CIK对地西他滨增敏乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤机制探讨

目的 观察地西他滨（DAC）增敏细胞因子介导的杀伤细胞（CIK）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的细胞毒作用,并探讨其增敏机制.方法 取对数生长期的乳腺癌MDA-MB-231及正常乳腺MCF-10A细胞,MMT法检测DAC及TRAIL对乳腺癌细胞的增殖抑制率,LDH法检测DAC单用或联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及CIK对乳腺癌细胞的杀伤率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 DAC对乳腺癌细胞MDA-MB-231及正常乳腺上皮细胞MCF-10A无明显杀伤作用.TRAIL对MDA-MB-231有明显杀伤作用,作用24h的IC50约为100 ng/mL,然而对MCF-10A无明显促凋亡影响.5∶1、10∶1、20∶1效靶比的CIK对MDA-MB-231的杀伤率分别为10.7％±1.2％、17.8％±2.1％、37.2％±3.4％,对MCF-10A无杀伤作用.经50 μmol/L的DAC预处理乳腺癌细胞MDA-MB-231 24 h后,5∶1、10∶1、20∶1效靶比的CIK对MDA-MB-231的杀伤率分别为18.6％±2.6％、26.3％±4.5％、51.6％±6.6％,与相应单独效靶比的CIK杀伤作用比较,P均＜0.01.结论 DAC增敏CIK对乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤敏感性,对正常的乳腺上皮细胞无影响,DAC联合CIK可能成为治疗乳腺癌患者的新途径.     

光敏化姜黄素对人胃腺癌MGC-803细胞的影响及其在细胞内的分布

目的:探讨光敏化姜黄素对人胃腺癌MGC-803细胞的影响及其细胞内的分布情况.方法:用MTT法检测细胞株的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,荧光显微镜观察细胞核形态;激光共聚焦显微镜观察姜黄素在细胞内的分布.结果:光敏化姜黄素作用于MGC-803细胞12、24、48h后,MTT法检测细胞的抑制率分别为35.53%±3.52%、40.17%±2.01%、44.93%±3.61%;凋亡率分别为20.32%±3.07%、22.46%±1.51%、26.58%±2.67%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).光敏化姜黄素作用48h后能见明显的凋亡小体.激光共聚焦显微镜下观察光敏化姜黄素发出的黄色荧光主要在细胞质膜、核膜呈聚集性分布,散在分布于其他亚细胞结构,细胞核分布较少.结论:光敏化姜黄素能抑制胃癌细胞的生长及凋亡,具有显著的光动力学效应,随作用时间的延长而逐渐增加.光敏剂主要分布于细胞质膜和核膜,散在分布于其他亚细胞结构,细胞核分布较少.     

番茄红素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及机制

采用MTT法和3H-TdR 掺入法观察番茄红素对体外培养雌激素受体阴性的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素作用后MDA-MB-231细胞增殖和DNA合成被抑制,具有剂量效应关系,随时间延长,抑制作用增强,最大抑制率达61.9%.番茄红素作用24 h后,细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,并诱导其凋亡.证实番茄红素可抑制MDA-MB-231细胞增殖;其机制除通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

中药扶正祛瘤对乳腺癌干细胞MDA-MB-231增殖、凋亡的影响及其机制的研究

目的探究中药扶正祛瘤对乳腺癌干细胞MDA-MB-231抑制增殖、凋亡的影响。方法体外富集培养乳腺癌干细胞MDA-MB-231,饲养小鼠并灌输中药获得含药血清;实验分为对照组、等药量组、1倍药量组、2倍药量组,MTT法检测每组乳腺癌干细胞MDA-MB-231细胞抑制率;在最适药物浓度条件下连续培养MDA-MB-23细胞5 d,MTT法测定每天细胞的抑制率,绘制乳腺癌干细胞MDA-MB-231抑制增长曲线;在最佳药物浓度及培养时间下培养细胞,用流式细胞仪检测乳腺癌干细胞MDA-MB-231的凋亡情况;q RT-PCR法检测中药扶正祛瘤处理后细胞MDA-MB-231中mi R-34a及其靶基因SIRT1的基因表达。结果含药血清对乳腺癌干细胞MDA-MB-231有不同程度的抑制,抑制率:2倍药量组1倍药量组等量药量组对照组;采用2倍药量的小鼠血清连续培养细胞,1～4 d内随处理时间增长细胞抑制率增加,第5天有下降趋势;含药血清处理后的细胞内mi R-34a基因表达量高于对照组,SIRT1基因表达量低于对照组;2倍药量的中药扶正祛瘤血清作用乳腺癌干细胞MDA-MB-231 4 d后与对照组相比出现大量的凋亡。结论中药扶正祛瘤能够效抑制乳腺癌干细胞MDA-MB-231的增殖,可能通过调控mi R-34a靶基因SIRT1的表达而抑制癌细胞的增殖凋亡。     

