Sorafenib对前列腺癌DU145细胞的抑制作用的研究

目的 观察索拉非尼(Sorafenib)对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的抑制作用.方法 用不同浓度Sorafenib处理前列腺癌DU145细胞24、48和72 h后,MTT法检测Sorafenib对DU145细胞的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡变化,Western blot检测不同浓度Sorafenib处理72 h后DU145细胞内ERK和Bcl-2的表达.结果 Sorafenib能显著抑制DU145细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性.DU145细胞凋亡率随着Sorafenib剂量的增加而增大,具有良好的量效关系(P<0.01);Sorafenib处理DU145细胞72 h后,ERK和Bcl-2蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论 Sorafenib抑制DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡,可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长.     

Sorafenib通过诱导铁死亡抑制DU145前列腺癌细胞增殖的分子机制

目的研究Sorafenib通过诱导铁死亡来抑制DU145前列腺癌细胞增殖的机制。方法分别用Sorafenib、铁死亡诱导剂RSL3和FIN56以及上述药物联合铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)处理前列腺癌细胞(DU145、PC3),采用MTT法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞内脂质过氧化物含量的改变、Western blotting方法检测铁死亡标志蛋白SLC7A11和GPX4的表达水平。结果 Fer-1可以逆转Sorafenib对DU145前列腺癌细胞的增殖抑制作用,并且能够逆转Sorafenib处理导致的细胞内过氧化物含量增加;Sorafenib处理DU145和PC3细胞,细胞SLC7A11蛋白水平下调,但GPX4蛋白表达不变。结论 Sorafenib可作为铁死亡诱导剂抑制DU145细胞增殖,其机制可能是通过下调SLC7A11表达诱导细胞发生铁死亡。     

MicroRNA-212在前列腺癌中的表达和功能研究

目的检测microRNA-212在前列腺癌组织和细胞株中的表达情况并研究其与前列腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的关系。方法检测前列腺癌标本及细胞系中microRNA-212的表达情况。在DU145和PC3转染microRNA-212 mimics、microRNA-212 inhibitor或者NC阴性对照物,通过MTT、Transwell、流式细胞仪检测其相关生物学情况。结果前列腺癌组织中的microRNA-212表达显著低于癌旁组织。前列腺癌细胞系中microRNA-212较正常前列腺上皮细胞系的表达低。microRNA-212的表达与Gleason评分、脉管侵犯和淋巴结转移密切相关。MTT实验和Transwell实验表明,转染了microRNA-212 mimics的DU145和PC3细胞,其增殖率降低,microRNA-212的上调抑制了DU145和PC3细胞的迁移和侵袭能力。转染了microRNA-212 inhibitor的DU145和PC3细胞则表现出较强的增殖、迁移和侵袭能力。流式细胞仪分析结果表明,转染了microRNA-212 mimics的DU145和PC3细胞的凋亡显著增加,转染了microRNA-212 inhibitor的DU145和PC3细胞凋亡受到抑制。结论前列腺癌组织中microRNA-212表达显著下降,microRNA-212的表达与Gleason评分、脉管侵犯和淋巴结转移密切相关,microRNA-212能够抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭并促进前列腺癌细胞凋亡。     

唾液酸酶1活性变化对前列腺癌PC3和DU145细胞行为的影响

目的:探讨唾液酸酶1(Neu1)活性变化在两种前列腺癌细胞PC3和DU145中对肿瘤生物学行为的影响。方法:通过Western印迹检测Neu1在PC3和DU145肿瘤细胞中的表达,并通过唾液酸酶抑制剂和抗体封闭的方法抑制Neu1酶活性后,运用CCK-8检测细胞增殖和Transwell检测细胞侵袭性改变。结果:实验结果显示Neu1在两种前列腺癌细胞中表达无明显差异,抑制Neu1酶活性后,两种肿瘤细胞的增殖均有所增加,侵袭能力增强。结论:Neu1活性与两种前列腺癌细胞的细胞生物学行为相关,可抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭。     

