跑台运动对Sarcopenia小鼠Caspase依赖与非依赖性细胞凋亡基因mRNA表达的影响

目的:探讨跑台运动对Sarcopenia小鼠骨骼肌线粒体介导的Caspase依赖与非依赖性细胞凋亡信号通路中凋亡基因mRNA的影响。方法:以30只快速老化小鼠(SAMP8)为研究对象,将其分为青年安静组(YC组,12周龄)、老年安静组(OC组,29周龄)和老年跑台运动组(OE组,29周龄),每组10只。OE组适应性饲养1周后开始跑台运动,每天1次,每周运动5天,持续8周,末次训练结束后24～48 h内将3组小鼠分别断头处死取腓肠肌,以小鼠腓肠肌质量(mg)除以对应体重(g)求得Sarcopenia Index(SI)。采用实时荧光定量PCR方法,分别检测各组腓肠肌Caspase依赖性凋亡通路相关基因(Cyt C、apaf-1、Caspase-9和Caspase-3)和Caspase非依赖性凋亡通路相关基因(PARP、AIF和Endo G)mRNA表达。结果:(1)OC组腓肠肌SI值显著低于YC组,OE组SI值与OC组比较未见显著性差异。(2)与YC组相比,OC组腓肠肌apaf-1、Caspase-3和PARP mRNA表达均显著上调,AIF mRNA表达显著下调,而Cyt C、Caspase-9和Endo G mRNA表达未见显著变化。(3)与OC组相比,OE组腓肠肌Cyt C和AIF mRNA表达显著上调,Caspase-3和PARP mRNA表达显著下调,而apaf-1、Caspase-9和Endo G mRNA未见显著变化。结论:与Caspase非依赖性凋亡途径相比,Caspase依赖性凋亡途径在Sarcopenia发生中发挥更重要的作用;跑台运动一定程度上弱化衰老骨骼肌Caspase依赖性凋亡通路的促凋亡基因mRNA表达,但对AIF诱导的Caspase非依赖性凋亡基因mRNA表达却呈现上调作用。     

大鼠严重脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因Bcl-2、Bax的表达

从分子水平对脑损伤后可能存在的基因和蛋白表达异常进行研究，有助于进一步阐明脑损伤的机制，从而指导临床治疗。笔者对50只大鼠严重脑损伤后脑组织中的细胞凋亡状态及相关基因Bcl-2、Bax的表达进行了研究。现报告如下。     

运动对生长期大鼠外周血单个核细胞中wnt途径相关骨重塑基因的影响

目的:研究水平跑台训练后生长期大鼠外周血单个核细胞(PBMC)中wnt信号途径的Jun、Mmp9、Cox2、Tnf和Msx2 m RNA表达水平,揭示其与骨重塑的关系。方法:24只2月龄SD雄性大鼠随机分成对照组(n=12)和运动组(n=12),运动组以25 m/min,50 min/d,5 d/w水平跑台运动12 w;训练结束进行大鼠体重、全身肌肉含量、整体BMD和BMC检测,股骨BMD和骨形态学测量,Micro-CT扫描观察股骨远端松质骨骨微结构;分离PBMC,QRT-PCR检测其Jun、Mmp9、Cox2、Tnf和Msx2 m RNA表达。结果:与对照组相比,运动组大鼠除了体重显著下降外,全身肌肉含量、整体BMD、BMC和股骨BMD增加,但均不具有统计学意义;股骨长度、厚度和宽度均无显著性变化;股骨远端松质骨骨微结构参数除骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁分离度(Tb.Sp)无显著性变化外,骨体积分数(BV/TV)和骨小梁厚度(Tb.Th)显著增加(P<0.05),骨表面积和体积比(BS/BV)及骨小梁模式因子(Tb.Pf)显著降低(P<0.05);股骨远端松质骨骨小梁数量增多,小梁间隔小、断裂少;大鼠PBMC中Msx2 m RNA表达上调,Jun、Mmp9和Cox-2 m RNA表达下调,Tnf无表达差异。结论:运动后PBMC中Jun、Mmp9、Cox2、Tnf和Msx2 m RNA表达变化与骨重塑变化一致,提示上述基因可作为反映运动对骨重塑影响的候选分子标记。     

