大黄酸通过抑制NF-κB通路促进DLBCL细胞OCI-LY8凋亡

目的:探讨大黄酸对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)OCI-LY8细胞凋亡的影响,并探究其作用的相关机制。方法:通过MTS实验和小鼠抑瘤实验观察大黄酸对DLBCL细胞生长的作用;流式细胞术结合Hoechst 33342染色证实大黄酸对DLBCL细胞凋亡的影响;采用qPCR和Western blot探究大黄酸对DLBCL细胞内相关基因转录和翻译的作用,分析其作用的分子机制。结果:体外和体内实验均证实大黄酸对DLBCL的发生和发展有抑制作用,它可抑制OCI-LY8细胞的活力,下调细胞内Rip2、Bcl-xL、NIK、NF-κB(p52和p65)和IκBα的mRNA和蛋白表达,促进caspase-3表达,诱导OCI-LY8细胞凋亡。结论:大黄酸通过影响DLBCL细胞OCI-LY8的NF-κB经典和非经典信号通路促进细胞凋亡,抑制DLBCL的发生和发展,可作为DLBCL的潜在治疗药物。     

TNFAIP3 siRNA对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-LY1细胞NF-κB活性及增殖的影响

目的探讨A20(TNFAIP3)基因对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞生长的影响及其与细胞内核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活化的关系。方法采用RNA干扰技术沉默A20,设计3条针对人A20mRNA的siRNA序列,经过lipofectamine RNAiMAX转染至OCI-LY1细胞(DLBCL细胞),用RT-PCR技术检测转染后OCI-LY1细胞内A20 mRNA的表达,用Western blot法检测A20和NF-κB(p65)蛋白的表达。用MTT法检测A20基因沉默后OCI-LY1细胞体外生长活力变化。结果 (1)siRNA转染组A20 mRNA及编码蛋白表达较未转染组及阴性对照组明显降低(P0.05);(2)转染组p65蛋白的表达较未转染组和阴性对照组明显增高(P0.05);(3)转染组细胞较未转染组、阴性对照组的OCI-LY1细胞体外生长活力明显增强。三组siRNA序列中siRNA-2序列干扰效果最明显。结论 DLBCL细胞中A20基因沉默会导致NF-κB活性增强,从而增强淋巴瘤细胞的生长活力。     

microRNA-191在弥漫大B细胞淋巴瘤患者中的表达及其作用机制研究

目的分析miR-191在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中的表达与临床病理特征的关系,观察miR-191对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LY10增殖、侵袭能力的影响。方法采用荧光实时定量PCR方法检测86例DLBCL患者肿瘤组织和22例正常淋巴结组织中miR-191的表达,分析miR-191表达水平与患者临床病理特征的关系。对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LY10进行miR-191反义核苷酸(ASO)转染并培养,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,实时PCR方法与Western blot方法检测细转染miR-191ASO后各组细胞PLCD1的m RNA和蛋白的表达。结果 DLBCL患者淋巴结组织中miR-191表达水平显著高于对照组,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。miR-191在DLBCL患者中的表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),但是与疾病分期显著相关(P<0.05)。与对照组相比,miR-191 ASO组OCI-LYl0细胞的增殖侵袭能力明显降低,PLCD1蛋白与mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论 miR-191在DLBCL中表达上调,其促进OCI-LY10细胞增殖侵袭的作用机制可能与下调PLCD1蛋白表达有关。     

IL-6和AG490对移植裸鼠的弥漫大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤生长的影响

目的:观察STAT3通路对移植裸鼠弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)和伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)的作用。方法:建立OCI-LY8细胞(DLBCL)和Raji细胞(BL)裸鼠移植瘤模型,并分别将其分为对照组、IL-6组和AG490组,测量裸鼠体重和肿瘤体积;应用Western blot和免疫组织化学检测移植瘤组织中p-STAT3、survivin及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的水平;real-time PCR检测瘤组织中survivin和VEGF的mRNA表达。结果:2种细胞株总成瘤率为83.3%(25/30),其中OCI-LY8细胞成瘤率为66.7%(10/15),低于Raji细胞成瘤率100%(15/15)(P0.05)。DLBCL和BL荷瘤鼠IL-6组在第9和10天裸鼠体重和总瘤体积较对照组均增加,2种移植瘤的IL-6组中第1天与第10天瘤体积总差值均明显大于对照组(P0.05)。pSTAT3阳性信号定位于细胞核;survivin和VEGF以细胞浆表达为阳性。与对照组相比,DLBCL移植瘤IL-6组survivin和VEGF明显升高(P0.05),p-STAT3无显著变化;AG490组p-STAT3及VEGF明显降低(P0.05),survivin无显著变化;在BL移植瘤IL-6组,p-STAT3和VEGF蛋白与相应对照相比均显著升高(P0.05),在AG490处理组中3种蛋白均明显降低(P0.05)。IL-6组和AG490组中survivin和VEGF的mRNA表达与对照组相比差异无统计学显著性。结论:IL-6和AG490可能通过STAT3通路影响DLBCL和BL的生长,STAT3通路活化可能通过调控VEGF和survivin表达而影响肿瘤的发生发展。     

