趋化性细胞因子对人Tc1和Tc2细胞内Ca~(2+)浓度变化的影响

为了探讨趋化性细胞因子在体外对人Tc1和Tc2亚群细胞内Ca2 + 浓度变化的影响 ,从PBMC中分离纯化CD8+ T细胞 ,在特定细胞因子及细胞因子抗体作用下 ,体外定向诱导出能长期培养的Tc1和Tc2细胞系 ,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析对其进行鉴定后 ,通过流式细胞术检测在趋化性细胞因子刺激前后 ,细胞内Ca2 + 浓度的变化。发现受SDF 1作用后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 浓度变化均不明显 ,而IP 10刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平在短时间内明显上调 ,且在Tc1胞内的上升幅度远高于Tc2细胞 ,在MIP 1β刺激后 ,也观察到类似趋势 ;受Eotaxin刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平均有微小上升 ,在Tc2细胞内的上升幅度略高于Tc1细胞。说明Tc1和Tc2细胞受趋化性细胞因子作用后 ,细胞内Ca2 + 浓度有不同程度的变化 ,且与趋化性细胞因子受体的表达呈现一定的相关性。     

抗钠钙交换体特异位点抗体对大鼠单个心室肌细胞钙瞬变的影响

目的:观察抗钠钙交换体(Sodium calcium exchanger,NCX)特异位点124HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145 抗体对正常成年大鼠心室肌细胞钙瞬变的影响。方法:利用Langendorff 灌流方法,分离得到单个大鼠心室肌细胞;负载荧光染料Fura-2/ AM 和2%牛血清白蛋白后,利用离子影像分析系统记录激发光为340 nm 和380 nm 时心室肌细胞成对系列图像,计算钙瞬变峰值(F340/ F380)、细胞钙恢复90%时程(TR90 )以及钙敏感性(F340/ F380 与细胞缩短数值的比值)。结果:抗NCX 特异位点抗体可以增加正常成年大鼠单个心室肌细胞F340/ F380,缩短TR90 ,对钙敏感性无显著影响;尼卡地平和KB-R7943 分别预处理心室肌细胞可以抵消大部分抗体对F340/ F380 和TR90 的增加或缩短效应,联合使用二者预处理心室肌细胞后,该抗体对钙瞬变不再有显著影响。结论:抗NCX 特异位点124 HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145 抗体可以增加心室肌细胞钙瞬变峰值,同时缩短细胞钙恢复时程,这种效应主要与其激动L-型Ca2+通道和NCX 的作用有关。     

血管活性肠肽对人脐静脉内皮细胞Ca~(2+)及其膜通道的调控

目的　观察血管活性肽 (VIP)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)膜上Ca2 + 通道及胞浆内游离Ca2 +([Ca2 + ]i)的调控作用。方法　应用共聚焦激光扫描显微术 (CLSM)和膜片钳单通道记录技术对体外培养HU VEC胞浆内 [Ca2 + ]i、膜上Ca2 + 通道开放情况进行观察。结果　VIP促使HUVEC胞膜上Ca2 + 通过道的开放概率和胞浆内 [Ca2 + ]i 均明显升高。结论　IVP对HUVEC胞浆内 [Ca2 + ]i的调节可能除通过细胞内储存的Ca2 +释放外还依赖细胞膜上Ca2 + 通道开放 ,从而达到其调节效应     

基于钙激活氯离子通道检测胞质内第二信使Ca2+

目的 建立一种基于钙激活氯离子通道（CaCC）可敏感检测胞质内第二信使Ca²⁺的细胞模型。 方法 构建氯离子通道蛋白1（ANO1）和YFP-H148Q/I152 L真核表达载体,应用脂质体转染法构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞,倒置荧光显微镜观察其表达情况,流式细胞仪检测细胞纯度;应用膜片钳技术研究CaCC生理特性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选CaCC调节剂;荧光探针法检测加入CaCC激活剂后胞质内的Ca²⁺浓度。 结果 倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上,YFP-H148Q/I152 L表达于胞质中;该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性;成功构建共表达ANO1和YFP-H148Q/I152 L的FRT细胞模型;该模型可筛选CaCC调节剂,荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系;荧光变化斜率值可反映胞质内Ca²⁺浓度,该模型可敏感检测胞质内Ca²⁺浓度。 结论 此细胞模型可以高效敏感检测胞质内第二信使Ca²⁺浓度,为Ca²⁺信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。     

