miR-126对内皮祖细胞增殖和迁移的影响以及靶基因的检测

目的 研究miR-126(micro RNA-126)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖和迁移能力的影响,并探讨miR-126新的靶基因.方法 采用电转的方法,在EPCs中转染对照寡核苷酸和miR-126的模拟物或抑制物.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,划痕和transwell实验检测细胞迁移能力的改变.microRNA靶基因预测软件TargentScan在线分析miR-126的靶基因,并进一步用Western blot检测靶基因的表达变化.结果 (1) miR-126模拟物在转染后24 h对EPCs的增殖有促进作用(P＜0.01),转染后48和72 h,miR-126对EPCs增殖没有影响.(2)划痕和transwell实验证实miR-126模拟物可以促进EPCs的迁移(P＜0.01),miR-126抑制物抑制EPCs的迁移(P＜0.01).(3)TargetScan在线软件预测KANK2是miR-126的靶基因.(4) Western blot检测结果显示miR-126模拟物抑制KANK2的表达,miR-126抑制物促进KANK2的表达.结论 miR-126对EPCs的增殖有一过性的促进作用,miR-126可以促进EPCs的迁移能力并靶向KANK2蛋白,抑制KANK2蛋白的表达.     

lncRNA NPIPA9靶向miR-210-3p对前列腺癌细胞生长和迁移的影响

目的:分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量,通过过表达lncRNA NPIPA9检测miR-210-3p的相对表达量及对前列腺癌细胞生长和迁移的影响。方法:通过Oncomine数据库分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA NPIPA9在前列腺癌细胞株DU-145、PC-3、C4-2B、22Rv1、LNCaP和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中的相对表达量。体外培养前列腺癌PC-3细胞,分为两组：NPIPA9组和对照组,NPIPA9组转染100 nmol/L lncRNA NPIPA9载体,对照组转染100 nmol/L对照载体。CCK-8法检测PC-3细胞的增殖活力。Transwell实验检测PC-3细胞的迁移能力。生物信息学技术预测lncRNA NPIPA9的潜在靶点。双荧光素酶报告基因实验确定lncRNA NPIPA9和miR-210-3p的靶向结合关系。RT-qPCR检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中miR-210-3p相对表达量的影响。Western blotting法检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中核因子κB(NF-κB)通路蛋白表达量的影响。计量资料以均数±标准差( ± s)表示,两组间比较采用 t检验,多组间比较采用单因素方差分析。 结果:前列腺癌组织中lncRNA NPIPA9相对表达量低于癌旁组织,差异具有统计学意义( P<0.01)。前列腺癌细胞株中lncRNA NPIPA9相对表达量均低于RWPE-1细胞,差异具有统计学意义( P<0.01);前列腺癌PC-3细胞中lncRNA NPIPA9相对表达量最低,差异具有统计学意义( P<0.01)。与对照组相比,lncRNA NPIPA9对前列腺癌PC-3细胞活力具有抑制作用,差异具有统计学意义( P<0.05)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞迁移数目分别为(101.70 ± 8.63)、(45.97 ± 8.83)个,lncRNA NPIPA9对PC-3细胞迁移具有抑制作用,差异具有统计学意义( P<0.01)。lncRNA NPIPA9可以直接靶向结合miR-210-3p,差异具有统计学意义( P<0.01)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞中miR-210-3p相对表达量分别为5.32±0.79和1.11±0.56,lncRNA NPIPA9可直接下调PC-3细胞中miR-210-3p表达,差异具有统计学意义( P<0.01)。与对照组相比,lncRNA NPIPA9能够降低PC-3细胞中NF-κB通路蛋白c-Myc、MMP-9、VEGF、p65、p50表达。 结论:lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中表达下调,其通过靶向并负调控miR-210-3p,降低前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移能力。     

miR-3189-3p在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-3189-3p在肾癌组织和癌旁组织中的表达差异及其对肾癌细胞生物学功能的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-3189-3p在肾癌组织及癌旁组织、肾癌细胞株(Caki-1、ACHN、A498、OS-RC-2)和正常肾小管上皮细胞HK-2中的表达。分别转染miR-NC或m...     

长链非编码RNA 909靶向调控miR-194-5p/DACH1轴对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景与目的:长链非编码RNA 909(LINC00909)是一个新发现的长度约为2 kb的长链非编码RNA(lncRNA),在胶质瘤和白血病中被报道发挥癌基因的作用.然而LINC00909在胰腺癌中的作用鲜有报道.本研究旨探讨LINC00909在胰腺癌中的表达及其对患者预后的影响,以及LINC00909与其调控网络对胰...     

