小儿病毒性心肌炎与Fas/Fasl介导的外周血淋巴细胞凋亡的关系

目的 探讨Fas/Fasl介导的外周血淋巴细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用.方法 选择临床诊断病毒性心肌炎患儿和正常小儿各25例,采用Annexin V/PI双参数法经流式细胞仪定量检测两组小儿外周血淋巴细胞凋亡百分率,并用双色流式细胞仪检测外周血淋巴细胞Fas、Fasl蛋白表达结果心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡率[(0.697 6±0.110 9)%]较正常对照组[(0.128 8±0.106 9)%]明显升高(t=18.459,P＜0.001),且与肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、羟丁酸脱氢酶升高程度均呈正相关(r=0.817,P＜0.01;r=0.785,P＜0.01;r=0.726,P＜0.01;r=0.712,P＜0.01);心肌炎患儿外周血淋巴细胞Fas、Fasl蛋白表达[(2.8804±0.3020)、(4.4496±0.4836)]较对照组[(2.1300±0.6200)、(0.123 8±0.0384)]明显增加(t=17.321,P＜0.001;t'=44.577,P＜0.001);心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率与 Fas、Fasl蛋白表达均呈正相关(r=0.972,P＜0.01;r=0.958,P＜0.01)结论病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡增加,可能为细胞免疫功能下降的原因之一,且与心肌损害程度相关 Fas、Fasl基因在病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡中起着重要作用.     

小儿急性病毒性心肌炎心肌酶与外周血淋巴细胞凋亡的关系

目的探讨外周血淋巴细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法选择临床诊断病毒性心肌炎患儿和正常小儿各25例,采用Annexin V/PI双参数法经流式细胞仪定量检测两组小儿外周血淋巴细胞凋亡百分率。结果心肌炎组患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率[(0.697 6±0.110 9)%]较正常对照组[(0.128 8±0.106 9)%]明显升高(t=18.459,P<0.001),且与心肌酶CK-MB、LDH、CK、HBDH升高程度均呈明显正相关(r=0.817,P<0.01;r=0.785,P<0.01;r=0.726,P<0.01;r=0.712,P<0.01)。结论病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡增加,且与心肌损害程度相关。     

病毒性心肌炎与外周血淋巴细胞凋亡的关系

近年来体外实验研究表明 ,许多病毒感染可诱发Ｔ细胞凋亡 ,且Ｆａｓ/ＦａｓＬ径路为Ｔ细胞凋亡的主要方式之一[1] 。为了探索病毒性心肌炎 (ＶＭ)与Ｆａｓ/ＦａｓＬ介导的外周血淋巴细胞凋亡的关系 ,我们检测了ＶＭ患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率和ＣＤ 3 细胞Ｆａｓ表达及ＣＤ 8细胞ＦａｓＬ的表达情况 ,以探讨ＶＭ继发性免疫功能低下的原因。对象心肌炎组患儿 15例均为 1997年 10月～ 1998年 6月在我院住院的患儿 ,其中男 9例 ,女 6例 ;年龄 1～ 12岁 (平均8.2岁 )。小儿ＶＭ的诊断标准按照 1994年 5月威海会议修订的小儿ＶＭ诊断标准[2 …     

Fas/Fasl介导的细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎的关系

目的 探讨Fas/Fasl介导的细胞凋亡在病毒性心肌炎(VM)小鼠发病中的作用。方法 采用光镜观察小鼠心肌组织病理改变;电镜技术、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;免疫组化技术检测不同时期Fas、Fasl蛋白表达。结果 感染后7～10d凋亡细胞数及Fas、Fasl蛋白表达水平逐渐升高,心肌病变以炎症细胞浸润及心肌坏死为主并逐渐加重,10～14d细胞凋亡及Fas、Fasl蛋白表达水平最高,心肌病变也最重,21～28d细胞凋亡数及Fas、Fasl蛋白表达水平逐渐下降,心肌炎症细胞浸润及坏死逐渐减轻,代之以成纤维细胞增生及心肌纤维化;Fasl蛋白表达与心肌病变积分呈显著正相关(r=0.86 P<0.01)。结论Fas/Fasl介导的细胞凋亡是VM心肌损伤的机制之一;Fas、Fasl基因在VM细胞凋亡中起重要作用。     

