N-乙酰半胱氨酸对化学性缺氧引起HaCaT细胞损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否保护人皮肤永生化角质形成细胞(HaCaT)对抗化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)诱导的损伤及对炎症因子的影响.方法 用2000 μmol/L CoCl2处理HaCaT细胞,建立化学性低氧诱导皮肤细胞损伤的实验模型.应用CCK-8比色法检测细胞存活率;ELISA试剂盒检测细胞培养基中IL-6、IL-8和TNF-α的水平;罗丹明123(Rh123)染色/荣光显微镜照相术检测线粒体膜电位(MMP);谷胱甘肽试剂盒检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的含量.结果 不同浓度的NAC预处理HaCaT细胞2 h能明显对抗CoCl2引起的存活率降低;CoCl2处理HaCaT细胞4 h能使IL-6、IL-8和TNF-α的释放显著增加,GSH水平及MMP降低;2000μmol/L NAC预处理2 h能使IL-6和IL-8的释放显著减少,并能使细胞内GSH含量增多,MMP升高.结论 氧自由基清除剂NAC能对抗CoCl2诱导的HaCaT细胞损伤及炎症反应,此作用可能与其减轻细胞内的氧化应激反应有关.     

冬凌草甲素对角质形成细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的研究冬凌草甲素(oridonin)对人永生化角质形成细胞株(HaCaT cells)增殖、凋亡和迁移的影响,并分析其机制。方法分别用0、10、20和40μmol/L的冬凌草甲素处理HaCaT细胞,在不同时间用MTT法检测冬凌草甲素对HaCaT细胞增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测冬凌草甲素对HaCaT细胞凋亡的影响;用Transwell实验检测冬凌草甲素对HaCaT细胞迁移能力的影响;用ELISA实验检测冬凌草甲素对HaCaT细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平的影响。结果冬凌草甲素对HaCaT细胞的增殖有明显的抑制作用,且抑制率与浓度和时间呈正相关;经冬凌草甲素干预后的HaCaT细胞凋亡率升高,迁移减慢;冬凌草甲素作用于HaCaT细胞后TNF-α、IL-6表达水平下降。结论冬凌草甲素能抑制角质形成细胞的增殖、迁移,促进凋亡,并且可以抑制角质形成细胞TNF-α、IL-6的分泌,可能成为治疗银屑病的潜在药物。     

N-乙酰半胱氨酸对PM2.5引起HaCaT细胞损伤的保护作用

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)对PM2.5诱导的HaCaT细胞损伤的影响.方法:HaCaT细胞分为NAC干预组、不同浓度PM2.5组(25、50、100、200、400μg/mL)及空白对照组.DCFH-DA荧光探针法检测HaCaT细胞内活性氧(ROS)的水平,RT-PCR...     

萝卜硫素对中波紫外线损伤HaCaT细胞的保护作用的研究

目的观察萝卜硫素对中波紫外线（UVB）损伤角质形成细胞的保护作用及作用机制。方法用不同浓度的萝卜硫素对HaCT细胞进行预处理4h，采用90mJ／cm^2的剂量照射细胞，以MTT法检测细胞生存率，以酶联免疫吸附实验（ELTSA）检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α的分泌量，以流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果UVB的照射对HaCaT细胞造成明显的损伤．萝卜硫素可提高UVB照射后HaCT细胞的生存率，抑制HaCaT细胞TNF-α的分泌水平。同时萝卜硫素能够降低UVB所引起的细胞凋亡率升高（P〈0．05）。结论UVB对HaCaT细胞有损伤作用，而萝卜硫素具有光保护作用．萝卜硫素可能是通过降低UVB引起的炎症因子TNF-α的分泌从而减轻紫外线辐射引起的损伤，同时也降低了细胞的凋亡率，改善细胞受UVB照射后增殖活性下降的状况。     