大鼠脑胶质瘤伽玛刀治疗对细胞凋亡和Caspase-3、Fas表达的影响

目的　研究大鼠脑胶质瘤伽玛刀治疗后肿瘤细胞凋亡的时程变化和Caspase 3、Fas的表达。方法　立体定向法制作C6大鼠脑胶质瘤模型 6 0只 ,分为治疗组和对照组 ,治疗组于肿瘤接种后 14d行伽玛刀治疗 ,治疗后不同时间点行流式细胞学检查测定肿瘤细胞的凋亡率以及Caspase 3和Fas基因蛋白表达情况 ,分析凋亡率与两种蛋白的相关性。结果　与对照组相比 ,治疗组肿瘤细胞的凋亡率明显增高 (P <0 0 5 ) ,治疗后 4 8h肿瘤细胞凋亡率达高峰 ,然后逐渐下降 ;Caspase 3和Fas的表达情况与凋亡率的变化呈正相关 (r1 =0 92 8,r2 =0 916 )。结论　肿瘤细胞的凋亡为伽玛刀治疗胶质瘤疗效之一 ,Caspase 3和Fas基因可能参与和调节伽玛刀照射后肿瘤细胞凋亡。     

延迟复苏对烫伤大鼠小肠上皮细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：探讨延迟复苏对烫伤大鼠肠粘膜上皮细胞凋亡百分率（ap%）及凋亡相关基因表达的影响。方法：Wistar大鼠30只，随机分为立即复苏组（ER）和延迟复苏组（DR）；30％体表面积Ⅲ度烫伤，采用DNA片段百分率测定、电泳和RT-PCR 观察伤后小肠粘膜上皮细胞ap%和ICE、bcl-2基因表达。结果：大鼠烫伤后小肠上皮ap%显著高于伤前（P＜0.01）；DR组肠上皮ap%显著高于ER组（P＜0.05-0.01）。DNA电泳可见明确梯形条带。烫伤后肠上此ICE基因表达明显增强，DR组ICE基因表达显著高于ER组（P＜0.01）。Bcl-2基因伤前在肠粘膜不表达，伤后极弱表达，两组比较无显著性差异。结论：烫伤延迟得苏后小肠上皮凋亡显著增加；促凋亡基因ICE和抑凋亡基因bcl-2的表达失衡可能是其凋亡剧增的重要原因之一。     

三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡相关基因表达改变的基因芯片研究

目的 利用基因芯片技术研究NB4细胞经三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡后的凋亡相关基因表达变化.方法 检索NCBI的Entrez以及Human IPI数据库,通过染色体定位来排除冗余基因,共获得1 384个凋亡相关基因.探针使用软件OligoArray 2.0设计,并作Blast比对.设计基因特异寡核苷酸探针,合成后点样,制备寡核苷酸芯片.用2μmol/L的As2O3处理NB4细胞48h后,提取细胞总RNA,分别以Cy3,Cy5标记对照组及实验组,随后与含1 384个凋亡相关基因的寡核苷酸芯片杂交,使用基因芯片扫描仪对杂交信号扫描,软件分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值,找出经As2O3处理后出现差异表达的基因,并挑选其中差异表达最明显的4条基因,设计引物后与CNDA产物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳进行验证.结果 NB4细胞经2μmol/L As2O3作用48h后共有4个基因表达上调,12个基因表达下调,且RT-PCR验证结果与基因芯片结果完全相符.结论 As2O3可以诱导NB4细胞一系列基因表达的改变,这些涉及信号转导、转录调节、细胞周期、氧化应激、蛋白质的翻译合成及细胞分化等方面基因的差异表达,可能在NB4细胞凋亡中起着重要作用.     

