银屑1号下调小鼠银屑病模型炎性因子及NF-κB表达的调控机制

目的研究银屑1号对咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型血清中炎性因子IL-6,IL-17,INF-γ和角质形成细胞内核转录因子-κB(NF-κB)及NF-κB mRNA表达的影响。方法入选动物随机分为5组:正常组(Normal)、模型组(Model)、银屑1号高(HD)、中(MD)、低(LD)剂量组,除正常组外,所有小鼠外涂咪喹莫特软膏14日诱导为银屑病模型,银屑1号高、中、低剂量组给药剂量分别为50g/(kg·d),25g/(kg·d),12.5g/(kg·d),连续10d,正常组及模型组予等量生理盐水对照。检测表皮垂直厚度,血液蛋白芯片法检测血清I-L6,IL-17,INF-γ水平,苏木精-依红染色观察皮损组织结构改变,免疫组化法检测NF-κB含量,应用逆转录-聚合酶链反应检测NF-κB mRNA表达情况。结果与正常组比较,模型组角质增厚,镜下T淋巴细胞浸润明显,其炎性因子、NF-κB蛋白及基因表达均升高(P0.01);同模型组比较,银屑1号高、中剂量组IL-6,IL-17,INF-γ水平下降明显(P0.01);高、中、低剂量组表皮增厚程度明显降低(P0.01),NF-κB蛋白水平明显降低(P0.01),中、低剂量组NF-κB mRNA表达降低(P0.05)。结论银屑1号对银屑病小鼠模型的角质增殖和炎性反应具有抑制作用,抑制NF-κB蛋白及基因的过度表达是其作用机制之一。     

卡泊三醇对TNF-α诱导的人角质形成细胞中CCL20表达的影响

目的：明确卡泊三醇体外对TNF-α诱导的人角质形成细胞CCL20表达的影响。方法：体外培养人角质形成细胞,分为TNF-α 组,卡泊三醇组,TNF-α+卡泊三醇组,TNF-α+卡泊三醇+SB202190(p38 MAPK抑制剂)组,TNF-α+卡泊三醇+SP600125(JNK抑制剂)组,TNF-α+卡泊三醇+U0126(ERK抑制剂)组,TNF-α+卡泊三醇+CAPE(NF-κB抑制剂)组。实时荧光定量PCR法和酶联免疫吸附试验检测CCL20 mRNA及蛋白表达水平。Western blot法检测p38 MAPK,ERK和NF-κBp65磷酸化情况。结果：TNF-α+卡泊三醇组CCL20的表达水平及ERK,p38 MAPK,NF-κBp65磷酸化水平低于TNF-α组,差异均有统计学意义（均P<0.05）。TNF-α+卡泊三醇组CCL20的表达水平低于TNF-α+卡泊三醇+U0126(ERK抑制剂)组,高于TNF-α+卡泊三醇+SB202190(p38 MAPK抑制剂)组和TNF-α+卡泊三醇+CAPE(NF-κB抑制剂)组,差异均有统计学意义（均P<0.05）。CCL20的表达水平在TNF-α+卡泊三醇组与TNF-α+卡泊三醇+SP600125(JNK抑制剂)组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：卡泊三醇可能通过调节TNF-α诱导的ERK,p38 MAPK,NF-κBp65磷酸化,从而参与调节人角质形成细胞中CCL20表达。     

p53蛋白在UVB诱导凋亡的富集表皮干细胞的角质形成细胞中的表达

目的研究p53蛋白在中波紫外线(ultraviolet lightB,UVB)诱导凋亡的富集表皮干细胞的角质形成细胞群中的表达情况。方法分离富集人表皮干细胞的角质形成细胞群和正常角质形成细胞群,使用UVB诱导两种细胞群凋亡,蛋白印迹法比较不同剂量UVB诱导前后两组细胞的p53蛋白表达的差异。结果两种细胞在不同剂量的UVB照射后p53蛋白表达均比照射前显著增加,在20mJ/cm2与40mJ/cm2照射剂量时,富集人表皮干细胞的角质形成细胞群p53蛋白表达高于正常角质形成的细胞群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论富集人表皮干细胞的角质形成细胞p53蛋白表达比其它角质形成细胞对中波紫外线的照射易感。     

