组,高脂组给予60％高脂饲料饲养...     

厚朴酚对高脂饮食性肥胖大鼠体重及胰岛素抵抗的影响

目的 观察厚朴酚对高脂饮食性肥胖大鼠体重和血清生化指标的影响,并探讨其机制.方法 将SD大鼠随机分成4组:对照组,高脂组和厚朴酚高、低二个剂量组.每天定时称量食水、灌胃,每周测体重,第8周末各组大鼠禁食12 hA股动脉取血测定血清生化指标.结果 低剂量厚朴酚组从第4周开始体重比高脂组显著降低(P＜0.05),高、低剂量厚朴酚组的胰岛素、游离脂肪酸、丙二醛以及低剂量组的血糖、三酰甘油比高脂组都显著下降(P＜0.05).结论 厚朴酚能降低高脂饮食性肥胖大鼠的体重,并对胰岛素抵抗和糖脂代谢紊乱等有一定的改善作用.     

蜂胶对脂多糖诱导的血管内皮细胞中PC-PLC活性和TLR4表达的影响

目的: 探讨在脂多糖(LPS)诱导的条件下中国蜂胶对血管内皮细胞(VECs)磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C (PC-PLC)活性和TLR4表达的影响。方法: 将100 μg/L LPS 加入到含0.5%血清的培养液中培养VECs,经12.5 mg/L的中国蜂胶分别处理12 h和24 h后,SRB法测定细胞存活率;化学法测定NO含量;以L-α-卵磷脂为底物测定PC-PLC的活性;Western blotting检测TLR4、核因子κB p65(NF-κB p65)和p53的表达;细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位分别通过荧光探针DCHF和JC-1检测。结果: 中国蜂胶处理LPS诱导的血管内皮细胞24 h并不影响细胞存活率,但降低NO的含量和ROS的水平;处理12 h后降低PC-PLC活性和NF-κB p65表达;处理12 h和24 h后降低TLR4和p53的表达。此外,中国蜂胶不影响细胞内线粒体膜电位的水平。结论: 中国蜂胶通过降低PC-PLC活性和TLR4表达,抑制其下游信号分子NF-κB p65、p53的表达和ROS的水平,以及抑制NO的释放,从而发挥抗炎功效。     

谷氨酰胺对高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠肥胖和胰岛素抵抗的影响

目的:探讨谷氨酰胺(L-glutamine,Gln)对高脂饮食(high-fat diet,HFD)诱导小鼠肥胖和胰岛素抵抗的影响。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照(normal control,NC)组、HFD组、HFD+丙氨酸(Lalanine,Ala)组和HFD+Gln组,每组15只。每周记录小鼠体重,给药16周后禁食不禁水12 h测定空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),处死后剖腹取附睾脂肪垫并称重。采用酶联免疫法检测小鼠胰岛素(insulin,INS)、瘦素(leptin,LEP)、脂联素(adiponectin,APN)和胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)的水平,并计算胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,IRI)和胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI)。结果:与NC组比较,HFD组小鼠体重和附睾脂肪垫重量明显升高,FBG、INS、IRI和LEP水平均明显升高,ISI和APN水平明显降低(P0.05);与HFD组比较,HFD+Gln组小鼠体重明显下降,FBG和LEP水平明显降低,IRI明显减小(P0.05)。4组小鼠血清的GLP-1水平差异无统计学显著性。结论:谷氨酰胺减轻高脂饮食诱导的肥胖小鼠体重和胰岛素抵抗。     

N-Ac-PGP通过激活TLR4诱导巨噬细胞的M1极化并提高慢性阻塞性肺疾病炎症水平

目的：探究N-乙酰化脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸（N-acetylated proline-glycine-proline, N-Ac-PGP）通过Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)诱导巨噬细胞M1极化对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）炎症反应的影响。方法：检测COPD患者痰液中N-Ac-PGP和M1型巨噬细胞炎性细胞因子的表达。体外培养人单核细胞白血病细胞THP-1,使用佛波脂（phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）诱导使之分化为M0型巨噬细胞,然后使用脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）和N-Ac-PGP诱导M0型巨噬细胞极化为M1型。采用RTqPCR和Western blot法分别检测巨噬细胞表面标志物CD11b、CD45、CD86和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）的mRNA和蛋白表达水平。使用ELISA检测M1型巨噬细胞炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(tu-m...     