d-δ-三烯生育酚对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的探讨d-δ-三烯生育酚抗鼻咽癌的生物学活性。方法将低分化5-8F鼻咽癌细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别予40、50、60panol／Ld-δ-三烯生育酚干预48h,对照组不予干预。采用MTT实验、流式细胞仪检测细胞增殖抑制率、凋亡率及细胞周期;荧光染色和显微镜观察细胞形态学变化。结果观察组干预48h后,随浓度增加,镜下观察活细胞减少,漂浮的死亡细胞增多,细胞核强荧光染色细胞比例增多,细胞出现明显的抑制和凋亡现象。观察组不同浓度细胞抑制率及凋亡率明显升高,且明显高于对照组（P均〈0．01）;对照组S期的细胞百分率明显低于观察组,P均〈0．01。结论d-δ-三烯生育酚能抑制5--8F细胞增殖,诱导其凋亡,具有潜在的抗鼻咽癌生物学活性。     

紫檀芪对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响

目的探讨紫檀芪(PTE)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响。方法细胞分为正常对照组、PTE组(10、20、40、80μmol/L),各组细胞分别处理24、48、72 h。MTT法检测各组细胞存活率;黏附实验测定各组细胞黏附率;TUNEL法测定各组细胞凋亡率;Caspase-Glo3/7定量试剂盒测定细胞Caspase3/7的表达情况。结果MTT结果显示PTE对MDA-MB-231细胞增殖有抑制作用(P<0.01),呈药物浓度时间依赖效应,其中80μmol/L处理72 h组抑制效果最明显。黏附实验(48 h)结果显示PTE可以减弱MDA-MB-231细胞黏附能力(P<0.01),并呈浓度依赖效应。TUNEL检测(48 h)结果显示PTE可以增加MDA-MB-231细胞的凋亡率(P<0.01)。Caspase3/7检测结果显示PTE可以使Caspase3/7活性升高(P<0.01)。结论 PTE可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡。     

曲古抑菌素A对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响

目的探讨曲古抑菌素A（TSA）对乳腺癌细胞株增殖的影响。方法培养乳腺癌细胞株MDA-MB-231,用组不同浓度TSA分别作用于细胞,于24、48、72、96h用MTT比色法观察细胞生长情况,流式细胞术检测S期细胞的比例和周期素（Cyclin）D1、A2表达。结果72h内和4μmol／L的浓度范围内,乳腺癌细胞生长受到抑制,并有一定的时效关系;TSA作用后周期素Cyclin A2表达下降,Cyclin D1表达上升（P均〈0．05）。结论TSA能抑制乳腺癌细胞生长,周期素Cyclin D1、Cyclin A2参与了抑制剂对细胞增殖周期的调控。     

睾酮联合阿那曲唑对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用的研究

目的:评估睾酮(Testosterone)联合芳香化酶抑制剂阿那曲唑及单用睾酮对雄激素受体(Androgen receptor,AR)阳性的乳腺癌细胞MDA-MB-231(ER-/AR+)作用的效果。方法:配置不同浓度的药物,CCK-8检测药物作用不同时间后细胞增殖抑制率,流式细胞凋亡分析试剂盒检测药物对细胞凋亡影响,荧光定量PCR法检测不同浓度药物作用下MDA-MB-231细胞中hsa-miRNA-30e表达情况。结果:体外实验中阿那曲唑单药及低浓度睾酮对MDA-MB-231细胞起到促增殖作用,高浓度睾酮及联合用药组会抑制MDA-MB-231细胞增殖作用,并且联合用药组较睾酮单药组增殖抑制率(P<0.05)及细胞凋亡率高(P<0.01);分析72h后不同药物浓度下hsa-miRNA-30e表达情况后显示,睾酮及联合用药组较阿那曲唑单药组可以明显降低其表达水平(P<0.01)。结论:睾酮联合芳香化酶抑制剂对AR阳性乳腺癌细胞具有较强的抑制作用,并且其作用机制可能通过miRNA调节途径发挥作用。     

