酶活性测定GAD抗体及其初步临床应用

目的 建立测定谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）抗体的方法，以探讨该抗体对胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）的预测、早期诊断及其发病机制研究的意义。方法 用专用酶反应试管建立放射性同位素底物测定ＧＡＤ活性的分析方法。结果 底物浓度为４ｍｍｏｌ／ｍｌ（３．７ｋＢｑ）时，酶活性测定在一定浓度范围内剂量效应呈直线关系（ｒ＝０．９８９）。结合免疫沉淀与酶活性分析，建立了免疫沉淀－酶活性分析测定ＧＡＤ抗体的方法，２份ＩＤＤ     

谷氨酸脱羧酶抗体微量平板放射结合检测法的建立与初步应用

目的 建立谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)的微量平板放射结合检测(RBA)法并评价其I临床价值.方法 采用35S-GAD65抗原与血清在96孔平板中保温24 h,而后转入已包被蛋白A的Millipore平板中,平板经洗涤后进行放射性计数,GAD-Ab结果以WHO标准单位(U/ml)表示.检测224名健康人、162例1型糖尿病(T1DM)和210例初诊2型糖尿病(T2DM)患者GAD-Ab浓度,评价其临床应用效果.并分别选择经典放射配体(RLA)法检测GAD-Ab指数呈梯度排列的T1DM患者和健康人共119名,比较RBA法和RLA法检测结果的一致率和相关性.对32名健康人、35例T1DM患者、24例T2DM患者同时采集静脉血和手指血,探索该方法检测手指血GAD-Ab浓度的可行性,同时也与RLA法比较.分别采用直线相关分析、t检验、方差分析、受试者工作特征(ROC)曲线等方法进行统计学处理.结果 (1)优化的检测条件包括采用2μl血清与3×104计数·min-1的标记抗原缓慢振荡保温24 h,采用4℃ PBS缓冲液洗涤沉淀物10次,采用Optiphase Supermix型闪烁液测量放射性计数.(2)该法检测GAD-Ab批内CV为3.8%～10.2%,批间CV 5.6%～11.9%;GAD-Ab浓度在40.3～664 U/ml范围内线性良好,检测限为3.6 U/ml;该方法灵敏度78%,特异性98%,与经典RLA法结果判定一致率97.5%,Kappa值0.95,两者检测值呈显著正相关(r=0.915,P<0.001).(3)GAD-Ab在TIDM和T2DM患者阳性率分别为46.9%(76/162)和5.2%(11/210),明显高于健康人的0.89%(X2值为123.5和10.1,P<0.001和<0.01).(4)该方法检测手指血GAD-Ab与经典RLA法检测静脉血结果判定一致率96.7%,Kappa值0.905,检测结果呈显著正相关(r=0.946,P<0.001).结论 建立的微量平板RBA法灵敏度、特异性、重复性好,能适用于末梢血GAD-Ab检测,具有较好的临床应用价值.     

测定GAD抗体的两种方法比较

谷氨酸脱羧酶 (ＧＡＤ)是抑制性神经递质γ 氨基丁酸的合成酶 ,主要以相对分子质量分别为 6 .5× 10 3 和 6 .7× 10 3 2种同工酶形式存在。笔者比较了放射免疫与酶联免疫 2种方法测定ＧＡＤ抗体的价值 ,现报道如下。一、资料与方法1.初诊的 2型糖尿病患者 87例 ,男37例 ,女 5 0例 ,年龄 (4 3.2± 12 .6 )岁 ,病程 (3.2± 2 .8)年。空腹取静脉血 ,分离血清 ,4℃保存 ,5ｄ内测定ＧＡＤ抗体 ,并行口服葡萄糖耐量试验 (ＯＧＴＴ)及Ｃ肽释放试验。 1年内有 19例患者注射胰岛素并第 2次测定ＧＡＤ抗体。2 .ＧＡＤ抗体测定采用放射免疫法(法国ＣＩ…     

胰岛素自身抗体微量平板放射免疫法的建立与应用

目的建立胰岛素自身抗体（IAA）的微量平板放射免疫（RIA）法,并探讨其临床应用价值。方法^125I-胰岛素与血清在微量平板4℃保温72h后,免疫复合物转移至已包被蛋白A的Millipore过滤平板中并洗涤,于多功能液体闪烁发光分析仪上测计数。以IAA指数≥0．06作为阳性标准,通过参加第四次国际糖尿病自身抗体检测标准化评估（DASP 2005）,评价方法的灵敏度与特异性。并检测71例1型糖尿病（T1DM）患者、551例初诊2型糖尿病（T2DM）患者以及317名健康对照者IAA水平。采用SPSS 11．5软件进行t检验、非参数检验χ^2检验和直线相关分析;一致率用Kappa值评估。结果（1）优化的检测条件为5μl血清与2×10^4计数·min^-1的^125I-胰岛素于4℃缓慢振摇保温72h。（2）该方法批内CV4．8％～8．9％,批间CV6．4％～10．5％,DASP 2005反馈结果显示该法诊断T1DM灵敏度50％（25／50）,特异性97％（97／100）。与国产IAA RIA试剂盒进行比较,结果判定总体一致率为72．9％（Kappa值0．402）,相关系数（r）为0．678（P〈0．001）;26例结果不相符的标本中25例为该法检测阳性而国产RIA试剂盒检测阴性。（3）该方法检测T1DM患者的阳性率为19．7％（16／71）,显著高于健康对照组的0．9％（3／317,χ^2=54．36,P〈0．001）,其中0～9岁T1DM组9例中IAA阳性5例。检测初诊T2DM患者IAA阳性率1．5％,与健康对照组差异无统计学意义（χ^2=0．95,P〉0．05）。结论IAA微量平板RIA法灵敏度与特异性好,可应用于临床,IAA在婴幼儿T1DM患者中阳性率较高。     