来氟米特对HaCaT细胞分泌α-肿瘤坏死因子、白介素-6和8的影响

目的：研究来氟米特活性代谢产物A77l 1726对角质形成细胞分泌α-肿瘤坏死因子（TNF-α），白介素(IL）-6及IL-8的影响。方法：以体外培养的角质形成细胞株HaCaT为对象，以不同浓度A77 l726处理正常及TNF-α刺激后细胞，用生物活性法及ELISA方法测定培养上清中TNF-α、IL-6及IL-8的分泌变化情况。结果：正常情况下，HaCaT细胞可自发分泌TNF-α、IL-6和IL-8；药物作用后分泌水平下降；TNF-α诱导下，HaCaT细胞IL-6及IL-8表达量均增加，加入来氟米特后则表达量均受到抑制。结论：来氟米特可抑制角质形成细胞分泌TNF-α、IL-6及IL-8。     

靛玉红对角质形成细胞中促炎细胞因子表达水平的影响

目的:探讨靛玉红对人类永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平的影响,初步阐明青黛膏治疗银屑病的机制.方法:以人类永生化角质形成细胞株HaCaT细胞作为研究对象,观察不同浓度靛玉红处理后HaCaT细胞中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平的变化,采用E...     

茶多酚和芦荟甙对UVB诱导人角质形成细胞合成和分泌TNF-α及IL-1β的影响

目的探讨茶多酚、芦荟甙对中波紫外线(UVB)辐射引起皮肤损伤的保护机理。方法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测UVB辐射角质形成细胞(HaCaT)引起TNF-α及IL-1β的分泌量的变化;RT-PCR法检测TNF-α及IL-1β的mRNA表达。结果UVB辐射后,HaCaT细胞分泌TNF-α及IL-1β的量比正常对照组明显增多;而应用茶多酚、芦荟甙后,分泌量则均明显降低。TNF-α及IL-1β的mRNA表达在UVB照射后明显增加;应用茶多酚、芦荟甙处理后,表达明显降低。差异均有显著性(P<0.01)。结论茶多酚、芦荟甙可以通过降低UVB引起的TNF-α和IL-1β分泌及其mRNA的表达减轻紫外线辐射引起的皮肤损伤。     

青海柴达木黑果枸杞水提物对中波紫外线诱导永生化角质形成细胞炎症因子分泌的影响

目的:研究青海柴达木黑果枸杞水提物对中波紫外线(UVB)诱导永生化角质形成细胞(HaCaT)炎症因子分泌的影响。方法:取处于对数生长期的HaCaT细胞,实验组在UVB照射后12 h加入不同浓度(0.5、1.0、2.0 g/L)的黑果枸杞水提物,正常对照组和UVB模型组只加入相同量的培养基。给药12 h后4℃下收集细胞培养上清液与细胞沉淀,测定5组细胞沉淀和上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量。结果:与正常对照组比较,UVB模型组HaCaT细胞合成与分泌的TNF-α和IL-6都增加(P0.05),实验组HaCaT细胞合成与分泌的TNF-α和IL-6都减少,且在一定浓度范围内呈剂量效应关系(P0.05)。结论:青海柴达木黑果枸杞水提物对光损伤HaCaT细胞的修复作用的机制之一可能是通过抑制炎症因子TNF-α和IL-6的合成与分泌实现。     

姜黄素对紫外线诱导损伤的HaCaT细胞的保护作用

目的比较姜黄素对UVA、UVB急性损伤的HaCaT细胞的保护作用。方法体外培养人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞,UVA、UVB照射建立HaCaT细胞急性光损伤模型。姜黄素与HaCaT细胞共培养24 h后,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,确定无毒性姜黄素浓度。通过MTT法、流式细胞术分别检测添加姜黄素前后,UVA、UVB照射引起的HaCaT细胞损伤情况及胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平变化。结果姜黄素浓度在5μmol/L以下时,正常细胞的增殖和凋亡不受影响。添加姜黄素前,UVA照射引起细胞增殖抑制、凋亡增加(P0.05),ROS增高67.9%;UVB照射引起细胞增殖抑制、凋亡增加(P0.05),ROS增高67.2%。添加姜黄素后,UVA、UVB组细胞损伤均减轻(P0.05),ROS水平升幅均下降,呈浓度依赖型。结论对于不同波长的紫外线诱导损伤的HaCaT细胞,姜黄素均可降低急性光损伤引起ROS水平升幅,具有抗氧化保护作用,其保护强度无差异,并且呈浓度依耐性。     

