舒芬太尼调节AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用

目的 探究舒芬太尼对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用及对AMP激活的蛋白激酶（AMPK）/沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)信号通路的调节机制。方法 将SPF级Wistar大鼠90只，随机分为假手术组、模型组、AMPK激活剂AICAR组、SUF低、高剂量组、SUF高剂量+AMPK抑制剂组。评估神经功能缺损评分；TTC染色法检测脑梗死情况；HE染色观察海马组织形态学变化；TUNEL法检测海马组织细胞凋亡率；ELISA测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脑源性神经营养因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）水平；Western blot检测海马神经元AMPK、p-AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果 与假手术组相比，模型组大鼠海马组织可见细胞紊乱、坏死、肿胀等损伤，神经功能缺损评分、脑梗死面积、凋亡率、TNF-α水平均升高，BDNF、NGF水平及p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC-1α表达降低；与模型组相比，AICAR组和SUF低、高剂量组大鼠海马组织水肿等损伤减轻，神经功能缺损评分、脑梗死...     

miR-29c通过下调TNFR1信号通路减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤

目的：探讨微小RNA-29c(microRNA-29c,miR-29c)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤效应的影响及机制。方法：构建慢病毒（lentivirus,LV）介导的过表达/低表达miR-29c的小鼠海马神经元HT22,分为空载体细胞株（LV-vector）组、LV-vector+TNF-α组、miR-29c过表达细胞株（LV-miR-29c）+TNF-α组和miR-29c低表达细胞株（LV-miR-29c sponge）+TNF-α组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放实验评价TNF-α对HT22细胞的毒性作用;免疫荧光染色观察肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)的表达;RT-qPCR检测miR-29c和TNFR1 mRNA的表达;Western blot检测TNFR1、TNFR相关死亡域蛋白（TNFR-associated death domain protein,TRADD）、Fa...     

PARP-1抑制剂通过激活SIRT1-PGC-1α轴减轻慢性阻塞性肺疾病大鼠的炎症和氧化应激反应

目的：通过构建慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠实验模型，探讨聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂是否通过调控沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)减轻COPD大鼠的炎症和氧化应激反应，探究SIRT1-PGC-1α轴作为PARP-1抑制剂作用新靶点的可能性。方法：将48只SD大鼠随机选取12只作为健康组，剩余大鼠构建COPD实验模型，将造模成功的大鼠随机分为模型组、PARP-1抑制剂处理组、PARP-1抑制剂+PGC-1α抑制剂组，HE染色观察肺组织病理形态变化，ELISA检测大鼠肺组织TNF-α、IL-6、IL-1β、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，荧光定量PCR法检测各组大鼠SIRT1、PGC-1α mRNA表达水平，Western blot检测SIRT1、PGC-1α蛋白表达。结果：健康组大鼠肺组织结构完整，与健康组相比，模型组大鼠肺组织产生结构损伤，有大量炎症细胞浸润，肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著升高，血清中MDA含量显著升高，SOD含量显著降低，SIRT1、PGC-...     

miR-495调控MAPK/ERK信号通路对大鼠脊髓损伤后神经元自噬的影响北大核心CSCD

目的:探究微小RNA-495(miR-495)调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经元自噬的影响。方法:按每组10只随机将50只SD大鼠分为假手术组、SCI组、agomir-NC组、miR-495 agomir组、miR-495 agomir+Anisomycin组(p38-MAPK特异性激活剂Anisomycin),击打T10段脊髓构建SCI模型,将agomirNC、miR-495 agomir、Anisomycin于造模前3 d(20 nmol/d)注入相应组大鼠脊髓T10段蛛网膜下腔,假手术组、SCI组注射等量生理盐水;qRT-PCR检测脊髓组织中miR-495的表达;运动功能BBB评分评估神经功能恢复情况;HE染色、吖啶橙染色分别观察大鼠脊髓组织病理学情况及神经元自噬;ELISA法检测脊髓组织中炎症因子表达;Western blot检测脊髓组织中自噬及MAPK/ERK通路蛋白表达。结果:与假手术组相比,SCI组大鼠miR-495表达、BBB评分显著降低,脊髓组织病理学程度、自噬小体数目、TNF-α、IL-1β、IL-6、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p-ERK1/2/ERK1/2和p-c-fos/c-fos水平显著增加(P<0.05);与SCI组相比,miR-495 agomir组miR-495表达、BBB评分显著升高,脊髓组织病理学程度、自噬小体数目、TNF-α、IL-1β、IL-6、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p-ERK1/2/ERK1/2和p-c-fos/c-fos水平显著降低(P<0.05);Anisomycin可逆转miR-495 agomir对大鼠SCI后神经元自噬的抑制作用。结论:miR-495过表达可能通过抑制MAPK/ERK信号通路激活来抑制大鼠SCI后神经元自噬。     

