伤寒Vi精制多糖分子大小测定中层析-比色法优化和层析-积分法比较

目的 优化层析-比色法,并对该方法进行分析方法验证;比较优化层析-比色法和层析-积分法,评价两方法测定伤寒Vi精制多糖分子大小的适用性。方法 优化比色法O-乙酰基标准曲线浓度范围,对该方法进行准确度、重复性、中间精密度、线性和耐用性的验证;应用优化层析-比色法和层析-积分法检测多批次伤寒Vi精制多糖分子大小,对结果进行统计学分析。结果 优化层析-比色法准确度回收率均为100%;样品的重复性相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）分别为2.4%和0.0%,中间精密度RSD均为3.4%,连续5次测定标准曲线,决定系数均大于0.999 0,耐用性RSD为4.6%。优化层析-比色法和层析-积分法在检测伤寒Vi精制多糖分子大小时,差异无统计学意义（t=-1.372,P＞0.05）。结论  优化的比色法具有良好的准确度、重复性、中间精密度、线性和耐用性,两种方法均可用于检测伤寒Vi精制多糖分子大小。     

动态浊度法定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量方法的验证

目的   对定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量的动态浊度法进行验证。方法   采用动态浊度法定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量，并对分析方法的线性、专属性、准确度、重复性、中间精密度和耐用性进行验证。结果  动态浊度法的线性相关系数绝对值为0.996；最大有效稀释倍数下专属性回收率为68.81%~73.80%；准确度回收率为53.50%~77.77%；3名实验人员重复性相对标准偏差分别为2.0%、3.6%、2.0%；中间精密度相对标准偏差为7.6%；耐用性回收率为66.49%~108.34%。 结论   动态浊度法检测冻干甲型肝炎中的细菌内毒素含量的方法具有良好的专属性、准确度、线性、重复性、中间精密度和耐用性，符合定量检测和数据完整性的要求。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆中富马酸单甲酯药物浓度及应用

目的： 建立液相色谱-质谱联用（HPLC-MS/MS）法测定人血浆中富马酸单甲酯的方法,并应用于检测中国健康受试者血浆中富马酸单甲酯的浓度。方法： 血浆样品用醋酸铵稀释后经过96孔固相萃取板前处理,以含0.5%甲酸的水溶液和甲醇作为流动相,采用梯度洗脱方式在ACE Excel 3 C₁₈-AR（2.1 mm×50 mm）色谱柱上进行分离,每个样品分析时间为4 min。在电喷雾负电离模式下,多反应监测检测离子对m/z 129.0→m/z 85.0（富马酸单甲酯）和m/z 134.0→m/z 90.0（内标,富马酸单甲酯-d₅）。结果： 富马酸单甲酯线性范围为4~1 200 ng·mL^-1（r²>0.99）,定量下限为4 ng·mL^-1,日内和日间精密度RSD ≤ 9.7%,准确度相对偏差均在±4.2%以内,平均回收率RSD ≤ 6.6%,基质效应在98.3%~100.9%之间。稳定性实验中,各种储存条件不影响对药品浓度的准确测定。结论： 本方法运行时间短,灵敏度高,重复性好,适用于富马酸单甲酯血浆浓度定量检测。     

超高效液相色谱-质谱联用法检测人全血中氯喹、羟氯喹、阿比多尔及其临床应用

目的: 建立并验证一种人全血中氯喹、羟氯喹、阿比多尔的检测方法,并将其用于临床检测。方法: 全血样本经氯化铵裂解和乙腈蛋白沉淀后,采用液相-串联质谱联用仪测定。色谱柱为BEH C₁₈,以含0.5%甲酸乙腈溶液-0.5%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1,电喷雾正离子模式,多反应监测。结果: 氯喹、羟氯喹、阿比多尔在8~1 600 ng·mL^-1线性关系良好;批内和批间精密度(RSD)均在12.71%以内,批内和批间准确度(RE)均在-7.12%~13.51%;提取回收率均在76.50%~92.49%;内标归一化的基质因子变异系数(RSD)均小于15%;在多种储存条件下,处理前后的样品稳定性良好。结论: 该方法专属性强,准确度高,重复性好,可用于3种药物治疗药物监测及中毒检测。     