心肌炎患儿淋巴细胞凋亡的改变

目的 了解心肌炎患儿的淋巴细胞凋亡的改变,进一步探讨心肌炎的发病机理。方法 荧光法检测41例心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡的改变,同时测定T淋巴细胞亚群与免疫球蛋白的变化。结果 心肌炎组淋巴细胞凋亡率高于正常组,且T淋巴细胞亚群CD4+,CD4+／CD8+明显下降,CD8+增高(P<0.01)。结论 淋巴细胞凋亡过度导致淋巴细胞总量失衡,T淋巴细胞及体液免疫功能均低下,可能是病毒或支原体感染后引起心肌炎的重要原因之一。     

细胞凋亡和 Fas/FasL 基因在小鼠病毒性心肌炎发病中的作用

目的 探讨细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）经Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导的细胞凋亡在柯萨奇病毒Ｂ３（ＣＶＢ３）病毒性心肌炎（ＶＭ）小鼠发病中的作用。方法 采用电镜技术及原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测小鼠心肌组织的细胞凋亡,同时采用免疫化、逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及原位杂交３种方法检测心肌炎小鼠不同时期心肌组织中Ｆｓａ与ＦａｓＬ基因转录与蛋白的表达。结果 （１）各期病鼠心肌组织只的ＴＵＮＥＬ阳性的心     

巨细胞病毒心肌炎患儿外周血免疫功能与淋巴细胞凋亡的关系

目的 探讨巨细胞病毒(CMV)心肌炎患儿外周血免疫功能与淋巴细胞凋亡(PCD)变化及关系。方法 选择CMV心肌炎患儿26例和正常组28例，采用单克隆抗体间接免疫荧光法检测CD3^ 、CD4^ 、CD8^ ；采用免疫比浊法检测IgA、IgM、IgG，外周血成熟淋巴细胞凋亡检测采用吖啶橙-溴化乙锭细胞内染色法。结果 心肌炎组CD3^ 、CD4^ 、CD4^ ／CD8^ 、IgG明显降低，CD8^ 、IgM、PCD明显升高，与正常组比较有统计学意义。结论 CMV心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡过度可能是导致其免疫功能降低和紊乱的重要原因之一。     

过敏性紫癜患儿急性期淋巴细胞凋亡与血清可溶性Fas和FasL变化的关系

目的 探讨过敏性紫癜(HSP)患儿急性期外周血淋巴细胞凋亡与血清可溶性Fasm(sFas)、可溶性FasL(sFasL)水平变化及其相互关系。方法 选择HSP患儿及健康儿童各33例。分别应用形态法、间接免疫荧光法、双抗夹心ABC-ELISA法检测外周血淋巴细胞凋亡率、CD25^ 细胞百分率及血清sFas及sFasL水平。结果 HSP患儿急性期外周血淋巴细胞培养0、48h凋亡率均显著高于正常对照组(P均＜0．01)；HSP组培养48h CD25^ 细胞百分率显著低于正常对照组(P＜0．01)，HSP患儿外周血淋巴细胞培养48h凋亡率与CD25^ 细胞百分率呈负相关(r＝-0．61 P＜0．05)；血清sFas及sFasL水平较正常对照组明显升高(P均＜0．01)；HSP患儿外周血淋巴细胞培养48h凋亡率与sFasL水平呈正相关(r＝0．69 P＜0．05)，与sFas水平呈负相关(r＝-0．58 P＜0．05)。结论 HSP患儿外周血淋巴细胞凋亡过度和血清sFas、sFasL水平升高，与患者免疫功能紊乱关系密切。血清sFasL升高是HSP患儿淋巴细胞凋亡过度的重要原因之一。     

