尿激酶,尿激酶受体在人脑胶质瘤中的免疫组织化学研究

研究尿激酶(uPA)、尿激酶受体(uPAR)在人脑胶质瘤中的表达特征,评估其在胶质瘤恶性生长方式中的作用。选取57例不同恶性程度的星形细胞瘤、13例良性脑膜瘤和10例正常脑组织,分别以抗uPA单克隆抗体和抗uPAR多克隆抗体用ABC法进行免疫组织化学染色和半定量分析。结果表明:uPA、uPAR的表达程度与胶质瘤的恶性程度有关,胶质瘤恶性程度越高,表达程度越高。良性脑膜瘤的表达程度较低。正常脑组织则未见uPA、uPAR的表达。uPA染色除见于肿瘤细胞、血管内皮细胞外,还见于少数胶质增生带中的正常胶质细胞和神经元。在肿瘤细胞增殖密集区域,uPA阳性的肿瘤细胞比例较低,而在肿瘤细胞生长较稀疏、肿瘤血管增殖旺盛的区域阳性细胞比例较高。uPAR的染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞。uPA和uPAR的共同表达是浸润性生长的胶质瘤的特征之一。其表达程度可作为判断星形细胞瘤浸润性的重要参考指标。在人体内,表达uPA的细胞种类是较多的。uPA、uPAR的表达对胶质瘤的浸润和血管发生起着重要作用。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体在胶质瘤中的表达

目的 研究人脑胶质瘤组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA)及其受体（uPAR)的表达,探讨uPA、uPAR的表达与人脑胶质瘤恶性程度的关系。方法 采用半定量逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法,对49例人脑胶质瘤手术切除标本、U251等3株胶质瘤细胞,12例内减压术中切除的正常脑组织标本的uPA mRNA和uPAR mRNA表达水平进行检测。结果 随着胶质瘤恶性度的升高,其uPA及uPAR mRNA表达率和表达水平逐渐增高。U251等3株胶质瘤细胞也表达了较高水平的uPA及uPAR mRNA,而正常组织表达率及表达水平极低。结论 人脑胶质瘤中纤溶酶原激活系统活性较高,uPA、uPAR基因的高表达反映了胶质瘤的恶性生物学行为。     

上皮钙粘附蛋白和尿激酶型纤溶酶原激活剂在脑膜瘤中的表达

目的 探讨上皮钙粘附蛋白(E-cadherin)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA) 在脑膜瘤中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化SP法,对60例脑膜瘤手术根治标本进行E-cadherin和uPA测定.结果 E-cadherin在10例正常脑组织中均呈强阳性表达,而在60例脑膜瘤中表达阳性率为69.2%,其差异有统计学意义(P＜0.05).但Ⅱ、Ⅲ级脑膜瘤与Ⅰ级脑膜瘤相比,E-cadherin的表达差异无统计学意义(P＞0.05).10例正常脑组织中uPA均呈阴性表达,60例脑膜瘤中uPA在Ⅱ、Ⅲ级脑膜瘤中的表达强度高于在Ⅰ级脑膜瘤中的表达,其差异有统计学意义(P＜0.05).E-cadherin低表达和uPA高表达与脑膜瘤侵袭性关系密切(P＜0.05).脑膜瘤E-cadherin和uPA蛋白表达呈负相关(P＜0.05).结论 uPA可能在脑膜瘤的恶性进展中发挥某种作用;E-cadherin和uPA表达均是反映脑膜瘤的侵袭性重要指标,它们可能相互影响和共同调节脑膜瘤的侵袭性生长.     

