伤寒Vi精制多糖分子大小测定中层析-比色法优化和层析-积分法比较

目的 优化层析-比色法,并对该方法进行分析方法验证;比较优化层析-比色法和层析-积分法,评价两方法测定伤寒Vi精制多糖分子大小的适用性。方法 优化比色法O-乙酰基标准曲线浓度范围,对该方法进行准确度、重复性、中间精密度、线性和耐用性的验证;应用优化层析-比色法和层析-积分法检测多批次伤寒Vi精制多糖分子大小,对结果进行统计学分析。结果 优化层析-比色法准确度回收率均为100%;样品的重复性相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）分别为2.4%和0.0%,中间精密度RSD均为3.4%,连续5次测定标准曲线,决定系数均大于0.999 0,耐用性RSD为4.6%。优化层析-比色法和层析-积分法在检测伤寒Vi精制多糖分子大小时,差异无统计学意义（t=-1.372,P＞0.05）。结论  优化的比色法具有良好的准确度、重复性、中间精密度、线性和耐用性,两种方法均可用于检测伤寒Vi精制多糖分子大小。     

动态浊度法定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量方法的验证

目的   对定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量的动态浊度法进行验证。方法   采用动态浊度法定量检测冻干甲型肝炎减毒活疫苗中细菌内毒素含量，并对分析方法的线性、专属性、准确度、重复性、中间精密度和耐用性进行验证。结果  动态浊度法的线性相关系数绝对值为0.996；最大有效稀释倍数下专属性回收率为68.81%~73.80%；准确度回收率为53.50%~77.77%；3名实验人员重复性相对标准偏差分别为2.0%、3.6%、2.0%；中间精密度相对标准偏差为7.6%；耐用性回收率为66.49%~108.34%。 结论   动态浊度法检测冻干甲型肝炎中的细菌内毒素含量的方法具有良好的专属性、准确度、线性、重复性、中间精密度和耐用性，符合定量检测和数据完整性的要求。     

UPLC同时测定生脉饮口服液中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素的含量

目的 建立UPLC测定生脉饮口服液中有效成分（五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素）含量的方法。方法 采用XBridge^® BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,2.5 μm）,以乙腈（A）-水（B）为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min^-1,进样量5 μL;柱温为40℃;检测波长为203 nm。结果 五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素检测质量浓度线性范围分别为1.950~124.8μg·mL^-1（r=0.999 9）、1.375~88.00μg·mL^-1（r=0.999 9）、1.594~102.0μg·mL^-1（r=0.999 9）;定量限≤0.137 5μg·mL^-1,检测限≤0.068 8μg·mL^-1;仪器精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.18%;加样回收率分别为98.65%（RSD=0.82%）,98.47%（RSD=1.21%）,99.24%（RSD=0.99%）。结论 该方法操作简便,仪器精密度、稳定性、重复性好,可用于生脉饮口服液中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素含量测定。     

基质补偿-电感耦合等离子体质谱法测定脂肪乳注射液中铝元素含量

目的 建立脂肪乳注射液中铝元素含量的电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定方法。方法 采用基质饱和系统,直接稀释制样,在线内标引入方式,以电感耦合等离子体质谱法进行含量分析。结果 铝离子浓度在1~30 ng·mL^-1线性关系良好,相关系数（r）为0.999 4,仪器精密度、重复性的RSD均<3%,方法检测限为1.04 μg·L^-1,加样回收率为102.0%~113.3%,RSD为3.6%（n=9）。结论 本方法准确、灵敏高、简便可行,可为脂肪乳注射液铝元素含量测定提供有力技术保障。     

HPLC同时测定斑蝥酸钠维生素B6注射液中斑蝥酸钠和维生素B6的含量

目的 建立斑蝥酸钠维生素B₆注射液中斑蝥酸钠和维生素B₆含量的同时测定方法。方法 采用HPLC,色谱柱为Syncronis C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为0.02 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH值至2.6）-乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为193,290 nm,波长切换法,柱温：30℃。结果 斑蝥酸钠回归方程为Y=1.926X+0.010（r=0.999 7）,在0.064 6~0.322 8 mg·mL^-1内斑蝥酸钠与峰面积的线性关系良好,平均回收率为98.9%,RSD为1.2%（n=9）。维生素B₆回归方程为Y=24.153X+0.670（r=0.999 9）,在0.535 9~2.679 7 mg·mL^-1内维生素B₆与峰面积的线性关系良好,平均回收率为100.2%,RSD为1.0%（n=9）;仪器精密度、稳定性和重复性试验的RSD均<2.0%。结论 所建立的方法结果准确、重复性好,可用于斑蝥酸钠维生素B₆注射液的质量控制。     