糖尿病鼠血清及睾丸中一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性的变化

目的研究1型糖尿病大鼠血清和睾丸中一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的动态变化。方法63只Wistar雄性大鼠随机分为对照组(C)和糖尿病组(D)，采用四氧嘧啶腹腔注射复制糖尿病动物模型。糖尿病组分别于观察1、2、3、4、5、6、7和8周后断头处死动物，取血收集血清，取睾丸制备组织匀浆，分别测定NO含量和NOS活性。结果与对照组比较，糖尿病组血清NO含量升高，NOS活性先升后降；睾丸组织在诱模后NO含量下降，而NOS活性变化不明显，随后两者均呈升高趋势。结论糖尿病大鼠血清和睾丸NO含量和NOS和活性均有改变。     

谷氨酸脱羧酶抗体与糖尿病周围神经病变的关系

1型糖尿病是遗传学上易感个体胰岛 β细胞自身免疫性损害引起的疾病。作为 1型糖尿病的免疫标志 ,胰岛细胞抗体 (ＩＣＡ)和谷氨酸脱羧酶抗体 (ＧＡＤＡ)受到广泛重视。80 %左右新发现的 1型糖尿病患者 (病程 <1年 )ＩＣＡ阳性 ,但数年后大多数患者ＩＣＡ转阴 ,原因在于胰岛 β细胞完全破坏 ,抗原储备耗竭。ＧＡＤＡ较ＩＣＡ出现早 ,持续时间长 ,阳性率高 ,这已取得共识 ,但有关ＧＡＤＡ随病程延长阳性率下降不明显的原因尚有争议。本研究通过对 130例糖尿病 (ＤＭ )患者血清ＧＡＤＡ的检测探讨糖尿病周围神经病变 (ＤＰＮ)与ＧＡＤＡ的关系…     

三种试剂盒与放射配体法检测谷氨酸脱羧酶抗体的比较

目的为合理选择谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）检测试剂盒及准确判定结果提供依据.方法采用2种酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒和1种免疫放射（IRMA）试剂盒检测88例已经放射配体（RLA）法核实抗体滴度的血清标本,对比各试剂盒检测结果与RLA法的一致性并选择一致性较好的试剂盒;与RLA法同时检测140例门诊连续就诊糖尿病患者的血清标本,确定经该试剂盒筛查后需采用RLA法复查标本的浓度范围.结果①3种试剂盒与RLA法检测结果一致性为Medizym试剂盒（75%）＞RSR试剂盒（73.9%）＞Biomerica试剂盒（62.5%）,Kappa值分别为Medizym试剂盒（0.408,中度）＞RSR试剂盒（0.405,中度）＞Biomerica试剂盒（0.185,较差）;②3种试剂盒受试者工作特征（ROC）曲线下面积：Medizym试剂盒（0.812）＞RSR试剂盒（0.727）＞Biomerica试剂盒（0.666）;③3种试剂盒检测结果与RLA法相关性为RSR试剂盒（r=0.992）＞Medizym试剂盒（r=0.791）＞Biomerica试剂盒（r=-0.055）;④RSR试剂盒检测标本浓度为0.25～0.99 U/ml者需进一步采用RLA法复查.结论RSR和Medizym试剂盒检测GAD-Ab效果较好.RSR试剂盒检测GAD-Ab浓度值为0.25～0.99 U/ml时,建议采用RLA法复查.     