人凝血因子Ⅷ澄清过滤后层析上样对层析效率的影响

目的  分析在人凝血因子Ⅷ(human coagulation factor Ⅷ,FⅧ)层析纯化上样前增加澄清过滤对FⅧ层析效果的影响。方法  采用直接上样和澄清过滤后上样两种方式各10批次进行层析纯化,比较层析参数（流速、柱压、上样量）、洗脱液效价、洗脱液体积、洗脱液比活性、成品量及成品质量指标（效价、水分、可见异物、磷酸三丁酯残留量、聚山梨酯80残余量）。结果  经澄清过滤后上样洗脱液效价高于直接上样且差异有统计学意义（t=28.56,P=0.000）,层析参数（流速、柱压、上样量）和洗脱液体积（t=0.51,P=0.310）、洗脱液比活性（t=0.56,P=0.296）差异均无统计学意义,成品产量高于直接上样且差异有统计学意义（t=23.14,P=0.000）。使用澄清过滤后,成品质量指标效价（t=0.95,P=0.183）和水分（t=1.12,P=0.145）差异无统计学意义、可见异物、磷酸三丁酯残留量、聚山梨酯80残余量符合质量标准。结论  在FⅧ层析生产过程中,增加一步澄清过滤能提高层析收率和成品收率,且对产品质量无影响。     

狭叶荨麻精制多糖含量测定

目的测定黑龙江产狭叶荨麻全草中精制多糖的含量。方法以苯酚-硫酸比色法测定,检测波长490nm。结果黑龙江产狭叶荨麻全草中精制多糖的3批平均含量为64.85%,RSD为1.36%,平均回收率为99.76%,RSD为1.19%,线性范围为2.39~14.34（μg.mL-1）,r=0.9993。结论该方法操作简单,精密度、稳定性及重复性好,结果可靠,可用于狭叶荨麻精制多糖的含量测定。     

超高效液相色谱-质谱联用法测定人血浆中沙丁胺醇浓度

目的：建立测定人血浆中沙丁胺醇浓度的超高效液相色谱-质谱联用方法。方法：内标选用沙丁胺醇-d9,以甲醇沉淀血浆中蛋白,取上清液吹干复溶;采用Welch Ultimate XS-C₁₈色谱柱（3.0 mm×100 mm,3 μm）,预柱选用Welch Ultimate XB-C₁₈柱（2.1 mm×5 mm,5 μm）,以含0.1%甲酸5 mmol·L^-1乙酸铵的5%乙腈和纯乙腈为流动相,梯度洗脱;应用电喷雾离子化,正离子模式下进行多反应监测沙丁胺醇（m/z 240.2→m/z 147.9）和内标沙丁胺醇-d9（m/z 249.1→m/z 149.1）的浓度。结果：沙丁胺醇的线性范围为5~2 000 pg·mL^-1,定量下限为5 pg·mL^-1,日内、日间准确度为101.93%~109.03%,精密度RSD为1.45%~8.50%。结论：本方法简便、准确、灵敏、稳健且经济,适用于硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂的临床药动学研究和生物等效性评价。     

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞DNA残留定量PCR检测法的验证

目的  验证Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留定量PCR（quantitative PCR,qPCR）检测法。方法  用试剂盒提取Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗原液的DNA,采用qPCR法检测Vero细胞DNA,并验证方法的线性、专属性、准确性、精密度、耐用性及定量限;同时采用DNA探针杂交法检测样品。结果  qPCR检测Vero细胞DNA标准曲线在0.003 0~300.000 pg/μl之间线性良好;对Hep-2细胞、大肠埃希菌、酵母细胞DNA均无扩增反应;高、中、低浓度样品加标回收率在50%~150%,准确性良好;定量检出限为0.003 0 pg/μl;精密度良好（相对标准偏差＜15%）;反应体系配制好后置于2~8 ℃ 30 min后进行检测,相对标准偏差＜15%,耐用性良好。DNA探针杂交法与qPCR结果均小于0.1 pg/μl。 结论  qPCR检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留具有良好的线性、专属性、准确性、精密度和耐用性,可适用于该项检测。     

不同品牌蛋白沉淀板对人血浆中霉酚酸含量测定结果比较

目的： 利用超高效液相色谱-串联质谱法,比较不同品牌（赛默飞和岛津）的蛋白沉淀板测定人血浆霉酚酸的效果。方法： 含霉酚酸的血浆样本经分别2种蛋白沉淀板进行前处理,以霉酚酸-d3为内标,采用Acquity UPLC^© BEH-C₁₈柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）分离,流动相包括水（含0.1%甲酸,2 mmol·L^-1醋酸铵,V/V）和乙腈（含0.1%甲酸,V/V）,梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1。正离子检测模式（+ESI）下,采用多离子反应监测（MRM）模式进行分析,霉酚酸的离子对为m/z 321.2-207.1,内标的离子对为324.0-210.0。比较各蛋白沉淀板的准确度、精密度、基质效应、提取回收率等指标。结果： 霉酚酸的线性范围为0.312 5~20 μg·mL^-1,定量下限为0.312 5 μg·mL^-1。各品牌的蛋白沉淀板所获得的准确度、精密度、基质效应和提取回收率均符合要求。结论： 这2种蛋白沉淀板操作简便、快速、准确、且精密度良好,方法学考察结果没有显著性差异,均适用于人血浆中霉酚酸的分析,可用于临床治疗药物监测。     