姜黄素通过上调miR-637抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨姜黄素对肾癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2和肾癌786-O细胞, 将786-O细胞分为对照组、低剂量姜黄素组、中剂量姜黄素组、高剂量姜黄素组、miR-NC组、miR-637组、高剂量姜黄素+anti-miR-NC组、高剂量姜黄素+anti-miR-637组。分别进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、MTT、Transwell和蛋白质印迹(Western blot)实验来检测各组的miR-637表达量、细胞活力、迁移侵袭能力和相关蛋白表达水平。结果与人正常肾小管上皮细胞HK-2比较, 肾癌786-O细胞中miR-637的表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较, 中、高剂量姜黄素组786-O细胞的活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2及MMP-9表达水平均显著降低, p21表达显著升高, miR-637的表达水平均显著升高(均P<0.05)。与miR-NC组比较, miR-637组的miR-637表达水平提高, miR-637组的细胞活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP...     

miR-124抑制结肠癌细胞增殖和侵袭与TET蛋白家族的关系

目的:探讨miR-124是否通过靶向调节TET蛋白家族的表达而抑制结肠癌细胞增殖与侵袭。方法:用双荧光素酶报告基因检测系统分别检测miR-124对TET家族(TET1、TET2、TET3)的3'UTR-荧光素酶活性的影响;用q RT-PCR与Western blot检测miR-124模拟物转染结肠癌HT29细胞后TET家族的m RNA与蛋白表达水平的变化;用MTS和Transwell实验观察HT29细胞转染miR-124模拟物及TET si RNA后增殖和侵袭能力的变化。结果:双荧光素酶报告基因检测结果显示,各TET m RNA的3'UTR均被miR-124特异性结合,其荧光素酶活性被明显抑制(均P0.05);转染miR-124模拟物后的HT29细胞TET的m RNA与蛋白表达水平明显减低(均P0.05);HT29细胞转染miR-124模拟物或TET si RNA后,增殖和侵袭能力均明显降低(均P0.05)。结论:miR-124可能通过直接靶向调控TET基因的表达,而抑制结肠癌细胞增殖和侵袭。     

TRPM8对前列腺癌细胞PC-3细胞增殖和迁移影响的研究

目的 探讨TRPM8对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖和迁移能力的影响. 方法 PC-3细胞分别转染空载体pcDNA3和目的 基因TRPM8,筛选稳定表达细胞株;分别通过免疫荧光和钙成像检测TRPM8蛋白表达、分布以及功能;通过流式细胞术和划痕实验检测TRPM8对PC-3细胞周期和细胞迁移率的影响. 结果 免疫细胞化学和钙成像提示PC-3-TRPM8细胞表达有功能的TRPM8通道;TRPM8能诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与PC-3和PC-3-vector细胞相比,处于G0/G1期的PC-3-TRPM8细胞显著增加(71.89%±3.43% vs 54.67%±4.59%、51.48%±3.54%,P＜0.05),易化饥饿诱导的细胞凋亡(12.56%±1.78% vs 4.67%±1.49%、5.28±1.35%,P＜0.05),并抑制细胞迁移(P＜0.01). 结论 TRPM8并不为PC-3细胞存活所必需,相反,高表达的TRPM8能抑制PC-3细胞的增殖和迁移,可能为前列腺癌治疗的一个新靶点.     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

微小RNA-148a对胃癌细胞MKN45增殖能力的影响及机制研究

目的：探讨微小RNA（miR）-148a对人胃癌细胞增殖的影响及可能机制。方法采用实时定量PCR技术检测60例胃癌组织及癌旁组织中miR-148a的表达水平。利用慢病毒包装建立稳定表达miR-148a的MKN45细胞系为转染组,未转染的MKN45细胞系为对照组。 CCK8法检测MKN45细胞的增殖情况,通过targetscan预测miR-148a的靶基因,Western-blot检测靶基因的表达水平。结果54例（90．0％,54/60）胃癌组织中miR-148a的表达量较癌旁组织下调,其中37例（61．7％,37/60）下降2倍以上;淋巴结转移、有无癌旁血管浸润及TNM分期Ⅲ～Ⅴ期者其表达量明显降低（P＜0．05）。转染miR-148a后3 d,MKN45细胞生长明显受抑,转染组吸光度值（0．978±0．091）明显低于对照组（1．182±0．074,P＝0．000）。转染组CDC25B（通过targetscan发现的miR-148a靶基因）蛋白表达较对照组明显降低。结论 miR-148a在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织;其具有抑制胃癌细胞增殖的作用,CDC25B可能是miR-148a发挥抑癌作用的靶基因。     

EGCG对肾癌细胞786-O增殖及血管化的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肾癌细胞增殖以及血管生成的作用.方法 将不同浓度(0、10、30、60 μmol/L)的EGCG与肾癌786-O细胞作用后,采用MTT法检测EGCG对肾癌细胞增殖能力以及通过ELISA法检测EGCG对肾癌细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)能力的影响;通过建立裸鼠肾癌动物模型,以不同剂量(0、30、100 mg/kg)经口途径喂服EGCG,测量肾癌肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,使用RT-PCR检测肿瘤组织中VEGF mRNA表达,使用免疫组织化学方法测定肾癌组织中微血管的生成.结果 EGCG能够抑制786-O细胞的增殖能力,其抑制能力随其浓度的升高和作用时间的延长而增强,呈现浓度和时间依赖性(P<0.05).同时EGCG还能以浓度依赖的方式抑制786-O细胞分泌VEGF的能力(P<0.05).进一步研究发现EGCG能够抑制786-O细胞体内的生长,同时降低786-O肿瘤组织中VEGF mRNA的表达水平以及新生微血管的面积(P<0.05).结论 EGCG具有抗肾癌的作用,能够抑制肾癌的生长以及血管的生成.     

