四君子汤通过铁死亡途径改善动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积

目的 基于"塞因塞用,以补开塞"探讨四君子汤通过铁死亡途径对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质沉积的影响.方法 ApoE-/-小鼠20只饲喂高脂饲料8周,随机分为模型组(Apoe)和四君子汤组(Sjz),Sjz组小鼠每天灌胃130mg/kg/d四君子汤,连续4周;另选10只C57BL/6J小鼠作为空白对照组(Con...     

Ghrelin改善ApoE-/-小鼠心肌梗死后内皮功能和斑块稳定性

目的 探讨ghrelin对ApoE敲除(ApoE-/-)小鼠心肌梗死后内皮功能和斑块稳定性的影响及机制研究.方法 将ApoE-/-小鼠分为对照组、双模型组和ghrelin干预组.所有ApoE-/-小鼠均高脂饮食喂养12周诱导动脉粥样硬化易损斑块,构建的动脉粥样硬化易损斑块模型即为对照组.在第8周时,双模型组和ghrel...     

间充质干细胞移植对小鼠动脉粥样斑块形成的影响

目的:研究间充质干细胞移植对ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块形成的影响。方法:分离培养ApoE-/-小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并进行鉴定。将30只ApoE-/-小鼠分为阴性对照组、阳性对照组、MSCs移植组,每组10只,阳性对照组和MSCs移植组从尾静脉注射MSCs。比较各组小鼠的斑块面积;分析各组小鼠不同组织中CD4+CD25+Treg细胞的数目和功能;利用ELISA法检测各组小鼠脾细胞炎性因子浓度。结果:与对照组比较,MSCs移植组小鼠斑块面积明显缩小(P<0.05),CD4+CD25+Treg细胞的数目显著增加(P<0.05),CD4+CD25+Treg细胞增殖反应下降;上清液中TGF-β和IL-10浓度显著升高,而IFN-γ浓度显著下降。结论:MSCs移植可能通过调控体内炎症反应而产生抗动脉粥样硬化作用。     

PPARγ在不同周龄apoE-/-小鼠主动脉斑块表达及与斑块成份的相互关系

目的:研究PPARγ基因表达与ApoE-/-小鼠主动脉斑块成份的相互关系。方法:以20和40周龄ApoE-/-小鼠(n=10/组)为研究对象,相同基因背景和周龄C57BL/6 J小鼠设为对照。采用RT-PCR和免疫印迹技术检测各组小鼠主动脉PPARγ基因和蛋白表达变化;Movat 5色套染法和油红O染色检测ApoE-/-小鼠主动脉斑块成份;免疫组织化学技术检测斑块内PPARγ、SM-actin、MOMA-2抗原表达。结合免疫荧光技术分析PPARγ基因在主动脉斑块巨噬细胞、平滑肌细胞的表达及与脂质、弹性纤维、胶原和蛋白聚糖的相互关系。结果:20和40周龄C57BL/6 J小鼠主动脉壁有少量PPARγ表达,以20周龄组明显。ApoE-/-小鼠主动脉壁和斑块内PPARγ表达增多,以斑块内表达明显(P<0.05);与20周龄组比较,40周龄组表达最显著;且斑块脂质含量丰富;弹性纤维、胶原和蛋白聚糖含量减少,血管正性重塑明显;MOMA-2表达增加,SM-actin表达降低(P<0.05)。PPARγ在斑块内巨噬细胞、血管中膜平滑肌细胞和斑块内平滑肌细胞都有表达,但以脂质含量丰富处PPARγ表达最明显。结论:PPARγ在C57BL/6 J小鼠动脉壁表达随增龄而减少;在ApoE-/-小鼠主动脉壁和斑块内PPARγ表达随AS病变进程而增加。推测ApoE-/-小鼠主动脉斑块PPARγ表达上调可能是机体一种代偿行为和自我保护机制。     

南蛇藤素对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块内CD40配体表达、巨噬细胞和平滑肌细胞数量的影响