高效液相色谱法评价贵州金钱草代谢产物槲皮素和山奈素的多样性

目的： 建立金钱草中槲皮素和山奈素的HPLC测定方法,用以测定贵州省不同来源地的21份金钱草中槲皮素和山奈素的含量,并对其多样性进行分析。方法： 采用Alltima C₁₈柱（5 μm,250 mm×4.6 mm）,以甲醇-0.4%磷酸（50∶50,V/V）为流动相,柱温：25℃,流速：1.0 mL·min^-1,检测波长为360 nm;用SPSS 19.0软件对不同来源地金钱草中槲皮素和山奈素进行聚类分析。结果： 槲皮素和山奈素分别在0.028 6~0.196 5 mg （r=0.999 7）和0.047 7~0.381 4 mg （r=0.999 9）的定量范围内,色谱峰面积与进样量呈良好的线性关系,相关系数均大于0.999。槲皮素和山奈素在精密度实验、重复性实验和稳定性试验中的RSD分别为0.24%和0.58%、0.95%和1.32%、1.02%和1.08%,RSD均小于1.40％,加样平均回收率为99.42%和98.36%。不同来源地的21份金钱草中槲皮素和山奈素含量差异较大。结论： 用HPLC法测定金钱草中槲皮素和山奈素含量简单、精确、重复性高,贵州金钱草中槲皮素和山奈素含量差异较大,具有丰富的多样性及一定的地域性。     

定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量的药典方法的改良及其验证

目的 通过应用低浓度对照品,对定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量的药典方法(O-乙酰基测定法)进行改良,并验证该法的可行性.方法 以含0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 μmol溴化乙酰胆碱的对照品溶液制作改良O-乙酰基测定法的标准曲线,并对该法的标准曲线线性、准确度、精密度、专属性和耐用性进行验证.结果 改良O-乙酰基测定法的标准曲线线性良好,决定系数＞0.998.该法的准确度、精密度和专属性良好,O-乙酰基回收率为99.8％～101.3％,实验间和实验内相对标准偏差均＜4％,O-乙酰基加样回收率均＞96％.该法测定O-乙酰基的定量限为0.070 mmol/L.结论 应用低浓度对照品的改良O-乙酰基测定法可用于定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量.     

检测精制肺炎链球菌多糖中甲基戊糖方法的验证

目的 建立检测精制肺炎链球菌多糖中甲基戊糖的方法,并进行方法学验证.方法 将经硫酸和加热处理的精制肺炎链球菌多糖与半胱氨酸盐酸盐进行反应,分别在396 nm和430 nm波长下检测合成的化合物的吸光度值,并根据差值计算甲基戊糖含量.对建立的甲基戊糖测定法进行准确度、专属性、精密度、线性和耐用性验证.结果 该法的准确度良好,甲基戊糖加样回收率为90.2％～108.9％.该法具有较好的重复性和中间精密度,相对标准偏差分别为≤4.6％和1.2％～5.2％,均符合规定的要求.在甲基戊糖质量浓度为2～22 mg/L的检测范围,该法的标准曲线呈现良好的线性,决定系数＞0.99000.该法的专属性较好,精制肺炎链球菌多糖溶液中含有10～50 g/L乙酸钠不会对检测结果产生影响.结论 建立的甲基戊糖测定法可准确定量甲基戊糖含量,可用于对精制肺炎链球菌多糖中甲基戊糖的质量控制.     

伤寒疫苗的现状及展望

伤寒仍是发展中国家的主要公共卫生问题,控制伤寒的最有效措施是接种疫苗.此文介绍了早期伤寒疫苗和现行伤寒疫苗的的安全性和有效性,讨论了伤寒Vi多糖结合疫苗的研发现状及应用前景.     