丙戊酸钠联合卡马西平治疗难治性癫痫临床效果及对脑电图、抗谷氨酸脱羧酶抗体、抗核抗体影响

目的 探讨丙戊酸钠联合卡马西平治疗难治性癫痫的临床效果,以及其对脑电图、抗谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、抗核抗体(ANA)的影响。方法 选取安徽医科大学附属安庆第一人民医院自2019年1月至2022年4月收治的120例难治性癫痫患者为研究对象。将患者随机分入卡马西平组和卡马西平+丙戊酸钠组,每组各60例。所有患者入院后均行常规治疗,包括调控血脂、降颅压、保护脑神经及抗血小板聚集等。卡马西平组给予卡马西平口服,0.1 g/kg, 1次/d,目标剂量为维持血药浓度在4～8μg/ml,连续治疗6个月。卡马西平+丙戊酸钠组在卡马西平组基础上联合丙戊酸钠口服,0.2 g/次,1次/d,连续治疗2周后,逐渐增加至2次/d,根据病情调整剂量,最大剂量每天不超过1.2 g,连续治疗6个月。比较两组的临床治疗效果、癫痫发作持续时间和发作次数、不良反应发生率,以及治疗前后的脑电图指标、GADA和ANA水平。结果 卡马西平+丙戊酸钠组临床治疗有效率高于卡马西平组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组α、β波段脑电相对功率高于治疗前且卡马西平+丙戊酸钠组高于卡马西平组,两组δ、θ波段脑电相对功...     

一个可以引发抗梭曼抗体的新型半抗原

一个可以引发抗梭曼抗体的新型半抗原赵毅民，荣康泰（军事医学科学院毒物药物研究所北京１００８５０）由于神经毒剂梭曼能使中毒者体内的胆碱酯酶快速老化，梭曼中毒用常规的重活化方法较谁救治。所以有必要探索其它预防和解毒的手段。用化学免疫的方法预防和治疗梭曼中...     

单链抗体研究进展及其在医学中的应用

自英国和日本学者发现白喉抗毒素以来，人们对于抗体的研究经历了多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体3个阶段，其中单链抗体由于具有相对分子质量小、穿透力强、血中半衰期短、抗原结合特异性强、免疫原性弱和可在原核细胞中表达等特点而倍受人们关注。     

彩色多普勒超声对糖尿病眼底微循环障碍及其慢性并发症评估的临床意义

目的:探讨彩色多普勒超声对2型糖尿病患者视网膜及脉络膜的微循环改变评估的临床意义。方法:将我院2型糖尿病患者分为糖尿病不伴视网膜病变组(NDR组)、非增殖性视网膜病变组(NPR组)、增殖性视网膜病变组(PR组)和对照组。应用彩色多普勒和脉冲多普勒成像技术对视网膜睫状后短动脉(PCA)、中央动脉(CRA)的血流动力学情况进行监测,同时检测其空腹血糖、糖化血红蛋白等生化指标。结果:NDR组动脉频谱呈S1、S2、S3三峰双切迹,NPR组和PR组为S峰降低,波形圆钝呈半圆形,D峰低平、宽大;4组间CRA的收缩期峰值流速(PSV)、舒张末期血流速度(EDV)和RI差异有统计学意义(F=13.21,11.34,9.85,P<0.05);CRA的PSV、EDV与空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数、24h尿蛋白呈正相关关系,CRA的RI与FBG、HbA1c、胰岛素抵抗指数、24h尿蛋白呈负相关关系(P<0.05)。结论:CDFI能监测眼底血流动力学参数的变化,评价眼底微循环的变化,早期发现糖尿病眼底病变。     

锚定多重PCR技术的建立及其在核酸相对分子质量标准制备中的应用

目的利用5＇端锚定引物及多重聚合酶链反应（PCR）技术建立高效、特异性扩增核酸片段的方法,并探讨其在核酸相对分子质量（Mr）标准（DNA标志物）制备中的应用。方法针对常用的pMD19-T载体（2692 bp）序列,利用命令行程序pd4marker.py,结合Primer3及多因素引物特异性评估软件MFEprimer,设计5＇端锚定的上游引物和7对扩增不同目的片段的下游引物;其次,以转化有pMD19-T载体的大肠杆菌DH5α菌液为模板,分别进行一至七重PCR扩增;并将扩增产物经2%琼脂糖凝胶分离及凝胶成像仪采集图像分析;最后,评估该方法在核酸Mr标准制备中的应用。结果制备了特异性较好的一至七重PCR扩增产物,可针对不同实验目的进行不同核酸Mr标准的制备。结论建立了一种快速、特异性扩增核酸片段的锚定多重PCR方法,可根据不同实验目的,快速制备出不同Mr标准大小的核酸片段,进一步拓展了PCR技术的应用范围。     

食管癌患者手术前后血浆Hcy和血清FA、维生素B12含量检测及其临床意义

 目的 探讨食管癌患者手术前后血浆Hcy和血清FA、维生素B12含量的变化及意义.方法 应用酶免法和化学发光法对40例食管癌患者进行了手术治疗前后血浆Hcy和血清FA、维生素B12含量动态检测,并与40名健康人比较.结果 食管癌患者手术前血浆Hcy含量高于健康人(P<0.01),FA含量低于健康人(P<0.01);食管癌患者手术后1个月血浆Hcy含量高于健康人(P<0.05),FA含量低于健康人(P<0.01);食管癌患者手术后3个月血浆Hcy和血清FA含量与健康人比较差异无统计学意义(P>0.05),食管癌患者手术前后维生素B12含量与健康人比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 检测食管癌患者血浆Hcy和血清FA含量的变化对观察病情和预后判定具有一定的参考价值.