LC-MS/MS同时测定灵芝胶囊中7种三萜酸的含量

目的 建立同时测定灵芝胶囊中7种三萜酸含量的LC-MS/MS方法。方法 选用Agilent Zorbax SB-C₁₈（3.0 mm×150 mm,0.35 μm）色谱柱,柱温为40℃,进样量5 μL,离子源为电喷雾离子源,负离子模式监测,以氯霉素为内标物,采用多反应监测模式,以乙腈-水（38∶62）为流动相,流速0.3 mL·min^–1。结果 灵芝酸A、B、C₂、F、G、灵芝烯酸D、赤芝酸A的线性范围分别为4.972~497.2,4.927~492.7,4.949~494.9,4.978~497.8,4.990~499.0,5.070~507.0和5.089~508.9 ng·mL^–1（r≥0.999 8）,仪器精密度、稳定性和重复性试验的RSD均<5%,加样回收率为98.4%~101.8%,RSD为1.28%~3.71%（n=6）。结论 该方法简单、快速、重复性好,可用于灵芝胶囊中7种三萜酸成分的含量测定,可用于灵芝胶囊质量控制。     

HPLC测定20(S)-原人参二醇原料药中有关物质

目的 建立一种用于分离和测定20（S）-原人参二醇原料药中的10种潜在相关杂质的高效液相色谱法。方法 采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱,以超纯水（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱,流速为0.20~0.25 mL·min^–1,检测波长为203 nm,柱温为35℃,进样量5 μL。结果 20（S）-原人参二醇与各杂质均达到有效分离,在一定范围内线性关系良好;加样回收率（n=9）在94.8%~102.2%,RSD值均<2.0%;日内和日间精密度RSD值均<2.0%,精密度良好;杂质C、杂质F、杂质H、杂质I在室温下放置48 h内RSD值<2.0%,溶液稳定;杂质A、杂质B、杂质D、杂质E、杂质G、杂质J在室温下放置48 h内RSD值>2.0%,溶液不稳定。结论 此次建立的方法简便、灵敏、准确,可同时测定原料药20（S）-原人参二醇中10种有关物质,可有效地鉴定原料药中有关物质,为其生产工艺的提高和质量控制提供参考。     

HPLC-MS/MS测定麦冬和参麦注射液中龙脑苷和龙脑次苷的含量

目的 采用HPLC-MS/MS测定麦冬和参麦注射液中龙脑苷和龙脑次苷含量。方法 以马钱苷为内标,色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C₁₈(4.6 mm×100 mm,2.7 μm),以乙腈(A相)-0.1%甲酸水溶液(B相)为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^–1,柱温为30 ℃。选用电喷雾离子源,在正离子模式下进行检测,定量分析选用多反应监测模式。龙脑苷、龙脑次苷和内标的离子对分别为m/z 449.5→137.1,317.1→137.1,391.2→179.1。结果 龙脑苷和龙脑次苷检测质量浓度的线性范围分别为0.20~10.32 μg·mL^–1(r=0.995 3,n=5),0.02~1.51 μg·mL^–1(r=0.998 0,n=6),定量限分别为8.1,3.5 ng·mL^–1。日内、日间精密度,重复性试验结果良好(RSD<10%),龙脑苷和龙脑次苷24 h内稳定(RSD<10%),平均回收率(n=3)分别为99.9%(RSD=1.93%)和99.6%(RSD=3.09%)。结论 该方法准确、简便、重复性好,可用于测定麦冬和参麦注射液中龙脑苷和龙脑次苷的含量。     

GC-MS/MS测定索法酮中基因毒性杂质异亚丙基丙酮含量

目的 采用GC-MS/MS测定索法酮中基因毒性杂质异亚丙基丙酮的含量。方法 采用顶空进样法测定,色谱柱为Agilent DB-Heavy WAX （30 m×0.25 mm,0.25 µm）,质谱检测器的离子源采用EI源,采集方式为选择性离子监测模式（SIM）。结果 异亚丙基丙酮在0.047 12~1.885 μg·mL^–1（LOQ~200%）内浓度与峰面积线性关系良好（n=6）,相关系数（r）为0.999 6,定量限为47.12 ng·mL^–1,检测限为18.85 ng·mL^–1,精密度RSD为1.43%。回收率为84.45%~91.58%,RSD为2.88%,溶液稳定性良好。结论 该方法简便准确,灵敏度高,耐用性好,适用于索法酮中异亚丙基丙酮含量的测定。     