向日葵盘黄酮对前列腺癌DU145细胞的抑制作用

目的探讨向日葵盘黄酮对前列腺癌细胞株DU145的影响。方法应用不同浓度向日葵盘黄酮培养DU145细胞,倒置显微镜观察细胞形态,检测细胞的生长抑制率、细胞凋亡情况及细胞周期。结果不同浓度的黄酮化合物均对细胞生长具有明显的抑制作用,且随着浓度的增加和作用时间的延长,对DU145细胞的生长抑制率逐步提高。倒置显微镜显示细胞有凋亡小体等形成,且琼脂糖凝胶电泳显示不同浓度黄酮作用DU145细胞24h后,细胞发生了凋亡,并且处在晚期凋亡阶段。流式细胞仪检测显示不同浓度黄酮作用细胞48h后,随着黄酮浓度的增高,DU145细胞S期细胞增多,M期细胞有减少趋势,同时可检测到凋亡细胞的亚G1峰。结论向日葵盘黄酮可抑制人前列腺癌细胞株DU145的生长,能使细胞凋亡增加,G/M期细胞百分数升高,并能引起细胞凋亡相关基表达改变。     

EZH2抑制剂DZNeP对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响

目的探讨EZH2抑制剂DZNe P对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法取对数生长期乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231,经2.5、5、10、20μmol/L DZNe P处理后(设不加DZNe P仅添加完全培养基组为对照组),采用四甲基偶氮唑盐比色法检测各组24、48、72 h的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组24、48 h的凋亡率,收集20μmol/L DZNe P处理72 h的MCF-7、MDA-MB-231细胞,采用Western印迹检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路和Wnt/β-连接素(β-catenin)通路中的蛋白变化。结果 DZNe P在2.5~20μmol/L范围内可抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖,且与对照组相比增殖抑制率升高(P0.05),该抑制效应呈浓度和时间依赖性;与对照组相比,DZNe P处理组的凋亡率均升高(P0.05),DZNe P各浓度处理48 h的凋亡率均高于24 h(P0.05);PI3K/Akt通路中,与对照组相比,20μmol/L DZNe P处理72 h后MCF-7、MDA-MB-231细胞的PTEN水平均升高,Akt水平均降低(P0.05);而在Wnt/β-catenin通路上,20μmol/L DZNe P处理72 h后两细胞株中的β-catenin、Cyclin D1和C-myc水平均降低(P0.05)。结论 DZNe P可抑制人乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,可能与抑制肿瘤恶性行为相关的PI3K/Akt、Wnt/β-catenin通路有关,在乳腺癌治疗上有一定应用前景。     

Effects of genistein and synergistic action in combination with eicosapentaenoic acid on the growth of breast cancer cell lines

Genistein, a prominent isoflavone in soy products, produced dose- and time-dependent in vitro growth inhibition at high concentrations (at least 185 microM) with an IC50 of 7.0-274.2 microM after 72 h incubation in four breast cancer cell lines (DD-762, Sm-MT, MCF-7 and MDA-MB-231) and one breast epithelial cell line (HBL- 100) of human and animal origin; it stimulated estrogen-receptor-positive MCF-7 cells at low concentrations (3.7 nM-37 microM). Genistein-exposed cells underwent apoptosis, confirmed by G2/M arrest followed by the appearance of a sub-G1 fraction in cell-cycle progression, and by a characteristic cell ultrastructure. The apoptosis cascade was due to up-regulation of Bax protein, down-regulation of Bcl-XL protein, and activation of caspase-3. Genistein acted in synergism with eicosapentaenoic acid (EPA), a fish oil component, on human breast cancer MCF-7 cells (genistein > 93.2 microM and EPA > 210.9 microM) and on MDA-MB-231 cells (genistein > 176.1 microM and EPA > 609.3 microM). Dietary intake of genistein in combination with EPA may be beneficial for breast cancer control.     