长链非编码RNA Linc00662促进前列腺癌细胞生长的研究

目的:探讨Linc00662在前列腺癌的表达情况及对前列腺癌细胞生物学功能的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对60例前列腺癌患者的前列腺癌组织标本以及正常前列腺上皮细胞(WPMY-1细胞)和前列腺癌细胞系(DU145、PC-3、LNCaP和22RV1)检测Linc00662的表达,并分析前列腺癌组织中Linc00662表达与患者临床病理特征的相关性。应用RNA干扰(siRNA)转染PC-3和DU145细胞,qRT-PCR验证干扰效率。通过CCK-8、Caspase 3/9活性测定、划痕试验、Transwell侵袭试验分别检测干扰Linc00662的表达对前列腺癌PC-3和DU145细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果:与邻近及正常组织前列腺上皮细胞相比,Linc00662在前列腺癌组织和细胞系的表达呈显著上调(P0.01)。Linc00662的高表达与肿瘤分期(P=0.002)、原发灶大小(P=0.006)、淋巴结转移(P=0.001)及远处转移(P=0.001)呈正相关。si-Linc00662转染PC-3和DU145细胞后,Linc00662的表达明显下降(P0.01)。与对照组相比, Linc00662干扰组在PC-3和DU145细胞中的增殖、侵袭及迁移能力均明显下降(P0.01),而凋亡增加(P0.01)。结论:Linc00662在前列腺癌组织及细胞中呈相对高表达,敲低Linc00662的表达可抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进其凋亡,可作为前列腺癌新的标志物。     

前列腺癌DU145细胞增殖和克隆形成与延伸因子1α基因表达的关系

目的 探讨延伸因子1α(EF-1α)基因表达与前列腺癌细胞株DU145细胞增殖、克隆形成等功能的关系. 方法 DU145细胞株分3组:对照组(未转染siRNA),转染对照组(转染随机siRNA)和实验组(转染EF-1α-siRNA).应用RNA干扰技术特异性调低DU145细胞株EF-1α蛋白质水平,并通过蛋白质印迹法验证.应用体外细胞功能分析技术,比较EF-1α蛋白质水平调低后DU145细胞增殖、克隆形成能力的变化和差异. 结果 应用RNA干扰技术实现了特异性调低前列腺癌细胞株DU145中EF-1α的水平.转染随机siRNA不影响DU145细胞中EF-1α蛋白质水平.调低DU145细胞EF-1α蛋白质水平后,实验组DU145细胞第4～7天增殖率较对照组下降45.9%、53.5%、35.3%和38.1%(P<0.05).实验组DU145细胞形成克隆数较对照组减少67.0%(P<0.01). 结论 调低EF-1α表达水平对前列腺癌细胞增殖、克隆形成等肿瘤相关生物学行为产生负面影响.EF-1α基因在前列腺癌靶向治疗中可能成为适当的靶基因.     

Zeste增强子同源物2在前列腺癌中的表达及对前列腺癌细胞生物学功能机制研究

目的观察Zeste增强子同源物2(EZH2)在前列腺癌中表达情况和在体外对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响, 并探究作用机制。方法通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析EZH2在前列腺癌组织和前列腺增生组织中表达差异和预后关系。DU145细胞来源于上海中国科学院细胞库。对DU145细胞进行小干扰RNA(siRNA) EZH2沉默, 并通过蛋白质印迹法(Western blot)和RT-qPCR检测干扰效率。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell实验检测EZH2对DU145生物学行为的改变。通过Western blot检测EZH2与p21相关性。结果前列腺癌组EZH2的信使RNA(messenger RNA, mRNA)表达高于正常前列腺组织, 且EZH2表达水平和Glesaon分级正相关。前列腺癌细胞系DU145、PC3组中EZH2的mRNAs和蛋白水平表达高于WPMY-1细胞组, 且在DU145中表达高于PC-3。CCK-8实验结果显示, si-EZH2组增殖能力显著低于于Control组(t=4.17, P<0.05);Transwell实验结果表明, si-E...     