过氧化氢对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2表达的影响及CaMKⅡ的作用

目的： 探讨过氧化氢（H₂O₂）对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2（COX-2）表达的影响及钙-钙调蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在其中的作用。方法: 采用活细胞计数法(CCK-8法)检测H₂O₂处理肺动脉内皮细胞后的细胞活性，采用RT-PCR检测 COX-2 mRNA的表达水平，采用Western blotting检测COX-2蛋白质的表达水平。结果: H₂O₂增强COX-2表达，呈浓度和时间依赖性。100 μmol/L H₂O₂处理肺动脉内皮细胞4 h，COX-2 mRNA和蛋白质表达水平明显高于正常对照组，COX-2 mRNA水平为正常对照组的256.01%±22.36%（P<0.05），蛋白质水平为正常对照组的216.65%±21.52%（P<0.05）。 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93能抑制H₂O₂的这一效应。结论: H₂O₂可增强肺动脉内皮细胞COX-2基因的表达，CaMKⅡ是H₂O₂增强肺动脉内皮细胞COX-2基因表达的途径之一。     

脑梗塞患者红细胞膜泵活性与血液流变性的相关性研究

目的 :探讨脑梗塞 (CI)病人红细胞膜Na+ K+ ATPase、Ca2 + Mg2 + ATPase与血液流变学指标的相关性。方法 :对 49例非急性期的脑梗塞患者和 2 9例健康人分别测定Na+ K+ ATPase、Ca2 + Mg2 +ATPase、Ox LDL、LDL C、Cho C以及血液流变学指标。结果 :CI组全血粘度、血浆粘度、还原粘度、HCT、EAI、TK与Na+ K+ ATPase、Ca2 + Mg2 + ATPase活力的变化呈明显负相关 ;与Ox LDL、LDL C、Cho C呈明显正相关。结论 :CI患者红细胞膜泵活性的变化能引起血液粘滞性的改变 ,其作用主要是红细胞膜Na+ K+ 泵、Ca2 + 泵的活性降低 ,导致红细胞变形能力下降。     

中药脊髓Ⅰ号对脊髓厚片Ca~(2+)荧光强度的影响

目的　探讨中药脊髓Ⅰ号对脊髓厚片Ca2 + 荧光强度的影响。方法　将 33只Wistar大鼠随机分为 3组 :下胸段脊髓半横断组 (损伤组 )、对照组和中药脊髓Ⅰ号治疗组。快速处死大鼠 ,取下胸段脊髓 ,切脊髓厚片 ,用Fluo 3荧光染料孵育 ,激光共聚焦显微镜观察。结果　损伤组、对照组和中药治疗组左侧Ca2 + 荧光强度分别为 12 6 3± 3 2 7、13 34± 3 5 1和 12 89±3 31,右侧分别为 2 1 6 8± 3 6 9、14 72± 2 12和 12 97± 3 6 0 ,损伤组脊髓厚片损伤侧Ca2 + 荧光强度显著升高 ,治疗组两侧灰质Ca2 + 荧光强度无显著差异。结论　 (1)损伤侧Ca2 + 荧光强度显著升高 ;(2 )中药脊髓Ⅰ号对Ca2 + 荧光强度的升高有一定抑制作用。     