尿激酶型纤溶酶原激活因子及其受体在人脑胶质瘤中的表达和意义

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator，uPA)及其受体(uPAR)的表达与人脑胶质瘤恶性程度的关系。方法采用免疫组化法，对58例人脑胶质瘤手术切除标本，10例内减压术中切除的正常脑组织标本的uPA、uPAR蛋白表达水平进行检测。结果随着胶质瘤恶性度的升高，其uPA、uPAR蛋白表达率和表达水平逐渐增高，而在正常组织中均无uPA和uPAR表达。结论uPA／uPAR蛋白高表达反映了胶质瘤的恶性生物学行为。     

uPA和uPAR在侵袭性垂体腺瘤中的表达及意义

目的研究尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)及其特异性受体uPAR在非侵袭性与侵袭性垂体腺瘤中的表达,探讨其与垂体腺瘤侵袭性的关系。方法 61例垂体腺瘤分为侵袭性和非侵袭性两组,采用免疫荧光检测uPA和uPAR的蛋白表达情况,应用RT-PCR检测uPA和uPARmRNA表达水平,并用t检验、2检验,spearman相关分析法分析比较两组肿瘤之间uPA和uPAR的表达差异性。结果在所检测的肿瘤中,31例为侵袭性垂体腺瘤,30例为非侵袭性垂体腺瘤,免疫荧光结果显示在侵袭性垂体腺瘤及非侵袭垂体腺瘤的uPA阳性表达率分别为67.74%和36.67%(P0.05)、uPAR为58.06%和30.00%(P0.05),PCR检测结果显示侵袭性垂体腺瘤组与非侵袭组中uPA的相对表达量为0.5468±0.0464和0.4462±0.0305(P0.05)、uPAR为0.6463±0.0314和0.5464±0.0471(P0.05)。检测结果显示侵袭性垂体腺瘤组中uPA和uPAR的mRNA及蛋白表达水平明显高于非侵袭组,并且两个指标间存在正相关性(r=0.525,P0.05)。结论 uPA和uPAR在侵袭性垂体腺瘤中的表达明显上调,说明其可能与垂体腺瘤侵袭性有关。     

人脑膜瘤中ATF3 maspin和MMP2表达研究

目的探讨转录激活因子3(ATF3)、乳腺丝氨酸蛋白酶抑制因子(maspin)和基质金属蛋白酶2(MMP2)在人脑各病理分级脑膜瘤中的表达和临床意义。方法采用免疫组化染色法、qRT-PCR和Western blot法检测71例脑膜瘤和32例正常脑组织中ATF3、maspin和MMP2的蛋白和mRNA表达情况,分析其在不同病理级别脑膜瘤患者中的可能作用和临床意义。结果 ATF3和MMP2在脑膜瘤中的表达明显高于正常脑组织,maspin在脑膜瘤中的表达明显低于正常脑组织。随着脑膜瘤病理级别的增高,ATF3和MMP2的表达量逐级增高,而maspin表达量逐级递减。ATF3和MMP2的蛋白和mRNA表达与脑膜瘤病理分级呈正相关,maspin蛋白和mRNA表达与脑膜瘤病理分级呈负相关。结论 ATF3、maspin和MMP2可能协同参与了脑膜瘤发生,ATF3、maspin和MMP2可能与脑膜瘤恶性进展紧密相关。     

胶质瘤中变异型IκBα的表达与抑制肿瘤浸润的研究

目的 探讨变异型IκBα(IκBαM)基因对人类多形性胶质母细胞瘤(GBM)细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase type PA,uPA)和其受体(uPA-receptor,uPAR)表达的调控作用及其与肿瘤浸润行为的关系.方法 构建质粒、基因转染以及IκBαM蛋白表达筛选,建立稳定表达IκBαM的人类GBM细胞株;用Transwell法测定肿瘤细胞的迁移能力;RT-PCR技术检测细胞内uPA、uPAR在RNA水平的表达;制作裸鼠皮下异位移植瘤生长模型,并采用免疫组化法分析肿瘤组织中uPA和uPAR的表达.结果 Transwell法测定G36△-M组肿瘤细胞的迁移能力明显降低;RT-PCR及肿瘤组化染色结果显示,uPA和uPAR在G36△-M组中的表达显著低于G36△、G36△-W和G36△-P三组,而在后三组间的表达无统计学意义.结论 IκBαM基因在RNA和蛋白水平均可显著降低人类恶性胶质瘤中uPA和uPAR的表达,进而减弱肿瘤细胞的浸润能力,抑制肿瘤组织的浸润.     

