缺氧大鼠心肌线粒体呼吸功能,ATP含量的变化

探讨缺氧大鼠心肌线粒体呼吸功能和心肌能量代谢的变化。方法；通过Ｃｌａｒｋ氧电极法和生化方法测定线粒体功能和ＦｏＦ１－ＡＴＰ酶活力，运用高效液相色谱技术测定心肌组织ＡＴＰ含量，结果；急性缺氧大鼠心肌线粒体呼吸功能，Ｆｏｆ１－ＡＴＰ酶活力以及１－苯胺基，８－萘磺酸镁相对荧光强度明显降低，表明：ＦｏＦ１－ＡＴＰ酶构象发生改变。     

高效液相色谱法检测大鼠脑线粒体的腺苷酸

目的 建立大鼠脑线粒体腺苷酸简便、快速、有效的高效液相色谱法.方法 采用Hypersil BDS C18(5 μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱对标准品和样品进行色谱分析.结果 腺苷酸(AMP、ADP、ATP)在0.25～40.0 μg/ml的范围内,线性关系良好,加标平均回收率大于(97.59±2.47)%,相对标准差(RSD)小于3.84%.结论 本法操作简便,线性关系好,回收率高、准确可靠,适于线粒体内腺苷酸的检测分析.     

缺氧大鼠脑线粒体的能量合成特点

线粒体是利用氧和产生能量的主要场所，机体生命活动所需能量的８０％以上来自线粒体。底物氧化脱下的Ｈ＋经线粒体内膜呼吸链的电子传递形成跨膜质子梯度，作为高能磷酸化合物形成的动力，在ＡＴＰ合成酶的作用下经磷酸化形成ＡＴＰ。脑组织具有耗氧量大、代谢率高、氧和...     

模拟高原缺氧大鼠脑线粒体UCP活性与含量的变化及其对线粒体能量合成的影响

目的 观察模拟高原暴露大鼠脑线粒体UCP活性和含量的改变,探讨其对线粒体能量合成功能的影响.方法 健康成年SD大鼠置于模拟海拔5 000 m低压舱中,23 h/d,连续3 d.差速离心法分离大鼠脑组织线粒体,Clark氧电极法测定线粒体的呼吸活性,罗丹明123法测定线粒体膜电位,高压液相色谱法测定腺苷酸的含量,用[3H]-GTP结合法测定线粒体UCP活性及含量.结果 高原缺氧导致大鼠脑线粒体解偶联蛋白与[3H]-GTP结合的解离常数Kd下降37%,结合[3H]-GTP的最大量Bmax增加2.9倍(P＜0.01);线粒体的呼吸ST3氧耗减为对照组的83.1%,而ST4则升高28%,RCR降为对照的66.67%(P＜0.01);相关分析显示,ST4与反映UCP活性的Kd呈显著负相关,而与UCP含量Bmax呈显著正相关(P＜0.01);同时线粒体内ATP含量仅为对照组的58.4%(P＜0.01),线粒体膜电位显著下降(P＜0.01).结论 模拟高原缺氧暴露可增加脑线粒体解偶联蛋白活性和含量,揭示缺氧时线粒体的呼吸氧耗及能量的生成的改变与关系.     