海马注射miR-181c对CCI模型大鼠机械痛和NF-L表达的影响

目的:在坐骨神经缩窄性损伤(CCI)大鼠海马背侧CA1区给予miR-181c激动剂及抑制剂,观察大鼠机械痛阈以及海马神经微丝轻链多肽(NF-L)表达变化.方法:雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、CCI组+生理盐水组、CCI+miR-181c激动剂组和CCI+miR-181c抑制剂组.在术前和术后第1、3、5、7、1...     

创伤性脑损伤激活miR-124-3p/Notch通路促进大鼠神经干细胞增殖和分化

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠伤侧海马区微小RNA-124-3p(miR-124-3p)的表达变化,探讨miR-124-3p对大鼠TBI后神经再生的影响。方法将健康雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、 TBI组、 miR-124-3p激动剂(miR-124-3p agomir)组与miR-124-3p抑制剂(miR-124-3p antagomir)组,后3组大鼠应用控制性皮层撞击(CCI)法建立TBI模型。创伤后, miR-124-3p agomir组与miR-124-3p antagomir组通过由创伤对侧侧脑室分别注射miR-124-3p agomir或miR-124-3p antagomir各1 nmoL,假手术组和TBI组注入等量溶剂。造模后12 h、 1 d、 3 d、 7 d,实时定量PCR检测大鼠伤侧海马区组织miR-124-3p的表达, Western blot法检测Delta样分子1(DLL1)的表达水平,免疫荧光组织化学染色检测海马组织5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、神经元核抗原(NeuN)、神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-124-3p与DLL1之间的靶向结合作用。结果与假手术组相比, TBI组大鼠海马区miR-124-3p和DLL1的表达均显著升高;与TBI组比较, miR-124-3p agomir组miR-124-3p的表达量明显升高、 DLL1表达量明显减少, miR-124-3p antagomir组miR-124-3p表达量明显降低, DLL1表达量则明显升高。创伤后7 d, TBI大鼠海马组织BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量明显多于假手术组, miR-124-3p agomir处理增加BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量, miR-124-3p antagomir处理则减少BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量。生物信息学分析证实DLL1为miR-124-3p的靶基因。结论创伤区miR-124-3p的高表达可靶向抑制DLL1蛋白表达,促进神经干细胞增殖和分化。     

人参皂苷Rg1对癫痫大鼠海马神经元损伤和小胶质细胞活化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对癫痫大鼠海马神经元损伤和小胶质细胞活化的影响及其作用机制。方法 SD大鼠分为对照组(control组)、癫痫模型组(model组)、人参皂苷Rg1低剂量组(Rg1-L组)和人参皂苷剂量组(Rg1-H组),采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制备癫痫大鼠模型;记录各组大鼠行为学发作情况;ELISA检测各组大鼠海马组织的氧化应激水平;qRT-PCR检测各组海马组织中炎症因子的表达;HE染色观察各组大鼠海马神经元结构和病理形态变化;免疫荧光组织化学染色检测各组大鼠小胶质细胞中iNOS、Arg-1蛋白表达。结果 model组大鼠症状达到Ⅲ级及Ⅲ级以上较control组显著增加,人参皂苷Rg1使大鼠的癫痫症状得到改善;与control组相比,model组大鼠海马组织中MDA(P<0.001)、TNF-αm RNA(P<0.001)、IL-1βmRNA(P<0.001)的表达水平上调,SOD(P<0.001)、IL-10 m RNA(P<0.001)的表达水平下调,而人参皂苷Rg1使大鼠海马组织中MDA(P<0.05)、TNF-αm RNA(P<0.05)、IL-1βmRNA(P<0.05)的表达水平下调,SOD(P<0.05)、IL-10 mRNA(P<0.05)的表达水平上调;model组大鼠海马神经元形态不完整,细胞间间隙增大和排列紊乱,人参皂苷Rg1组大鼠海马神经元形态明显改变,可见细胞排列较规则,大部分细胞形态正常;model组大鼠海马神经元凋亡率显著上升(P<0.001),人参皂苷Rg1组使大鼠海马神经元凋亡率下降(P<0.05);与control组相比,model组大鼠小胶质细胞数量显著增加(P<0.001),iNOS蛋白的表达显著升高(P<0.001),Arg-1蛋白表达显著降低(P<0.001),与model组相比,人参皂苷Rg1组大鼠小胶质细胞数量减少(P<0.05),iNOS蛋白的表达降低(P<0.05),Arg-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1降低癫痫大鼠海马组织中iNOS蛋白的表达,增加Arg-1蛋白的表达,抑制小胶质细胞的激活,减轻氧化应激和炎症因子的表达,降低癫痫大鼠发作的等级。     