p53抑制剂PFT-α对阿霉素诱导的人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的探讨p53抑制剂PFT-α对阿霉素诱导的人皮肤角质形成细胞凋亡的影响。方法用MTT法通过比色分析测定吸光度(OD)值,检测0,4,8,12mg/LPFT-α和阿霉素给药对角质形成细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果阿霉素抑制体外培养的人皮肤角质形成细胞增殖,先给予8,12mg/LPFT-α处理细胞,然后给予阿霉素,与对照组比较,PFT-α升高OD值(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05)。结论先行给予适当剂量PFT-α处理人皮肤角质形成细胞,能一定程度减轻阿霉素对人皮肤角质形成细胞的损伤,表现出对阿霉素致凋亡的保护作用。     

TNF-α、IFN-γ诱导人角质形成细胞β防御素的表达

目的:检测TNF-α、IFN-γ诱导HaCaT细胞β-防御素的表达。方法:用TNF-α、IFN-γ、TNF-α加IFN-γ干预HaCaT细胞后,RT-RCR方法检测hBD-2 mRNA、hBD-3 mRNA的表达。结果:TNF-α干预组HaCaT细胞中hBD-2 mRNA、hBD-3 mRNA,IFN-γ干预组HaCaT细胞中hBD-3 mRNA表达增高(P0.05),干预12 h时的表达量高于干预24 h时的表达量;TNF-α与IFN-γ联合干预HaCaT细胞12 h时,hBD-2 mRNA、hBD-3 mRNA表达量最高。结论:TNF-α能刺激人角质形成细胞产生hBD-2和hRD-3,而IFN-γ仅能诱导产生hBD-3。     

IL-33与TNF-α的协同作用对角质形成细胞增殖和凋亡的影响

目的研究白细胞介素33(IL-33)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的协同作用对角质形成细胞增殖和凋亡的影响及其调节机制。方法分别构建腺病毒表达载体AAV-IL-33和AAV-TNF-α转染HaC aT细胞。将细胞随机分为4组:control组,IL-33组,TNF-α组和L-33+TNF-α组。Western blot法检测各组细胞中IL-33和TNF-α的水平,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,ELISA检测IL-6,IL-8和IFN-γ的含量,并检测细胞核内NF-κB和IκBα蛋白的磷酸化水平。结果 IL-33和TNF-α能够促进HaC aT的增殖并降低其凋亡,提升IL-6,IL-8和IFN-γ的含量,增加细胞中NF-κB和IκBα的蛋白水平,且在其协同作用下效果更加显著。结论 IL-33和TNF-α的协同作用能增强HaC aT细胞增殖和炎症反应水平,抑制细胞凋亡,这可能与NF-κB信号通路的激活有关。     

IL-33与TNF-α的协同作用对角质形成细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究白细胞介素33(IL-33)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的协同作用对角质形成细胞增殖和凋亡的影响及其调节机制。方法分别构建腺病毒表达载体AAV-IL-33和AAV-TNF-α转染HaC aT细胞。将细胞随机分为4组:control组,IL-33组,TNF-α组和L-33+TNF-α组。Western blot法检测各组细胞中IL-33和TNF-α的水平,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,ELISA检测IL-6,IL-8和IFN-γ的含量,并检测细胞核内NF-κB和IκBα蛋白的磷酸化水平。结果 IL-33和TNF-α能够促进HaC aT的增殖并降低其凋亡,提升IL-6,IL-8和IFN-γ的含量,增加细胞中NF-κB和IκBα的蛋白水平,且在其协同作用下效果更加显著。结论 IL-33和TNF-α的协同作用能增强HaC aT细胞增殖和炎症反应水平,抑制细胞凋亡,这可能与NF-κB信号通路的激活有关。     