氯霉素处理对急性缺氧大鼠脑线粒体氧化呼吸功能变化研究

目的通过观察氯霉素处理大鼠急性缺氧暴露后脑线粒体呼吸功能和细胞色素氧化酶(COX)活性变化,了解线粒体基因组表达在缺氧引起线粒体呼吸功能改变中的作用.方法以成年雄性Wistar大鼠建立氯霉素药物处理及高原缺氧模型.应用差速离心法提取脑皮质线粒体,Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能,及细胞色素C氧化酶(COX)的活性.结果①急性缺氧24 h后大鼠脑线粒体Ⅲ态呼吸(ST3)、呼吸控制率(RCR)显著降低,呼吸Ⅳ态(ST4)较对照组显著升高;②氯霉素处理加缺氧组大鼠脑线粒体ST3较对照组显著降低,ST4较对照组、单纯缺氧、氯霉素组比较均显著降低,RCR与对照组比较显著降低,但高于单纯缺氧、氯霉素组;③单纯缺氧、氯霉素处理组脑组织COX活性显著降低,而氯霉素处理加缺氧组较单纯缺氧组COX活性从正常组的65.7%恢复至86.5%.结论①线粒体蛋白合成的抑制可导致线粒体氧化功能障碍,提示线粒体基因组的完整表达在其呼吸功能发挥中的重要作用;②氯霉素处理对缺氧造成的线粒体功能障碍具有保护作用.     

大鼠烫伤早期肝线粒体ATP合成酶和腺苷酸激酶活性的改变

为进一步了解大鼠烫伤早期肝线粒体氧化磷化偶联增强的机理，应用荧光素和荧光素酶法，以琥珀酸为底物，测定了烫伤３０ｍｉｎ大鼠肝线粒体合成酶和腺苷酸激酶的活性。     

缺氧复合运动大鼠心肌线粒体功能的变化

目的 观察缺氧及缺氧复合运动条件下大鼠心肌线粒体功能的变化.方法 将Wistar大鼠分为4组:平原对照组、缺氧组、平原运动组和缺氧复合运动组.缺氧复合运动组大鼠持续暴露于模拟海拔5 000 m高原5周,每天降至4 000 m 的高原进行游泳运动1 h(6 d/周),运动结束后回升至5 000 m;缺氧组大鼠同时在低压舱内相同海拔高度饲养,但不进行游泳运动;平原运动组和平原对照组在舱外同时饲养,其中平原运动组每天进行游泳运动1 h(6 d/周).在末次运动结束后24 h处死大鼠,分离心室肌提取线粒体.用clark氧电极法测定线粒体呼吸功能.结果 与单纯缺氧组比较,缺氧复合运动后心肌线粒体ST3、ST4显著增加,呼吸控制率降低;各组线粒体膜电位无显著改变;与平原对照组比较缺氧组大鼠心肌线粒体ATP合成酶α亚基表达显著下降;与单纯缺氧组比较,缺氧复合运动组线粒体ATP合成酶α亚基表达显著增加.结论 结果表明缺氧复合运动可改善心肌线粒体3态呼吸,ATP合成酶α亚基表达增加.提示缺氧复合运动后心肌ATP产生效率增加,有氧氧化代谢增强.     

缺氧对新生大鼠眼球壁线粒体钙含量的影响

观察缺氧不同时期新生大鼠眼球壁线粒体钙含量的变化规律，探讨缺氧对眼球壁的损伤机制。方法用ＳＤ新生大鼠吸入９６％Ｎ２＋４％Ｏ２制备缺陷模型，以原子吸收火焰法测定线粒体钙含量。结论缺氧使眼球壁线粒体钙含量增高。     

缺氧复合氯霉素处理对大鼠脑皮质线粒体氧化呼吸功能及COX活性的影响

目的观察大鼠经不同时间低压缺氧并复合线粒体蛋白翻译特异抑制剂氯霉素(CAP)处理后,脑组织线粒体呼吸功能和COX活性的变化以及CAP处理对缺氧过程中线粒体氧化呼吸功能的影响.方法成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、单纯药物处理组和缺氧复合药物处理组,后者为模拟海拔5 000 m高原连续低压缺氧暴露1、5、15 d和30d,分别于动物处死前7 d按100 mg/kg体质量,腹腔注射0.5?P.高速离心密度梯度法分离大鼠脑皮质线粒体,Clark氧电极法测定线粒体呼吸活性,极谱法测量COX活性.结果与对照组相比,单纯CAP处理大鼠脑线粒体ST3、RCR、OPR及COX活性显著降低;复合缺氧后则线粒体呼吸功能及COX活性明显改善,且随缺氧时间的延长而基本恢复到平原对照组水平.结论缺氧可以改善氯霉素处理大鼠脑皮质COX活性及线粒体的氧化呼吸功能,提高氧化磷酸化效率,其改善程度具有时间依赖性,随缺氧时间的延长而逐渐恢复.     