miR-155通过靶向SIRT1减轻脓毒症导致的急性肺损伤

目的 探讨miR-155对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的影响及可能机制方法 60只大鼠分为对照组(Control组)、ALI、ALI+miR-NC及ALI+miR-155模拟物(mimics)组,每组15只。LPS诱导建立幼龄大鼠ALI模型。HE染色观察大鼠肺组织病理变化,计算大鼠肺组织W/D值,TUNEL法检测细胞凋亡率,ELISA法检测IL-6和TNF-α水平,Western blot检测SIRT1蛋白表达,RT-PCR检测肺组织中miR-155、沉默信息调节因子2相关酶1(silencing information regulator 2-associated enzyme 1,SIRT1)mRNA表达,生物信息预测miR-155与SIRT1的靶向作用关系,荧光素酶实验验证。结果 与Control组比较,ALI组大鼠肺W/D值、细胞凋亡率及外周血IL-6和TNF-α水平升高,出现明显的病理性改变,同时组织内miR-155、SIRT1-mRNA,SIRT1蛋白水平降低(P<0.05...     

橙皮素通过调控SIRT1/PGC-1α信号通路保护急性心肌梗死大鼠

目的:探究橙皮素是否通过调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)通路调节急性心肌梗死(AMI)大鼠的氧化应激反应。方法:将SD雄性大鼠随机分成:假手术组、模型组、橙皮素(30 mg/kg)组和橙皮素(30 mg/kg)+抑制剂(SIRT1抑制剂)组,每组12只。除假手术组外,其余各组采用冠状动脉左前降支(LAD)结扎术构建AMI大鼠模型。小型动物超声系统检测大鼠心脏功能;ELISA法检测大鼠血清中炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;试剂盒检测大鼠血清中氧化应激指标总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平;HE染色察心肌组织病理变化;TU-NEL法检测心肌组织细胞凋亡;Western blot法检测心肌组织中SIRT1/PGC-1α通路相关蛋白表达水平。结果:假手术组大鼠心肌细胞排列规则、清晰,未见明显变性;模型组大鼠部分心肌纤维排列明显紊乱,大量炎症细胞浸润;橙皮素组大鼠与模型组相比,心肌纤维排列较规则,炎症细胞浸润较轻,整体形态较为清晰;橙皮素+抑制剂组病变程度明显重于橙皮素组。与假手术组相比,模型组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室射血分数(LVEF)、SOD和GSH-Px及SIRT1和PGC-1α蛋白水平显著降低(P0.05),左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、MDA、IL-6、TNF-α及心肌细胞凋亡率显著升高(P0.05);与模型组相比,橙皮素组大鼠LVFS、LVEF和SOD和GSH-Px及SIRT1和PGC-1α蛋白水平显著升高(P0.05),LVESD、LVEDD、MDA、IL-6、TNF-α及心肌细胞凋亡率显著降低(P0.05);与橙皮素组相比,橙皮素+抑制剂组大鼠LVFS、LVEF、SOD和GSH-Px及SIRT1和PGC-1α蛋白水平显著降低(P0.05),LVESD、LVEDD、MDA、IL-6、TNF-α及心肌细胞凋亡率显著升高(P0.05)。结论:橙皮素可通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路,抑制AMI大鼠氧化应激反应,从而发挥心脏保护作用。     