人脑胶质瘤表皮生长因子受体表达及与增殖和侵袭相关性的研究

目的 探讨胶质瘤细胞EGFR基因表达以及和肿瘤细胞增殖及侵袭性生长的相互关系。方法 应用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR、Ki67、MMP2和MMP9表达。结果 EGFR、Ki67、MMP2和MMP9在胶质瘤中的表达不同,正常脑组织和WHOⅡ级与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤和体外细胞系之间的表达差异显著,且四者间的表达水平两两相关。结论 EGFR过表达可以引起Ki67、MMP2和MMP9的过表达,从而促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

基质金属蛋白酶9及其抑制剂在脑膜瘤中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂TIMP-1在脑膜瘤中的表达与脑膜瘤侵袭性的关系。方法采用免疫组化S-P法测定手术切除的70例不同组织学类型脑膜瘤标本中MMP-9及TIMP-1的蛋白表达。结果MMP-9和TIMP-1在良性脑膜瘤中的阳性表达率分别为35.00%、52.50%;在恶性脑膜瘤中的阳性表达率分别为76.67%、53.33%。MMP-9在恶性脑膜瘤和良性脑膜瘤的表达均存在显著性差异,TIMP-1无差异。结论MMP-9与脑膜瘤的生物学特性相关,促进脑膜瘤的侵袭;MMP-9/TIMP-1的失衡与脑膜瘤的恶性程度和侵袭能力相关。     

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶9及其抑制剂在脑膜瘤中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制剂TIMP-1与脑膜瘤的生物学特性和侵袭性的关系。方法采用免疫组化S-P法测定手术切除的45例不同组织学类型脑膜瘤标本中VEGF、MMP-9及TIMP-1的蛋白表达。结果VEGF、MMP-9和TIMP-1在良性脑膜瘤中的阳性表达率分别为40%、36%、52%;在恶性脑膜瘤中的阳性表达率分别为70%、75%、55%。VEGF和MMP-9在恶性和良性脑膜瘤中的表达存在显著性差异(P<0.01),且二者在脑膜瘤中的表达呈正相关。结论VEGF、MMP-9与脑膜瘤的生物学特性相关,二者可能相互协同促进脑膜瘤的侵袭;MMP-9/TIMP-1的失衡与脑膜瘤的恶性程度和侵袭能力相关。     

MMP-9、TIMP-1及其mRNA在脑膜瘤中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、MMP-1组织抑制剂（TIMP-1）以及MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA在脑膜瘤中的表达及其与脑膜瘤侵袭性的关系。方法采用免疫组化技术法测定手术切除的70例不同组织学类型脑膜瘤标本中MMP-9及TIMP-1的蛋白表达，并用原位杂交技术检测在不同组织类型脑膜瘤中MMP-9、TIMP-1基因在转录水平的表达，并测量其吸光度比值进行对比。结果MMP-9和TIMP-1在良性脑膜瘤中的阳性表达率分别为35.00％和52.50％，在恶性脑膜瘤中的阳性表达率分别为76.67％和53.33％。MMP-9在恶性脑膜瘤和良性脑膜瘤中的表达存在显著性差异（P〈0.05），而TIMP-1在二者之间差异无显著性（P〉0.05），但MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA的表达在不同组织学类型脑膜瘤中存在显著性差异（P〈0.05）。结论MMP-9与脑膜瘤的生物学特性相关，促进脑膜瘤的侵袭性生长，其表达在基因转录水平已经上调，MMP-9和TIMP-1表达的失衡与脑膜瘤的恶性程度和侵袭能力相关，MMP-9、TIMP-1基因参与了脑膜瘤的发展过程，与脑膜瘤的生物学行为有关。     

