携Herceptin包裹紫杉醇的高分子造影剂的制备及体外显影实验研究

目的 制备一种携Herceptin包裹紫杉醇的高分子造影剂,并进行体外显影实验.方法 通过双乳化法制备出包裹紫杉醇的高分子PLGA-COOH造影刺,然后通过碳二亚胺化学连接法将制备出的载药造影剂与Herceptin连接,检测其一般性质及其包封率与载药量,观察所制备的载药靶向高分子造影剂与乳腺癌细胞的结合能力,并进行体外显影实验.结果 载药靶向高分子造影剂的平均粒径大小为(733.4±30.7)nm,包封率为(65.08±2.31)%,载药量为(6.51±0.23)%,体外寻靶能力实验可观察到载药靶向高分子造影剂与乳腺癌细胞有较强的结合能力,体外显影实验显示载药靶向造影剂显影效果好.结论 成功制备出的携Herceptin包裹紫杉醇的高分子造影剂具有较高的包封率和与乳腺癌细胞结合的能力,在体外显影实验中显影效果好.     

靶向VEGFR-3超声造影剂的制备及其体外寻靶实验研究

目的 制备一种特异性靶向淋巴管内皮细胞的高分子超声造影剂,并考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子造影剂羟基端乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA-COOH);并用碳二亚胺法将造影剂与抗体偶联制备出靶向高分子造影剂.检测该造影剂一般特性及体外寻靶能力,并与普通高分子造影剂做比较.结果 高分子造影剂平均粒径771.2 nm.体外寻靶试验显示,该靶向高分子造影剂较多并牢固的聚集到淋巴管内皮细胞表面;普通高分子造影剂对照组未见造影剂和细胞的结合.结论 成功制备出结合VEGFR-3抗体的高分子超声造影剂.该造影剂在体外对淋巴管内皮细胞有较强的特异性亲和力.     

靶向高分子造影剂的制备及其体外寻靶实验

目的制备一种特异性靶向肝癌细胞的高分子超声造影剂,并考察其体外寻靶能力。方法采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与抗体偶联制备出靶向高分子造影剂。检测该造影剂一般特性及体外寻靶能力,并与普通高分子造影剂做比较。结果高分子造影剂的平均粒径600.5 nm,体外寻靶试验显示,该靶向高分子造影剂较多并牢固的聚集到肝癌细胞表面;普通高分子造影剂对照组末见造影剂和细胞的结合。结论成功制备出特异性结合人肝癌抗体的靶向高分子超声造影剂。该造影剂在体外对肝癌细胞具有较强的特异性亲合力。     

携紫杉醇和抗人表皮生长因子受体2抗体高分子造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的制备一种携紫杉醇和抗人表皮生长因子受体2（HER-2）抗体的高分子造影剂,并考察其体外寻靶能力及体外显像效果。 方法通过双乳化法及碳二亚胺法制备携紫杉醇和抗HER-2抗体的高分子造影剂,并对其一般性质进行检测,激光共聚焦显微镜观察制备的靶向载药造影剂与SKBR-3乳腺癌细胞的结合能力,并使用高频超声观察其体外显影效果。 结果载药靶向羧基端乳酸（PLGA）纳米粒平均粒径为（318.07±12.51）nm,表面电位（-2.16±0.31）mV,包封率为（60.00±3.40）%,载药量为（6.00±0.34）%,粒子呈规则球形,大小均一,分散性好。激光共聚焦显微镜观察到抗HER-2抗体和羧基端乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA-COOH）造影剂大量结合,流式细胞术观察到两者的结合率高达（99.59±0.42）%,体外寻靶实验示靶向载药高分子超声造影剂与SBKR-3乳腺癌细胞较强的结合在一起。体外成像实验显示,靶向载药高分子造影剂显像呈细腻均匀点状强回声。 结论成功制备了携抗HER-2抗体和紫杉醇高分子造影剂,该纳米粒相关性能良好,有较高的载药量及包封率,且与高表达HER-2受体的乳腺癌细胞有较强结合能力,有较好的体外显像效果。     

结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用

目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.     

靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA造影剂的制备及其体外寻靶实验

目的采用共价结合的方法制备靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂,并考察其体外寻靶能力。方法采用碳二亚胺法将包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂与抗体共价结合,制备靶向高分子超声造影剂,检测该造影剂一般特性及体外寻靶能力。结果体外寻靶实验显示,该靶向超声造影剂与普通包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA COOH造影剂对照能聚集并牢固结合到人脐静脉血管内皮细胞表面。结论成功制备出靶向包载经PEG修饰的重组腺病毒PLGA-COOH造影剂,该靶向造影剂在体外具有较强的特异性寻靶结合能力。     

携抗HER-2抗体PLGA高分子纳米超声造影剂的制备及其体外寻靶实验

目的以高分子聚合物聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）为成膜材料制备携抗HER-2抗体空心纳米靶向超声造影剂,并考察其体外寻靶及显像效果。方法以樟脑为致孔剂,通过改进的双乳化溶剂挥发法制备PLGA纳米超声造影剂,利用扫描电子显微镜、透射电子显微镜及激光粒度仪对其一般特性进行表征;并用碳二亚胺法将造影剂与抗HER-2抗体耦联制备携抗HER-2抗体的PLGA靶向纳米超声造影剂,用激光共聚焦扫描显微镜对其体外寻靶能力进行初步评估,考察其体外成像效果。结果 PLGA纳米超声造影剂的平均粒径为（152.00±58.08）nm,粒子呈规则球形,大小均一,分散性好。体外寻靶实验显示,携抗HER-2抗体的PLGA靶向造影剂较多牢固地聚集到乳腺癌细胞表面。体外成像实验显示,PLGA靶向纳米超声造影剂显像呈细腻均匀的点状高回声,后方回声未见明显衰减。结论本研究成功制备了携抗HER-2抗体的PLGA靶向纳米超声造影剂,其能与HER-2受体高表达的乳腺癌细胞体外特异性靶向结合,且体外显像效果较好。     

靶向纳米脂质超声造影剂制备及其体外寻靶能力实验研究

目的 制备一种靶向乳腺癌的纳米脂质超声造影剂,并观察其体外寻靶能力.方法 制备生物素化抗人乳腺癌细胞单克隆抗体Neu(F-11),并检测其生物素化程度和活性;通过生物素-亲和素系统制备靶向纳米脂质超声造影剂,用免疫荧光染色定性检测造影剂与抗体的连接情况,通过靶向造影剂与不同细胞的结合实验检测其寻靶能力.结果 每分子抗体可结合的生物素数目平均为7个,生物素化抗体的活性与游离单抗相比未见明显降低;免疫荧光染色显示靶向纳米脂质超声造影剂表面可见明亮的红色环状荧光,细胞结合实验显示其可与乳腺癌细胞特异性牢固结合.结论 生物素-亲和素系统可使造影剂与抗体牢固结合,所制得的靶向纳米脂质超声造影剂在体外具有较强的寻靶能力.     

携载PSMA单抗靶向前列腺癌的纳米级脂质微泡的制备及体外寻靶能力

目的制备携载PSMA单抗靶向人前列腺癌的纳米级脂质微泡,并观察其体外寻靶能力。方法利用静电吸附法制备携载PSMA单抗靶向前列腺癌的脂质纳米级微泡,检测其一般特性;免疫荧光法检测抗体与纳米级微泡的结合情况;用细胞免疫荧光分析鉴定PSMA的表达及其在细胞膜上的定位;普通光镜下观察靶向微泡对前列腺癌细胞的寻靶能力,同时以胃癌细胞作对照。结果携载PSMA单抗的靶向纳米级微泡分布均匀,平均粒径为(623.70±66.05)nm,免疫荧光法显示微泡表面可见绿色荧光,细胞免疫荧光检测前列腺癌细胞膜高表达PSMA,体外寻靶实验显示该靶向微泡可与人前列腺癌LNCAP及C4-2细胞牢固结合,而与胃癌MKN45细胞不结合。结论本实验成功制备的携载PSMA单抗靶向人前列腺癌的纳米级脂质微泡具有较强的体外寻靶能力,能特异性地与前列腺癌细胞结合。     