miR-140-5p靶向HMGB1/IκB-α轴对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)miR-140-5p通过靶向调节高迁移率族蛋白1(HMGB1)/核因子κB抑制蛋白α(IκB-α)轴对糖尿病大鼠视网膜病变的影响。方法 将糖尿病大鼠随机分为模型组、miR-140-5p激动剂(miR-140-5p agomir)组、激动剂阴性对照(agomir-NC)组，10只/组，另取10只正常大鼠作为对照组。分离血清及视网膜组织，RT-qPCR检测血清和视网膜组织miR-140-5p、HMGB1 mRNA表达水平；HE染色检测病理学变化；ELISA检测血清单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量；TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡；双荧光素酶报告基因实验检测miR-140-5p、HMGB1的靶向关系；Western blot检测视网膜组织HMGB1、IκB-α、NF-κB p65蛋白表达。结果 HMGB1为miR-140-5p的靶基因。模型组、agomir-NC组MCP-1、TNF-ɑ、ICAM-1含量、HMGB1、NF-κB p65表达、凋亡细胞及组织损伤较对照组增加，miR-140...     

海马注射miR-181c对CCI模型大鼠热痛的影响

目的:观察大鼠海马CA1区注射miR-18Ic激动剂/抑制剂对坐骨神经缩窄性损伤(CCI)大鼠热痛及海马炎症因子和转录因子表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠随机分为6组,分别是假手术组(Sham)、CCI模型组(CCI)、CCI+miR-181c激动剂阴性对照组、CCI+miR-181c抑制剂阴性对照组、CCI+miR-181c激动剂组和CCI+miR-I8le抑制剂组。在术前1 d,术后第1、3、5、7 d测定热缩足潜伏期(TWL)。连续7 d给药后取海马,real time RT-PCR、ELISA及Western Blot检测TLR4、炎症因子(TNF-α和IL-1β)和转录因子(CTCF和Nrt2)表达。结果:与Sham组相比,CCI组大鼠TWL缩短(P<0.05),海马miR-18Ic表达下降(P<0.05),TLR4.TNF-a和IL-1βmRNA表达上调(P<0.05),IL-1β和TNF-α含量增多(P<0.05);与CCI组相比,注射miR-181c激动剂后CCI大鼠TWL延长(P<0.05),海马miR-181c表达上调(P<0.05),而TLR4、TNF-α和IL-IβmRNA表达下降(P<0.05),IL-1β和TNF-c含量下降(P<0.05);注射miR-181c抑制剂则TWL降低(P<0.05),CCI大鼠海马miR-18lc表达进一步下降(P<0.05),TLR4、TNF-α和IL-IβmRNA表达进一步上升(P<0.05),IL-1β和TNF-α含量上升(P<0.05)。与Sham组相比,CCI组海马CTCF表达下降,Nrf2在胞核表达上升(P<0.05)。结论:海马注射miR-181c激动剂减轻CCI大鼠热痛敏可能是由于miR-181e下调TLR4和TNF-α表达导致。CCI大鼠海马miR-181e表达下调可能与CTCF低表达有关。     

辛伐他汀对糖尿病脑病大鼠认知功能障碍的影响及其机制研究

目的 探讨辛伐他汀糖尿病脑病大鼠认知功能的改善作用及可能机制。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病脑病大鼠模型，选取模型制备成功的大鼠随机分为模型组与辛伐他汀组(20 mg/kg),每组8只，另取同龄8只SD大鼠作为对照组，连续灌胃5周。测定大鼠空腹血糖水平；Morris水迷宫测定大鼠认知功能；HE染色观察大鼠脑组织海马病理损伤；Nissl染色观察大鼠海马神经元；ELISA检测大鼠脑组织白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平；Western blot检测大鼠脑组织中SIRT1、NLRP3、Caspase-1、ASC及IL-18蛋白表达。结果 与模型组相比，辛伐他汀组大鼠空腹血糖水平显著降低，认知功能显著改善，海马区病理性损伤减轻，海马尼氏体数量增加，IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低，SIRT1蛋白表达水平升高，而NLRP3、Caspase-1、ASC及IL-18蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 辛伐他汀可通过调控SIRT1/NLRP3通路改善糖尿病脑病大鼠认知功能。     