大麻素2型受体激动剂JWH133对人永生化角质形成细胞体外增殖以及细胞因子表达影响的研究

目的探讨JWH133对人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)体外增殖以及经肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导后细胞因子表达的影响。方法首先用不同浓度JWH133(15、30、60μmol/L)分别作用于Ha Ca T细胞。采用CCK-8法检测JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪检测JWH133对HaCaT细胞凋亡率的影响。其次采用抗体芯片检测技术分别检测20 ng/ml TNF-α组、20 ng/ml TNF-α+30μmol/L JWH133组中细胞因子表达的变化,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行定量分析,以验证抗体芯片检测结果的可靠性。结果 15、30、60μmol/L JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用。随着时间延长和JWH133浓度的增加,JWH133对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用均逐渐增强(F=187.1、2678.9,P 0.05)。60μmol/L JWH133作用24 h后,凋亡率由(4.34±0.07)%(阴性组)增加至(21.77±0.40)%(JWH133组)(P 0.05)。20 ng/ml TNF-α能够诱导HaCaT细胞不同程度增加白细胞介素19(IL-19)、IL-22、IL-23等细胞因子的高表达,而30μmol/L JWH133处理后可降低上述细胞因子的表达。结论大麻素2型受体激动剂JWH133可抑制HaCaT细胞体外增殖、促进凋亡,且能够抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞中一些重要免疫分子的表达。     

砷剂对角质形成细胞生长和IL-8、TNF-α分泌的影响

目的研究不同浓度砷剂对角质形成细胞生长和IL-8、TNF-α分泌的影响。方法以体外培养的角质形成细胞株为对象,不同浓度砷剂处理细胞后,用MTT比色分析法反映细胞增殖的变化。ELISA方法测定细胞上清中IL-8分泌,用L929细胞检测上清TNF-α的生物活性。结果0.5～5μmol/L三氧化二砷对角质形成细胞株HaCaT细胞有明显抑制作用,并呈剂量依赖关系。在0.001μmol/L至0.015μmol/L药物浓度范围内,同对照组相比细胞增殖加快;未药物处理的对照组HaCaT细胞可分泌一定水平的IL-8和TNF-α,低浓度砷剂(0.001～0.015μmol/L)可刺激其分泌增加。结论低浓度砷剂可促进角质形成细胞株HaCaT细胞的生长,但高浓度能抑制增殖和影响细胞活性。并在一定浓度范围刺激IL-8和TNF-α的合成分泌,可能在砷相关皮肤病的发病机制中具有重要意义。     

白芍总苷对经肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞细胞因子分泌的影响

目的观察白芍总苷（TGP）对体外培养的Hacalr细胞白细胞介素（IL）-6、IL-8、IL-10、干扰素（IFN）-γ分泌的影响，以及肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ分泌在白芍总苷的作用下是否发生变化，从而进一步探讨银屑病的发病机制及白芍总苷治疗银屑病的可能作用机制。方法本实验运用TNF—α诱导HaCaT细胞，并用不同浓度的TGP进行处理，通过ELISA法检测TGP作用前后细胞因子分泌的变化。结果TGP对经TNF-α诱导的HaCaT细胞IL-6、IL-8、IFN-γ分泌有抑制作用，而对IL-10分泌有促进作用。且这两种作用均与药物作用浓度相关。结论TGP可能通过抑制HaCaT细胞IL-6、IL-8及IFN-γ的分泌，提高IL-10的分泌，进而发挥一定的免疫调节作用，从而达到治疗银屑病的作用。     

姜黄素对肿瘤坏死因子-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的HaCaT细胞增殖及凋亡的影响。方法 MTT法检测不同浓度重组TNF-α（0、1、5、10、25、50、100 ng/ml）、姜黄素20 μmol/L对HaCaT细胞增殖的影响。蛋白印迹实验检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞PCNA、 Notch-1 的蛋白表达。使用Annexin-V/PI试剂盒在流式细胞仪上检测25 ng/ml TNF-α和20 μmol/L姜黄素作用下HaCaT细胞早期凋亡情况。结果 TNF-α呈浓度依赖性促进HaCaT细胞增殖,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖基本达到最大,20 μmol/L姜黄素有效抑制25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的促增殖作用,25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞无明显促凋亡作用,而20 μmol/L姜黄素有效促进HaCaT细胞发生凋亡,并可激发25 ng/ml TNF-α对HaCaT细胞的凋亡诱导作用。 结论 姜黄素可激发TNF-α对HaCaT细胞的促凋亡作用,同时抑制TNF-α对HaCaT细胞促增殖作用。     