目的:探讨南蛇藤素对高脂饲养ApoE基因敲除小鼠(ApoE-/-)主动脉粥样硬化斑块内CD40配体表达、巨噬细胞和平滑肌细胞数量的影响。方法:8周龄雄性ApoE-/-小鼠12只,随机分为南蛇藤素组或二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,每组各6只。均给以高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予南蛇藤素2 mg·kg-1·d-1或相当剂量的DMSO腹腔注射(ip)4周。麻醉处死小鼠后,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片.。免疫组化法检测主动脉粥样硬化斑块内CD40配体、CD68和平滑肌α-actin表达水平,以Image Pro Plus 6.0软件进行图像分析。结果:与对照组相比,南蛇藤素组主动脉粥样硬化斑块内CD40配体表达显著减少(P＜0.05);巨噬细胞的阳性率显著降低(P＜0.05);而两组间动脉粥样硬化斑块内平滑肌细胞的阳性率没有显著差异(P＞0.05)。结论:南蛇藤素可能通过减少ApoE-/-小鼠粥样斑块内CD40配体的表达和巨噬细胞的聚集,抑制动脉粥样硬化斑块中炎症反应,而发挥稳定动脉粥样硬化斑块的作用。     

一种小鼠2型糖尿病合并动脉粥样硬化模型的构建方法及评价

目的:对比2型糖尿病合并动脉粥样硬化的造模方法,研究优化模型条件,构建一种发病过程类似人类2型糖尿病合并动脉粥样硬化的小鼠模型。方法:8周龄MKR小鼠20只,随机选取10只作为MKR空白组,剩余MKR小鼠(MKR模型组)与FVB/N小鼠(FVB/N对照组,10只)及ApoE-/-小鼠(ApoE-/-模型组,10只)腹腔注射链脲佐菌素(STZ),后经高脂乳剂及N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)灌胃联合诱导完成糖尿病动脉粥样硬化模型制备,另取10只FVB/N小鼠作为正常组。造模诱导12周后采血,血糖仪(电化学法)检测空腹血糖;全自动生化分析仪检测血脂相关指标;化学发光法测定血清胰岛素水平;ELISA检测血清C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-18水平;HE及Masson染色观察胰腺和动脉组织病理学形态改变;免疫组化检测动脉组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的表达水平。结果:(1)与正常组比较,MKR模型组血糖、血脂及胰岛素水平显著升高(P0.05),呈现明显糖脂代谢紊乱及胰岛素抵抗特征。造模诱导组间比较中,MKR模型组血糖、血脂及胰岛素水平显著高于FVB/N对照组(P0.05),而与ApoE-/-模型组水平相当(P0.05)。(2)ELISA结果显示,与MKR模型组比较,MKR空白组、FVB/N对照组及正常组血清CRP、TNF-α、IL-1β和IL-18水平显著降低(P0.05),而ApoE-/-模型组差异无统计学显著性(P0.05)。(3)HE染色显示,与正常组比较,MKR模型组胰腺出现胰岛萎缩,胰岛细胞减少,小叶间隙增宽及明显炎症细胞浸润表现,主动脉出现明显斑块脂质斑块沉积;Masson染色观察到斑块内胶原含量明显减少。(4)免疫组化结果显示,MKR模型组动脉组织MMP-9表达与正常组比较显著上调,TIMP-1表达显著下降,而与ApoE-/-模型组比较差异无统计学显著性(P0.05)。结论:MKR小鼠经STZ、高脂乳剂及L-NAME诱导建立的模型可作为研究2型糖尿病血管并发症的一种病理模型。     