薄荷醇抑制前列腺癌DU145细胞的增殖和迁移

目的探讨薄荷醇对雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖和迁移能力的影响。方法通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法检测TRPM8和TRPA1的表达;MTT和划痕试验检测薄荷醇对DU145细胞的增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测TRPM8对DU145细胞周期和凋亡的影响。结果 RT-PCR、免疫组织化学和Western blot提示TRPM8在DU145细胞中高表达而TRPA1在DU145细胞中不表达;薄荷醇能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与未经薄荷醇处理的细胞相比,经100μmol/L薄荷醇处理的细胞培养24、48和72h后,G0/G1期细胞显著增加(49.12%±1.92%vs61.71%±2.70%、77.65%±1.63%、71.81%±2.46%,P<0.05,P<0.01),进而抑制细胞增殖(P<0.05),并抑制细胞迁移(P<0.05),流式细胞术检测显示薄荷醇并不引起细胞凋亡。结论 TRPM8可能成为前列腺癌治疗的一个新靶点,对于高表达TRPM8的雄激素非依赖性前列腺癌针对TRPM8通道的药物治疗可能比TRPM8基因治疗更为实用,因此,薄荷醇作为一个潜在的抗肿瘤药物也拥有很大的发展前景。     

雷公藤内酯醇抑制人前列腺癌DU145细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 观察雷公藤内酯醇(TP)对人雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 以不同浓度的雷公藤内酯醇作用于体外培养的DU145细胞不同的时间,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的情况,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化.结果 20 ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml TP作用DU145细胞24h、48h、72h后对DU145细胞均有抑制作用,各组间有显著差异(P＜0.05);24h、48h、72h IC50分别为117.95 ng/ml、47.60 ng/ml、14.43 ng/ml,TP作用DU145细胞72min后,DU145细胞被阻滞于S期,并且随浓度的加大,阻滞效果越显著;凋亡率逐渐增加.结论 TP能抑制DU145细胞的增殖,阻滞DU145细胞于S期,诱导DU145细胞调亡.     

miR-155表达对人前列腺癌DU145细胞增殖及细胞周期的影响

目的 检测前列腺癌组织及细胞中微小RNA-155(miR-155)的表达水平,探讨其对前列腺癌细胞增殖与细胞周期的影响.方法 采用qRT-PCR检测前列腺癌组织及细胞中miR-155的表达水平;上调miR-155或加入miR-155抑制剂,体外细胞功能实验检测miR-155对前列腺癌细胞株DU145细胞增殖能力和细胞周...     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的：研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法 ：采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中（分别为过表达组和抑制剂组）,并设置miR阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果：与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达（P<0.05）,而HOXB4在骨肉瘤中高表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞...     

TXNDC9在结肠直肠癌组织中的表达及其影响

目的:探讨TXNDC9基因在结肠直肠癌组织和细胞中的表达,以及沉默TXNDC9高表达后对细胞株SW1116增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:分别应用免疫组织化学技术、免疫印迹法观察TXNDC9在结肠直肠癌组织和细胞中的表达水平:应用小干扰RNA瞬时转染TXNDC9高表达的结肠癌细胞株SW1116,用实时PCR筛选最高效率的干扰片段,并用Western印迹法检测基因沉默效果:最后研究瞬时转染后SW1116细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果:结肠直肠癌组织中TXNDC9的表达明显高于对照的癌旁正常组织(P<0.01),细胞迁移和侵袭能力亦有明显下降(P<0.01)。结论:TXNDC9在结肠直肠癌组织中的表达显著高于癌旁正常黏膜上皮,并与肿瘤的大小和浸润深度相关,SW1116是TXNDC9基因高表达的细胞株之一,下调TXNDC9表达能显著抑制该细胞的增殖能力、细胞迁移和侵袭能力。TXNDC9基因对维持肿瘤细胞的增殖和运动能力有重要作用,并可能成为抑制肿瘤生长和转移的有效途径。     

Prognostic factors for bladder cancer

Cancer of the urinary bladder is the fifth most common cancer in men and the second most urological malignancy in Western society [17], with an incidence rate per year of 29.8/100 000 males. Bladder tumors are distinguished as either invasive or superficial: invasive tumors are generally associated with poor prognosis, while 20–30% of superficial carcinomas recur and progress to become invasive and metastatic [26, 27]. The most common prognostic factors for classification of urothelial cancer are staging and grading, which are based on morphological criteria. In the past decade, however, other criteria have been developed as a possible prognostic aid to better disease management, such as expression of specific cell surface antigens, DNA content, chromosomal aberrations, gene rearrangements and point mutations [26, 7]. Since most tumors of the bladder are carcinomas and are associated with dedifferentiation and high metastatic capability, we investigated whether reduced expression of socalled differentiation factors in combination with increased cell motility might be correlated with tumor progression.     