益母草和枸杞对UVB损伤角质形成细胞的保护作用

目的探讨中草药益母草、枸杞对中波紫外线损伤角质形成细胞的保护作用及作用机制。方法用益母草和枸杞对HaCaT细胞进行预处理24h,采用30mJ/cm2、40mJ/cm2、50mJ/cm2剂量的UVB照射细胞,以MTT法检测细胞生存率,以酶联免疫吸附实验检测细胞上清液中TNF-α的分泌量,以Annexin-V凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。结果经UVB照射后,细胞损伤程度与UVB照射剂量有关,益母草和枸杞均可提高UVB照射后角质形成细胞的生存率,减少细胞因子TNF-α的分泌。UVB照射后早期细胞损伤以凋亡为主,晚期以死亡为主,UVB照射8h后益母草和枸杞预处理的HaCaT细胞凋亡率明显减少(P<0.05)。结论UVB对角质形成细胞有损伤作用,且与照射剂量相关,益母草和枸杞对角质形成细胞具有光保护作用。抑制TNF-α的释放和减少细胞凋亡可能是其保护作用机制之一。     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的以不同剂量的中波紫外线(UVB)诱导体外培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)凋亡,探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否参与凋亡过程。方法取对数生长期的HaCaT细胞,分别用10 mJ/cm2,15 J/cm2,20 J/cm2,25 J/cm2,30 J/cm2的UVB照射,并于照射24 h后检测HaCaT细胞的增殖活性,分析HaCaT细胞的凋亡率,测定HaCaT细胞上清液中TNF-α的水平,观察细胞形态及凋亡细胞特征。结果在10~30 mJ/cm2的UVB照射下,随照射剂量的增大,细胞的增殖活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,当剂量达30 J/cm2时,细胞凋亡率最大,细胞的增殖活性和凋亡率呈直线负相关;随UVB照射剂量的增大,TNF-α的分泌量增加,细胞上清液中TNF-α的分泌量和凋亡率呈直线正相关;倒置显微镜及透射电镜进一步从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性;照射产生的TNF-α可能参与了其凋亡过程。     

CpG ODN刺激的寻常性银屑病中性粒细胞培养上清液对HaCaT细胞增殖的影响

目的 探讨中性粒细胞在银屑病发病中的作用.方法 采用脂多糖(LPS)或人工合成的CpG ODNs(CpG-A或CpG-B)刺激中性粒细胞,取其培养上清液处理人永生化角质形成细胞株(HaCaT),观察HaCaT细胞株增殖的变化,并通过抗IL-8、抗TNF-α单克隆抗体以及SOD/CAT预处理评价中性粒细胞分泌的炎性因子在银屑病发病中的作用.结果 与RPMI 1640培养液比较,无LPS、CpG-A和CpG-B刺激的正常人和静止期银屑病患者中性粒细胞培养上清液对HaCaT细胞株的增殖无明显促进作用(P＞0.05),而进行期患者中性粒细胞培养上清液明显促进HaCaT细胞株的增殖(t=2.41,P<0.05).与正常人比较,进行期银屑病患者中性粒细胞受LPS、CpG-A和CpG-B刺激后的培养上清液显著增强HacaT细胞的增殖(t值分别为3.11,2.89,2.29,P<0.05).经LPS、CpG-A刺激的中性粒细胞培养上清液与无刺激组比较,均明显促进HaCaT细胞的增殖.与未予阻断剂组比较,予抗IL-8、抗TNF-α单克隆抗体以及SOD/CAT预处理的进行期银屑病组中性粒细胞经LPS、CpG-A和CpG-B刺激后的上清液诱导的HaCaT细胞增殖均显著减少(P<0.05).结论 寻常性银屑病患者外周血中性粒细胞存在炎性因子IL-8、TNF-α和SOD/CAT分泌异常,且这些异常分泌的炎性因子可以促进HaCaT细胞的增殖.     