安化黑茶减轻高脂诱导的ApoE~(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝

目的:探讨安化黑茶对高脂饮食诱导的载脂蛋白E敲除(ApoE~(-/-))小鼠非酒精性脂肪肝的防治作用及相关机制。方法:选取8周龄雄性ApoE-/-小鼠50只,随机分为模型组、阿托伐他汀组和安化黑茶高、中、低剂量组,每组10只,另选用10只8周龄C57BL/6J雄性野生小鼠作为正常对照组,ApoE-/-和野生小鼠分别予以等量高脂饲料和普通饲料持续喂养17周,同时用相应药物或生理盐水灌胃干预。实验末取部分肝组织行HE染色,并检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;RT-qPCR检测羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)和硬脂酰辅酶A脱饱和酶1(SCD-1)的mRNA表达。结果:模型组小鼠肝脏体积变大,表面光滑,被膜紧张,边缘变钝,肉眼呈现黄色油腻感,显微镜下可见大小不等的空泡形成,提示模型制备成功。与模型组相比,安化黑茶不同剂量组小鼠的肝脏脂变程度减轻,肝组织中ALT和AST活性、MDA含量及HMGCR、SCD-1和PPAR-γ的mRNA表达显著降低(P0. 05),SOD和GSH-Px活性上升(P0. 05),且黑茶高、中剂量组预防性给药的治疗效果优于低剂量组(P0. 05)。结论:安化黑茶防治高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠非酒精性脂肪肝形成的机制可能是通过抑制HMGCR、SCD-1和PPAR-γ的mRNA表达来减少脂类物质合成,同时通过抗氧化来减少氧化损伤和保护肝细胞。     

丹参酮ⅡA对ApoE~(-/-)小鼠肝脏脂质沉积及铁死亡相关蛋白表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积及铁死亡相关蛋白表达的影响。方法:32只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮ⅡA高剂量(60 mg/kg)组、丹参酮ⅡA低剂量(30 mg/kg)组和辛伐他汀组,另取8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。模型组及各治疗组均给予高脂饲料喂养,空白组给予普通饲料喂养。造模4周后丹参酮ⅡA高、低剂量组及辛伐他汀组分别给予相应的药物灌胃,正常对照组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃。8周后全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE染色和油红O染色观察小鼠肝组织形态及脂质沉积;试剂盒检测肝组织活性氧簇(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;免疫组化检测肝脏p53和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达;Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统及RT-qPCR检测肝脏铁死亡相关因子GPX4、xCT/SLC7A11、p53和铁蛋白重链1(FTH1)蛋白及mRNA的表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高(P0. 05或P0. 01),HDL-C含量无明显变化;肝组织脂肪空泡清晰可见;GSH水平降低,ROS水平显著升高(P0. 01);p53蛋白及mRNA的表达增高,GPX4、xCT/SLC7A11和FTH1蛋白和mRNA的水平显著降低(P0. 05或P0. 01)。与模型组相比,丹参酮ⅡA高、低剂量组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著下降,HDL-C含量无明显改变;肝组织脂滴变小且脂肪变性程度明显减轻;GSH水平增高,ROS水平降低(P0. 01);GPX4、xCT/SLC7A11和FTH1蛋白及mRNA的水平显著升高,p53蛋白及mRNA的表达显著降低(P0. 05或P0. 01)。结论:丹参酮ⅡA能够降低ApoE-/-小鼠肝脏脂质沉积和脂质过氧化损伤,可能与干预肝细胞铁死亡相关蛋白作用有关。     

RXR/VDR激动剂对糖尿病ApoE-/-小鼠胸主动脉硬化及NF-κB表达的调控

 目的：探讨视黄醇X受体（RXR）激动剂贝沙罗汀（Bex）和维生素D受体（VDR）激动剂骨化三醇（Cal）对链脲佐菌素（STZ）诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠胸主动脉硬化及NF-κB表达的影响。方法: 动物分6组：C57组、ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-+Bex（10 mg·kg-1·d-1）组、STZ-ApoE-/-+Cal（10 μg/kg）组和STZ-ApoE-/-+Bex+Cal组。STZ腹腔注射复制糖尿病动物模型,Western blotting法及免疫组化法测定小鼠胸主动脉中NF-κB的表达,HE染色观察小鼠胸主动脉斑块的面积。结果：与C57组相比,ApoE-/-组的血糖水平无明显差别,血清总胆固醇（TC）及低密度脂蛋白（LDL）水平升高（P<005）;STZ-ApoE-/-组的血糖及血清TC和LDL水平较ApoE-/-组明显增高（P<005）,Bex和Cal对小鼠的血糖及血清TC、LDL无影响。与C57组相比,ApoE-/-和STZ-ApoE-/-小鼠胸主动脉的NF-κB蛋白表达显著增加;与STZ-ApoE-/-组相比,Bex和Cal均显著降低NF-κB的水平（P<0.05）,联合用药降低更明显（P<001）。与STZ-ApoE-/-组相比,Bex和Cal可缩小STZ-ApoE-/-小鼠的胸主动脉斑块面积（均P<005）;与Bex组相比,联合组斑块面积缩小的程度有显著差异（P<005）。结论：Bex和Cal可降低STZ-ApoE-/-小鼠胸主动脉粥样硬化斑块面积及NF-κB的表达,联合有协同作用,由此推论Bex和Cal的抗动脉粥样硬化机制可能与其对NF-κB的调节有关。     