长春新碱降低由转染A20 siRNA促进的弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系增殖

目的研究A20小分子干扰RNA片段(siRNA)对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(OCI-LY1)增殖和多药耐药基因(MDR1)表达的影响。方法分对照组、转染组、长春新碱干预组(VCR)组和转染+VCR组。用脂质体转染法将A20 siRNA转入OCI-LY1细胞,MTT法检测细胞对VCR的敏感性;流式细胞计量术检测细胞凋亡;用real-time PCR检测A20及MDR1 mRNA;用Western blot检测细胞内A20、Pgp蛋白及核蛋白NF-κB的表达。结果 1)A20 siRNA转染后,细胞增殖能力增强(P0.05),VCR刺激后转染细胞的增殖曲线下降缓慢。2)转染细胞凋亡率明显低于对照组,VCR刺激24 h后OCI-LY1细胞凋亡率较加药前明显增加(P0.05),VCR组凋亡率比转染+VCR组增高的幅度大(P0.05)。3)转染后,A20 mRNA及蛋白表达明显降低(P0.001),NF-κB蛋白(P0.001)、MDR1mRNA(P0.001)和Pgp(P0.001)表达都明显增高;但MDR1 mRNA和Pgp在药物刺激后表达降低(P0.05),且VCR组较转染+VCR组降低的幅度大(P0.01)。结论 A20 siRNA能有效的增强OCI-LY1细胞内NF-κB的表达,使得MDR1基因及编码蛋白Pgp蛋白增强,从而抑制细胞凋亡、促进细胞增殖;VCR刺激后细胞内MDR1 mRNA和Pgp的表达明显降低,A20 siRNA则减弱了VCR的这一作用。     

microRNA-224在弥漫大B细胞淋巴瘤的表达及作用

目的研究miR-224在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中的表达与临床病理特征的关系,观察miR-224对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LY10增殖、侵袭能力的影响。方法收集86例DLBCL组织,并以22份无肿瘤细胞侵犯的正常淋巴结组织标本为对照,采用real-time PCR方法检测miR-224的相对表达水平,分析miR-224表达水平与患者临床病理特征的关系。对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LYl0进行miR-224反义寡核苷酸(ASO)转染并培养,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,real-time PCR方法与Western blot方法检测细胞中bcl-2的表达水平。结果DLBCL患者淋巴瘤中miR-224表达水平显著低于正常淋巴结组织(P0.05),miR-224在DLBCL患者中的表达与患者年龄、性别、疾病分期均无相关性(P0.05)。miR-224ASO明显升高OCI-LYl0细胞的增殖侵袭能力,显著升高bcl-2蛋白与m RNA表达水平(P0.05)。结论miR-224抑制OCI-LY10细胞增殖侵袭可能与下调bcl-2蛋白表达相关。     