狭叶荨麻精制多糖含量测定

目的测定黑龙江产狭叶荨麻全草中精制多糖的含量。方法以苯酚-硫酸比色法测定,检测波长490nm。结果黑龙江产狭叶荨麻全草中精制多糖的3批平均含量为64.85%,RSD为1.36%,平均回收率为99.76%,RSD为1.19%,线性范围为2.39~14.34（μg.mL-1）,r=0.9993。结论该方法操作简单,精密度、稳定性及重复性好,结果可靠,可用于狭叶荨麻精制多糖的含量测定。     

定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量的药典方法的改良及其验证

目的 通过应用低浓度对照品,对定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量的药典方法(O-乙酰基测定法)进行改良,并验证该法的可行性.方法 以含0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 μmol溴化乙酰胆碱的对照品溶液制作改良O-乙酰基测定法的标准曲线,并对该法的标准曲线线性、准确度、精密度、专属性和耐用性进行验证.结果 改良O-乙酰基测定法的标准曲线线性良好,决定系数＞0.998.该法的准确度、精密度和专属性良好,O-乙酰基回收率为99.8％～101.3％,实验间和实验内相对标准偏差均＜4％,O-乙酰基加样回收率均＞96％.该法测定O-乙酰基的定量限为0.070 mmol/L.结论 应用低浓度对照品的改良O-乙酰基测定法可用于定量伤寒Vi多糖疫苗O-乙酰基含量.     

Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞DNA残留定量PCR检测法的验证

目的  验证Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留定量PCR（quantitative PCR,qPCR）检测法。方法  用试剂盒提取Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗原液的DNA,采用qPCR法检测Vero细胞DNA,并验证方法的线性、专属性、准确性、精密度、耐用性及定量限;同时采用DNA探针杂交法检测样品。结果  qPCR检测Vero细胞DNA标准曲线在0.003 0~300.000 pg/μl之间线性良好;对Hep-2细胞、大肠埃希菌、酵母细胞DNA均无扩增反应;高、中、低浓度样品加标回收率在50%~150%,准确性良好;定量检出限为0.003 0 pg/μl;精密度良好（相对标准偏差＜15%）;反应体系配制好后置于2~8 ℃ 30 min后进行检测,相对标准偏差＜15%,耐用性良好。DNA探针杂交法与qPCR结果均小于0.1 pg/μl。 结论  qPCR检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留具有良好的线性、专属性、准确性、精密度和耐用性,可适用于该项检测。     

检测精制肺炎链球菌多糖中甲基戊糖方法的验证

目的 建立检测精制肺炎链球菌多糖中甲基戊糖的方法,并进行方法学验证.方法 将经硫酸和加热处理的精制肺炎链球菌多糖与半胱氨酸盐酸盐进行反应,分别在396 nm和430 nm波长下检测合成的化合物的吸光度值,并根据差值计算甲基戊糖含量.对建立的甲基戊糖测定法进行准确度、专属性、精密度、线性和耐用性验证.结果 该法的准确度良好,甲基戊糖加样回收率为90.2％～108.9％.该法具有较好的重复性和中间精密度,相对标准偏差分别为≤4.6％和1.2％～5.2％,均符合规定的要求.在甲基戊糖质量浓度为2～22 mg/L的检测范围,该法的标准曲线呈现良好的线性,决定系数＞0.99000.该法的专属性较好,精制肺炎链球菌多糖溶液中含有10～50 g/L乙酸钠不会对检测结果产生影响.结论 建立的甲基戊糖测定法可准确定量甲基戊糖含量,可用于对精制肺炎链球菌多糖中甲基戊糖的质量控制.     

伤寒疫苗的现状及展望

伤寒仍是发展中国家的主要公共卫生问题,控制伤寒的最有效措施是接种疫苗.此文介绍了早期伤寒疫苗和现行伤寒疫苗的的安全性和有效性,讨论了伤寒Vi多糖结合疫苗的研发现状及应用前景.     