热休克蛋白60口服耐受对小鼠动脉粥样硬化斑块的影响

目的:探讨热休克蛋白60(HSP60)口服诱导的免疫耐受对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的影响.方法:8周龄ApoE-/-小鼠分别口服重组鼠HSP60 PBS溶液和单纯PBS,连续5天后高脂饲养12周.观察各组斑块面积;分析脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞百分比;脾细胞抗原特异性T细胞增殖反应,ELISA法检测上清液细胞因子浓度.结果:与对照组比较,口服HSP60组斑块面积显著减小,口服HSP60组脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞百分比显著升高(P<0.01).HSP60刺激脾细胞后,口服HSP60组T细胞增殖反应下降,上清液中TGF-β浓度显著升高,而IFN-γ显著下降.结论:口服HSP60可预防动脉粥样硬化形成;口服HSP60诱导调节性T细胞介导的抗原特异性免疫耐受可能是动脉粥样硬化的机制.     

阿托伐他汀通过RXRα介导的抗氧化应激效应抑制高脂喂养糖尿病ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的形成

目的:观察阿托伐他汀(Atorv)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病高脂喂养载脂蛋白E敲除(apolipoprotein E knockout,ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响,探讨阿托伐他汀在糖尿病合并高脂饮食条件下对抗动脉粥样硬化的机制。方法:C57小鼠8只作为对照,34只高脂喂养的ApoE-/-小鼠随机分为3组:ApoE-/-组、STZ-ApoE-/-组和STZ-ApoE-/-+Atorv组。STZ腹腔注射建立糖尿病动物模型,测定小鼠空腹血糖、血脂水平,HE染色图像分析测定胸主动脉斑块面积;免疫杂交检测主动脉及细胞内NADPH氧化酶亚基gp91phox蛋白水平;Fenton反应Griess显色法测定血清及胸主动脉匀浆上清液活性氧(ROS)水平。I型胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),流式细胞术检测内皮细胞内ROS的水平,光泽精分析法测定NADPH氧化酶活性。采用干扰RNA和质粒转染的方法评价类视黄醇X受体α(RXRα)在Atorv抑制氧化应激中的作用。结果:(1)与C57组相比,ApoE-/-组小鼠胸主动脉斑块面积显著增加[(215.88±34.19)μm2vs 0μm2,P0.01],2组间空腹血糖水平无显著差异,血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox表达水平显著缩小(P0.05);(2)与ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-组胸主动脉斑块面积进一步增加[(314.13±35.72)μm2vs(215.88±34.19)μm2,P0.05],血糖水平升高,血清TC、LDL-C、血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox水平进一步增加(P0.05);(3)与STZ-ApoE-/-组相比,STZ-ApoE-/-+Atorv组胸主动脉粥样斑块面积显著降低[(217.47±24.56)μm2vs(314.13±35.72)μm2,P0.05],血糖、血清TG、HDL、TC、和LDL-C无显著变化,血清及胸主动脉ROS、胸主动脉gp91phox水平亦显著降低(P0.05);(4)高糖(25 mmol/L)干预后,HUVECs内ROS含量、gp91phox蛋白水平及NADPH氧化酶活性明显增加(P0.05),阿托伐他汀(10-8~10-6mol/L)显著降低高糖环境下HUVECs胞内ROS含量、gp91phox表达及NADPH氧化酶活性,且具有浓度依赖性;(5)将RXRαsiRNA转染至HUVECs之后,阿托伐他汀(10-6mol/L)对高糖环境下ROS生成及NADPH氧化酶活性的抑制效应显著减弱,RXRα质粒转染使RXRα过表达后,阿托伐他汀(10-6mol/L)抑制ROS生成及NADPH氧化酶活性的作用明显增强(P0.05)。结论:阿托伐他汀通过抑制高糖环境下机体的氧化应激反应对抗动脉粥样硬化;核受体RXRα介导阿托伐他汀的抗氧化应激效应。     

