铁对三阴性乳腺癌细胞体外血管生成拟态的影响

目的研究铁对三阴性乳腺癌细胞体外血管生成拟态(VM)的影响及其机制。方法将细胞分为6组:对照组、30和300μmol/L含羞草氨酸组、500μmol/L去铁胺组及50和500μmol/L乳酸亚铁组。用MTT法检测细胞增殖活力,三维培养和PAS染色鉴定细胞形成VM的能力,免疫荧光染色法检测ROS变化,Western blot检测p-ERK1/2表达。结果去铁胺、含羞草氨酸均可显著抑制血管样结构形成(P0.05),乳酸亚铁可促进其形成(P0.05),并且血管样结构表现为PAS染色阳性。细胞血管样结构形成能力与胞内ROS及p-ERK1/2表达水平变化相一致。加入PD98059可以显著抑制其形成(P0.05)。结论铁诱导生成ROS促进VM的形成,ERK1/2的异常激活可能是主要调节机制。     

姜黄素减轻小鼠深部组织压力性损伤

目的评价姜黄素(Cur)对缺血-再灌注所致小鼠深部组织压力性损伤(DTPI)创面愈合的影响。方法将小鼠随机分为对照组(Con)、模型组(Mod)、姜黄素4和8 mg/kg干预组(Cur 4,Cur 8),每组10只。磁铁压迫法构建深部组织损伤模型,每隔48 h于创面注射姜黄素,拍照观察伤口愈合情况。HE染色观察伤口愈合病理改变,realtime PCR检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、血管内皮生长因子(VEGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达;Western blot检测VEGF-α、TGF-β、Stat3、p-Stat3蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组伤口逐渐恶化,病理学改变明显。与模型组相比,Cur 8组伤口愈合明显加快(P<0.05);Cur 8组炎性细胞浸润减少,新生血管密度增多。Cur 8组TNF-α、IL-6的mRNA表达量均低于模型组,IL-10、VEGF-α和TGF-β表达量均高于模型组(P<0.05);Cur 8组VEGF-α、TGF-β、p-Stat3蛋白表达水平均高于模型组(P<0.05)。结论姜黄素可减轻小鼠缺血-再灌注所致的DTPI,其机制可能与抑制炎性反应及促进血管再生有关。     

Pyrin重组蛋白通过TGF-β1/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路减轻慢性支气管哮喘小鼠气道炎症及气道重塑

目的探讨pyrin重组蛋白是否通过抑制转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路缓解卵清蛋白(OVA)诱导的慢性哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。方法选取雄性BALB/c小鼠32只,分为4组,每组8只。分别为对照组、 OVA模型组、 pyrin重组蛋白治疗组(100μg/kg)、地塞米松(DEX)治疗组(1 mg/kg)。ELISA测定各组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子的表达, HE染色观察小鼠支气管炎症浸润情况,过碘酸雪夫反应(PAS)染色观察杯状细胞数量变化, Masson染色观察胶原纤维沉积,免疫组织化学染色法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 TGF-β1和Notch1蛋白在肺组织中表达分布情况, Western blot法检测肺组织中α-SMA、上皮钙黏素(E-cadherin)、 TGF-β1、 SMAD2/3、 SMAD7、 Jagged1、 Notch1、 Hes1蛋白水平。结果 Pyrin重组蛋白能够改善OVA诱导的支气管哮喘小鼠气道炎症反应,抑制杯状细胞的增生及胶原纤维沉积,降低BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-4、 IL-13含量,抑制肺组织中TGF-β1、 SMAD2/3、 Jagged1、 Notch1、 Hes1、α-SMA的蛋白表达。结论 Pyrin重组蛋白通过下调TGF-β1/SMAD及Jagged1/Notch1信号通路减轻哮喘小鼠气道炎症及气道重塑。     