全硫代反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的 本研究探讨全硫代反义寡核苷酸( PS-ASODN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞生长、迁移、侵袭的影响.方法 本实验将PS-ASODN经脂质体转染作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,将实验分为空白对照组、对照正义全硫代寡核苷酸(PS-SODN)组和不同剂量的PS-ASODN组;脂质体介导的PS-ASODN和PS-SODN作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(EUSA)、流式细胞术、Transwell小室迁移、侵袭实验检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡、细胞迁移、侵袭能力的影响.结果 终浓度为1、3及5 μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与空白对照组比较差异显著(P＜0.01),并呈一定剂量依赖性;ELISA法检测结果,1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞作用72 h后端粒酶皆为阴性,表明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性.1、3及5μmol/L的PS-ASODN作用24h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.01).结论 PS-ASODN能有效抑制人乳腺癌MDA-MB -231细胞的生长、促进凋亡、抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能是通过PS-ASODN降低端粒酶活性而实现.     

Osteoblast-conditioned medium promotes proliferation and sensitizes breast cancer cells to imatinib treatment

Inhibition of platelet-derived growth factor receptor (PDGFR) signaling restricts the growth of human breast cancer in the bone of nude mice. We hypothesized that osteoblast-secreted substances may alter the response capacity of breast cancer cells to the PDGFRs tyrosine kinase inhibitor imatinib mesylate. We found that osteoblast-conditioned medium (OCM) increases the proliferation rate of the estrogen receptor negative (ER-) MDA-MB-231 and of the ER+ MCF-7 human breast cancer cell lines and the growth-promoting effect on ER+ cells is independent from estrogen. OCM significantly improved the dose- and the time-dependent sensitivity of the tumor cells to the anti-proliferative effect of imatinib. We also found that MDA-MB-231 and MCF-7 cells express the two PDGFRs subtypes, PDGFR-alpha and PDGFR-beta, and OCM treatment increases the expression of the PDGFRs. Furthermore, imatinib inhibited the phosphorylation rate of its target tyrosine kinase receptors. We conclude that bone microenvironment, through osteoblast-secreted substances may cause estrogen-independent proliferation of breast cancer cells by a mechanism mediated by the induction of PDGFRs expression. The enhanced sensitivity of OCM-treated breast cancer cells to imatinib would justify investigation on the efficacy of imatinib in bone breast cancer metastasis.     

A role for LIM kinase in cancer invasion

In this study, we show that LIM kinase 1 (LIMK1), a critical regulator of actin dynamics, plays a regulatory role in tumor cell invasion. We found that the level and activity of endogenous LIMK1 is increased in invasive breast and prostate cancer cell lines in comparison with less invasive cells. Overexpression of LIMK1 in MCF-7 and in MDA-MB-231 human breast cancer cell lines increased their motility, whereas the specific ROCK and Rho inhibitors Y-27632 and C3, respectively, attenuated this effect. In addition, inhibition of LIMK1 activity in the MDA-MB-231 cells by expression of dominant-negative LIMK1 resulted in decreased motility and formation of osteolytic bone lesions in an animal model of tumor invasion. This study shows an important role for LIMK1 signaling in invasion of cancer, demonstrating its potential as a therapeutic molecular target to decrease metastasis.     

Inhibition of growth of human mammary tumor cells by potent antagonists of luteinizing hormone-releasing hormone.

Various studies support the view that analogs of luteinizing hormone-releasing hormone (LH-RH) exert some direct effects on mammary tumor cells. Recently, new LH-RH antagonists [Ac-D-Nal(2)1,D-Phe(pCl)2,D-Trp3,D-Hci6,D-Ala10]-LH-RH (SB-29) and [Ac-D-Nal(2)1,D-Phe(pCl)2,D-Trp3,D-Cit6,D-Ala10]LH-RH (SB-30), which are devoid of edematogenic effects, were synthesized. In this study, we examined whether these LH-RH antagonists inhibit the proliferation of MDA-MB-231 human mammary tumor cells in culture. [3H]Thymidine incorporation into DNA and cell number were measured. The antagonists induced up to 40% inhibition of [3H]thymidine incorporation in MDA-MB-231 cells. This inhibition was dose-dependent in the 0.3-30 microM range and could be demonstrated after 2 days of incubation in the presence of the peptides. An older antagonist, [Ac-D-Phe(pCl)1,2,D-Trp3,D-Arg6,D-Ala10]-LH-RH (ORG 30276), had a lesser effect, and the agonist des-Gly10-[D-Ser(tBu)6]LH-RH ethylamide (buserelin) had no effect. The antagonists SB-29 and SB-30 also inhibited the rate of cell growth, as measured by cell number, while the LH-RH agonist buserelin had no significant effect. These results support the concept that these new LH-RH antagonists can directly inhibit the growth of human mammary tumors and thus might be suitable for the treatment of breast cancer.     