人参皂苷Rd通过下调NF-κB信号改善小鼠动脉粥样硬化炎症反应北大核心CSCD

目的探究人参皂苷Rd在ApoE-/-小鼠中抗动脉粥样硬化(AS)的潜在机制。方法将ApoE-/-小鼠随机分为6组(n=8):对照组、模型组、阿托伐他汀钙(ATV)组、人参皂苷Rd治疗组(5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg)。给小鼠喂食西式饮食6周,然后同时给予人参皂苷Rd治疗6周。采集血样进行脂质分析、炎症因子水平检测和氧化应激水平检测。采集胸主动脉,分别进行苏木素-伊红(HE)和油红O染色,Western印迹检测蛋白表达。结果人参皂苷Rd显著抑制了AS病变的发展和脂质积累,显著降低总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,显著升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。人参皂苷Rd下调促炎标志物的表达,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β。此外,人参皂苷Rd处理降低了丙二醛(MDA)活性并增强了超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。人参皂苷Rd处理也显著抑制诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达,并抑制核因子-κB(NF-κB)通路的异常激活。结论人参皂苷Rd通过抑制NF-κB通路激活对AS发挥抗炎和抗氧化作用。     

HSP60通过Toll样受体对ApoE~(-/-)小鼠树突状细胞功能影响研究

目的:探讨HSP60通过Toll样受体(TLR)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导在体外对ApoE-/-小鼠树突状细胞(mDC)的功能影响。方法:将ApoE-/-小鼠构建动脉粥样硬化模型后,从骨髓提取DC,体外培养成熟后分三组:HSP组、LPS组及对照组,分别与HSP60、LPS及生理盐水孵育后,应用流式细胞仪检测细胞表面TLR及CD80水平,RT-PCR检测TLR的mRNA水平,免疫印迹法检测MAPK家族中p38及ERK水平;上清液用ELISA法检测IL-6及TNF-α水平。结果:与对照组比较,HSP组中DC表达TLR及MAPK家族水平、成熟标记物CD80水平、分泌IL-6及TNF-α水平均明显升高(P0.01);但与LPS组比较则无显著差异(P0.05)。结论:HSP60通过TLR介导MAPK信号转导参与动脉粥样硬化模型mDC的活化过程。     

NF-κB"decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6表达的影响

目的 :研究NF -κB“decoy”寡核苷酸 (ODNs)对LPS诱导小鼠巨噬细胞株J774 1细胞的TNF -α和IL - 6表达的影响 ,探讨F -κB“decoy”寡核苷酸防治LPS诱导急性炎性损伤的可行性。方法 :巨噬细胞株J774 1细胞接种于 6孔板中 ,4× 10 5个细胞/孔 ,37℃、5 %CO2 培养过夜 ,待细胞汇合至 80 % ,用无血清、无抗生素 16 4 0培养液洗涤细胞两次后随机分为 4组。内毒素刺激组 :用含 1mg/LLPS的培养液刺激 ,不加治疗 ;NODN治疗组 :用含 1mg/LLPS的培养液刺激 3h ,然后用脂质体介导 1μmol/L(终浓度 )NF -κB“decoy”ODNs治疗 ;SO…     

动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢相关的PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路及炎症因子的变化和化瘀祛痰方在其中的作用

目的:观察动脉粥样硬化(AS)小鼠肝脏脂质代谢相关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)/肝X受体α(LXR-α)/ATP结合盒转运体G1(ABCG1)通路和炎症因子的变化,以及化瘀祛痰方在其中的作用,探讨化瘀祛痰方对肝脏脂质代谢及炎症反应的影响及作用机制。方法:将24只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组和辛伐他汀组,8只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。除正常对照组给予基础饲料外,其余各组给予高脂饲料。造模12周后,灌胃给药,化瘀祛痰方组与辛伐他汀组给予相应药物,正常对照组与模型组给予等体积的生理盐水。8周后用全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;HE和油红O染色观察肝脏组织病理及脂质的变化情况;ELISA法检测肝脏游离脂肪酸(FFA)、TG、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量;Western blot法检测PPAR-γ、LXR-α和ABCG1的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和...     