β-丙内酯残留量检测分析方法的建立及验证

目的  建立准确快速检测灭活疫苗中β-丙内酯（β-propiolactone , BPL）含量的分析方法。方法  采用气相色谱法进行BPL含量检测，用外标法计算BPL含量。对分析方法的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性进行验证。结果  BPL溶液和供试品溶液在相应保留时间内可见BPL峰，阴性对照溶液未出峰。BPL峰5次进样峰面积相对标准偏差小于2%且与其他峰分离度大于1.5。BPL的浓度在1.11~35.52 μg/ml范围内与峰面积成线性关系。浓度分别为2.22、4.44和8.88 μg/ml的供试品溶液回收率在97.3%~106.9%之间，相对标准偏差均小于3%。检测限为0.30 μg/ml，定量限为0.49 μg/ml。结论  建立的BPL检测方法具有良好的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、耐用性，符合定量检测的需求。     

Combined vaccination against hepatitis A,hepatitis B,and typhoid fever: safety,reactogenicity, and immunogenicity

BACKGROUND: The etiological agents of hepatitis A, hepatitis B, and typhoid fever share similar patterns of global distribution, and cause significant disease burden in travelers to endemic countries. Combined vaccination against all three diseases, based on currently available vaccines, would promote compliance and convenience for travelers. This clinical study evaluated the feasibility of extemporaneously syringe-mixed hepatitis A and B vaccine (Twinrix) and a Vi polysaccharide vaccine (Typherix) in healthy adults, and compared this to concomitant administration of the vaccines in separate arms. METHODS: The mixed dose of vaccine contained at least 720 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) units of the inactivated hepatitis A antigen, 20 microg of the recombinant hepatitis B antigen and 25 microg of the Vi polysaccharide typhoid antigen in 1.5 mL. The study was conducted in 200 healthy 18- to 45-year-old volunteers. RESULTS: Equivalence between the vaccines mixed before administration and the concomitantly administered vaccines was shown in terms of seroconversion and seroprotection. With the exception of local injection site soreness, which was higher in the mixed administration group, the reactogencity was similar for both groups. In both vaccination groups more than 95% of the subjects were anti-hepatitis A virus and anti-Vi seropositive 1 month after the first vaccination. With regard to hepatitis B, a strong response was achieved in both groups, with more than two-thirds of the subjects protected 2 months after the start of the immunization course. CONCLUSION: These results support the feasibility of extemporaneously syringe-mixed combined hepatitis A and B vaccine with a Vi polysaccharide typhoid vaccine, administered in healthy adults.     

14型肺炎球菌多糖双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的  建立并验证测定14型肺炎球菌多糖（pneumococcal capsular polysaccharide serotype 14，PS14）浓度的双抗体夹心ELISA。方法  采用Protein G亲和层析纯化兔血清，得到兔抗PS14多克隆抗体（多抗）。以鼠抗PS14单克隆抗体（单抗）为捕获抗体，兔抗PS14多抗为检测抗体，碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG为二抗，PS14为参考品建立双抗体夹心ELISA法。确定鼠抗PS14单抗和兔抗PS14多抗的工作浓度，建立标准曲线，并验证该方法的准确性、精密度和特异性，考察佐剂对该方法的影响。结果  鼠抗PS14单抗的最适工作浓度为5 μg/ml，兔抗PS14多抗的最适工作浓度为1 μg/ml，标准曲线的范围为9.375 ~ 600.000 ng/ml，线性良好，相关系数为0.999。测定多糖样品的PS14回收率为110% ~ 140%，多糖蛋白结合物样品的PS14回收率为90% ~110%。平均批内和批间精密度分别是5.64%和7.14%。13价结合物混合样品的PS14回收率为85% ~100%；含有佐剂的疫苗样品的PS14回收率为85% ~110%。结论  成功建立了双抗体夹心ELISA法，该方法准确性、精密度、特异性良好，且检测结果不受佐剂的影响，具有一定耐用性。     

中药化学成分定量分析方法学验证中精密度和准确度的探讨

目的：研究精密度、准确度和范围的具体考察方法。方法：采用RP—HPLC法,以厚朴药材为例,对该药中厚朴酚、和厚朴酚含量进行测定,在方法学验证过程中,重复性和回收率试验分别设计不同范围和不同考察方法。结果：重复性试验结果表明厚朴酚、和厚朴酚含量的RSD分别为2．5％～5．8％,2．5％～5．7％;平均回收率厚朴酚为95．1％～97．7％（RSD：2．2％～4．3％）;和厚朴酚为94．8％～97．7％（RSD=2．0％～7．5％）。结论：重复性RSD值随考察范围增大而增大,且同一浓度6份供试品溶液的测定结果与低、中、高浓度9份供试品溶液的测定结果方差非齐性。回收率RSD值亦随考察范围增大而增大。当药材取样量不同,根据被测成分含量按1：1添加对照品时,误差影响相对较小。而确定相同取样量,通过改变对照品加入量考察回收率时,9份样品测定结果RSD明显增大。