丙泊酚调节SIRT1/HMGB1/NF-κB信号通路对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠神经元损伤的影响

目的 探讨丙泊酚调节信息调节因子相关酶1(SIRT1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对缺血缺氧性脑损伤（HIBD）新生大鼠神经元损伤的影响。方法 取SD新生大鼠通过Rice-Vannucci法构建缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型，随机分为：模型组、丙泊酚低剂量组（5 mg/kg）、丙泊酚高剂量组（10 mg/kg）、EX527组（5 mg/kg）、丙泊酚高剂量（10 mg/kg）+EX527(5 mg/kg)组，每组15只，另取15只新生大鼠设为假手术组，以丙泊酚和EX527分组干预后，跳台实验检测大鼠认知功能；检测大鼠脑含水量；尼氏染色检测各组大鼠海马神经元数量；透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构；使用试剂盒检测各组大鼠血清和脑组织炎性介质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）及氧化应激因子总抗氧化能力（TAC）、丙二醛（MDA）水平；免疫印记法检测各组大鼠脑组织SIRT1/HMGB1/NF-κB通路相关表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠海马神经元超微结构发生严重损伤，跳台潜伏期、海马神经元数量、血清和脑组织T...     

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的：探讨延龄草总皂苷（TST）对卒中后认知障碍（PSCI）大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法：将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型（model）组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐（DON; 0.45 mg/kg）组，另设假手术（sham）组，每组10只，连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力；TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化，HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化；免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果：与sham组相比，model组大鼠逃避潜伏期显著延长，穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少（P<0.01）；大鼠脑梗死体积显著增大，神经元尼氏小体数量显著减少，凋亡细胞显著增多；海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白...     

基于miR-155 / SOCS1 轴研究复方甘草酸苷治疗特应性皮炎小鼠的作用 机制

目的:基于miR-155/SOCS1轴研究复方甘草酸苷治疗特应性皮炎(AD)小鼠的作用机制。方法:BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、miR-155 agomir组、miR-155 agomir阴性对照组、复方甘草酸苷组、复方甘草酸苷+miR-155 agomir组。除对照组外,其余各组小鼠采用耳背涂布卡泊三醇(MC903)溶液法建立AD小鼠模型。观察各组小鼠耳部临床特征并进行皮炎评分;HE检测各组小鼠耳组织病理情况;ELISA检测各组小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IgE水平,qRT-PCR法检测各组小鼠耳部出现组织中miR-155、SOCS1 mRNA水平;Western blot检测各组小鼠耳部组织中SOCS1蛋白表达。结果:与对照组比,模型组小鼠耳部出现明显红斑、充血红肿、耳组织表皮层增生、棘细胞层变厚、毛细血管扩张、组织水肿充血、大量炎症细胞浸润等症状,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平升高(P0.05),SOCS1 mRNA及蛋白水平降低(P0.05)。与模型组相比,miR-155 agomir组小鼠上述症状加重,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平升高(P0.05),SOCS1 mRNA和蛋白表达降低(P0.05);miR-155 agomir阴性对照组小鼠各指标差异无统计学意义(P0.05);复方甘草酸苷组小鼠上述症状减轻,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平降低(P0.05),SOCS1 mRNA和蛋白表达升高(P0.05)。与miR-155 agomir组相比,复方甘草酸苷+miR-155 agomir组小鼠上述症状减轻,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平降低(P0.05),SOCS1 mRNA和蛋白表达升高(P0.05)。与复方甘草酸苷组相比,复方甘草酸苷+miR-155 agomir组小鼠上述病理症状加重,耳部皮炎评分、血清IgE及TNF-α、IL-6水平、组织miR-155水平升高(P0.05),SOCS1 mRNA和蛋白表达降低(P0.05)。结论:复方甘草酸苷可通过下调miR-155表达、上调SOCS1表达减轻AD小鼠炎症反应。     