HSF1对LPS诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用及其相关差异表达基因的筛选

目的:探讨热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的作用及其分子机制。方法:采用气管滴注LPS的方法制备小鼠急性肺损伤模型,观察HSF1野生型小鼠(HSF1~(+/+))和HSF1敲除小鼠(HSF1~(-/-))肺大体改变和肺组织病理改变,检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的蛋白表达。采用基因芯片技术筛选经LPS处理后的HSF1~(+/+)和HSF1~(-/-)小鼠肺组织中的差异表达基因,并进一步采用real-time PCR对CXC趋化因子受体2(CXC chemokine receptor 2,CXCR2)的表达进行验证。结果:与经LPS刺激后的HSF1~(+/+)小鼠相比,经LPS刺激的HSF1~(-/-)小鼠肺大体和病理损伤加重,BALF中总蛋白、VEGF、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量升高,差异具有统计学意义(P0.05)。基因芯片分析发现,与经LPS处理的HSF1~(+/+)小鼠相比,HSF1~(-/-)小鼠共筛选出918个差异基因,有65个基因表达差异明显,其中Atg7、ccr1、cxcr2、Tbl1xr1、Mmp9、Pparg、Plcb2、Arrb2、Cntn1、Col4a6等共28个基因在HSF1~(-/-)小鼠的肺组织中表达明显上调;Fgfr1、Fgfr2、Map4k4、Ddx58、Tfg、Stat3、Smad4、Lamc1、Sdc3等共37个基因表达明显下调。Real-time PCR结果显示,CXCR2的mRNA水平在LPS刺激的HSF1~(-/-)小鼠肺组织较HSF1~(+/+)小鼠表达明显上调,表达趋势与基因芯片结果一致。结论:HSF1能减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤,CX-CR2可能参与了对肺组织的保护作用。     

吡格列酮对尿毒症apoE~(-/-)小鼠调节性T细胞和动脉粥样硬化的影响

目的:观察吡格列酮(Pio)对尿毒症apoE基因敲除(apoE-/-)小鼠调节性T细胞(Treg)和动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响。方法:ApoE-/-小鼠通过二步外科手术法建立尿毒症模型,对照组行假手术。造模后检测肾功能判断造模是否成功。实验动物分为:尿毒症Pio干预组(UP)、尿毒症安慰剂组(UO)及对照安慰剂组(CO),分别以Pio或安慰剂干预8周。干预结束后检测肾功能、血脂及血糖;血清转化生长因子β1(TGF-β1)及干扰素γ(IFN-γ)浓度;脾脏Treg比率;主动脉叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)及IFN-γmRNA的表达;主动脉根部AS斑块相对面积。结果:手术后肾功能检测提示造模成功。干预结束后UO组与CO组相比,主动脉根部斑块相对面积显著增大;脾脏Treg比率下降;血清TGF-β1浓度降低、IFN-γ浓度升高;主动脉Foxp3及CTLA-4mRNA表达下调、IFN-γmRNA表达上调。Pio干预能逆转上述指标的改变,即UP组与UO组相比,主动脉根部斑块面积显著缩小;脾脏Treg比率上升;血清TGF-β1浓度升高、IFN-γ浓度降低;主动脉Foxp3及CTLA-4mRNA表达上调、IFN-γmRNA表达下调。结论:Pio可上调尿毒症apoE-/-鼠体内受损Treg的数量和功能,校正Treg/效应性T细胞(effectorTcell,Teff)失衡和延缓其主动脉加速发展的AS,而此作用与改善糖脂代谢无关。     