预缺氧对大鼠低压缺氧性脑损伤保护作用的实验研究

目的 探讨预缺氧对严重低压缺氧引起大鼠海马神经细胞损伤及学习记忆能力降低的保护作用.方法 ①Wistar大鼠分为对照组、单纯缺氧组、预缺氧复合缺氧组.光镜和电镜观察大鼠海马CA1区神经元形态变化;TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡.②单纯缺氧组和预缺氧复合缺氧组大鼠进行穿梭箱主动回避训练,随后进行低压缺氧,观察大鼠学习记忆能力的改变.结果 预缺氧复合缺氧组大鼠CA1区神经元病理改变较轻,神经元凋亡显著低于单纯缺氧组(P＜0.05);预缺氧复合缺氧组大鼠在严重缺氧后受电击次数和主动逃避时间的增加显著低于单纯缺氧组(P＜0.05).结论 缺氧引起大鼠海马CA1区神经元凋亡等病理改变,并导致学习记忆能力降低;预缺氧对海马CA1区神经元的缺氧性损伤具有保护作用,并能有效减轻严重缺氧所导致的学习记忆能力下降.     

低氧培养对小鼠胚胎成纤维细胞生长和线粒体分布及功能的影响

目的 研究低氧培养条件对小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)的生长和线粒体分布及功能的影响.方法 将MEFs分为20％氧浓度的常氧培养组和5％氧浓度的低氧培养组连续培养,每24小时采用台盼蓝染色对MEFs活细胞计数;MitoTracker Green对细胞线粒体染色并在激光共聚焦显微镜下观察;腺苷三磷酸(ATP)试剂盒检测ATP合成.结果 对数生长期低氧培养组活细胞数高于常氧培养组,差异有统计学意义(P＜0.05);并且低氧培养组细胞内线粒体核周分布型比例高于常氧培养组,差异有统计学意义(P＜0.05);同时两组细胞内ATP水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧培养条件影响线粒体在MEFs细胞内的分布和能量的合成,对细胞生长的促进作用高于常氧培养.     

Effects of chloramphenicol preconditioning on oxidative respiratory function of cerebral mitochondria in rats exposed to acute hypoxia

To investigate the roles of chloramphenicol (CAP) preconditioning in the oxidative respiratory function of cerebral mitochondria in rats exposed to acute hypoxia during acute hypoxia by observing the changes of mitochondrial oxidative respiratory function and cytochrome C oxidase (COX) activity. Methods: Adult male Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control (C), medication (M), hypoxia (H), and medication plus hypoxia (MH). Rats in groups M and MH were administered by peritoneal injection of CAP (50 mg/kg) every 12 h for 7 d before decapitation, but those in groups H and MH were exposed to a hypobaric chamber simulating 5 000 m high altitude for 24 h. The rat cerebral cortex was removed and mitochondria were isolated by centrifugation. Mitochondrial respiratory function and COX activity were measured by Clark oxygen electrode. Results: Compared with Group C, Group H showed significantly elevated state 4 respiration (ST4), decreased state 3 respiration (ST3), and respiratory control rate (RCR) in mitochondrial respiration during acute hypoxic exposure. ST3 in Group MH was significantly lower than that in Group C, but was not significantly different from that in Groups H and M, while ST4 in Group MH was significantly lower than that in groups C and H. RCR in Group MH was higher than that in Group H, but lower than that in Group C. COX activity in Group H was significantly lower than that in Group C. In Group MH, COX activity increased and was higher than that in Group H, but was still lower than that in Group C. Conclusion: Acute hypoxic exposure could lead to mitochondrial respirator3 dysfunction, suggesting that CAP preconditioning might be beneficial to the recovery of rat respiratory function. The change of COX activity is consistent with that of mitochondrial respiratory function during acute hypoxic exposure and CAP-administration, indicating that COX plays an important role in oxidative phosphorylation function of mitochondria from cerebral cortex of hypoxic rats.     