+Gz重复暴露大鼠海马细胞凋亡及相关基因bcl-2和p53表达的观察

目的 探讨细胞凋亡在反复高＋Gz暴露所致脑损伤中的病理作用。方法20只SD大鼠随机分成对照组,＋Gz重复暴露后30min,6h,24h和48h5组,每组4只,对照组大鼠G值为＋1Gz,实验组大鼠在动物离心机上经历了3次＋14Gz/45s(两次间间隔30min)作用,分别于暴露后30min,6h,24h,48h处死大鼠取脑,固定包埋,用原位末端标记法TUNETL检测大鼠海马细胞凋亡及用免疫组化方法检测调亡相关基因bcl-2和p53表达变化,6h组海马CA1区可见部分细胞凋亡和明显的bcl-2,p53表达变化,但在24h组和48h组基本恢复正常。结论 ＋Gz重复暴露可引起大鼠海马细胞凋亡及凋亡相关基因 bcl-2,p53的表达变化,细胞凋亡是反复高Gz暴露致脑操作的机制之一。     

不同强度运动与雌激素联合作用对去卵巢大鼠腰椎超微结构影响的扫描电镜观察

目的 :探讨不同强度运动与雌激素联合作用对去卵巢所致骨质疏松大鼠腰椎超微结构的影响。方法 :成年雌性SD大鼠分正常对照组 (SHAM )、骨质疏松对照组 (OVX)、雌激素对照组(OVX +ES)、中等强度运动组 (OVX +EX1)、大强度运动组 (OVX +EX2 )、中等强度运动加雌激素组(OVX +ES +EX1)和大强度运动加雌激素组 (OVX +ES +EX2 )。用扫描电镜观察 8周不同强度运动及运动和雌激素联合作用对腰椎松质骨的影响。结果 :两个运动加雌激素组腰椎骨小梁数量较两个单纯运动组、雌激素对照组及骨质疏松对照组增多 ,骨小梁表面吸收面减少 ,胶原排列规律、整齐。大强度运动组骨小梁发生板结、出现微骨折且空间结构被破坏。结论 :雌激素和运动联合作用比单纯用药或单纯运动能起到更好的预防椎体骨丢失及改善椎体超微结构的作用     

大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的实验研究

探讨创伤性脑损伤后神经细胞凋亡机制及其时序空间分布。方法采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法、琼脂糖凝胶电泳、透射电镜、流式细胞术、凋亡调节蛋白免疫组织化学方法检测大鼠轻、重度脑损伤不同脑域神经细胞凋亡的动态变化。     

U-74389G对大鼠脑创伤后细胞凋亡及bcl-2表达的影响

目的探讨脂质过氧化反应与脑损伤后细胞凋亡及bcl-2基因表达的关系。方法在大鼠液压颅脑损伤模型中,观察其运动神经功能;脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征;伤后bcl-2基因表达情况;比较伤前给予U-74389G对上述指标的影响。结果治疗组的颅脑伤大鼠伤后行走功能、平衡功能障碍程度明显低于未治疗组（P<0.01）。治疗组大鼠不同脑区各个时间点凋亡细胞数均显著减少,DNA电泳未见凋亡带谱。Bcl-2免疫反应阳性细胞主要位于伤侧大脑半球皮质、皮层下白质、海马及齿状回的神经细胞。表达Bcl-2蛋白的神经细胞很少见到凋亡或坏死的形态特征。Bcl-2早期改变出现在伤后6h,比细胞凋亡出现早。注射U-74389G能阻止bcl-2蛋白下调。结论U-74389G能阻止大鼠液压脑损伤后bcl-2基因表达下调,抑制脑创伤所致细胞凋亡,具有明显的神经保护作用。     