Ki-67在侵袭性脑膜瘤的表达与意义

目的探讨Ki-67表达水平与脑膜瘤侵袭性的关系。方法回顾性分析68例脑膜瘤病例资料,根据肿瘤侵袭性与否,分为侵袭组（n=18）和非侵袭组（n=50）,测定Ki-67的表达水平,并进行统计学分析。结果男性病人中侵袭性脑膜瘤的发生率（41.7%）明显高于女性（18.2%）（P〈0.05）。不同病理等级,侵袭性脑膜瘤的发生率有明显差别（P〈0.05）。不同年龄段及病理类型,侵袭性脑膜瘤发生率无明显差别（P〉0.05）。脑膜瘤侵袭性或性别,与Ki-67表达水平无明显相关性（P〉0.05）。病理等级和Ki-67表达水平有明显相关性（P〈0.05）。结论 Ki-67表达水平主要与病理等级有关。在相同病理等级脑膜瘤中,Ki-67表达水平与脑膜瘤侵袭性无明显相关性。     

骨桥蛋白、基质金属蛋白酶-9和环氧化酶-2与脑膜瘤侵袭性的相关研究

目的探讨骨桥蛋白（OPN）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和环氧化酶-2（COX-2）在人脑膜瘤中的表达及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法检测40例脑膜瘤（侵袭性脑膜瘤16例，非侵袭性24例）患者和10例健康人血清中OPN、MMP-9和COX-2的浓度；采用免疫组化技术检测上述40例脑膜瘤组织及10例正常脑膜组织中OPN、MMP-9和COX-2的表达。结果健康人血清中OPN、MMP-9和COX-2浓度为0，正常脑膜组织中OPN、MMP-9和COX-2表达阴性。侵袭组中OPN、MMP-9、COX-2的血清浓度显著高于非侵袭组（P〈0．01）。OPN、MMP-9及COX-2蛋白在侵袭组中的表达均显著高于非侵袭组（P〈0．01）。在侵袭性脑膜瘤中MMP-9、OPN和COX-2三者的表达互为正相关（P〈0．01）。结论OPN、MMP-9、COX-2的血清浓度升高和在脑膜瘤组织中的表达上调与脑膜瘤的侵袭性密切相关，提示其可作为评价脑膜瘤侵袭性及预后的辅助指标。     

Expression of matrix metalloproteinase-9 and urinary-type plasminogen activator in Alzheimer's disease brain

OBJECTIVE: Urinary-type plasminogen activator (uPA) binding to uPA receptor (uPAR) promotes the activation of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), which degrades amyloid beta protein (Abeta) in vitro. We investigated the expression of MMP-9, uPA, and uPAR in post-mortem brains from patients with Alzheimer's disease (AD) and those with vascular dementia (VD). MATERIAL AND METHODS: We used immunohistochemistry to examine the sections of the parietal lobe and hippocampus from 4 AD and 3 VD patients. The anti-MMP-9 antibody, anti-uPA antibody, and anti-uPAR antibody were used to perform immunohistological analysis. RESULTS: In the brain tissues from the AD patients, we found expression of MMP-9 in the cytoplasm of neurons, neurofibrillary tangles, senile plaques, vascular walls and uPAR expression in the cytoplasm of neurons and vascular walls. uPA was detected only in the vascular walls. On the other hand, we could not find expression of MMP-9, uPAR and uPA in the brain tissues of the VD patients, except for the vascular walls. CONCLUSION: The neurons in the AD brains expressed MMP-9 and uPAR. MMP-9 may be produced for the degradation of Abeta, but uPA, which activates MMP-9, was not immunolocalized to the neurons in the AD brains.     

骨桥蛋白及整合素β_3亚基与脑膜瘤恶性程度相关性

目的探讨骨桥蛋白、整合素β3亚基与脑膜瘤恶性程度的相关性。方法 2008年3月至2013年10月手术切除42例脑膜瘤,其中WHOⅠ级22例,Ⅱ级11例,Ⅲ级9例。另外,收集同期8例颅脑损伤减压术后正常脑组织标本作为对照。采用免疫组织化学染色分析检测各组骨桥蛋白和整合素β3亚基蛋白表达变化,采用逆转录酶聚合酶链反应方法检测各组骨桥蛋白和整合素β3亚基m RNA表达变化。结果正常脑组织未检测出骨桥蛋白与整合素β3亚基;随着脑膜瘤恶性程度的升高,骨桥蛋白和整合素β3亚基在脑膜瘤血管内皮及肿瘤细胞胞膜与胞浆中表达量显著升高（P〈0.05）。结论骨桥蛋白和整合素β3亚基可能与脑膜瘤恶性程度相关。     