携Gelsolin单抗靶向超声造影剂的制备及体外靶向实验

目的 制备一种以肿瘤淋巴转移相关特异性膜抗原蛋白——凝溶胶蛋白（Gelsolin）为靶点的纳米级高分子造影剂,并观察其体外寻靶及显影能力。方法 通过改良的双乳化法制备高分子PLGA-COOH造影剂,以碳二亚胺法将造影剂与Gelsolin单抗连接,制备出GSN-PLGA靶向超声造影剂。检测该造影剂的一般性质,评估Gelsolin单抗与造影剂表面连接情况,评价其体外寻靶能力并进行体外显影实验。结果 GSN-PLGA靶向超声造影剂平均粒径为（575.67±4.71）nm,表面电位（-11.46±1.19）mV,造影剂表面GSN单抗结合率达96.93%。体外摄取实验显示细胞表面高表达Gelsolin抗体的小鼠腹水型肝癌高淋巴转移细胞株（Hca-F细胞）可较多摄取GSN-PLGA靶向造影剂。体外显像实验显示靶向超声造影剂体外显影效果较好。结论 GSN-PLGA靶向超声造影剂可与高表达Gelsolin的Hca-F细胞特异性结合,且体外显影效果较好。     

携RGD肽靶向高分子造影剂的制备及体外靶向实验

目的 制备携RGD肽的PLGA造影剂,并观察其在体外的靶向能力。 方法 采用双乳化法制备PLGA-COOH造影剂,利用碳二亚胺法将RGD肽与PLGA-COOH造影剂共价结合,制备出RGD-PLGA的靶向造影剂。用激光共聚焦检测FITC-RGD与PLGA造影剂的连接情况,并在光镜及荧光显微镜下对比观察RGD-PLGA与普通PLGA靶向SKOV-3细胞的能力,而后利用流式细胞检测技术对比RGD-PLGA与普通PLGA的靶向能力。 结果 连接FITC-RGD的PLGA显示出明显的绿光,体外靶向实验显示RGD-PLGA较普通PLGA更多地聚集在SKOV-3细胞的周围,流式细胞检测显示RGD-PLGA较普通PLGA有更好的靶向性。 结论 成功制备出RGD-PLGA,且在体外实验中对高表达整合素α_vβ₃的SKOV-3细胞有较强的结合能力。     

"适配子-PLGA纳米粒"靶向超声/光声相变造影剂的制备

目的 研制一种适配子偶联的包裹纳米金棒和液态氟碳的PLGA纳米粒。方法 采用双乳化法制备包裹纳米金棒及全氟己烷(PFH)的PLGA纳米粒(GNP);用碳二亚胺法将适配子与PLGA纳米粒连接获得"适配子-PLGA纳米粒"靶向相变造影剂(AP-GNP)。光镜、激光共聚焦显微镜及电镜下观察及检测AP-GNP基本性质;激光共聚焦显微镜下及流式细胞术观察及检测适配子与纳米粒连接情况;以激光仪辐照AP-GNP观察其光致相变情况;观察AP-GNP与乳腺癌细胞MCF-7特异性结合情况。结果 成功制备适配子修饰的包裹纳米金棒和PFH的PLGA纳米粒, 其平均粒径为(472.43±25.82)nm, 适配子与纳米粒的连接率为达97.98%;激光辐照AP-GNP后, 光致相变效果明显;AP-GNP粘附于MCF-7细胞周围, 未修饰适配子GNP未见明显特异性结合。结论 成功制备偶联的包裹纳米金棒和PFH的PLGA纳米粒, 其光致相变效果明显, 靶向性能良好。     