破骨细胞形成过程中的融合与分裂

 目的 研究破骨细胞的形成及其特殊细胞生物学行为。方法 采用活细胞成像技术连续动态观察大鼠周围血单核细胞在核因子κB 受体激活物配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子 (macrophage colony stimulating factor,M-CSF)诱导下向破骨细胞分化及形成具有骨吸收功能的多核细胞的全过程。采用倒置相差显微镜观察、抗酒石酸酸性磷酸酶染色、骨磨片扫描电镜观察法对破骨细胞进行鉴定。结果 细胞诱导培养2周后,倒置相差显微镜观察可见大量多核细胞形成;抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示绝大部分多核细胞与单核细胞均呈阳性反应;骨磨片扫描电镜观察可见较多的骨吸收陷窝、坑洼、沟道及破骨细胞。活细胞成像观察表明多核破骨细胞是由单核细胞、单核细胞与多核细胞及多核细胞之间相互融合而成,其细胞间的融合均发生在贴壁状态;显微缩时电影观察显示破骨细胞形态复杂多变,多核破骨细胞可以发生分裂。结论 大鼠周围血单核细胞在RANKL和M-CSF诱导下可向破骨细胞分化,形成具有骨吸收功能的破骨细胞。破骨细胞能够通过多种方式融合形成巨大的多核细胞,使其核数增加、体积增大、形态伸缩多变、质膜贴附面积广泛扩展,同时破骨细胞还可通过分裂来缩小体积、减少核数,以适应局部形态学、生物力学及骨吸收动力学的需求。这提示破骨细胞的融合及非有丝分裂方式可能是其发挥功能效应与骨吸收效率的一种特殊细胞生物学行为。     

断层皮片成纤维细胞原代培养法

目的在人成纤维细胞的生物学特性观察研究中,进行成纤维细胞的原代培养,以获得足够量的成纤维细胞.方法我们采用整形外科断层取皮技术,使用细胞刮刀,可相对简单获取有活力的成纤维细胞,并应用台盼蓝细胞活力染色排除法进行检测.结果该方法简单、经济可获取足够量的成纤维细胞,使得短期内即可获得大量的传代细胞.1 cm×2 cm的断层皮片可达到的细胞的数量级106左右.结论断层皮片成纤维细胞培养方法,较胰酶消化法和组织块贴壁法有明显的优越性,在进行成纤维细胞移植方面,值得加以推广和应用.     

成体小鼠肝脏卵圆细胞的分离及培养

目的:建立一种稳定的成体小鼠卵圆细胞的分离和培养方法。方法:采用喂饲2-乙酰氨基芴（AAF）加2/3肝切除方法诱导肝脏卵圆细胞的增殖。经门静脉灌注消化法和等密度离心法分离卵圆细胞，并在体外进行长期培养。免疫荧光和免疫双标法对培养的卵圆细胞加以鉴定。结果:体外培养的卵圆细胞呈集落样生长，稳定传代并已培养至3个月。免疫荧光和免疫双标法证实培养的细胞为卵圆细胞，并显示该细胞具有分化潜能。结论:该方法是一种稳定的成体小鼠卵圆细胞的分离和培养方法，为肝脏干细胞的相关研究和应用奠定基础。     