钙库操纵性钙通道在人循环纤维细胞中的表达及功能

 目的: 研究钙库操纵性钙通道(store-operated calcium channels,SOCC)相关功能蛋白ORAI1-3和STIM1-2在人循环纤维细胞(circulating fibrocytes)中的表达及SOCC对人循环纤维细胞分化的影响。方法: 采集健康人外周静脉血,分离出单个核细胞,体外培养分化为循环纤维细胞。采用RT-PCR和real-time PCR检测循环纤维细胞中ORAI1-3及STIM1-2的mRNA表达情况,并检测SOCC抑制剂对循环纤维细胞分化的影响。结果: Real-time PCR检测结果显示ORAI1-3和STIM1-2 mRNA在循环纤维细胞中有较高的表达水平,并且SOCC抑制剂SKF-96365对循环纤维细胞分化具有明显的抑制作用。结论: SOCC表达于循环纤维细胞中,并且影响循环纤维细胞的分化。     

DM2肾病患者血清leptin水平与红细胞ATP酶活性的关系

目的：探讨了2型糖尿病（DM2）肾病患者血清瘦素（leptin）水平与红细胞膜Na＋K＋-ATP酶和Ca2＋Mg2＋-ATP酶活性改变参与DM2肾病发生的可能机制。方法：应用放射免疫分析和Reilni制膜法测定了40例DM2无肾病和32例DM2肾病患者血清leptin水平和红细胞膜Na＋K＋-ATP酶和Ca＋2Mg＋2-ATP酶含量,并与35名正常健康人作比较。结果：DM2无肾病组和肾病组血清leptin水平非常显著地高于正常人组（P〈0.01）和红细胞膜Na＋K＋-ATP酶和Ca2＋Mg2＋-ATP酶水平显著地低于正常人组（P〈0.01）。DM2肾病组与无肾病组亦有显著性差异（P〈0.05）。结论：DM2的发生、发展与血清leptin水平和红细胞膜Na＋K＋-ATP酶和Ca2＋Mg2＋-ATP酶的活性有密切的关系。     

人CaMKKβ蛋白的原核表达、纯化及活性测定

目的对原核体系表达的CaMKKβ蛋白体外活性进行探索,为针对CaMKKβ、AMPK药物研发提供科研基础。方法克隆人CaMKKβ基因,建立原核表达载体pET28a-CaMKKβ,将其转化入E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞内,在16℃、0.02 mmol/L IPTG条件下诱导重组表达CaMKKβ蛋白,Ni-NTA纯化6His-CaMKKβ蛋白,并利用Glo?Max Assay方法检测其活性。结果通过基因测序表明pET28a-CaMKKβ质粒构建成功;重组人CaMKKβ蛋白可溶性表达量较高,Ni-NTA纯化6His-CaMKKβ蛋白纯度可达80%以上,活性检测结果表明,大肠杆菌体系内表达的人CaMKKβ蛋白在CaM/Ca2+存在与否情况下,酶活基本一致。结论成功构建原核表达载体pET28a-CaMKKβ,实现重组人CaMKKβ在原核体系内可溶性表达,活性测定表明原核体系内表达的CaMKKβ自主酶活性较强,受CaM/Ca2+影响较小。     

细胞凋亡中Ca2+稳态失调机制的研究进展

Ca2+是重要的胞内信号传导因子,其稳态失调是细胞凋亡中的一个普遍现象.Ca2+稳态失调机制涉及胞外Ca2+内流,胞内钙库动员,Ca2+空间分布改变,细胞内活性氧及Bcl-2基因的调节等.研究凋亡过程中Ca2+稳态失调的发生机制,有助于阐明凋亡的启动及信号传导机制,为各种凋亡相关疾病的诊治及药物开发提供新的思路.     