二氢丹参酮Ⅰ(DHTS1)通过抑制双环己酮草酰二腙诱导的小鼠小胶质细胞激活减轻髓鞘损伤

目的探讨二氢丹参酮I(DHTS1)对双环己酮草酰二腙(cuprizone)诱导脱髓鞘保护作用的机制。方法 DHTS1溶解于5 g/L羧甲基纤维素钠(CMC-Na)中,饲喂小鼠含2 g/L cuprizone的饲料制备脱髓鞘模型,给予DHTS1处理,实验动物随机分为CMC-Na正常组、 CMC-Na联合cuprizone处理组、 DHTS1联合cuprizone处理组。通过固蓝(LFB)组织化学染色、免疫荧光组织化学染色检测髓鞘碱性蛋白(MBP)和髓鞘蛋白脂(PLP)的表达判断髓鞘完整性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;免疫荧光组织化学染色检测小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白钙离子结合接头蛋白分子1(Iba-1)、 CD86、 CD163的表达确定小胶质细胞极化情况。脂多糖(LPS)极化SIM-A9小胶质细胞, DHTS1处理,实验分为CMC-Na对照组、 DHTS1对照组、 CMC-Na联合LPS处理组和DHTS1联合LPS处理组。流式细胞术检测CD16/32、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)阳性细胞比例。结果与CMC-Na联合cuprizone模型组比较, DHTS1处理明显减少cuprizone诱导的小鼠大脑胼胝体区髓鞘脱失,减少细胞凋亡,减少Iba-1~+阿米巴样小胶质细胞的面积,减少CD86~+细胞数目,增加CD163~+细胞数目。与CMC-Na联合LPS处理组相比, DHTS1明显减少CD16/32~+、 TNF-α~+、 iNOS~+小胶质细胞的百分比。结论 DHTS1可以抑制cuprizone诱导的脱髓鞘和细胞凋亡,可能与DHTS1调节小胶质细胞极化,减轻中枢神经系统炎症反应有关。     

α硫辛酸抑制6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞中α突触核蛋白(α-synuclein)表达及机制

目的研究α硫辛酸(α-LA)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病细胞模型中α突触核蛋白(α-syn)表达的影响及其机制。方法采用6-OHDA诱导PC12细胞建立帕金森病细胞模型,用α-LA处理。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,比色法检测细胞内铁含量和细胞内丙二醛(MDA)含量,荧光探针2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot法检测α-syn蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组细胞活性显著降低,细胞内铁含量、MDA含量、ROS水平均显著增高,α-syn蛋白水平显著增加;与模型组相比,α-LA处理的细胞活性显著升高,细胞内铁含量、MDA含量、ROS水平显著降低,α-syn蛋白水平显著降低。结论α-LA能抑制α-syn过表达,减轻6-OHDA诱导所致的PC12细胞损伤,这可能与α-LA降低细胞内铁含量、氧化应激水平有关。     

方格星虫水提物促小鼠皮肤创伤愈合及作用机制的研究

为探讨方格星虫水提物(SNE)促进小鼠皮肤创伤愈合的活性及其机制,测定SNE的止血作用,建立小鼠全皮层创伤模型,观察伤口愈合形态并测定愈合率;采用苏木素-伊红(HE)、马森(Masson)染色、透射电镜(TEM)观察创面的组织结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞因子及其相关蛋白的表达水平。结果显示,SNE具有止血作用,能明显提高小鼠创伤愈合率并缩短掉痂时间(P 0.05)。研究中,SNE组小鼠表皮生长完全、创面毛细血管和胶原纤维增生明显优于空白(NT)组;第7 d,SNE明显降低白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平(P 0.05);第28 d,相比于NT组,SNE组的Smad7表达水平上调,TGF-βII型受体(TGF-βRII)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平下调,差异具有统计学意义(P 0.05),而与云南白药组(PC组)的差异无统计学意义(P 0.05)。结果表明,SNE具有促进伤口愈合活性和抑制增生性瘢痕生成作用,其作用机制与止血、调节炎症因子、促进胶原纤维重塑以及调控TGF-β/Smads信号通路传导有密切关联。SNE作为皮肤创伤修复和抑制瘢痕制剂,具有潜在的临床应用价值。     