强骨宝方对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:探讨不同浓度强骨宝方提取液直接添加对体外培养成骨细胞增殖、分化与矿化功能的影响。方法:采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从2只1~2日龄SD乳鼠颅盖骨中分离出成骨细胞,鉴定细胞并传代培养后,分为对照组与4个实验组,实验组分别用终浓度为100、50、10、5μg/ml的强骨宝方提取液加入成骨细胞培养体系,对照组用不含强骨宝方提取液的培养基培养,应用MTT比色法、ALP含量测定、矿化结节形成等分别观察其对成骨细胞增殖、分化及矿化能力的影响。结果:100、50及10μg/ml浓度的强骨宝方提取液均具有促进体外成骨细胞增殖、分化与矿化的作用,以100μg/ml与50μg/ml促进作用最强。结论:每毫升含生药2g的强骨宝方提取液,pH=7.0,50μg/ml的添加浓度可能最适合于体外培养成骨细胞的增殖、分化及矿化成骨能力。     

低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响

目的 探讨低氧/复氧后星形胶质细胞对永生化神经前体细胞增殖与分化的影响.方法 24 h内新生SD大鼠,断头处死,分离、培养和传代星形胶质细胞,取本室构建的永生化神经前体细胞,根据培养条件的不同分为3组,每组24孔,对照组永生化神经前体细胞在正常培养条件下培养(O2 17%-CO2 5%-N2 78%);共培养组取第三代星形胶质细胞孵育24 h后接种永生化神经前体细胞,培养条件同对照组;低氧/复氧后共培养组取第三代星形胶质细胞,先置入低氧培养箱(O2 2%-CO25%-N2 93%)中孵育12 h后,恢复正常培养条件12 h,再接种永生化神经前体细胞.3组以相同密度接种永生化神经前体细胞(1×104/cm2),隔天半量置换培养基,培养时间为6 d.共培养6 d后每组取6孔,采用免疫荧光细胞化学法,观察共培养后永生化神经前体细胞的增殖与分化情况,计算其增殖倍数、神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率.结果 与对照组和共培养组相比,低氧/复氧后共培养组永生化神经前体细胞增殖倍数升高(P＜0.05),神经元阳性率和星形胶质细胞阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低氧/复氧后星形胶质细胞可促进永生化神经前体细胞增殖,但对其分化无影响.     

Vero cell growth and differentiation on poly(L-lactic acid) membranes of different pore diameters

In the last few years, the demand has increased for research on polymeric materials, which can be used as substitutes for injured tissues and organs or to improve their regeneration. In this work, we studied poly(L-lactic acid) (PLLA) membranes, a resorbable biomaterial, which were either dense or had different pore diameters (less than 45 microm, between 180 and 250 microm, and between 250 and 350 microm), in relation to stimulation of cell adhesion, growth, and differentiation in vitro. We used Vero cells, a fibroblastic cell line, as the biological model of investigation. We found that cells attached slowly to all PLLA membranes studied. On the other hand, once the adhesion occurs, the cells are able to grow and differentiate on the different polymers. The cells grew to form a confluent monolayer and were capable of producing collagen Type IV and fibronectin on different PLLA membranes. This behavior indicates that cells try to create a better environment to stimulate their growth. This also indicates that Vero cells alter their differentiation pattern once they are producing extracellular matrix molecules related to epithelial differentiation.     

紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量及功能变化

目的 探讨紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的数量及功能特点.方法 选取法洛四联症及单纯室间隔缺损病人各10例,采用Ficoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞,用添加牛脑垂体提取物和胎牛血清的M199培基进行体外诱导分化培养.用免疫组化和透射电镜行EPC表型鉴定;采用流式细胞仪计数CD133+/KDR+细胞;采用改良的Boyden小室,黏附能力测定实验和MTT比色法,观察EPC的迁移、黏附及增殖能力.结果 紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞的数量增多[集落记数(14.7±3.1)/100倍视野对(8.2±1.3)/100倍视野;DiIAcldl+/UEA-Ⅰ+细胞数(72.2±9.73)/200倍视野对(51.2±3.83)/200倍视野;CD133+/KDR+细胞百分比(0.66±0.20)%对(0.18±0.08)%,P＜0.01],其迁移能力[(140.6±9.24)/200倍视野对(91.84±8.58)/200倍视野]、黏附能力[(149.00±11.58)/200倍视野对(112.6±7.02),200倍视野]及增殖能力(OD值0.34±0.02对0.27±0.01)增强(P＜0.01).结论 紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量增多,其迁移、黏附及增殖能力增强.