MicroRNA-34a靶向SIRT1参与阿霉素诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其作用靶基因。方法:建立阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡模型;TUNEL染色观察H9c2细胞凋亡;双萤光素酶报告实验检测miR-34a与潜在靶基因沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR检测miR-34a和SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1和凋亡相关蛋白表达水平。结果:阿霉素处理H9c2细胞之后,细胞发生凋亡,miR-34a的表达显著增强;双萤光素酶报告实验提示miR-34a与SIRT1 3'UTR可相互作用,并证实miR-34a可在转录后水平抑制SIRT1的表达,SIRT1蛋白水平在阿霉素处理的心肌细胞中显著下调;过表达miR-34a及沉默SIRT1均能一致性抑制Bcl-2表达,促进Bax和p66shc的表达,而过表达SIRT1能有效抑制阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡。结论:SIRT1是miR-34a的靶基因,并介导了miR-34a在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用。     

虾青素预处理通过调控Sirt1/miR-134信号通路改善脑缺血再灌注大鼠认知功能

目的:探究虾青素(ATX)预处理是否通过调控沉默信息调节因子1(Sirt1)/微小RNA-134(miR-134)信号通路影响脑缺血再灌注(CI/R)大鼠认知功能。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(CI/R组)、ATX低剂量(50 mg/kg)组(ATX-L组)、ATX高剂量(100 mg/kg)组(ATX-H组)和ATX(100 mg/kg)+Sirt1抑制剂EX527(10 mg/kg)组(ATX+EX527组),每组12只。分组完成后给予相应的药物进行预处理,每天1次,连续3 d。末次给药1 h后,建立CI/R大鼠模型。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能缺损评分,并采用Morris水迷宫实验检测大鼠的认知功能;HE染色观察海马神经元损伤;TUNEL染色检测海马神经元凋亡;免疫组化法检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)的表达;RT-qPCR检测海马组织miR-134水平及Sirt1、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和BDNF mRNA表达;Western blot检测海马组织Sirt1、CREB和BDNF蛋白表达。结果:与sham组相比,CI/R组大鼠神经功能缺损评分、海马神经元凋亡率、miR-134水平和逃避潜伏期均增加,空间探索实验中在目标象限停留时间和穿越平台次数、Sirt1和BDNF的mRNA和蛋白表达、CREB的mRNA表达及p-CREB/CREB比值降低(P0.05),海马神经元数量减少;与CI/R组相比,ATX-L组和ATX-H组大鼠神经功能缺损评分、海马神经元凋亡率、miR-134水平和逃避潜伏期均降低(P0.05),在目标象限停留时间和穿越平台次数、Sirt1和BDNF的mRNA和蛋白表达、CREB的mRNA表达及p-CREB/CREB比值升高(P0.05),海马神经元数量增加;在ATX干预的基础上使用EX527可明显上调miR-134的表达,减弱ATX对CI/R后大鼠认知功能的改善作用和对CREB/BDNF信号通路的激活作用。结论:ATX预处理可能通过调控Sirt1/miR-134信号通路,激活CREB/BDNF信号通路,进而改善CI/R后大鼠的认知功能。     