The mitogenic and anti-apoptotic activity of tumor conditioned medium on endothelium

This study was designed to observe the effect of tumor conditioned medium (TCM) on the proliferation and apoptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). HUVECs were exposed to TCM from breast carcinoma cell line MDA-MB-231, then we measured their proliferation, apoptosis and cell cycle distribution by MTT and flow cytometery (FCM). Following the stimulation of TCM, HUVECs showed higher pro-mitogenic and anti-apoptotic ability than did the negative control group (ECGF-free medium with 20% FBS), but a similar ability to the positive control group (medium with ECGF and 20% FBS). From these results, we can conclude that breast carcinoma cell line MDA-MB-231 could secret soluble pro-angiogenic factors that induce HUVEC angiogenic switching, including cell cycle progression, proliferation and growth. The role and character of these factors remain to be further studied.     

人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响,并探讨其机制。方法取处于对数生长期的MDA-MB-231,加入不同终浓度（50、100、200、400、600μmol/L）人参皂苷Rg3,以不加人参皂苷Rg3为对照。MTT法检测细胞生长情况;Western blot法检测细胞中细胞周期蛋白E（Cyclin E）及细胞分裂周期蛋白25A（CDC25A）表达水平。结果低浓度（≤200μmol/L）的人参皂苷Rg3可促进MDA-MB-231增殖,高浓度（≥400μmol/L）的人参皂苷Rg3则抑制其增殖。与对照细胞比较,低浓度人参皂苷Rg3处理的细胞中Cyclin E及CDC25A的表达增高,高浓度处理者Cyclin E及CDC25A的表达下降（P均〈0.01）。结论高浓度人参皂苷Rg3在体外对乳腺癌细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与抑制细胞周期关键蛋白Cyclin E及CDC25A的表达有关。     

亚砷酸联合硼替佐米对肝癌细胞系BEL-7402的作用

目的:探索亚砷酸(As2O3)对BEL-7402的作用,研究其与硼替佐米联合的化疗效果.方法:As2O3不同浓度及作用时间处理细胞,或与硼替佐米联合作用,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测增殖,流式AnnexinⅤ-PI双染法检测凋亡,Westernblot及EMSA法检测NF-κB活性.结果:细胞形态及生长抑制率随亚砷酸作用时间及浓度变化而变化,呈时间和浓度依赖性,细胞凋亡率随时间增加而提高(3-48h:5.23%±0.55%,5.24%±0.28%,4.92%±0.91%,4.73%±0.83%,17.54%±1.49%),双药联合作用时,NF-κB活性受到抑制,细胞凋亡率也提升(24h:8.41%±0.78%).结论:As2O3对BEL-7402有明显抑制作用;联合硼替佐米作用,可以增强肿瘤细胞对药物的敏感性,提高肿瘤治疗的效果.     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,给予不同浓度（2.5、5.0和7.5μmol/L）SAHA处理12~72h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;加入SAHA（5.0和7.5μmol/L）处理SMMC-7721细胞24h或48h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;采用RT-PCR法检测p53、bcl-2及bax基因mRNA水平;采用分光光度法检测Caspase-3蛋白表达。结果经5.0μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,细胞增殖率较对照下降了25.8%和28.8%,经7.5μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,下降了30.6%和48.6%;经5.0μmol/L或7.5μmol/L SAHA处理细胞24 h后,S期细胞从对照水平（24.33±0.17）%分别显著上升至（32.08±0.160）%和（33.96±0.20）%,（P=0.00）,早期凋亡率均由（0.19±0.04）%显著上升至（1.67±0.59）%和（8.92±0.94）%,（P=0.03）,而在48h后,S期细胞由（24.33±1.18）%分别显著上升至（32.25±0.53）%和（34.61±0.08）%,早期凋亡率由（0.19±0.04）%分别显著上升至（14.49±2.26）%和（26.23±0.55）%,（P=0.00）;SAHA能够上调p53、bax基因mRNA水平,下调bcl-2基因mRNA水平;经5.0μmol/L和7.5μmol/L SAHA处理细胞24h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平（0.41±0.07）分别上升至（0.81±0.02）,（P=0.01）和（1.09±0.21）,（P=0.00）,而在处理48 h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平分别上升至（1.43±0.23）和（2.01±0.01）,（P均=0.00）。结论 SAHA通过影响p53、bcl-2及bax凋亡相关基因水平及Caspase-3蛋白的活性,对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用。