β-丙内酯残留量检测分析方法的建立及验证

目的  建立准确快速检测灭活疫苗中β-丙内酯（β-propiolactone , BPL）含量的分析方法。方法  采用气相色谱法进行BPL含量检测，用外标法计算BPL含量。对分析方法的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性进行验证。结果  BPL溶液和供试品溶液在相应保留时间内可见BPL峰，阴性对照溶液未出峰。BPL峰5次进样峰面积相对标准偏差小于2%且与其他峰分离度大于1.5。BPL的浓度在1.11~35.52 μg/ml范围内与峰面积成线性关系。浓度分别为2.22、4.44和8.88 μg/ml的供试品溶液回收率在97.3%~106.9%之间，相对标准偏差均小于3%。检测限为0.30 μg/ml，定量限为0.49 μg/ml。结论  建立的BPL检测方法具有良好的专属性、系统适应性、线性和范围、准确度、精密度、耐用性，符合定量检测的需求。     

Combined vaccination against hepatitis A,hepatitis B,and typhoid fever: safety,reactogenicity, and immunogenicity

BACKGROUND: The etiological agents of hepatitis A, hepatitis B, and typhoid fever share similar patterns of global distribution, and cause significant disease burden in travelers to endemic countries. Combined vaccination against all three diseases, based on currently available vaccines, would promote compliance and convenience for travelers. This clinical study evaluated the feasibility of extemporaneously syringe-mixed hepatitis A and B vaccine (Twinrix) and a Vi polysaccharide vaccine (Typherix) in healthy adults, and compared this to concomitant administration of the vaccines in separate arms. METHODS: The mixed dose of vaccine contained at least 720 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) units of the inactivated hepatitis A antigen, 20 microg of the recombinant hepatitis B antigen and 25 microg of the Vi polysaccharide typhoid antigen in 1.5 mL. The study was conducted in 200 healthy 18- to 45-year-old volunteers. RESULTS: Equivalence between the vaccines mixed before administration and the concomitantly administered vaccines was shown in terms of seroconversion and seroprotection. With the exception of local injection site soreness, which was higher in the mixed administration group, the reactogencity was similar for both groups. In both vaccination groups more than 95% of the subjects were anti-hepatitis A virus and anti-Vi seropositive 1 month after the first vaccination. With regard to hepatitis B, a strong response was achieved in both groups, with more than two-thirds of the subjects protected 2 months after the start of the immunization course. CONCLUSION: These results support the feasibility of extemporaneously syringe-mixed combined hepatitis A and B vaccine with a Vi polysaccharide typhoid vaccine, administered in healthy adults.     

14型肺炎球菌多糖双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的  建立并验证测定14型肺炎球菌多糖（pneumococcal capsular polysaccharide serotype 14，PS14）浓度的双抗体夹心ELISA。方法  采用Protein G亲和层析纯化兔血清，得到兔抗PS14多克隆抗体（多抗）。以鼠抗PS14单克隆抗体（单抗）为捕获抗体，兔抗PS14多抗为检测抗体，碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG为二抗，PS14为参考品建立双抗体夹心ELISA法。确定鼠抗PS14单抗和兔抗PS14多抗的工作浓度，建立标准曲线，并验证该方法的准确性、精密度和特异性，考察佐剂对该方法的影响。结果  鼠抗PS14单抗的最适工作浓度为5 μg/ml，兔抗PS14多抗的最适工作浓度为1 μg/ml，标准曲线的范围为9.375 ~ 600.000 ng/ml，线性良好，相关系数为0.999。测定多糖样品的PS14回收率为110% ~ 140%，多糖蛋白结合物样品的PS14回收率为90% ~110%。平均批内和批间精密度分别是5.64%和7.14%。13价结合物混合样品的PS14回收率为85% ~100%；含有佐剂的疫苗样品的PS14回收率为85% ~110%。结论  成功建立了双抗体夹心ELISA法，该方法准确性、精密度、特异性良好，且检测结果不受佐剂的影响，具有一定耐用性。     

中药化学成分定量分析方法学验证中精密度和准确度的探讨

目的：研究精密度、准确度和范围的具体考察方法。方法：采用RP—HPLC法,以厚朴药材为例,对该药中厚朴酚、和厚朴酚含量进行测定,在方法学验证过程中,重复性和回收率试验分别设计不同范围和不同考察方法。结果：重复性试验结果表明厚朴酚、和厚朴酚含量的RSD分别为2．5％～5．8％,2．5％～5．7％;平均回收率厚朴酚为95．1％～97．7％（RSD：2．2％～4．3％）;和厚朴酚为94．8％～97．7％（RSD=2．0％～7．5％）。结论：重复性RSD值随考察范围增大而增大,且同一浓度6份供试品溶液的测定结果与低、中、高浓度9份供试品溶液的测定结果方差非齐性。回收率RSD值亦随考察范围增大而增大。当药材取样量不同,根据被测成分含量按1：1添加对照品时,误差影响相对较小。而确定相同取样量,通过改变对照品加入量考察回收率时,9份样品测定结果RSD明显增大。