力竭运动后大鼠海马脑区谷氨酸受体NR2A蛋白含量和基因表达的变化

目的:观察力竭运动前后大鼠脑中海马谷氨酸受体NR2A蛋白含量和基因表达的变化,探讨其与运动性疲劳的可能联系。方法:50只SD雄性大鼠,随机分为安静对照组(S,n=10),力竭运动后即刻组(AE1,n=10),力竭运动后恢复0.5小时组(AE2,n=10),力竭运动后恢复3小时组(AE3,n=10)和力竭运动后恢复24小时组(AE4,n=10)。分别采用免疫印迹法和RT-PCR法测定一次性力竭运动后大鼠脑中海马谷氨酸受体NR2A蛋白含量和基因表达。结果:与安静对照组相比,力竭运动后即刻,大鼠NR2A蛋白含量明显升高,而mRNA表达显著减少;恢复0.5小时后,蛋白含量略有下降,mRNA表达显著增加;恢复3小时后蛋白含量显著下降,mRNA表达继续增加;恢复24小时后蛋白含量恢复到安静时水平,mRNA表达则减少至恢复0.5小时后水平。结论:力竭运动后即刻及恢复过程中,大鼠脑中海马谷氨酸受体NR2A蛋白含量及mRNA表达变化趋势不同,提示基因表达对蛋白含量的调控可能具有延迟性。     

运动对心脏心钠素受体基因表达的影响

为探讨运动对心脏心钠素受体基因表达的影响,建立不同强度运动训练动物模型,采用免疫荧光组织化学法、原位杂交、激光共聚焦扫描和计算机图像分析技术,观察心脏心钠素受体的分布和运动对心脏心钠素受体基因表达的影响,结果表明,心钠素受体主要分布在心内膜、心肌纤维的肌膜、心肌纤维间的结缔组织和冠状动脉分支的血管壁.中等和大强度运动使心脏A型心钠素受体基因表达上调和C型心钠素受体基因表达下调,力竭运动使A型心钠素受体基因表达下调和C型心钠素受体基因表达上调.     

失重对成骨细胞基因表达和细胞功能影响的研究进展

骨骼可以适应包括重力在内的各种机械刺激，并对骨形成与骨吸收之间的平衡进行调整。失重状态下的骨质减少主要归因于骨形成的减少，这与成骨细胞功能下降有关，表现为细胞增殖粘附能力下降，与分化成熟相关的物质(碱性磷酸酶，骨钙素和I型胶原)的mRNA及蛋白合成均减少，多种生长因子的分泌量以及细胞对其反应性下降。成骨细胞功能下降的机制尚不明确，有假说认为失重时细胞形态的改变导致了基因表达与功能的变化。     

运动性心肌微损伤发生中凋亡基因表达谱研究

目的:对一次力竭运动后不同时间心肌凋亡基因表达谱进行研究,探讨其在运动性心肌微损伤发生中的可能作用与功能意义。方法:健康雄性SD大鼠50只,分为一次力竭游泳运动组(n=40)和对照组(n=10),一次力竭运动后,分不同时相取材,采用基因芯片技术对相关凋亡基因表达谱的进行分析。结果:一次力竭游泳运动后心肌细胞凋亡基因主要包括诱导凋亡基因(Bok、Bnip3)和调控凋亡的转录因子(Nfkbia、Sphk1、ATF-3以及Casp2)等两类凋亡基因的表达。其中,Bok、Nfkbia、Sphk1、ATF-3在一次性力竭运动后即刻出现显著性上调表达,且Bok在12小时又出现显著性上调表达。心肌促凋亡基因(Bnip3、Casp2)在运动后即刻出现显著性下调表达,且Bnip3在12小时又出现显著性下调表达。结论:(1)一次性力竭运动后,心肌促凋亡基因Bok、转录因子Nfkbia显著性上调表达,加速运动性心肌细胞凋亡的发生,可能参与运动性心肌微损伤发生过程的调节,构成了运动性心肌微损伤发生的重要机制。(2)一次性力竭运动后,心肌促凋亡基因Bnip3、Casp2显著性下调表达,细胞凋亡调控基因Atf3、Sphk1显著性上调表达,抑制心肌细胞凋亡的发生与发展,可能对运动心肌有保护作用,防止严重性心肌损伤的发生。     