补肾活血汤对多囊卵巢综合征不孕症大鼠卵巢超微结构的影响及助孕效果观察

目的探讨补肾活血汤对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症大鼠卵巢超微结构的影响,并观察其助孕效果。方法选取80只雌性SD大鼠随机分为五组,每组16只。除N组外均建立PCOS不孕症模型,五组分别给予无菌生理盐水(N组)、无菌生理盐水(M组),以及1.0g/mL(LD组)、2.0g/mL(MD组)和4.0g/mL(HD组)三种剂量的补肾活血汤灌胃。对比干预后血清性激素水平;观察各组卵巢超微结构及卵巢凋亡颗粒细胞数;将各组剩余大鼠待性成熟后与SD性成熟雄鼠按照2∶1同笼配繁,统计妊娠成功率。结果各组血清性激素水平比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),血清孕酮(P)、黄体生成素(LH)比较,M组>LD组>MD组>HD组>N组,血清雌二醇(E 2)比较,N组>HD组>MD组>LD组>M组。干预后N组卵巢镜下黄体和卵泡均发育状态均正常,M组均显著改变,LD、MD和HD组均有所好转,且呈剂量依赖性。五组大鼠干预后卵巢凋亡颗粒细胞数比较,差异具有统计学意义(P<0.05),且M组>LD组>MD组>HD组>N组。五组剩余大鼠妊娠成功率比较,差异具有统计学意义(P<0.05),其中N组>HD组>MD组>LD组>M组。结论补肾活血汤可改善PCOS不孕症大鼠性激素水平和卵巢超微结构,达到良好的助孕效果,且呈剂量依赖。     

扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8、3的表达

目的 研究扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)和Caspase-3的表达及意义.方法 采用免疫组化法和原位末端标记技术(TUNEL)检测20例扁平苔藓患者皮损和20例健康人皮肤组织中TNF-α、Caspase-8、Caspase-3的表达和细胞凋亡情况.采用SPSS 11.5统计软件,组间比较采用成组t检验,指标间相关性采用Pearson相关分析.结果 扁平苔藓组TNF-α、Caspase-8和Caspase-3的积分光密度值分别为12580±2330、11690±3520和11450±2820,均明显高于健康对照组(分别为5120±1780、3870±3360、4760±1930),两组比较,t值分别为11.38、7.19、8.76,P值均＜0.01;扁平苔藓组角质形成细胞凋亡指数(71.35±7.93),明显高于健康对照组(33.62±8.75),两组比较,t=14.29,P＜ 0.01.扁平苔藓组TNF-α、Caspase-8的表达强度与角质形成细胞凋亡指数间均呈正相关,r分别为0.72、0.75,P值均＜0.01;同时两者与Caspase-3的阳性表达也均呈正相关,r分别为0.68、0.73,P值均＜0.01.结论 TNF-α、Caspase-8和Caspase-3的高表达可能参与了扁平苔藓中角质形成细胞的凋亡.     

芹菜素对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的影响及机制

目的：观察芹菜素对咪喹莫特（IMQ）造模小鼠及对角质形成细胞（HaCaT细胞）炎症通路和细胞增殖的影响。方法：小鼠随机分为4组，连续6 d使用凡士林或IMQ涂抹背部皮肤建立对照组和银屑病模型，期间每日予芹菜素或玉米油灌胃。于第7天比较治疗后各组皮损变化；蛋白免疫印迹法（western blot）检测各组核因子κB抑制蛋白（IKB)α、磷酸化（phosphorylation,p)-IKBα、凋亡及细胞核因子-κB p65(NF-κB p65）、p-NF-κB p65、信号转导与转录激活因子（STAT)3、p-STAT3、细胞增殖抗原（Ki-67）和角蛋白（keratin,K)17蛋白变化。体外实验设对照组、模型组、5μmol/L芹菜素处理组和10μmol/L芹菜素处理组；western blot检测各组角质形成细胞p-STAT3、STAT3、p-IKB α、IKB α、p-NF-κB p65、NF-κB p65、Ki-67和K17变化。结果：芹菜素改善了IMQ诱导的银屑病样小鼠的皮损及病理改变。与造模组比较，干预组小鼠皮损中p-STAT3、p-IκB、p-NF-κB p65、Ki-67、...     