外周血纯真、记忆性CD8~+T细胞数量与中国HIV/AIDS患者疾病进程的相关性研究

目的:研究不同疾病进展阶段的中国HIV/AIDS患者外周血CD8+T细胞亚群的数量变化,以探讨各亚群与HIV感染疾病进展的相关性。方法:首先应用多参数(CD45RA、CCR7、CD28)流式细胞术圈定幼稚(nave)CD8+T细胞和记忆性(memory)CD8+T细胞(包括TCM、TEM-1及TEM-2),随后测定58例不同疾病进展阶段HIV/AIDS患者和20例健康对照者外周血各CD8+T细胞亚群的绝对数量和占CD8+T细胞的百分比,分析其与病毒载量、CD4+T细胞数量的相关性。结果:HIV/AIDS患者与健康对照相比,nave CD8+T细胞百分比和绝对值均显著减少,memory CD8+T细胞百分比和绝对值均显著升高(P0.05)。在memoryCD8+T细胞各亚群中,效应型(effector memory T cells,TEM)-1百分比显著升高(P0.05)。HIV感染缓慢进展(slow progressor,SP)组、HIV组及AIDS组中,nave CD8+T细胞百分比和绝对值均依次下降,AIDS组、HIV组显著低于SP组(P0.05),memory CD8+T细胞绝对值依次下降,各组间的下降均有显著性差异(P0.05)。在memory CD8+T细胞各亚群中,TEM-1百分比依次升高,AIDS组显著高于SP组(P0.05);TEM-2百分比及绝对值依次下降,AIDS组显著低于SP组(P0.05)。相关性分析发现,nave CD8+T细胞与CD4+T细胞显著正相关(P0.01),与HIV病毒载量显著负相关(P0.01);中央型(central memory T cells,TCM)和TEM-2型memory CD8+T细胞与CD4+T细胞显著正相关(P0.01)。结论:Nave、memory CD8+T细胞数量与HIV疾病进展显著相关。     

AP2M1抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭

目的 探究接头相关蛋白质复合体2亚基μ1(AP2M1)对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖和侵袭的调控作用。方法 将人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系OCI-LY8分为对照组、NC-LV组、AP2M1-LV组。用Lipofectamine 2000进行细胞转染。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测AP2M1、表皮生长因子受体(EGFR)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和p-蛋白质激酶B(AKT)蛋白表达。结果 与对照组相比,AP2M1-shRNA组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均降低(P<0.05),相对细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数量均升高(P<0.05);EGFR的蛋白相对表达量及PI3K和AKT的磷酸化水平均升高(P<0.05)。与对照组相比,AP2M1-LV组细胞中AP2M1的mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),相对细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P...     

CHOP方案治疗前后外周T细胞淋巴瘤患者外周血CD45RA~+ T和CD45RO~+ T的变化特点

目的:探讨CHOP方案对外周T细胞淋巴瘤(PTCL)患者外周血中初始和记忆T细胞水平的变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测20例PTCL患者CHOP方案化疗前后外周血中CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T细胞的比例,分析疗效与T细胞亚群的关系。结果:PTCL患者化疗前外周血中CD4+T细胞、CD4+CD45RO+细胞的比例明显降低,CD4+CD45RA+、CD8+、CD8+CD45RO+和CD8+CD45RA+T细胞的比例均明显升高(P<0.05),而化疗后PTCL患者CD4+、CD4+CD45RO+细胞的比例较治疗前升高,CD4+CD45RA+、CD8+、CD8+CD45RO+和CD8+CD45RA+T细胞比例则较治疗前稍下降(P<0.05)。治疗前后化疗有效组的CD4+CD45RA+均明显高于化疗无效组(P<0.05)。结论:CHOP治疗对PTCL患者胸腺输出功能有一定的影响,伴有较高胸腺输出功能者对化疗效果更好。     

类风湿关节炎小鼠关节浸润的T细胞克隆型分析

目的 :对一种自发性类风湿关节炎 (RA)小鼠 (SKG小鼠 )四肢足关节浸润的T细胞克隆型进行分析 ,以了解T细胞克隆型与RA的关系。方法 :采用RT PCR与单链构象多态性分析 (SSCP)相结合的方法。结果 :在SKG小鼠的四肢足关节Vβ2和Vβ8 2T细胞克隆型的一致率比较高 (分别为 6 8 1%和 5 9 2 % ) ,并且在被检测的所有小鼠的四肢足关节中都具有一致的Vβ2和Vβ8 2克隆型 (10 0 % )。DNA测序表明在SSCP中显示的来源于不同关节样品的共同的DNA带是相同的T细胞克隆型。T细胞转移试验表明关节聚集的T细胞克隆与RA的病变形成有关。结论 :TCR为Vβ2和Vβ8 2的T细胞可能在SKG小鼠的RA中具有重要作用。     