构建新型液态氟碳壳聚糖纳米超声造影微粒

目的 构建一种新型天然高分子聚合物纳米超声造影微粒,表征其理化特征、体外显像效果及其对肿瘤细胞的结合能力和毒性。 方法 采用超声乳化法制备包裹液态氟碳PFOB的壳聚糖(CTS)纳米粒和FITC标记的壳聚糖纳米粒(FITC-CTS),表征其表面形态、粒径、Zeta电位和稳定性;评价纳米粒的体外超声显像效果,以激光共聚焦观察FITC-CTS与细胞的结合作用,流式细胞仪检测FITC-CTS对细胞的黏附比例。 结果 制备的纳米粒形态圆整,CTS纳米粒平均粒径为(248.52±7.96)nm,Zeta电位为+(29.91±0.64)mV,FITC-CTS纳米粒平均粒径为(244.83±2.72)nm,Zeta电位为+(22.21±0.53)mV。纳米粒性质稳定,在体外能增强超声显影,激光共聚焦观察到纳米粒聚集在细胞膜周围,流式细胞仪测得纳米粒对细胞的黏附比例为(45.15±8.35)%。 结论 构建的CTS纳米粒性质稳定,体外能与肿瘤细胞MCF-7紧密结合,增强超声回声。     

叶酸介导靶向高分子造影剂的制备及体外识别研究

目的 合成叶酸介导靶向的聚乳酸共聚物,以其为靶向膜材制备靶向造影剂,表征造影剂性质.方法 以自制的叶酸-脯氨酸-乳酸共聚物(Fa-PLLA-Hpr)为膜材,应用双乳化-冷冻干燥法制备叶酸介导靶向高分子造影剂(MB-Fa-PLLA).采用激光粒径测量仪检测微泡的粒径,通过光镜观察该靶向造影剂(靶向造影剂实验组)对人卵巢癌SKOV3细胞的体外寻靶情况,并与游离叶酸干预组及空白对照组(普通微泡)比较.结果 FT-IR表征了靶向膜材的结构.成功制备叶酸介导靶向聚乳酸共聚物MB-Fa-PLLA.MB-Fa-PLLA在光镜下大小分布均匀,形态圆整,65％的微粒直径分布为500～800 nm,呈单峰分布,其亲水性较普通高分子微泡更好.体外寻靶实验显示,MB-Fa-PLLA可以较多并牢固地聚集到SKOV3细胞表面,而普通微泡未见特异性结合.结论 MB-Fa-PLLA亲水性好,对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有较强特异性亲合力,其有望成为靶向显像叶酸高表达肿瘤的理想造影剂.     

载10-羟基喜树碱液态氟碳纳米粒制备及其表征、体外增强超声显像效果观察

目的 研制一种包裹液态氟碳（PFP）的新型载药纳米级超声造影剂,考察其基本特性并观察其体外增强超声显像效果。方法 采用旋转蒸发和探头超声法制备载10-羟基喜树碱（10-HCPT）的液态氟碳（PFP）纳米粒,在光学显微镜和透射电镜下观察纳米粒形态,采用马尔文仪测量纳米粒粒径和电荷。采用紫外分光光度计测定纳米粒包封率,并应用低强度聚焦超声（LIFU）辐照载药液态氟碳纳米粒溶液,观察纳米粒相变情况及其增强超声显像效果。结果 制备的载药脂质纳米粒外观为乳白色混悬液,在油镜及透射电镜下观察,载药纳米粒形态规则,分布均一,平均粒径约（500.82±25.97）nm,表面平均电位为（-47.77±3.09）mV;在体外经LIFU辐照后,可见纳米粒发生液气相变形成微泡,在基波模式和谐波模式下,均可显著增强超声显影。结论 成功研制了包裹液态氟碳的载药脂质纳米粒,可望成为一种新型的多功能超声造影剂。