沙利度胺减轻肾病综合征小鼠肾脏纤维化

目的探讨沙利度胺对肾病综合征小鼠表皮生长因子受体(EGFR)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路及肾脏纤维化的影响。方法将小鼠随机分为对照组、模型组(制备膜性肾病模型)、沙利度胺组(灌胃给予沙利度胺溶液100 mg/kg)、来氟米特组(灌胃给予来氟米特溶液5 mg/kg),每组15只。1天1次,连续给药4周。分别在造模前、造模后、治疗4周后检测小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-Upro);治疗4周后,全自动生化分析仪检测小鼠生化指标;酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中炎性因子白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达;苏木精-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色、高碘酸-无色品红(PAS)染色观察肾组织病理变化;RT-qPCR和Western blot检测肾脏组织中EGFR、ERK mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,模型组小鼠肾小球体积增大,肾小管中有空泡性病变,肾小管上皮细胞有嗜复红蛋白沉积,小鼠24 h-Upro、血清中TC、TG、BUN、Scr含量、血清中炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α含量、肾脏组织中EGFR、ERK mRNA水平及p-EGFR/EGFR、p-ERK/ERK蛋白表达显著升高(P0.05);与模型组相比,来氟米特组、沙利度胺组小鼠上述病理症状明显减轻,小鼠24 h-Upro、血清中TC、TG、BUN和Scr含量、血清中炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α表达、肾脏组织中EGFR、ERK mRNA水平及p-EGFR/EGFR、p-ERK/ERK蛋白表达显著回降(P0.05)。结论沙利度胺可能通过抑制EGFR/ERK信号通路减轻肾脏损伤,抑制肾脏纤维化。     

葡萄糖胺对TNF-α诱导的血管内皮细胞VCAM-1表达的影响

目的探讨葡萄糖胺对肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)诱导的人脐带血管内皮细胞(HUVEC)血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)表达的影响。方法实时逆转录聚合酶链式反应(Real time RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别测定葡萄糖胺对VCAM-1的表达情况;Western blot法测定HUVEC核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)磷酸化程度。结果葡萄糖胺抑制TNF-α诱导的VCAM-1在HUVEC的表达;NF-κB抑制剂BMS-345541抑制TNF-α诱导的VCAM-1的表达;葡萄糖胺抑制TNF-α诱导的NF-κB的磷酸化。结论葡萄糖胺抑制TNF-α诱导的VCAM-1的表达与抑制NF-κB的活化相关。     

绿原酸通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究绿原酸对脓毒症小鼠急性肺损伤的影响及活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体蛋白3(ROS/TXNIP/NLRP3)信号通路在其中的作用。方法:建立脓毒症小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照(地塞米松)组及低剂量(5 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)、高剂量(20 mg/kg)绿原酸组,每组各12只,另取12只正常小鼠作为对照组。计数肺泡灌洗液中炎症细胞数量;测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;HE染色观察肺组织病理改变;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡;ELISA法测定肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,相应试剂盒检测肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平;Western blot法检测TXNIP、NLRP3蛋白、caspase-1及细胞焦亡关键蛋白Gasdermin D的N末端片段(GSDMD-N)的表达水平。结果:相较于对照组,模型组肺泡间隔增厚,肺泡内及肺泡间质水肿,炎症细胞数量显著增加,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平均显著升高(P0.05);而模型组SOD水平较对照组显著降低(P0.05)。相较于模型组,绿原酸低、中、高剂量组肺泡间隔增厚及水肿情况有所减轻,炎症细胞数量显著减少,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平显著降低(P0.05);而模型组SOD水平较对照组显著升高(P0.05);绿原酸高剂量组与阳性对照组上述指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:绿原酸可能通过下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路表达水平,抑制炎症分子产生及细胞焦亡发生,有效减轻脓毒症小鼠肺损伤。     

人参皂苷Rg1对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的研究人参皂苷Rg1对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,并探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入不同终浓度的人参皂苷Rg1 4 h后,细菌脂多糖LPS(10μg/ml)作用24 h,直径1μm的微球(1×1010/L)结合流式细胞术分析Rg1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响;Griess试剂盒检测NO的释放;H2DCFDA染色检测ROS的含量;Fluo-4/AM染色检测Rg1对Ca2+超载的影响;Sytox R Green染色,荧光酶标仪检测Rg1对CHX、CTX诱导的细胞凋亡的影响。结果 10、20μmol/L的Rg1时能明显抑制LPS诱导的巨噬细胞NO和ROS的产生以及吞噬微球的能力;10μmol/L的Rg1能显著抑制Ion诱导的的巨噬细胞Ca2+的超载以及CHX、CTX诱导的细胞的凋亡。结论 Rg1具有显著的抗炎作用,并可抵抗多种因素诱导的细胞凋亡,为进一步开发为免疫治疗药物提供了依据。     