突触结合蛋白-1与学习记忆的研究进展

<正>突触结合蛋白-1(synaptotagmin-1,Syt-1)是脑内小突触囊泡和大致密核心囊泡特有的膜内在蛋白质,是在膜融合机制中起重要作用的一个蛋白,可以作为Ca2+感受器调节刺激偶联的快速化学突触传递,对胞吐及递质释放过程皆有影响。本文旨在讨论Syt-1通过调节神经递质释放进而影响到     

脑淋巴引流阻滞对缺血大鼠脑组织谷氨酸、Ca~(2+)含量和NMDAR1表达的影响

目的:探讨脑梗塞后给予大鼠颈淋巴管阻塞对缺血侧大脑皮质脑含水量、Ca2+和谷氨酸含量、脑梗塞体积以及N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)表达水平等的影响。方法:用线栓法复制大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,以及行大鼠大脑中动脉阻塞15min后摘除双侧颌下腺的颈浅和颈深淋巴结,制成脑梗塞后颈淋巴管阻塞(MCAO+CLB)模型,检测缺血侧大脑皮质脑含水量、Ca2+和谷氨酸含量、脑梗塞体积以及NMDAR1mRNA表达水平和免疫活性的变化。结果:在不同的时间点,MCAO+CLB组大鼠上述各指标要比MCAO组明显升高(P0.05)。结论:颈淋巴管阻塞通过提高脑含水量、Ca2+和谷氨酸含量、脑梗塞体积以及上调NMDAR1表达水平而加重脑梗塞。     

人参环氧炔醇对体外培养RSC96细胞的实验观察

目的研究人参环氧炔醇(Panaxydol,PND)对体外培养RSC96细胞神经营养因子及髓鞘蛋白表达的影响并探讨其机制。方法用含不同血清浓度的培养基培养RSC96细胞,MTT检测其增殖能力,以获取最适宜RSC96细胞体外生长的血清浓度。在适宜的血清培养基中加入PND(10μmol/L)处理RSC96细胞,以RT-PCR、western blot及ELISA检测RSC96细胞NGF和BDNF的表达。另外,预先在培养基中加入钙离子通道阻滞剂尼非地平探讨PND可能的作用途径。结果培养基血清浓度为4mmol/L时,RSC96细胞生长形态最接近于原代Schwann细胞。PND增强RSC96细胞表达和释放NGF和BDNF(P0.05)。尼非地平的使用,则削弱了PND对RSC96细胞的作用(P0.05)。结论在适宜的血清培养基中,体外培养的RSC96细胞可替代原代Schwann细胞,作为研究药物对它的影响及机制的细胞模型。PND增强RSC96细胞的生物活性的作用机制可能通过Ca2+信号途径介导。     

可调控Ca2+的IQ基序结构和功能研究概述

IQ基序是与真核细胞内Ca2+调控有关的重要结构域，具有特征性的核心序列和空间构象。它可特异性地募集和结合靶蛋白，后者从属于EF-hand蛋白家族，其中最重要的是钙调素，借此可调控胞内Ca2+浓度变化，从而参与调节细胞Ca2+信号转导途径。IQ基序与靶蛋白的结合受诸多因素和环节的影响，尤其是Ca2+自身浓度变化对其可有反馈效应。目前已发现并报道的含IQ基序的蛋白广泛存在于各类生物体，定位于各级亚细胞结构，调控诸多生理和代谢过程，如肌纤维的收缩与舒张、离子通道状态、酶活性、细胞周期的维持、细胞骨架的组建以及生殖和发育等。对IQ基序的结构特征和生物学功能进行简要阐述，有助于深入研究具有重要功能的含IQ基序的蛋白和探寻新的未知蛋白。     

缺血等因素对大鼠心肌线粒体Ca^2＋转运的影响

本研究检测了体外缺血等因素对心肌线粒体Ca~(2+)转运的影响。结果表明,缺血明显抑制线粒体Ca~(2+)-ATP酶活性及~(45)Ca摄取率。缺血10分钟时,线粒体Ca~(2+)-ATP酶活性开始下降,40分钟时显著降低,~(45)Ca摄取率的变化也呈类似趋势。去甲肾上腺素及cAMP对线粒体Ca~(2+)-ATP酶活性,~(45)Ca摄取率无任何影响。无机磷对线粒体Ca~(2+)-ATP酶有轻微的抑制作用,二磷酸腺苷对谚酶活性有明显抑制作用,其IC_(50)值为2.5mmol/L。     