白藜芦醇对高脂饮食去卵巢肥胖大鼠海马组织脑源性神经营养因子水平的影响

 目的：探讨去卵巢联合高脂饮食诱导的肥胖大鼠海马组织中脑源性神经营养因子（BDNF）、雌激素受体α (ERα)和雌激素受体β (ERβ) 表达的变化,同时观察白藜芦醇对这些改变的影响。方法：50只3月龄雌性Wistar大鼠随机分为5组：假手术普通饮食对照（C）组、假手术高脂饮食（H）组、单纯去卵巢（O）组、去卵巢高脂饮食（O+H）组和白藜芦醇（40 mg·kg-1·d-1）+去卵巢高脂饮食(O+H+R)组。3月后抽取股动脉血检测血清雌二醇（E2）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;实时荧光定量PCR法检测海马BDNF、ERα和ERβ mRNA表达,蛋白免疫印迹法及ELISA法分别检测海马BDNF蛋白含量。结果：与C组比较,H组大鼠血清TC和LDL-C含量升高,海马BDNF水平显著降低（P<0.05或P<0.01）,O组大鼠血清E2水平降低,TC含量升高,海马BDNF 水平及ERα、ERβ mRNA表达均明显下降（P<0.05或P<0.01）;O+H组大鼠血清TC含量升高,HDL-C水平降低,海马BDNF 水平降低,与C组、H组和O组比较均有显著差异（P<0.05或P<0.01）,海马ERα和ERβ mRNA表达下降,与C组和H组比较差异显著（P<0.05或P<0.01）;O+H+R组大鼠血清E2水平升高,TC含量降低,海马ERα和ERβ mRNA表达水平及BDNF含量均明显增加,与O+H组比较有显著差异（P<0.05或P<0.01）。结论：去卵巢联合高脂饮食显著降低大鼠海马ERα和ERβ mRNA表达及BDNF水平,而白藜芦醇能够明显改善绝经后肥胖大鼠的血脂水平,上调海马ERα和ERβ mRNA表达,增加海马BDNF水平。     

高迁移率族蛋白-1对增生性瘢痕成纤维细胞的调控作用

目的 探讨高迁移率族蛋白-1（HMGB1）对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFbs）的调控作用.方法 增生性瘢痕组织取自中山大学附属第一医院烧伤科行瘢痕整复术的患者,组织块法培养HSFbs.通过细胞增殖、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、迁移和胶原网收缩实验检测不同浓度（0～200 ng/mL） HMGB1对HSFbs的影响.结果 1.56、3.13、6.25、12.50、25.00 ng/mL HMGB1呈剂量依赖方式刺激HSFbs的增殖,HMGB1对HSFbs Toll样受体4（TLR4）、α-滑肌肌动蛋白（α-SMA）、非肌肉肌球蛋白Ⅱ（NMMⅡ）mRNA的表达有促进作用而对基质金属蛋白酶1-α （MMP1-α）无,HMGB1对HSFbs迁移及收缩有促进作用但可被TLR4阻断剂抑制.结论 HMGB1可能通过TLR4调控HSFbs而在增生性瘢痕的形成过程中起作用.     

高脂饮食对大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF表达的影响

目的:探讨高脂饮食对大鼠海马、大脑皮质和脊髓胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的影响。方法:20只雄性SD大鼠随机分成两组:普通饮食组(ND)和高脂饮食组(HFD),每组10只,分别给予两组大鼠普通饮食和高脂饮食14周,测量各组大鼠体重、脂肪重、Lee’s指数和脂体比。应用real time RT-PCR检测各组大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF mRNA的表达;应用Western Blot检测各组大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF蛋白的表达;应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组大鼠海马、大脑皮质和脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6的水平。结果:高脂饮食导致大鼠体重、脂肪重、Lee’s指数和脂体比均明显升高(P <0.05); HFD组大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF mRNA表达水平较ND组均显著下降(P <0.01),HFD组大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF蛋白表达水平较ND组均明显下降(P <0.05); HFD组大鼠海马、大脑皮质和脊髓中TNF-α、IL-1β和IL-6水平与ND组相比均明显升高(P <0.0...