改良保存液处理红细胞对糖尿病小鼠创面愈合的影响

目的研究改良处理红细胞回输对糖尿病小鼠伤口愈合的影响,并探讨其可能的作用机制。方法建立糖尿病小鼠模型,随机分为献血组和实验组。采集献血组小鼠血液,分别用标准和改良保存液保存,在7、14、21和28 d检测红细胞(RBC)携氧能力及变形能力。在实验组小鼠背部制作伤口愈合模型,并将保存7 d的血液回输给实验组小鼠,再分为标准组及改良组,每组6只,在0、1、4、7和14 d观察小鼠伤口愈合情况,第14天处死小鼠,取创面皮肤组织进行HE、Masson染色,免疫组化方法对伤口组织的纤维化程度进行分析,Western blot检测伤口组织PI3K/AKT、MEK/ERK及其磷酸化蛋白水平。结果与标准组比较,改良组游离血红蛋白(fHb)含量降低,而P50、pH、2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)和红细胞变形性(RCD)升高(P0.05);改良组创面面积显著减小、皮肤组织和血管面积增加、胶原纤维的表达和纤维化程度升高(P0.05)。小鼠伤口组织中HIF-1α、VEGF和EGF浓度水平增加(P0.05)。PI3K/AKT、MEK/ERK表达增加,PI3K/AKT和MEK/ERK磷酸化显著增强(P0.05)。结论改良保存液处理的红细胞可能通过激活HIF-1α信号通路促进糖尿病小鼠的伤口愈合。     

α7nAChR的激活通过抑制TNF-α表达促进糖尿病小鼠伤口愈合

 目的：观察糖尿病小鼠伤口愈合期间巨噬细胞浸润及肿瘤坏死因子 α（TNF-α）表达特征,探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）特异性激动剂PNU-282987是否可通过抑制TNF-α表达促进糖尿病小鼠伤口的愈合。方法：(1) 制作糖尿病小鼠切创模型（糖尿病组）,正常小鼠在相同部位制作相同大小创口作为对照（对照组）,分别于切创后1 d、3 d、5 d、10 d、14 d和21 d（每个时间段5只）提取创口样本。免疫组化观察创口中巨噬细胞和成纤维细胞数量,Western blotting检测TNF-α表达水平,Masson染色观察胶原沉积情况。 (2) 在糖尿病小鼠切创后,选择合适的干预时间窗进行PNU-282987干预,然后观察上述指标变化。结果：(1) 与对照组相比,糖尿病组创口愈合明显延迟,在切创初期的伤口中巨噬细胞数量和TNF-α表达水平较低（P<0.05）,而切创5 d后的伤口巨噬细胞数量和TNF-α表达水平显著增加（P<0.05）,成纤维细胞数量和胶原含量减少（P<0.05）。 (2) 在切创5 d后对糖尿病小鼠腹腔注射PNU-282987,可显著减少伤口中TNF-α表达,提高成纤维细胞数量和胶原含量,促进伤口愈合。结论：糖尿病伤口愈合具有炎症反应发生迟但不易消退的特征。在炎症反应明显期激活α7nAChR可抑制TNF-α表达,促进糖尿病小鼠的伤口愈合。     

18α-GA激活Nrf2对成体神经干细胞的影响

目的:明确18α-甘草次酸(18α-GA)对核因子E2相关因子2(Nrf2)的激活作用,观察上调Nrf2对成体神经干细胞(a NSCs)增殖和分化能力的影响,探讨维持a NSCs活力的有效途径。方法:体外培养新生、成年和老年小鼠的侧脑室室膜下区神经干细胞(NSCs),观察随年龄增长NSCs中Nrf2的表达变化。以18α-GA作用a NSCs,用real-time PCR和Western blot实验比较18α-GA组与DMSO对照组a NSCs的Nrf2表达变化。构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的Nrf2-shRNA慢病毒载体(LV)感染a NSCs,用real-time PCR和Western blot实验检测shRNA对Nrf2的沉默效率。将a NSCs按照干预条件不同分为DMSO组、18α-GA组、LV-GFP组和LV-Nrf2-shRNA组,运用Brd U掺入实验、Tuj1免疫荧光染色、CCK-8实验、Hoechst 33342/PI双染色和活性氧簇(ROS)水平测定等方法评价18α-GA是否通过激活Nrf2对a NSCs的增殖、分化、细胞活力、细胞凋亡以及氧化应激水平产生影响。结果:随年龄增长,成年和老年小鼠a NSCs的Nrf2 mRNA表达水平较新生小鼠NSCs显著降低(P0.01),但a NSCs的ROS水平显著高于新生小鼠NSCs(P0.05)。应用18α-GA后,a NSCs的Nrf2 mRNA与蛋白表达水平较DMSO组明显升高(P0.01),并且a NSCs的Brd U阳性率也显著增加(P0.01)。2 mg/L 18α-GA作用后,a NSCs的Tuj1阳性率和细胞活力较DMSO组显著升高(P0.05),而凋亡率和ROS水平显著下降(P0.05和P0.01)。但是,敲减a NSCs的Nrf2并应用18α-GA干预后,LV-Nrf2-shRNA组Brd U阳性率、Tuj1阳性率以及细胞活力均较LV-GFP组显著下降(P0.05),ROS水平却显著上升(P0.05)。结论:18α-GA可能通过激活Nrf2提高a NSCs的抗氧化能力,促进a NSCs增殖和分化,维持a NSCs潜能。     