Mechanisms responsible for quantal Ca2+ release from inositol trisphosphate-sensitive calcium stores

Activation of cells by hormones, growth factors or neurotransmitters leads to an increased production of inositol trisphosphate (InsP₃) and, after activation of the InsP₃ receptor (InsP₃R), to Ca²⁺ release from intracellular Ca²⁺ stores. The release of intracellular Ca²⁺ is characterised by a graded response when submaximal doses of agonists are used. The basic phenomenon, called “quantal Ca²⁺ release”, is that even the maintained presence of a submaximal dose of agonist or of InsP₃ for long time periods (up to 20 min) provokes only a partial release of Ca²⁺. This partial, or quantal, release phenomenon is due to the fact that the initially very rapid InsP₃-induced Ca²⁺ release eventually develops into a much slower release phase. Physiologically, quantal release allows the Ca²⁺ stores to function as increment detectors and to induce local Ca²⁺ responses. The basic mechanism for quantal release of Ca²⁺ is presently not known. Possible mechanisms to explain the quantal behaviour of InsP₃- induced Ca²⁺ release include the presence of InsP₃Rs with varying sensitivities for InsP₃, heterogeneous InsP₃R distribution, intrinsic inactivation of the InsP₃Rs, and regulation of the InsP₃Rs by Ca²⁺ store content. This article reviews critically the evidence for the various mechanisms and evaluates their functional importance. A Ca²⁺-mediated conformational change of the InsP₃R is most likely the key feature of the mechanism for quantal Ca²⁺ release, but the exact mode of operation remains unclear. It should also be pointed out that in intact cells more than one mechanism can be involved.     

Effect of endurance training and acute exercise on sarcoplasmic reticulum function in rat fast- and slow-twitch skeletal muscles

Following 10 weeks of endurance training and in age-matched sedentary rats, sarcoplasmic reticulum (SR) Ca²⁺-uptake, Ca²⁺-release, and Ca²⁺-stimulated adenosinetriphosphatase (ATPase) activity were examined in homogenates of the plantaris and soleus muscles from rats subjected to moderate-intensity treadmill running to exhaustion. In order to examine the effects of acute exercise and/or training on SR Ca²⁺-handling capacity, comparisons between exhausted and non-exercised rats and between trained and untrained rats were performed. Our data confirm that Ca²⁺-sequestration by the SR from fast-twitch muscles is depressed after training. Immediately after exhaustive running, decreases in SR function occurred in both muscles, but were more pronounced in the soleus. In the plantaris, reductions in SR Ca²⁺-uptake rate and Ca²⁺-ATPase activity were observed in untrained rats only, while in the soleus they were adversely affected irrespective of training status. Although the average run time to exhaustion varied markedly between untrained and trained animals (untrained: 253.0 min; trained: 559.4 min), no differences existed with regard to the magnitude of decreases in SR function in the soleus after exercise. The mean rate of decline in SR Ca²⁺-handling capacity during acute exercise, as estimated from the run time and the extent of the decline, was more than twofold higher in untrained than in trained soleus. From the present study, it is unclear whether there exists a causal relationship between muscular fatigue and SR function because the run time to exhaustion was not significantly correlated with any of parameters indicative of SR Ca²⁺-handling capacity, but suggested that endurance training may be capable of delaying a progression of the deterioration in SR function that occurs during exercise. Electronic Publication     

感染性休克大鼠心肌肌浆网摄钙功能的变化

本工作观察大鼠感染性休克不同阶段心肌肌浆网(SR)摄钙功能的改变。结果表明在休克早期心肌SR的钙摄取功能尚无明显变化;SR Ca~(2+)-ATP酶活性抑制和钙摄取量降低出现在感染性休克的晚期阶段,可能是心功能障碍的重要原因。