去甲斑蝥素通过线粒体信号转导途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响及其机制。方法:分别用MTT和AnnexinⅤ/PI法检测NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率和细胞凋亡率。用流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化。应用Western blot方法来分析细胞色素c、caspase-3、AIF、Bcl-2和Bax的表达。结果:NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。用AnnexinⅤ/PI双染色法检测SMMC-7721细胞,随NCTD的剂量增加,细胞凋亡率也增加,呈剂量依赖性。用流式细胞仪检测细胞膜电位,随NCTD的剂量增加,线粒体膜电位也随之下降。应用Western blot analysis方法检测,NCTD可诱导caspase-3和AIF的活化及线粒体细胞色素c释放到胞浆中。并随NCTD的剂量增加,Bax的表达量上升,而Bcl-2的表达量下降。结论:NCTD能显著抑制SMMC-7721细胞增殖,并可通过内源性线粒体信号转导途径诱导细胞凋亡。     

三羟异黄酮诱导人肝癌细胞凋亡及对相关基因的影响

目的探讨三羟异黄酮(genistein)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将三羟异黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞(SMMC-7721),MTT法检测增殖抑制率,光镜下观察凋亡细胞的形态,凝胶电泳分析DNA改变;通过免疫组化技术检测凋亡基因蛋白P53、survivin和caspase-3的表达。结果三羟异黄酮呈浓度和时间依赖性抑制人肝癌细胞的增殖。5mg/L、10mg/L和20mg/L三羟异黄酮作用48h对肝癌细胞的抑制率分别为9·86%、19·13%和25·64%。形态学显示,三羟异黄酮能诱导SMMC-7721细胞凋亡,细胞DNA电泳出现典型梯状条带;且凋亡相关基因蛋白survivin表达明显减少,而P53和caspase-3的表达增加。结论三羟异黄酮能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其凋亡机制之一可能是下调survivin基因蛋白表达,增强P53和caspase-3的表达。     

尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡并下调HSP70基因表达

目的:探讨尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的尼美舒利处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和/或Western blot法检测caspase-9和PARP的剪切情况及HSP70的表达水平;通过RNAi技术沉默HSP70基因表达,观察其对细胞凋亡的影响。结果:尼美舒利可抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡,导致caspase-9和PARP的剪切活化及HSP70的mRNA和蛋白表达下调;在人肝癌SMMC-7721细胞中转染靶向HSP70的siRNA可沉默HSP70表达、剪切活化caspase-9和PARP,进而显著促进细胞凋亡。结论:尼美舒利可诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡,这一作用可能与抑制HSP70表达有关。     

白藜芦醇诱导KG-1细胞凋亡作用机制的初步研究

通过观察白藜芦醇诱导人急性白血病细胞株KG-1凋亡的作用,检测bcl-2、caspase-3的表达,探讨白藜芦醇诱导白血病细胞凋亡的作用机制。采用噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长状态;瑞-吉染色、透射电镜观察KG-1细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡与周期分布;半定量RT-PCR检测bcl-2 mRNA、caspase-3 mRNA表达水平。结果显示白藜芦醇可明显抑制KG-1细胞增殖(P<0.01),与对照组相比,实验组使细胞发生S期阻滞(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01),使bcl-2的表达下调,上调caspase-3的表达(P<0.05)。结论:白藜芦醇能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与下调bcl-2、上调caspase-3表达水平有关。     

shRNA下调Paxillin表达对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的采用RNA干扰技术转染shRNA下调SMMC-7721肝癌细胞中Paxillin的表达,探讨Paxillin下调对SMMC-7721细胞迁移、侵袭力的影响。方法采用Paxillin shRNA转染肝癌细胞株SMMC-7721,分别设未处理SMMC-7721肝癌细胞组(未处理组)、shRNA Paxillin阴性组(对照组)和shRNA Paxillin组(实验组)。以GAPDH为内参,采用qRT-PCR、Western blot、ELISA法分别检测各组SMMC-7721细胞中Paxillin与FAK的表达;筛选出稳定转染Paxillin shRNA的肝癌细胞株,采用MTT、Transwell侵袭小室法分别检测各组细胞的增殖情况和侵袭力差异。结果 qRT-PCR和ELISA结果均显示Paxillin表达明显下调(P0.05),FAK表达各组间差异无显著性(P0.05);Western blot法检测结果显示实验组Paxillin的相对表达量明显低于未处理组和对照组;成功构建Paxillin稳定表达的SMMC-7721肝癌细胞株;MTT细胞增殖与Transwell细胞侵袭力检测显示Paxillin下调肝癌细胞的增殖、侵袭能力明显低于未处理组和对照组(P0.05)。结论 shRNA干扰技术可以下调Paxillin的表达;Paxillin表达下调抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖、侵袭能力;Paxillin有望成为肝癌复发、转移预测和基因治疗的新靶点。     