骨髓增生异常综合征患者先天性免疫细胞数量和功能分析

目的:检测骨髓增生异常综合征(Myelodysplatic syndrome,MDS)患者先天性免疫细胞数量并分析其功能变化.方法:采用流式细胞仪检测了97例MDS病人的免疫功能.健康对照34名.结果:Refractory Anemia (RA)和Refractory Anemia with Excess Blasts (RAEB)患者的CD3- (CD16 CD56)+(NK)细胞百分率与正常对照组无明显差异.RAEB患者的CD56+细胞中颗粒酶和穿孔素的百分率均较正常对照组明显升高(P＜0.05),而RA患者与正常对照组相比无明显差异.RA和RAEB患者的CD3+CD56+细胞百分率均显著高于正常对照组(P＜0.001);Vα24+CD161+NKT细胞在RA患者中的表达明显增加(P＜0.05),RAEB患者无明显变化(P＞0.05);Vα 24+CD161-细胞在RA患者CD4+、CD8+细胞中的表达明显减少(P＜0.05);而CD4-CD8- NKT细胞与对照组比无明显差异;RAEB患者Vα24+细胞的表达与正常对照组无明显差异.γδT细胞在RAEB患者CD4-CD8-细胞中的表达较正常对照组明显减少(P＜0.05).结论:MDS患者可能存在明显的免疫功能紊乱.     

肺癌患者血管内皮生长因子和T细胞亚群表达的变化

测定和比较83例肺癌患者与60名正常人血清血管内皮生长因子(VEGF)和T细胞亚群(CD3 、CD4 、CD8 、CD8 CD28 )和NK细胞的表达水平,探讨其临床意义,VEGF采用ELISA法,T细胞亚群的表达采用流式细胞仪法。结果表明:肺癌患者VEGF水平明显高于对照组(P<0.01)。CD4 细胞、CD8 CD28 细胞和NK细胞明显低于对照组(P<0.01)。CD8 细胞则明显高于对照组(P<0.01)。提示肺癌患者血清VEGF增高和细胞免疫功能紊乱,有一定的临床意义。     

白细胞介素8参与CD133^+肝癌细胞的侵袭与转移北大核心

背景:白细胞介素8是一种重要的炎性趋化因子,其在调节肿瘤细胞增殖、血管新生方面发挥了重要作用。目的:探讨白细胞介素8对CD133^+肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法:分离培养人肝癌MHCC97-H细胞株,免疫磁珠分选出CD133^+/CD133-MHCC97-H细胞,流式细胞仪检测CD133表达,ELISA检测上清液白细胞介素8水平。克隆形成实验、裸鼠成瘤实验、Transwell小室分别检测CD133^+/CD133-MHCC97-H细胞克隆形成率、小鼠成瘤能力、细胞迁移侵袭能力。另外,采用白细胞介素8中和抗体处理细胞,比较CD133^+/CD133-MHCC97-H细胞CD133表达、上清液中白细胞介素8水平及细胞克隆形成能力和迁移、侵袭能力。结果与结论:(1)CD133^+MHCC97-H细胞的CD133表达率、上清液白细胞介素8水平及克隆形成率均显著大于CD133-MHCC97-H细胞(P<0.05);(2)细胞浓度为1×10~6 L^(-1)和1×10~7 L^(-1)的CD133^+MHCC97-H细胞接种后有部分小鼠出现皮下移植瘤,但CD133-MHCC97-H细胞在同样细胞浓度下,均未出现皮下移植瘤;(3)CD133^+MHCC97-H细胞的透膜细胞数量均显著大于CD133-MHCC97-H细胞(P<0.05);(4)经白细胞介素8中和抗体处理之后,CD133^+/CD133-MHCC97-H细胞的CD133表达率、上清液中白细胞介素8水平、克隆形成率均显著下降(P<0.05),且CD133^+MHCC97-H细胞下降程度更大(P<0.01);CD133^+MHCC97-H细胞的迁移、侵袭透膜细胞数显著减少(P<0.05),CD133-MHCC97-H细胞则未出现明显的改变(P>0.05);(5)结果表明,白细胞介素8可以特异性参与调节CD133^+MHCC97-H细胞侵袭、转移能力。     

DC-CIK细胞协同索拉菲尼对肝癌细胞的杀伤作用

目的:观察DC-CIK共培养细胞(DC-CIK)联合索拉菲尼( sorafenib)对肝癌细胞BEL-7402的体外杀伤效应.方法:取健康人外周血单个核细胞,加入不同细胞因子促进DC及CIK细胞成熟后混合共培养.MTT法检测用药后BEL-7402细胞增殖的情况CCK8试剂盒检测DC-CIK共培养细胞联合索拉菲尼对BEL...     