布比卡因对离体大鼠心脏功能和心肌能量代谢的影响

目的 研究布比卡因对离体大鼠疏脏功能和心肌能量代谢的影响。方法 Ｌａｎｇｅｎｄｒｏｆｆ心脏灌注模型。２４只ＳＤ大鼠随机分为对照组、６μｍｏｌ／Ｌ布比卡因组（Ｂ１组）和１２μｍｏｌ／Ｌ布比卡因（Ｂ２组）,每组８只。Ｂ１、Ｂ２组在平衡灌注３０ｍｉｎ后,分别续灌含６μｍｏｌ／Ｌ、１２μｍｏｌ／Ｌ布比卡因的Ｋ－Ｈ液,记录上述各组在平衡末、用药５ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、２５ｍｉｎ时的ＨＲ、ＬＶＤＰ、     

缺氧习服过程中大鼠骨骼肌能量代谢特点研究

目的探讨缺氧习服过程中组织物质代谢特点.方法将大鼠置模拟海拔5 000m低压舱内,分别于5、15、30d后取动脉血,测定血气、血糖等,取双后肢骨骼肌用3H-脱氧葡萄糖测定葡萄糖摄取率,用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖、糖原含量,用酶法测定ATP、磷酸肌酸、乳酸水平,并以平原动物作为对照组进行对比分析.结果 ATP含量平原组与缺氧组之间以及各缺氧组之间没有统计学差异(P>0.05).磷酸肌酸含量缺氧5d组显著低于平原对照组,缺氧15、30d组骨骼肌组织磷酸肌酸含量回复至平原水平.缺氧5d组糖原含量降低(P<0.01),缺氧15、30d组回升,但仍低于平原对照组(P<0.01).缺氧5d组骨骼肌葡萄糖没有显著降低(P>0.05),缺氧15、30d组葡萄糖含量高于平原对照组、缺氧5d组(P<0.01),缺氧30d组较缺氧15d组进一步增加(P<0.05).缺氧5d组血糖降低(P<0.01),缺氧15、30d组增高并高于平原对照组(P<0.05).骨骼肌乳酸的含量先增加后回降,其在缺氧15d组骨骼肌中的含量显著低于缺氧5d组(P<0.01),缺氧30d组显著低于缺氧5d组(P<0.01).结论在缺氧习服之后,骨骼肌组织能量产生维持在稳定的水平,但是组织物质代谢发生调整,对葡萄糖利用能力增强.     

大鼠脑线粒体生物大分子合成过程中能量需求的研究

目的：探讨线粒体内RNA和蛋白质合成过程澡的能量需求及其ATP的调节作用。方法：组织匀浆－梯度离心法分离并纯化大鼠脑皮质线粒体,氧电极法鉴定线粒体氧化呼吸及其偶联活性;体外无细胞（Cell-free in vitro)线粒体,^3H-UTP和3H－Leucine掺入法分别测定细胞器的转录与翻译活性。结果：线粒体RNA和蛋白质合成中所需的ATP可来自线粒体自身氧化产生外源ATP的加入可使转录活性增加3．7倍,而翻译活性仅提高17％,在既无外源ATP加入又无内内源性产生时,线粒体蛋白翻译活性仍为最大活性的53．1％;ATP浓度对RNA和蛋白质合成的影响呈双相性,1mmol/L时转录以及翻译活性最高,高浓度或低浓度均产生浓度依赖性抑制效应。结论：ATP可在转录与翻译两个水平影响线粒体RNA和蛋白质合成,ATP对mDNA表达的调节是一种经济,积极有效的反馈调节方式。