MiR-139-3p通过靶向下调TRPV1缓解大鼠神经病理性疼痛

目的:研究miR-139-3p在大鼠神经病理性疼痛发生发展中的作用及其作用机制。方法:将大鼠随机分为假手术组(sham)、坐骨神经慢性压迫损伤模型组(chronic constriction injury group,CCI)、2 mg/kg miR-139-3p模拟物(mimic)鞘内注射组、4 mg/kg miR-139-3p mimic鞘内注射组。术后的第14 d,Real-time PCR法检测大鼠背根神经节(DRG)中miR-139-3p及TRPV1的表达。于注射前及注射后的第1、3、7、14 d,利用von Frey检测大鼠机械性痛阈及热辐射法检测大鼠热痛阈值。Western Blot法检测DRG中TRPV1的表达;ELISA法检测脊髓L4-L5组织中TNF-α及IL-1β的含量;双荧光素酶报告基因法检测miR-139-3p与TRPV1的靶向关系。结果:(1)与sham组相比较,miR-139-3p在CCI大鼠DRG中的表达显著下降,而TRPV1的表达显著上升(P0.05)。(2)与sham组相比较,CCI组中大鼠机械刺激缩足反射阈值及热刺激缩足反射潜伏期显著下降(P0.05);而与CCI组相比较,鞘内注射miR-139-3p mimic可显著促进大鼠机械刺激缩足反射阈值及热刺激缩足反射潜伏期的上升,抑制TRPV1的表达(P0.05)。(3)与sham组相比较,CCI组大鼠TNF-α及IL-1β含量显著上升(P0.05);而与CCI组相比较,鞘内注射miR-139-3p mimic可显著抑制TNF-α及IL-1β的产生(P0.05)。(4)miR-139-3p mimic转染可显著降低荧光素酶报告基因的荧光强度。结论:miR-139-3p通过靶向下调TRPV1的表达缓解大鼠神经病理性疼痛。     

糖肾方对糖尿病肝损伤和肝组织中SIRT1和PGC-1α表达的影响

目的:观察糖肾方对糖尿病(DM)肝损伤的作用及其对肝组织沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)表达的影响。方法:采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为DM模型组及糖肾方低、中、高剂量组,另设正常对照组。糖肾方给药12周后检测空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;放射免疫法检测血清胰岛素(FINS)的水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);ELISA技术检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1(IL-1)含量;羟胺法和TBA法分别测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;Western blot技术测定SIRT1和PGC-1α蛋白的表达;HE染色和Masson染色法检测肝组织病理变化。结果:与正常对照组相比,DM模型组血清FBG、TG、ALT、AST、FINS、HOMA-IR、TNF-α和IL-1均明显升高(P0.01);肝组织MDA含量升高,SOD活性及SIRT1和PGC-1α蛋白表达降低(P0.01);病理结果显示肝细胞呈明显脂肪变,局灶性坏死伴炎细胞浸润,门管区和小叶间可见胶原纤维增生。与DM模型组比较,糖肾方各治疗组FBG、TG、FINS、HOMA-IR、ALT和AST均明显降低(P0.05);肝脏组织损伤、炎症和纤维化程度明显改善;肝组织MDA水平降低,SOD活性及SIRT1和PGC-1α蛋白表达升高(P0.05)。结论:糖肾方可能通过促进SIRT1和PGC-1α蛋白表达来改善胰岛素抵抗和氧化应激,从而减轻糖尿病肝损伤。     

miR-143靶向TREM1调控免疫因子白介素-6/10对克罗恩病模型肠黏膜HT-29细胞增殖的影响机制北大核心CSCD

目的探讨miR-143靶向TREM1调控免疫因子IL-6、IL-10对克罗恩病模型肠黏膜HT-29细胞增殖的影响及其机制。方法采用LPS刺激HT-29细胞建立克罗恩病(Crohn′s disease,CD)肠黏膜细胞炎症反应模型,将模型细胞分为agomir NC组、antagomir NC组、miR-143 agomir组和miR-143 antagomir组,通过ELISA、Western blot、qRT-PCR实验检测各组细胞炎性因子、细胞活力、细胞凋亡及TREM1表达水平,探究miR-143对模型细胞炎症反应、细胞凋亡的影响及miR-143与TREM1的靶向关系;并通过生物信息学数据库和双荧光素酶基因报告实验对miR-143和TREM1靶向关系进行验证。结果与正常组比较,模型组细胞IL-6表达水平显著升高(P<0.01),而IL-10表达水平显著下降(P<0.01),提示CD细胞模型建立成功;与agomir NC组相比,miR-143 agomir能显著降低促炎因子IL-6水平(P<0.01)、增加抗炎因子IL-10水平(P<0.01),增加模型细胞活力,降低细胞凋亡;同时,miR-143 agomir能显著下调CD模型细胞中TREM 1的蛋白和mRNA表达水平(P<0.01)。双荧光素酶基因报告实验证实miR-143与TREM1的靶向结合作用。结论miR-143可靶向抑制TREM1减少IL-6的分泌和增加IL-10的分泌,并抑制肠黏膜细胞的凋亡,从而缓解CD中肠黏膜的损伤。