二氢杨梅素对APP/PS1转基因小鼠抗炎的作用及其机制初探

目的研究二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DHM)对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠脑内肿瘤坏死因子α(TNF-α)及小胶质细胞M1、M2表型转化的影响。方法在体外实验中,以20μg/ml Aβ_(1-42)刺激BV2细胞24 h诱导其活化,通过2.5μg/ml DHM及等质量浓度的DMSO稀释液干预BV2细胞24 h,分别作为治疗组和对照组,采用免疫印迹法(Western blot)检测炎症因子TNF-α、小胶质细胞M1和M2表型的表达水平。在动物实验中,取4月龄的APP/PS1双转基因模型小鼠10只,按随机数字表法平均分为DHM治疗组和对照组。DHM治疗组小鼠腹腔注射DHM 1 mg/(kg·d),对照组小鼠腹腔注射等量经生理盐水稀释的DMSO溶液,连续治疗2周。采用Western blot检测2组小鼠脑内炎症因子TNF-α的表达水平,用免疫荧光染色观察2组小鼠脑内M1、M2型小胶质细胞表型的表达情况。结果与对照组比较,DHM治疗抑制BV2细胞释放TNF-α,减少APP/PS1小鼠脑内炎症因子TNF-α的表达,可明显减少诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的表达水平,增加精氨酸酶1(Arginase-1)的表达。结论 DHM可有效抑制APP/PS1转基因小鼠脑内的炎症反应,其机制可能与DHM促进M1型小胶质细胞向M2型转化有关。     

慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结...     

肠上皮细胞HIF-1α对结肠炎的缓解作用及机制研究

目的研究肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在炎症性肠病中的作用以及对调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的影响。方法采用肠上皮特异性HIF-1α敲除(HIF-1α~(△IEC))小鼠,建立葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的溃疡性结肠炎动物模型(给予3%DSS处理7 d)。结果 DSS条件下,HIF-1α~(△IEC)小鼠遭受更严重的体质量减轻,结肠长度缩短和更高的疾病活动指数。同时,HE染色显示HIF-1α~(△IEC)小鼠结肠破坏更严重。mRNA分析显示促炎因子水平更高。此外,肠炎条件下,敲除鼠体内Tregs上调受到抑制。结论 HIF-1α在诱导产生Tregs和调节肠道炎症中具有重要作用。     

荔枝核总皂苷对脂多糖诱导的神经细胞损伤的影响研究

目的:探讨荔枝核总皂苷(LSS)对脂多糖(LPS)诱导的PC12细胞活力、细胞凋亡率及免疫因子的影响及机制。方法:3. 75、7. 5、15、30、60 mg/L的LSS处理PC12细胞24 h,MTT检测细胞存活率;随机将PC12细胞分为对照组(细胞不做任何处理)、LPS处理组(1 mg/ml的LPS处理PC12细胞24 h)、LSS处理组(3. 75 mg/L的LSS处理细胞24 h后,再用1 mg/ml的LPS处理PC12细胞24 h)。MTT及流式细胞术分别检测细胞存活率及凋亡率; H2DCFHDA荧光探针检测ROS含量;Western blot检测PI3K/AKT信号通路PI3K、p-AKT和下游cycyin D1、Bax及免疫抑制因子HIF-1α和VEGF的蛋白表达。结果:3. 75 mg/L和7. 5 mg/L的LSS对PC12细胞存活率的影响与0 mg/L LSS比较差异无统计学意义(P0. 05),而15 mg/L、30 mg/L和60 mg/L的LSS均能显著降低PC12细胞存活率,与0 mg/L LSS比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。选择3. 75 mg/L的LSS为研究对象;与对照组比较,LPS组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,ROS含量显著升高,PI3K、p-AKT和cycyin D1的蛋白表达显著降低,Bax、HIF-1α和VEGF的蛋白表达显著升高(P0. 05)。与LPS组比较,LSS组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,ROS含量显著降低,PI3K、p-AKT和cycyin D1的蛋白表达显著升高,Bax、HIF-1α和VEGF的蛋白表达显著降低(P0. 05)。结论:LSS可提高PC12细胞存活率,降低细胞凋亡,提高免疫,其机制与激活PI3K/AKT信号、提高细胞ROS水平及抑制HIF-1α和VEGF的表达有关。     