小儿病毒性心肌炎的免疫改变观察

为探讨免疫与小儿病毒性心肌炎发病的关系,检测５４例病毒性心肌炎血清免疫球蛋白和外周血Ｔ淋巴细胞亚群,与健康对照组对比,结果：病毒性心肌炎急性期,恢复期血清免疫球蛋白无明显变化,急性期ＣＤ３、ＣＤ４和ＣＤ４／ＣＤ８均明显下降,恢复期ＣＤ８下降,ＣＤ４／ＣＤ８明显升高;１３例慢性期ＣＤ８进一步下降,ＣＤ４／ＣＤ８进一步升高,提示病毒性心肌炎的免疫改变以细胞免疫为主,存在细胞免疫功能紊乱,急性期细胞免疫功能低下,恢复期、慢性期存在免疫过强和自身免疫反应。     

甲基强的松龙对特发性血小板减少性紫癜外周血淋巴细胞凋亡及FasFasl的影响

研究甲基强的松龙对小儿特发性血小板减少性紫癜 (ITP)外周血淋巴细胞凋亡及Fas(CD95 )、Fas配体 (Fasl)表达的影响及其临床意义。用流式细胞仪检测 2 5例ITP患儿治疗前后外周血淋巴细胞凋亡率及Fas、Fasl蛋白表达。结果 ,治疗前淋巴细胞凋亡率及Fas、Fasl蛋白表达与正常对照组相比差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。治疗后血小板增加时淋巴细胞凋亡率增加 ,Fas、Fasl蛋白表达上调 ,与治疗前相比差异有显著性意义 (P <0 0 1)。结果表明 :甲基强的松龙可显著促进ITP患者外周血淋巴细胞凋亡的发生 ,上调淋巴细胞Fas、Fasl的表达 ,有助于清除激活的淋巴细胞。     

CD8+T淋巴细胞在病毒性心肌炎发病机制中作用的研究

目的探讨CD8 T淋巴细胞在病毒性心肌炎发病机制中的作用。方法70只4周龄Balb/c健康雄性小鼠随机分为正常对照组(n=15)、病毒感染组(n=55)。正常对照组小鼠腹腔接种不含病毒的Eagle氏液0.15ml,病毒感染组小鼠腹腔接种TCID50为109/ml的CVB3 Nancy株病毒液0.15ml。分别于第7、10、14、21、28天随机取正常对照组小鼠3只,病毒感染组小鼠8只断髓处死。取各组小鼠心肌组织固定、脱水、石蜡包埋,切片后行HE染色、计算心肌病理组织学积分、免疫组化法检测CD8 T淋巴细胞及TUNEL法检测细胞凋亡,光镜下计算CD8 T淋巴细胞数所占浸润细胞数的百分比作为阳性细胞百分率。结果病毒感染组小鼠心肌病理积分、心肌组织中CD8 T淋巴细胞百分率及细胞凋亡率均于第10、14天达高峰(P<0.01);心肌组织中CD8 T淋巴细胞数百分率与心肌病理积分、心肌细胞凋亡率呈显著正相关。结论CD8 T淋巴细胞系小鼠病毒性心肌炎心肌损伤的重要效应细胞,其可能主要通过诱导心肌细胞凋亡而致病。     

病毒性心肌炎患儿细胞免疫状况的研究

目的 探讨病毒性心肌炎患儿细胞的免疫状况,为估计病情和预后提供客观依据。方法 对４８例急性期和２９例迁延期及慢性期病毒性心肌炎患儿的细胞免疫状况进行了动态观察,测定了不同时期病毒性心肌炎必的外周血血Ｔ淋巴细胞亚群、白细胞介素２膜受体的表达及血浆可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）的水平和白细胞介素２（ＩＬ－２）产生水平的动态变化。结果 在病毒性心肌炎急性期,患儿外周     