运动与复方丹参合剂联合应用对去卵巢大鼠骨体积和骨量的影响

目的:观察运动和复方丹参合剂(CDM)联合应用对去卵巢大鼠骨体积和骨量的影响。方法:健康4月龄雌性SD大鼠48只随机分成6组:正常对照组,假去卵巢组,去卵巢组,去卵巢+复方丹参合剂组,去卵巢+运动组,去卵巢+复方丹参合剂+运动组。去卵巢+复方丹参合剂组和去卵巢+复方丹参合剂+运动组大鼠于去卵巢手术后第2天开始给予复方丹参合剂溶液(10 ml.kg-1.d-1)灌胃,持续11周。去卵巢+运动组和去卵巢+复方丹参合剂+运动组大鼠于去卵巢术后第7天开始给予中等强度的运动训练,每周5天,每天以16 m/min速度跑45 min,跑道倾角0,持续10周。第11周末,麻醉状态下动脉放血处死各组大鼠,观察左股骨骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重变化。结果:去卵巢组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等指标均低于假去卵巢组(P<0.01);去卵巢+复方丹参合剂组和去卵巢+运动组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等指标虽较去卵巢组显著增加(P<0.01),但仍显著低于假去卵巢组(P<0.01);去卵巢+复方丹参合剂+运动组大鼠骨直径、骨体积、骨湿重、骨干重、骨灰重等指标均显著高于去卵巢+复方丹参合剂组和去卵巢+运动组(P<0.01)。结论:运动可加强复方丹参合剂改善去卵巢大鼠骨体积和骨量的作用。     

CO对小鼠小脑基因表达的影响

目的 探讨CO对小鼠小脑基因表达的影响.方法 利用差异表达基因克隆技术抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization,SSH),筛选750 mg/m3 CO暴露染毒72 h小鼠小脑差异表达基因.结果 获得了750 mg/m3 CO暴露染毒72 h小鼠小脑差异表达的cDNA片段20个,克隆化后测序.结论 CO主要影响细胞信号和传递﹑代谢﹑精子生成﹑免疫等功能相关的基因表达.     

运动对2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因表达的影响

目的 :研究运动对 2型糖尿病大鼠脂肪组织中肥胖基因 (obesegene ,obgene)表达水平的影响 ,在基因转录水平上探讨 2型糖尿病大鼠obmRNA表达水平的变化 ,以及运动改变 2型糖尿病大鼠obmRNA表达的机制。方法 :4 0只自发发病的 2型糖尿病模型 :OLETF大鼠分成 4组 ,分别为基础饲料非运动组、基础饲料运动组、高脂饲料非运动组和高脂饲料运动组 ;15只LETO大鼠(与OLETF大鼠同系 ,但不同株 ,系不发病对照组 )用基础饲料饲养 ,随机分为两组 :非运动组和运动组 ,分别进行 9周的运动和高脂饮食干预 ,9周后用实时荧光定量RT -PCR法检测每只大鼠腹膜后脂肪组织obmRNA的表达水平。结果 :基础饲料饲养的OLETF大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数分别为 4 0 2 4× 10 6 ± 5 4 67× 10 5/ μgRNA和 1 2 5 8× 10 6 ± 3 862× 10 5/ μgRNA ;高脂饲料饲养的OLETF大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数为 4 832×10 6 ± 1 0 34× 10 6 / μgRNA和 1 5 74× 10 6 ± 6 783× 10 5/ μgRNA ;而基础饲料饲养的LETO大鼠非运动组和运动组脂肪组织obmRNA的平均拷贝数分别为 1 979× 10 6 ± 6 4 77× 10 5/ μgRNA和 1 82 4×10 6 ± 4 0 89× 10 5/ μgRNA。OLETF大鼠脂肪组织obmRNA表达水平运动     