白藜芦醇对铁超载大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的：研究白藜芦醇（RES）对铁超载大鼠肝星状细胞凋亡的影响。方法：体外培养大鼠肝星状细胞细胞系HSC-T6，使用25μmol/L的柠檬酸铁铵（FAC）刺激24 h建立铁超载模型，将细胞分为对照组、铁超载模型组（25μmol/L FAC）、低剂量RES(L-RES)组（3.12μmol/L RES+25μmol/L FAC）、中剂量RES(M-RES)组（6.25μmol/L RES+25μmol/L FAC）、高剂量RES(H-RES)组（12.5μmol/L RES+25μmol/L FAC）和去铁铵（DFO）组（50μmol/L DFO+25μmol/L FAC）。采用CCK-8法测定HSC-T6细胞活力；采用免疫荧光法测定细胞凋亡及活性氧（ROS）水平；通过普鲁士蓝染色观察HSC-T6细胞中铁含量的变化；通过ELISA法测定各组HSC-T6细胞上清液中金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)的表达水平；Western blot法检测HSC-T6细胞中I型胶原蛋白（Col-I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、caspase-3及Bax蛋白的表...     

Cyr61上调人角质形成细胞表达IL-36α的实验研究

银屑病是多种炎症因子参与的慢性炎症性皮肤疾病,其中IL-1家族分子IL-36α与银屑病发生发展密切相关。在基因敲除小鼠研究中发现,当敲除IL-36α基因后,再用咪喹莫特制备小鼠银屑病样模型时,皮损和炎症都明显减轻。我们前期研究发现促炎因子Cyr61/CCN1能通过活化角质细胞、促进趋化因子产生而加剧银屑病发生,但其是否也参与IL-36α表达与调控则未见报道。本研究采用人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes cell line,HaCaT cell)在体外研究Cyr61对IL-36α表达的调控作用。结果发现Cyr61能显著上调HaCaT细胞表达IL-36α,而且呈剂量依赖性。进一步通过siRNA干扰技术下调HaCaT细胞中Cyr61的内源性表达,发现当Cyr61表达受抑制后,IL-36α表达也被有效抑制,表明Cyr61能够介导角质细胞表达IL-36α。已有报道表明TNF-α、IL-17和IL-22能够上调角质细胞表达IL-36α,因此我们还采用TNF-α、IL-17和IL-22特异性siRNA干扰这些炎症因子的内源性表达,观察Cyr61对IL-36α的作用。结果表明这些因子被干扰后并不影响Cyr61对IL-36α表达的影响,说明Cyr61能直接促进IL-36α表达。本研究的结果提示Cyr61/CCN1还可能通过上调IL-1家族分子IL-36α而参与银屑病发生。     

白刺果提取物花色苷通过抑制肝脏纤维化及炎症减轻非酒精性脂肪性肝病

目的:探讨白刺果提取物花色苷对高脂饮食导致的小鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用和潜在机制。方法:高脂饮食建立小鼠非酒精性脂肪肝模型,用花色苷进行干预后,测量小鼠肝脏重量,检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;肝脏组织经过HE染色、油红O染色及Masson染色,观察小鼠组织形态、脂滴沉积和胶原纤维增生的情况;Western blot检测肝脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6及IL-10的水平;免疫组化检测肝脏组织中巨噬细胞、白细胞和单核细胞的浸润情况及肝脏组织趋化因子CCL7和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达。结果:白刺果提取物花色苷能显著抑制由高脂饮食引起的小鼠肝重、ALT、AST、TG、TC及LDL-C的增高;肝脏切片染色显示花色苷能缓解由高脂饮食引起的肝脏纤维化及炎性细胞的浸润;花色苷能降低肝脏中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10及炎性趋化因子CCL7和MCP-1的水平。结论:白刺果提取物花色苷显著缓解由高脂饮食引起的非酒精性脂肪性肝病,其机制主要是通过抑制肝脏中的炎性因子和炎性细胞的浸润并降低炎性趋化因子来实现的。