病毒性心肌炎患儿血清可溶性白细胞介素2受体检测的临床意义

目的探讨心肌炎患儿免疫功能的改变。方法应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法对３０例病毒性心肌炎急性期患儿可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）进行检测,并与２２例健康儿童对照进行比较。结果病毒性心肌炎患儿血清ｓＩＬ－２Ｒ水平明显升高,为６３２．５６±２９３．４５Ｕ／ｍｌ,在急性期病人中,病程小于１个月者与病程２～６个月者血清ｓＩＬ－２Ｒ无显著性差异。当病毒感染时,机体免疫功能处于紊乱状态,随着病程的延长,病情的迁延不愈,血清ｓＩＬ－２Ｒ一直处于高水平状态。ｓＩＬ－２Ｒ升高可使白细胞介素２（ＩＬ－２）产生受体抑制,从而进一步加重机体的免疫功能紊乱。结论动态观察血清ｓＩＬ－２Ｒ水平对判定病情变化和预后有意义,亦可评估机体的免疫状态。     

抗FasL抗体对小鼠病毒性心肌炎作用机制的研究

目的探讨抗FasL抗体对小鼠柯萨奇病毒性心肌炎的治疗作用及作用机制。方法80只BALB／c小鼠随机分为4组：1组为空白对照组、2组为病毒对照组、3组为IgG对照组、4组为抗FasL抗体治疗组。于接种病毒后第10天每组处死小鼠8只,取心脏,分别采用光镜检查心肌组织的病理变化,原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡的情况,免疫组化方法检测活化caspase-3的表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌组织中caspase-3和CVB,mRNA表达。结果（1）病毒对照组可见活化的caspase-3表达和心肌细胞的凋亡,且均与心肌病变积分成正相关（r=0．81,P〈0．05;r=0．73,P〈0．05）。（2）抗FasL抗体治疗组小鼠心肌组织病变积分、心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达及心肌细胞内CVB,mRNA表达均明显低于病毒对照组（P〈0．01,P〈0．01,P〈0．01,P〈0．01,P〈0．05）和IgG对照组（P〈0．01,P〈0．01,P〈0．05,P〈0．01,P〈0．05）。结论凋亡是病毒性心肌炎心肌损伤的重要机制之一,抗FasL抗体可降低caspase-3活化和mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,降低心肌细胞内病毒复制,使心肌损伤明显减轻。     

PKC信号传导对ITP患儿外周血T细胞凋亡及Fas/FasL蛋白表达的影响

目的探讨蛋白激酶C(PKC)信号传导对ITP患儿外周血T细胞凋亡及其相关蛋白Fas、FasL表达的影响。方法无菌采集ITP患儿及正常健康儿童的外周抗凝血,分离T细胞,并分为三组,第一组为空白对照组,第二组加入PKC的激活剂PMA,第三组加入PMA与抑制剂H-7;在37℃、5%CO2条件下培养24小时,用流式细胞仪检测T细胞的凋亡率及Fas、FasL蛋白的表达。结果加入PMA培养液的正常组,T细胞的凋亡率和Fas、FasL蛋白表达与空白对照比较,差别均无显著性差异(P>0.05);加入PMA培养液的ITP组,T细胞的凋亡率与空白对照比较,差别有统计学意义(P<0.05),与加入PMA培养的正常组比较,差别也有显著性(P<0.05),ITP患儿T细胞Fas的表达与其它各组比较,差别均有统计学意义(P<0.05),而FasL的表达仅与ITP组空白对照相比有统计学意义(P<0.05);同时加入PMA和H-7培养液的ITP组,T细胞的的凋亡率和Fas、FasL蛋白表达与只加入PMA培养液的ITP组比较,差异也有显著性(P<0.05),而与空白对照比较,差别均无显著性(P>0.05)。结论PKC信号传导对ITP患儿T细胞凋亡及其相关蛋白Fas、FasL的表达产生影响,并且可能与ITP的免疫病理机制有关。     