有氧运动改善高脂血症分子机理的研究.II. 运动对饮食性高脂血症大鼠肝脏载脂蛋白A 和B基因表达的影响

观察高脂、高胆固醇膳食和有氧游泳运动对大鼠脂代谢的影响,深入探讨与高脂血症发生密切相关的载脂蛋白A-I、载脂蛋白B基因在饮食诱导的高脂血症实验动物体内表达的变化,并与有氧运动对它们的影响作对比研究。结果表明,高脂饮食组肝脏apoA-ImRNA水平显著低于对照组;高脂运动组显著高于高脂不运动组;8周高脂饮食和/或有氧运动没有显著上调或下调大鼠肝脏apoBmRNA的水平。结果提示,运动可在转录水平对抗高脂负荷下调大鼠肝脏apoA-I表达的作用,而apoBmRNA水平无显著变化。     

中等强度跑台运动对去卵巢大鼠腰椎骨量、骨髓脂肪细胞数量和血脂水平的影响

目的:通过观察中等强度跑台运动对去卵巢大鼠腰椎骨量、骨髓脂肪细胞数量和血脂水平的影响,探讨其预防绝经后骨质疏松的机制。方法:将45只3月龄雌性SD大鼠按体重随机分为假手术、去卵巢静止、去卵巢运动和雌激素四个组。运动组每周进行4次45 min、速度18 m/min、坡度5°的跑台训练。雌激素组每周颈部皮下注射3次17-β雌二醇,剂量为25μg/kg体重。正式运动处理14周时,称量各组大鼠体重和第5腰椎(L5)干重;检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、雌激素(E2)水平以及L5的骨矿物含量和骨密度;常规HE染色观察第2腰椎(L2)组织形态学变化,计数骨髓腔内脂肪细胞数。结果:去卵巢静止组L5骨密度、骨矿物含量、骨干重/体重以及血清E2、TC和HDL/TC水平显著低于其他三组,而血清LDL/TC水平和骨髓脂肪细胞数目显著高于其他三组;去卵巢静止组血清TC和LDL水平显著高于假手术和去卵巢运动组,与雌激素组比较无显著性差异;各组HDL水平均无显著变化。结论:中等强度跑台运动减缓去卵巢大鼠椎骨骨量丢失的效应可能与其能改善去卵巢大鼠血脂紊乱、抑制去卵巢大鼠椎骨骨髓脂肪细胞的增加有关。     

一次性和反复性力竭运动后不同时相大鼠心肌Kir6.1的表达

目的:探讨力竭运动后不同时相大鼠心肌Kir6.1基因表达的变化特点.方法:健康雄性SD大鼠80只,分为一次力竭游泳运动组和2周反复力竭游泳运动组及相应安静对照组.依据Thomas实验方案,建立不同程度的运动性心肌微损伤实验动物模型.力竭运动后,分时相取材,采用RT-PCR定量反转录方法分析心肌离子通道亚基Kir6.1在mRNA表达水平的变化.结果:(1)一次性力竭运动和反复力竭运动后24小时,心房肌中Kir6.1基因表达均显著下降(P＜0.05).(2)一次性力竭运动和反复力竭运动后4、12、24小时,心室肌中Kir6.1基因表达均显著升高(P＜0.01).结论:(1)力竭运动后,心室肌Kir6.1基因的表达水平总体呈上调变化,心房肌Kir6.1基因的表达水平在运动后24小时呈下调变化.(2)心室肌Kir6.1基因表达的上调对运动心肌有保护作用,而心房肌Kir6.1基因表达下调是心房肌易损伤的机制之一.