黄芪甲甙对中波紫外线损伤皮肤角质形成细胞的保护作用

目的 研究传统中药活性成分黄芪甲甙对中波紫外线(UVB)损伤皮肤角质形成细胞的保护作用.方法 采用30、60、90 mJ/cm2的UVB照射培养的人皮肤永生角质形成细胞系HaCaT细胞,加入黄芪甲甙进行干预处理,以MTT法检测细胞活性;ELISA法检测细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素(IL)-6的分泌量;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 UVB照射可引起皮肤角质形成细胞损伤,单纯照光组细胞增殖活性可下降23%～43%,而黄芪甲甙预处理组照光后活性仅下降7%～20%;UVB照射后炎性细胞因子TNF-α、IL-6分泌显著增加,A值分别为16.32～91.59及98.6～403.53,而黄芪甲甙预处理后其分泌量显著降低(P<0.05);UVB辐射后在G1期前出现明显的亚二倍体峰(凋亡峰),而经黄芪甲甙处理的UVB组细胞凋亡率则明显下降(P<0.05).结论　黄芪甲甙具有光保护性能,可减轻UVB对皮肤角质形成细胞的损伤作用.     

黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞的凋亡及p16、p53蛋白表达

目的：明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法： 体外培养HaCaT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2 UVB,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射后24 h细胞凋亡率,Western blot检测各组HaCaT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果：与对照组（6.12±1.19）%比较,UVB组HaCaT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑枸杞水提取物组为（57.52±2.93）%,差异有统计学意义（P<0.05）。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义（Ps<0.05）。结论：黑果枸杞水提物可抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

紫外线辐射诱导角质形成细胞凋亡的机制

紫外线辐射诱导角质形成细胞凋亡,与多种皮肤病理过程关系密切,已引起人们关注。紫外线可通过诱导活性氧及细胞因子产生DNA损伤和基因表达改变等致角质形成细胞凋亡,此过程有多个信号转导途径参与,其中p53、CD95、Bcl-2、半胱天冬酶、丝裂原活化蛋白激酶介导的信号转导途径起重要作用。     

常用治疗银屑病的中药对肿瘤坏死因子-α刺激后角质形成细胞生长及分泌白介素-8的影响

目的研究常用中药治疗银屑病的作用机制。方法采用体外细胞培养技术,观察常用于治疗银屑病的8味中药提取液对角质形成细胞生长及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激后角质形成细胞分泌细胞因子白介素-8(IL-8)的影响。结果多数中药表现出抑制角质形成细胞增殖的作用,其中牡丹皮、赤芍、金银花、拳参、全蝎、苦参还表现出拮抗TNF-α刺激后角质形成细胞分泌IL-8的作用。结论初步证明几种常用于治疗银屑病的中药具有抑制TNF-α刺激后角质形成细胞增殖及分泌IL-8作用,从细胞生物学水平探讨了中药抗银屑病作用机制。     

黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达

目的:明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaC aT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法:体外培养HaC aT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射12 h后Western blot检测各组HaC aT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果:与对照组(6.12±1.19)%比较,UVB组HaC aT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑果枸杞水提取物组为(57.52±2.93)%,差异有统计学意义(P0.05)。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑果枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义(Ps0.05)。结论:黑果枸杞水提取物可抑制UVB引起的HaC aT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