Expression of serine proteases and metalloproteinases in human pituitary adenomas and anterior pituitary lobe tissue

Data on the dural invasiveness of pituitary adenomas have been correlated to the expression of matrix metalloproteinases (e.g. MMP-9). Serine proteases have not yet been investigated in human pituitary adenomas. In this study, paraffin-embedded material from 84 human pituitary adenomas (acromegaly n=18, Cushing's disease n=21, prolactinoma n=18, thyroid-stimulating hormone-secreting adenoma n=1, nonsecreting adenoma n=26) and 9 nontumourous anterior pituitary lobes (obtained from patients with prostate cancer) was immunohistochemically analysed for expression of MMP-2, MMP-9, tissue inhibitor of metalloproteinases-2 (TIMP-2), urokinase-type plasminogen activator (uPA), uPA receptor (uPAR), tissue-type plasminogen activator (tPA), plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1), and interleukin-6 (IL-6). Cavernous sinus invasion was determined by assessment of preoperative magnetic resonance imaging and intraoperative inspection (invasive n=50, noninvasive n=34). In pituitary adenomas, reactions were positive (diffuse expression) to MMP-2 (74% of cases), MMP-9 (49%), TIMP-2 (88%), uPA (89%), uPAR (90%), tPA (69%), and PAI-1 (87%). A weak expression of IL-6 was found in 12% of the adenomas. All reactions were positive (focal expression) in every sample of anterior lobe tissue, except for uPA (negative in 3 out of 9 cases), and IL-6 (faintly positive in 5 out of 8 cases). Adenomas showed remarkably greater expression of uPA than anterior lobe tissue (Chi-square P<0.05). Nonsecreting adenomas exhibited a stronger tendency towards overexpression of uPA in invasive tumours when compared to noninvasive adenomas (Chi-square P=0.053). We found no correlation of MMP-9 expression and tumour invasion. TIMP-2 was overexpressed in noninvasive as compared to invasive adenomas (Chi-square P<0.05). The interrelationship between MMPs and serine proteinases in pituitary adenomas remains to be elucidated. From our data, a correlation between IL-6 and an activation of MMP-9 cannot be proven. The uPA-system may, however, play a role in dural invasion of pituitary adenomas.     

E26转录因子与基质金属蛋白酶9在脑膜瘤中的表达及相关性研究

目的研究E26转录因子(Ets-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在脑膜瘤中的表达及相关性。方法采用免疫组织化学法检测56例脑膜瘤石膜标本(良性组39例、恶性倾向组17例)中Ets-1和MMP-9的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测30例新鲜脑膜瘤(良性组22例,恶性倾向组8例)中Ets-1和MMP-9的mRNA水平。另取9例行脑外伤减压术的正常脑组织作为对照组结果正常脑组织Ets-1和MMP-9不表达或低表达,脑膜瘤中Ets-1阳性表达率48.2%(27/56),MMP-9阳性表达率62.5%(35/56);脑膜瘤恶性倾向组Ets-1和MMP-9的阳性表达率高于脑膜瘤良性组(P<0.05);Ets-1和MMP-9在脑膜瘤中的表达呈正相关(rs=0.284,P<0.05)。脑膜瘤中Ets-1和MMP-9的mRNA含量高于正常脑组织(P<0.05),脑膜瘤恶性倾向组Ets-1和MMP-9的mRNA含量高于脑膜瘤良性组(P<0.05),Ets-1和MMP-9在脑膜瘤的mRNA水平呈正相关(r=0.479、P<0.02)。结论Ets-1和MMP-9的表达与脑膜瘤恶性度有关,两者在脑膜瘤发生、发展过程中有协同作用,可作为脑膜瘤预后的潜在指标。