卡维地洛对免疫性心肌炎小鼠心肌凋亡调控蛋白影响

目的 观察卡维地洛对免疫性心肌炎小鼠心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Fas的影响,探讨其在免疫性心肌炎中的作用.方法 60只4～5周龄近交系雄性BALB/C小鼠,随机将小鼠分为3组:免疫性心肌炎模型组(模型组),卡维地洛干预组(干预组),空白对照组(对照组),每组20只.眼球取血后处死,留取心脏及血液标本.光镜观察各组小鼠心肌组织病理学改变,电镜观察心肌细胞超微结构,化学发光免疫法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平;免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达的含量;原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况.结果 模型组小鼠心肌细胞光镜下见大量炎症细胞浸润,电镜下可见细胞核固缩、染色质边集,对照组小鼠心肌细胞光镜下未见炎症细胞浸润,电镜下染色质边集不明显.模型组Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达较对照组高(23.48±2.24 vs 6.64±1.60,26.15±2.02 vs 5.09±0.85,21.22±3.62 vs 5.86±1.37,P＜0.01);干预组与模型组比较,小鼠心肌组织炎症积分轻(2.60±0.3l vs 2.02±0.26,P＜0.05),电镜下细胞核固缩轻,心肌细胞Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达低(17.13±1.94 vs 23.48±2.24,17.66±2.62 vs26.15±2.02,16.79±2.83 vs 21.22±3.62,P＜0.05),凋亡指数低[(16.61±4.67)%vs(24.51±4.70)%,P＜0.05],cTn-I水平低[(1.878±0.48)ng/ml vs(1.102±0.23)ng/ml,P＜0.05].结论 卡维地洛可减轻免疫性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡,对免疫性心肌炎起一定的保护作用.

Abstract：

Objective To observe the effects of carvedilol on the expression of Bcl-2, Bax and Fas in autoimmune myocarditis (AM).Methods A total of 60 inbred male BALB/C mice 4-5 weeks of age were divided at random into 3 groups as follows: AM group ( n = 20), carvedilol group ( n = 20 ) and control group (n = 20).The mice were sacrificed after gathering blood specimens by taking out the eyeballs and hearts tissue.The histological and ultrastructural changes were observed under light microscope and electron microscope.The concentrations of cardiac troponin Ⅰ (cTn Ⅰ ) were detected by chemiluminescence immunoassay (CLIA).Immunohistochemistry (IHC) was performed to analyze the contents of Bcl-2, Bax and Fas, TUNEL to detect the apoptotic index in myocardial cells.Results There were large number of lymphocyte and monocyte infiltrates under light microscope and karyopyknosis and chromatin gathered along the nuclear membrane under electron microscope in AM group.There were no inflammations and chromatin gathering in group C.Compared with control group, the Bcl-2, Bax and Fas protein expression significantly elevated in AM group ( 23.48 ± 2.24 vs.6.64 ± 1.60,26.15 ± 2.02 vs.5.09 ± 0.85,21.22 ± 3.62 vs.5.86 ± 1.37, P ＜ 0.0l ) . The histopathologic scores ( 2.60 ± 0.31 vs.2.02 ± 0.26, P ＜ 0.05 ) and karyopyknosis of carvedilol group decreased as compared with AM group.The Bcl-2, Bax and Fas protein expression (17.13 ±1.94 vs.23.48 ±2.24,17.66 ±2.62 vs.26.15 ±2.02,16.79 ±2.83 vs.21.22 ±3.62, P ＜ 0.05 ), AI [( 16.61 ± 4.67 ) % vs.( 24.51 ± 4.70) %, P ＜ 0.05]and contents of cTnI [( 1.878± 0.48 ) ng/ml vs. ( 1.102 ± 0.23 ) ng/ml, P ＜ 0.05]also decreased in carvedilol group compared with AM group.Conclusion Carvedilol could protect against AM by alleviating cardiomyocyte apoptosis.