PM2.5对角质形成细胞增殖、凋亡及对CCL20和核转录因子-κB表达的影响

目的探讨大气颗粒物(PM2.5)对皮肤角质形成细胞的生物学效应。方法角质形成细胞株(HaCaT细胞)暴露于不同浓度PM2.5混悬液(0～400μg/ml)24 h,采用CCK-8法检测不同浓度及不同暴露时间(1～24 h)的细胞存活率;Annexin V法检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测不同浓度处理组细胞内细胞因子CCL20 mRNA的表达水平及CCL20分泌浓度;免疫印迹试验(Western blot)检测细胞中核转录因子(NF)-κB信号通路相关蛋白的表达水平。结果与对照组(0μg/ml)相比,当PM2.5浓度≥50μg/ml或刺激时间≥3 h时,各组细胞存活率均显著降低(P 0.05);随着PM2.5刺激浓度增高(PM2.5浓度≥50μg/ml),各组细胞凋亡率均显著增高(P 0.01),细胞中炎性因子CCL20的m RNA表达水平显著上调(P 0.05);随着PM2.5刺激浓度增高(PM2.5浓度≥25μg/ml),CCL20分泌水平显著上调(P 0.05);Western blot检测显示细胞中NF-κB信号通路关键蛋白p65的磷酸化水平表达上调。结论 PM2.5可降低角质形成细胞存活率,促进细胞凋亡,且可能通过激活NF-κB信号通路诱导角质形成细胞内细胞因子CCL20的表达上调,进而介导多种慢性皮肤炎症反应。     

N-乙酰半胱氨酸对PM2.5诱导肥大细胞活化作用的影响

目的：明确N-乙酰半胱氨酸（NAC）对颗粒物PM_2.5诱导肥大细胞P815活化作用的影响。方法：用100 μg/mL PM_2.5刺激肥大细胞建立脱颗粒模型，设空白组，模型组，不同浓度NAC组（浓度分为100，50，25 μmol/L）；不同浓度NAC处理肥大细胞6 h后，再以 PM_2.5刺激6 h，CCK-8法测定细胞增殖活性，酶标仪测定活性氧（ROS）水平及β-氨基己糖苷酶（β-Hex）水平、ELISA检测IL-4水平，Western blot检测蛋白酶激活受体2（PAR2）蛋白表达水平。结果：与空白组比较，模型组ROS、β-Hex、IL-4含量及PAR2蛋白表达显著增高（均P＜0.05）；与模型组比较，NAC组肥大细胞ROS、β-Hex、IL-4含量及PAR2蛋白表达水平降低（均P＜0.05），其中50 μmol/L NAC组降低最明显。结论：NAC可降低肥大细胞氧化应激，抑制PAR2蛋白表达，减少炎症介质释放。     

重楼总皂苷对HaCaT细胞增殖和分泌IL-8的影响

目的研究重楼总皂苷对人永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)增殖和分泌白介素8(IL-8)的影响。方法采用MTT法进行细胞增殖实验,采用ELISA法测定重楼总皂苷对HaCaT细胞分泌IL-8的情况。结果在所选浓度范围内(60μg/mL,90μg/mL,120μg/mL和150μg/mL),重楼总皂苷对HaCaT细胞的增殖有抑制作用;其中120μg/mL和150μg/mL浓度组重楼总皂苷可抑制HaCaT细胞自分泌IL-8,90μg/mL,120μg/mL和150μg/mL浓度组重楼总皂苷能抑制TNF-α(浓度为100U/mL),刺激HaCaT细胞分泌IL-8。结论重楼总皂苷能抑制HaCaT细胞增殖和IL-8的分泌。     

小檗碱衍生物HB-13对角质形成细胞分泌IL-10的影响

目的:评价小檗碱衍生物HB-13对HaCaT细胞分泌IL-10的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选HB-13的细胞安全浓度;以P物质刺激HaCaT细胞,加入不同浓度的HB-13分别孵育12、24、48 h后,ELISA法及荧光定量PCR法检测培养上清液中IL-10水平及细胞内IL-10mRNA的表达。结果:HB-13浓度为2.5、5、10μg/mL时对HaCaT细胞的毒性作用不显著,但可促进P物质诱导IL-10的分泌,促进作用随时间的延长而增强(P0.05)。结论:HB-13的抗炎作用部分可能是通过促进细胞因子IL-10的分泌而实现的。