Nutlin-3 促进肝癌细胞SMMC-7721 发生焦亡的作用

目的:探讨MDM2 拮抗剂Nutlin-3 促进肝癌细胞SMMC-7721 发生焦亡的作用及相关机制。方法:Western blot 检测细胞中活化caspase-1(p20)及IL-1β的表达,LDH 法检测SMMC-7721 细胞焦亡情况,ELISA 检测细胞上清中IL-1β释放情况。结果:Nutlin-3 提高SMMC-7721 细胞活化caspase-1(p20) 及IL-1β的蛋白表达水平。Nutlin-3 处理显著提高了SMMC-7721 细胞培养上清中的LDH 及IL-1β的表达水平(P<0.05)。结论:Nutlin-3 激活了caspase-1,诱导肝癌细胞SMMC- 7721 发生焦亡,并促进IL-1β释放。     

18β-甘草次酸哌嗪衍生物A30抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖北大核心CSCD

目的研究18β-甘草次酸(18β-GA)哌嗪衍生物A30抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的机制。方法实验分为对照组、18β-GA组、A30组,采用MTT法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测SMMC-7721细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测胱天蛋白酶8(caspase-8)和Bcl2蛋白水平。结果 (2~128)μg/m L A30均可抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈剂量依赖性。18β-GA和A30均可诱导SMMC-7721细胞凋亡,并且A30处理细胞的凋亡率显著高于18β-GA组。与对照组相比,18β-GA和A30组的G2/M期细胞显著增加,caspase-8蛋白水平均显著升高,而Bcl2水平均显著降低。结论 A30能抑制SMMC-7721细胞增殖,抑制效果强于18β-GA,与降低细胞Bcl2水平和增加caspase-8水平有关。     

MYH9在人肝癌组织中的表达及其对肝细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨非肌肉肌球蛋白重链(MYH9)在肝癌组织中的表达及通过沉默MYH9基因对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖及凋亡的影响。方法收集50组人肝癌组织及癌旁组织,选用人肝癌细胞系SMMC-7721和Hep G2及人正常肝细胞系LO2,免疫组织化学方法及Western blot检测肝癌组织及癌旁组织中MYH9蛋白的表达,Western blot检测SMMC-7721、Hep G2及LO2中MYH9蛋白的表达;将MYH9 siRNA转染SMMC-7721,CKK8法及流式细胞术检测沉默MYH9对肝癌细胞增殖及细胞凋亡的影响。结果 MYH9蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁(P0.05);MYH9蛋白在SMMC-7721及Hep G2中的表达均明显高于LO2(P0.05);沉默MYH9基因可抑制细胞增殖(P0.001),促进细胞凋亡(P0.05)。结论 MYH9蛋白在肝癌组织的表达显著高于癌旁组织;MYH9低表达能有效抑制肝癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

环氧合酶抑制剂NS-398增强放射诱导的肝癌细胞凋亡

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398对放射诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡的影响及可能作用机制。 方法:应用MTT 法检测NS-398对细胞的抑制率;透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bc1-2、Bax蛋白表达;比色法分析caspase-3酶活性变化。 结果:NS-398对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间与剂量依赖性;电镜下处理组细胞呈现典型的凋亡形态学变化,NS-398显著增加放射诱导的细胞凋亡,上调bax mRNA、Bax蛋白及caspase-3mRNA 表达,并增强caspase-3酶活性,而Bcl-2 表达无明显变化（P>0.05）。 结论:NS-398能增加放射诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、 caspase-3表达,上升Bax／Bcl-2比例,激活线粒体凋亡通路,活化caspase-3,最终诱导细胞凋亡相关。     

大麻素WIN55,212-2抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和侵袭迁移

目的研究大麻素WIN55,212-2(WIN)对SMMC-7721肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法应用CCK-8法分析(0、1、5、10、20)μmol/L WIN对SMMC-7721细胞活力的影响;Hoechst33258染色荧光显微镜下观察各组细胞形态改变;异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白P53、P21、Bcl-2、Bax和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达;采用TranswellTM侵袭实验及划痕实验检测细胞侵袭、迁移的能力,Western blot法检测基质金属蛋白酶14(MMP-14)蛋白水平。结果 WIN抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理后的细胞,经Hoechst33258染色,可发现细胞核浓缩、破碎,引起明显细胞凋亡;凋亡相关蛋白P53、P21、Bax激活,抗凋亡蛋白Bcl-2水平下降;AKT、p-AKT、p-ERK水平下降,而ERK总蛋白无明显变化;与对照组比较,WIN处理后的SMMC-7721细胞侵袭和迁移的能力均显著降低,MMP-14蛋白水平也下降。结论 WIN能抑制SMMC-7721细胞增殖和诱导其凋亡,与WIN激活P53,抑制AKT、p-AKT、p-ERK表达有关。WIN通过下调MMP-14蛋白水平,抑制SMMC-7721细胞侵袭和迁移。