消银解毒饮调控银屑病血热证肿瘤坏死因子-α的相关研究

目的 研究消银解毒饮对银屑病血热证外周血单一核细胞(PBMCs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的调控作用.方法 入选银屑病血热证患者抽取静脉血,分离PBMCs,并与人永生化角质形成细胞(HaCat细胞)混合接种培养48h,加入五种不同组别的动物药理血清,即蒸馏水空白组、消银解毒饮组、凉血方组、解毒方组、甲氨蝶吟阳性对照组,并于不同体积分数培养混合细胞48h,用四唑盐比色实脸(MTT)测定药物对HaCat细胞的细胞增殖率,双抗体夹心法测定药物对混合培养细胞上清TNF-α的影响.结果 消银解毒饮能有效的抑制HaCat细胞增殖(P<0.001),且效果优于拆方中药组(P<0.05);消银解毒饮能降低混合培养细胞分泌TNF-α(P<0.05),且与拆方两组比较疗效更显著(P<0.05).结论 消银解毒饮能有效的抑制角质细胞活化增殖,对银屑病血热证TNF-α有免疫调节作用,凉血类中药与解毒类中药协同作用治疗血热型银屑病效果可能更佳.     

miR-142-3p/Sema3A轴调节角质形成细胞增殖凋亡及银屑病皮肤炎症反应

目的 旨在探讨miR-142-3p在M5刺激人表皮角质形成细胞HaCaT中的作用及潜在机制.方法 MTT法检测细胞增殖;ELISA凋亡检测试剂盒评估细胞凋亡.ELISA试剂盒测定炎症介质TNF-α、IL-22和IL-17A的分泌量.RT-PCR和Western blot分别测定目的基因mRNA和蛋白表达.荧光素酶报告实...     

红斑、丘疹及鳞屑性皮肤病

20 0 11687　 c- myc,p53和 bcl- 2与银屑病角质形成细胞凋亡异常关系的研究 /倪晓 (中国医科院皮研所 )…∥中华皮肤科杂志 .- 2 0 0 0 ,33( 4 ) .- 2 4 0～ 2 4 2采用免疫组化和非同位素核酸原位杂交技术从蛋白和 m RNA二个水平检测 36份寻常性银屑病皮损中c- myc、p53和 bcl- 2的表达状况。发现银屑病表皮中 c-myc、p53和增殖细胞核抗原 ( PCNA)阳性细胞较正常皮肤明显增加 ,而 bcl- 2阳性细胞在表皮基底层中明显减少 ,提示银屑病时 c- myc、p53的表达上调和 bcl- 2的表达下调可能共同激活了角质形成细胞的凋亡通路 ,导致角质细胞的凋…     

反义p53寡核苷酸对阿霉素诱导的培养人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的 探讨反义p53寡核苷酸(ODN)对阿霉素诱导的培养人皮肤角质形成细胞凋亡的影响.方法 用MTT法检测不同浓度脂质体和0.5mg/L反义p53 ODN转染角质形成细胞后对2mg/L阿霉素抑制细胞增殖的影响;RT-PCR方法 测定p53 mRNA水平的变化;用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 阿霉素抑制体外培养的人皮肤角...     

中波紫外线辐射损伤角质形成细胞的p53信号传导通路研究

目的 探讨中波紫外线(UVB)辐射对角质形成细胞p53信号传导通路的影响.方法 以20、60和120mJ/cm²UVB辐射培养的取自健康儿童包皮的正常人表皮角质形成细胞,应用RT-PCR和免疫印迹方法,分别从mRNA水平和蛋白质水平,检测分析UVB辐射后2h、24h和48h,p53及其下游分子MDM2、p21、Bax和GADD45的表达.结果 不同剂量UVB辐射角质形成细胞后均可见p53表达水平持续性显著升高(P<0.05).低剂量UVB辐射角质形成细胞后,MDM2、p21、GADD45升高不明显(P>0.05),Bax不表达;UVB辐射剂量升至60mJ/cm²后,MDM2于辐射后2h短暂性显著升高,p21和Bax持续性显著升高.结论 UVB辐射激活了角质形成细胞的p53信号传导通路,p53下游分子的表达具有剂量依赖性和时相性.