大黄素甲醚通过miR-380-3p调控前列腺癌细胞周期和增殖

目的:探讨大黄素甲醚通过调节miR-380-3p表达影响前列腺癌DU145细胞株的细胞周期和增殖的作用机制。方法:采用50 μg/mL的大黄素甲醚处理前列腺癌DU145细胞,将其作为大黄素甲醚组;以不做任何处理的正常培养的DU145细胞作为对照组。流式细胞术检测DU145细胞的周期变化,MTT法检测DU145细胞的增殖...     

miRNA-6516-5p通过靶向ODC1调控肾癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨微小RNA(miRNA)-6516-5p在肾癌细胞系中的表达及调控肾癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞系和正常近端肾小管上皮细胞系中miR-6516-5p的表达。用脂质体法分别将miR-6516-5p模拟物和无意义序列(NC)瞬时转染至miR-6516-...     

微小RNA-128对肝癌细胞增殖和凋亡的影响和机制

目的探讨微小RNA-128(miR-128)对肝癌细胞增殖、凋亡的影响和机制。方法生物信息学结合双荧光素酶报告基因分析miR-128下游靶基因。肝癌细胞MHCC97H分为miR-128过表达组和阴性对照组,分别感染miR-128和阴性对照序列慢病毒。miR-128过表达稳定细胞系再次分为miR-128+空质粒组和miR-128+高尔基体蛋白73(GP73)组,感染包装对照和GP73基因的腺相关病毒。活细胞计数检测试剂盒检测各组细胞增殖,脱氧核糖核昔酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡并计算凋亡指数。6-8周Balb/c裸鼠30只随机分为过表达组和对照组,各15只,分别接种miR-128过表达组和阴性对照组肝癌细胞,随后测量肿瘤体积。结果生物信息学和双荧光素酶报告基因显示GP73是miR-128靶基因。与阴性对照组比较,miR-128过表达组增殖能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与miR-128+空质粒组比较,miR-128+GP73组增殖能力提高,差异有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组比较,miR-128表达组凋亡指数增加,差异有统计学意义(P<0.05。与miR-128+空质粒组比较,miR-128+GP73组凋亡指数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。裸鼠接种肿瘤细胞第5周时,过表达组肿瘤体积为(1209±108)mm^3,低于对照组(1985±298)mm^3,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-128抑制肝癌细胞增殖,促进凋亡。miR-128通过靶向调节GP73基因影响肝癌细胞增殖和凋亡。miR-128/GP73为临床肝癌治疗靶点提供新参考。     

小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.     

降钙素基因相关肽对人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响及机制研究

目的组织工程骨的神经化能有效促进支架材料内血管生成,修复骨缺损。研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖与迁移的作用,进一步揭示组织工程骨的神经化促血管生成机制。方法体外分离获取HUVECs,并通过血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)与CD31抗原鉴定,取第1代细胞用于实验。实验分为6组,分别以0(A组)、1×10—12(B组)、1×10—11(C组)、1×10—10(D组)、1×10—9(E组)、1×10—8mol/L(F组)浓度CGRP干预HUVECs。采用细胞免疫荧光观察HUVECs的CGRP1受体(CGRP1 receptor,CGRP1R)表达情况,AlarmarBlue法动态检测各组HUVECs增殖率,Transwell小室检测各组HUVECs的迁移能力,ELISA法检测HUVECs分泌VEGF的水平,Westernblot法检测其局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达。结果分离的细胞通过形态学及vWF、CD31免疫荧光鉴定为HUVECs,并可见CGRP1R在细胞质和细胞膜表达。CGRP呈时间-浓度依赖性刺激HUVECs增殖;B～F组各时间点细胞增殖能力均高于A组(P<0.05),F组各时间点细胞增殖能力最高。B～F组迁移细胞数均显著高于A组(P<0.05),最大增幅达3倍以上。B～F组VEGF分泌量均显著高于A组(P<0.05);C、D组促进细胞分泌VEGF的能力最强。Western blot检测示,与A组相比,B～F组CGRP刺激HUVECs 3、7、10 d后,FAK表达明显增加(P<0.05)。结论 CGRP对HUVECs的增殖和迁移有直接促进作用,可能作用机制为CGRP能促进VEGF分泌和增加FAK的表达。