两次随访的康复期SARS患者T细胞亚群及其相关活化分子的研究

目的 :探讨康复期SARS患者外周血T细胞亚群及其相关活化分子的变化。方法 ::对出院后的SARS患者 ,采用统一调查问卷及实验室检测进行随访研究。两次随访中 ,应用流式细胞仪检测了我院 70余例经中西医结合治疗的康复期SARS患者外周血中CD3 、CD4 、CD8 、CD8 CD2 8 、CD8 CD2 8-、CD3 CD2 5 、CD3 CD6 9 、CD3 HLA DR T细胞的百分率及CD4 /CD8 T细胞的比率的改变 ,并以描述性分析及t检验进行比较分析。结果 :两次随访中 ,CD3 、CD4 和CD8 CD2 8 T细胞的百分率 (均值 )及CD4 /CD8 T细胞的比率 ,均明显低于正常值 (P <0 .0 5 ) ,而CD8 CD2 8-T细胞的百分率则显著增高 (P <0 .0 1)。第 2次随访中 ,检测的CD3 、CD8 、CD3 CD2 5 、CD3 CD6 9 及CD3 HLA DR T细胞的百分率 (均值 ) ,及CD4 /CD8 T细胞的比率 ,与第 1次的相比较差异较显著 (P <0 .0 1) ,其余项目差异均不明显。结论 :随着康复期的延长 ,患者的免疫功能逐渐恢复 ,病毒对T细胞活化的影响逐渐减少。     

DC-CIK细胞体外抗淋巴瘤细胞的免疫效应研究

目的:探讨共培养树突状细胞(Dendritic cell,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cell,CIK),即产生的DC-CIK细胞抗淋巴瘤免疫效应的机制。方法:分离健康人外周血单个核细胞,分别于体外诱导DC和CIK,然后共培养成DC-CIK细胞。分四组:DC组、DC-T组、CIK组和DC-CIK组。对各组分别进行免疫机制研究:测定细胞因子IL-12、IL-17和IFN-γ的分泌量、检测细胞免疫表型和分析对人淋巴瘤细胞株杀伤活性。结果:在DC-CIK组,细胞因子IL-12、IL-17和IFN-γ的分泌量均明显高于其它三组(P0.05);杀伤活性亦较其它组增强(P0.05)。CD8+、CD3+/CD56+细胞在DC-CIK组亦明显增加(P0.05)。结论:DC-CIK细胞抗淋巴瘤免疫效应与分泌大量的细胞因子和产生细胞毒性细胞有关。     

舟山眼镜蛇细胞毒素1对K562细胞的抑制作用

目的: 研究舟山眼镜蛇细胞毒素1(CTX1)对人慢性粒细胞白血病细胞系K562的抑制作用。方法: 应用MTS方法和细胞计数法分别检测不同浓度CTX1作用K562后的细胞相对活力和细胞数;PI染色后用倒置荧光显微镜观察活细胞培养体系中K562细胞死亡情况;流式细胞术检测Annexin V-FITC和PI双染色后细胞凋亡情况。结果: 不同浓度的CTX1(2、5、10 mg/L)作用于K562细胞24 h,细胞相对活力分别为(90.50±3.07)%、(58.33±3.08)%和(27.43±1.99)%(与阴性对照组相比,下同,P<0.05),作用24 h时CTX1对K562细胞的半数抑制浓度为5.77 mg/L。CTX1(8 mg/L)作用于K562 6 h、12 h、24 h,细胞数分别占对照组的(85.01±3.54)%、(56.65±3.59)%和(43.24±4.15)%,P<0.05。随CTX1浓度增加和作用时间延长,荧光显微镜下观察到被PI染色的细胞数逐渐增多。CTX1(8 mg/L)作用于K562细胞6 h、12 h、24 h,细胞坏死率分别为(0.73±0.06)%、(13.90±0.46)%和(23.33±0.86)%;晚期凋亡率分别为(16.27±0.21)%、(26.90±1.23)%和(18.77±0.81)%。结论: CTX1对K562细胞有明显抑制作用,主要引起K562细胞晚期凋亡和坏死。     