肥大细胞在小鼠佐剂性关节炎疼痛中的作用及其机制研究

目的:探讨肥大细胞在完全弗氏佐剂(CFA)诱导的小鼠佐剂性关节炎(AA)疼痛中的作用。方法:实验分为4组:正常对照组(control组)、AA模型组(model组)、AA模型+色甘酸钠(CS)组(CS组)和AA模型+肥大细胞缺失组(W-4Bao组)。每组6只小鼠,前3组均为健康雌性C57BL/6小鼠,W-4Bao组为肥大细胞缺乏的KitW-4Bao小鼠。除control组注射生理盐水外,其他各组小鼠右后足底皮下注射CFA构建慢性AA疼痛模型;CS组于致炎1 d后开始腹腔注射CS(20 mg/kg),其它各组给予等体积生理盐水,每日1次,连续给药14 d。分别于致炎第0、1、3、7、10和14天测量小鼠足掌厚度、机械刺激缩爪反应阈值(PWT)和热刺激缩爪反应潜伏期(PWL)。14 d后获取各组小鼠踝关节组织,组织切片进行HE和甲苯胺蓝染色,ELISA法检测踝关节组织中组胺(histamine)、类胰蛋白酶(tryptase)、P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的浓度。结果:小鼠致炎1 d后,与control组相比,model组小鼠右后足炎症表现明显,PWT和PWL显著降低(P&...     

青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的合成及其抗炎作用

目的合成并初步探索青藤碱衍生物青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯的抗炎作用。方法以青藤碱(SN)为原料,化学合成青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。用脂多糖(LPS)诱导建立内毒素血症小鼠模型,并在诱模前于治疗组小鼠体内分别注射5 mg/kg、2.5 mg/kg剂量的青藤碱和青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯,未治疗组和空白对照组注射生理盐水,观察记录各组小鼠的状态及生存状况。MTT法检测不同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外对RAW264.7细胞增殖的影响。用终浓度为(0、1、2、5、10)μmol/L的青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯共培养刺激RAW264.7细胞24 h,再加终浓度为1μg/kg的LPS刺激6 h后,实时定量PCR检测IL-6mRNA表达水平。结果成功制备青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯。体内研究发现:相同浓度青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯治疗组小鼠,生存状态较青藤碱治疗组有所改善;青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯体外可以抑制巨噬细胞的增殖和IL-6的表达。结论青藤碱-4-羟基-棕榈酸酯具有一定的抗炎作用,可能是通过抑制巨噬细胞增殖、减少炎症介质释放而实现的。     

巨噬细胞特异表达共刺激分子VSIG4对实验性肾间质纤维化的影响

目的:探讨巨噬细胞特异表达共刺激分子VSIG4与实验性小鼠肾间质纤维化的关系。方法:SPF级雄性C57B6(VSIG4-/-及VSIG4+/+)小鼠共40只,其中VSIG4-/-肾小管间质性肾炎模型组(n=20)和VSIG4+/+肾小管间质性肾炎模型组(n=20),两个模型组下分别设术前7d及单侧输尿管梗阻后3d、7d、14d4个时相点,每个时相点各5只。模型组行左输尿管结扎。采用自动生化分析仪检测小鼠血肌酐、尿素氮水平。于术前7d、术后第3、7、14天观察肾小管损害及肾间质炎性细胞浸润程度,免疫组化技术观察病变肾组织TGF-β1和MMP-2的表达。结果:①血肌酐及尿素氮水平在两个模型组间无统计学意义。②与VSIG4+/+肾小管间质性肾炎模型组相比,VSIG4-/-肾小管间质性肾炎模型组肾间质炎性细胞浸润和肾小管损害程度明显加重(P0.05),肾组织TGF-β1表达明显升高(P0.05),MMP-2表达显著降低(P0.01)。结论:VSIG4-/-的小鼠肾间质炎性细胞浸润、肾小管损害加重,病变肾组织TGF-β1的表达上升和MMP-2的表达下调。提示VSIG4在抑制肾小管间质损伤的病理进程中发挥作用。