Th1、Th2样细胞因子对CD158+细胞比率的调节作用

目的:观察Th1、Th2样细胞因子对外周血CD158+细胞比率的调节作用,为寻找干细胞移植免疫耐受的方法提供论理依据。方法:将Th1样细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2样细胞因子(IL-4、IL-6),单独或联合与人外周血单个核细胞(PBMC)培养72h,用流式细胞法分析总CD158a+、CD158b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+ CD56+细胞亚群中CD158a+、CD158b+细胞的比率。结果:①细胞因子对CD3+、CD4+、CD8+细胞及CD16+ CD56+细胞的影响:IL-2和IFN-γ均可增加上述细胞的百分率(P<0.05),但IL-2的作用大于IFN-γ(P<0.05)。IL-2+IFN-γ联合处理的效应高于IFN-γ单独处理(P<0.05)。IL-4+IL-6可降低上述细胞的百分率(P<0.05)。IL-2+IL-4对上述细胞百分率的影响,高于IL-4(P<0.05)但低于IL-2(P<0.05)。②细胞因子对CD158a+/b+细胞的影响:IL-2可增加总的CD158a+/b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+ CD56+细胞中的CD158a+/b+细胞的百分比率(P<0.05);IL-2+IFN-γ可增加CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05),但与IL-2单独处理无明显区别,IL-4+IL-6可降低CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05)。IL-2+IL-4可增加总的CD158a+/b+细胞及各亚群中CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05),但低于IL-2单独处理(P<0.05)。结论:IL-2有促进CD158基因表达或使CD158a+、CD158b+     

肺结核患者外周血CD4~+和CD8~+记忆性T细胞亚群、IL-17、IL-27表达的初步探讨

目的:探讨肺结核患者外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞亚群及白细胞介素17(Interleukin-17,IL-17),IL-27的表达。方法:采用流式细胞术检测肺结核患者组外周血CD4+和CD8+记忆性T细胞,患者组按治疗史分为初治组,复治组;按痰涂片抗酸染色分为痰涂阳性组,痰涂阴性组。初治组8例为凡既往未用过抗结核药物治疗或用药时间少于一个月的新发病例;复治组22例为凡既往应用抗结核药物一个月以上的新发病例、复发病例、初治治疗失败病例等;痰涂阳组9例为痰涂片抗酸染色阳性;痰涂阴组21例为痰涂片抗酸染色阴性。ELISA法检测IL-17,IL-27。结果:①与健康对照组比较:患者组CD4+效应型记忆性T细胞均显著增高(P<0.05),初治组与涂阴组CD8+效应型记忆性T细胞均显著降低(P<0.05),复治组IL-17显著降低(P<0.05),而IL-27显著增高(P<0.05)。②与初治组比较:复治组CD4+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05),而CD8+效应型记忆性T细胞显著增高(P<0.05),IL-17显著降低(P<0.05),IL-27显著增高(P<0.05)。③与涂阴组比较:涂阳组CD4+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05),CD8+效应型记忆性T细胞显著增高(P<0.05),CD8+中央型记忆性T细胞显著降低(P<0.05)。④Spearman相关性分析显示:IL-17与IL-27呈正相关(P<0.05),记忆性T细胞亚群与IL-17,IL-27水平无显著相关性(P>0.05)。结论:肺结核患者外周血CD4+效应型记忆性T细胞的表达可望作为TB初步诊断的观察指标,CD4+中央型记忆性T细胞和CD8+效应型记忆性T细胞的表达均可望作为TB患者的临床分组依据,TB外周血IL-17、IL-27水平可望用于判断TB的炎症程度。     

Tregs调节小鼠肝癌局部引流淋巴结内免疫效应细胞的功能

目的:探讨肿瘤引流淋巴结(TDLNs)内调节性T细胞(Tregs)对局部免疫效应细胞的调节作用。方法:建立小鼠肝癌TDLNs模型,通过免疫组织化学染色和流式细胞仪检测TDLNs内Foxp3+Tregs和CD4+及CD8+T细胞的数量。实时定量PCR测定Foxp3mRNA表达水平。应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测TDLNs内CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能。结果:TDLNs内Tregs和效应性T细胞均明显扩增,Tregs弥散分布于CD8+T细胞聚居区。TDLNs内Foxp3mRNA表达水平显著高于同一接种肿瘤小鼠腹股沟淋巴结(P0.01)和脾脏(P0.01)。Tregs趋向于在TDLNs内聚集,而非其它外周淋巴结位点。荷瘤小鼠的脾脏Foxp3mRNA表达明显高于注射LPS小鼠脾脏。Tregs抑制TDLNs内已初始化的CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能,经anti-CD3刺激激活后,CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能可恢复。结论:TDLNs内Tregs通过调控CD8+T细胞功能而发挥重要作用,清除Tregs是发挥特异性肿瘤免疫治疗的关键。