吉西他滨治疗骨肉瘤研究进展

体外研究及动物试验证实吉西他滨具有良好的抗骨肉瘤作用.吉西他滨抗骨肉瘤作用主要通过抑制增殖和诱导凋亡的细胞毒性作用完成,抑制增殖的机制主要是抑制细胞有丝分裂间期DNA的合成及修复,使细胞增殖停滞;诱导凋亡的机制可能与死亡受体Fas介导的死亡受体途径及与凋亡抑制基因Bcl-2家族相关的线粒体途径有关.相关研究显示吉西他滨单药治疗肉瘤(包括骨肉瘤)的作用不甚理想,可能是由于肉瘤对吉西他滨耐药,耐药机制可能与细胞核因子-κB/丝(苏)氨酸蛋白激酶Akt途径有关;吉西他滨与其他化疗药物联合应用可产生显著效果.临床试验证实吉西他滨具有骨肉瘤放疗增敏作用,与放疗药物联合应用产生中等姑息治疗作用,为骨肉瘤放疗提供了理论依据.吉西他滨治疗骨肉瘤具有良好的临床应用前景.     

增强顺铂对骨肉瘤疗效的体内外研究进展

骨肉瘤是骨骼系统常见的恶性肿瘤,目前其治疗以新辅助化疗结合保肢术为主。顺铂是骨肉瘤化疗的常用药物之一。本文综述了增强顺铂疗效的体内外研究新进展,包括自噬相关的化疗耐药、抑制DNA损伤修复、抑制原癌基因表达、增强细胞凋亡、热休克蛋白HSP90相关化疗敏感性、多药联合化疗等。这些新进展将有助于骨肉瘤新药的研发。     

p53与肾细胞癌

人类p53基因定位于17p13,具有野生型和突变型两种.野生型为抑癌基因,编码蛋白p53,具有"分子警察"的作用,通过多种方式控制DNA损伤细胞的生长:①肩动下游p21基因;②转录启动生长抑制和DNA损伤诱导家族45(growth arest and DNA damage induction gene 45,GADD45);③抑制有丝分裂所必需的细胞分裂周期基因2(cell divi-sion cycle,cdc 2)和细胞周期蛋白B1(cyclin B1)基因的表达;④介导细胞凋亡[1].p53基因突变见于多种人类肿瘤,多数研究认为其为肿瘤促进因子,具有癌基因的作用,是多种基因突变导致肿瘤发生的终末事件.     

不同强度恒磁场协同顺铂促进U2骨肉瘤细胞凋亡的分子机制

[目的]探讨不同强度恒磁场促进顺铂诱导的U2骨肉瘤细胞(U2-OS)细胞凋亡及p53、bcl-2、c-myc基因表达变化的情况.[方法]分别使用1 mT、10 mT、100 mT恒磁场和加入3.0 μg/ml顺铂的细胞培养液共同培养U2-OS细胞24 h.采用四甲基氮唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测恒磁场和顺铂联合对U2骨肉瘤细胞体外增殖、凋亡及相关基因表达.[结果]不同强度恒磁场能促进顺铂对人U2-OS细胞的抑制作用,10 Gs场强下其抑制率、凋亡率最高;凋亡率达37.66%,而p53 mRNA表达最强,bcl-2、c-myc mRNA表达最弱.[结论]不同强度恒磁场协同顺铂通过诱导细胞内p53、bcl-2、c-myc基因表达的变化是其抗肿瘤的机制之一,10 Gs场强下协同顺铂的抗肿瘤作用最强.     

奥沙利铂对不同p53状态肝癌细胞中DNA损伤修复基因GADD45β的诱导差异及调控机制

目的 探索奥沙利铂对不同p53状态肝癌细胞的DNA损伤修复基因(GADD45β)诱导差异及可能调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B+p53.体外合成GADD45β近端启动子序列群(-618至-314),构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B+p53.以实时荧光定量PCR比较奥沙利铂对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异;比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异;通过Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展.结果 奥沙利铂对Hep3B中GADD45β诱导并不明显.转染p53全基因序列后,Hep3B+p53对奥沙利铂的敏感性明显增加,并呈现出剂量-效应的正相关关系.荧光素分析提示奥沙利铂作用Hep3B+p53后的启动子NF-κB(-618/+6)和E2F-1(-470/+6)活性较Hep3B明显增强约1.5倍和0.8倍.奥沙利铂能够更加明显地抑制Hep3B+p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,100 μmol/L奥沙利铂作用后Hep3B+p53DNA合成率为30.41％,对细胞克隆形成能力的抑制率则达到75.60％,与Hep3B相比差异显著.奥沙利铂作用后Hep3B+p53的Caspase-3能够迅速地启动凋亡的发生和发展.结论 p53对铂类化疗药物对肝癌细胞的GADD45β诱导具有重要作用,增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制.     

环氧化酶-2——骨肉瘤治疗靶点

环氧化酶(COX)是催化花生四烯酸合成前列腺素的限速酶.COX-2作为一种诱导性即刻反应基因,在炎症和肿瘤中高表达,骨肉瘤中亦发现COX-2高表达.COX-2的高表达与肿瘤的血管形成增加、细胞凋亡减少、侵袭性增加和免疫抑制相关.COX-2抑制剂则能通过COX-2途径和非COX-2途径(天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶、凋亡抑制基因bcl-2、过氧化物酶体增殖因子激活受体、神经酰胺、其他凋亡相关因子生存素、p53等)诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用,因此COX-2成为骨肉瘤预防和治疗的靶点.COX-2抑制剂还能促进化疗和放疗效果,从而为骨肉瘤新辅助化疗和放疗等综合治疗提供理论依据.     

紫杉醇诱导骨肉瘤细胞系凋亡的体外研究

目的研究抗微管新药紫杉醇对成骨肉瘤细胞系U-2OS的生长抑制及诱导凋亡作用,并探讨其诱导凋亡作用的机制。方法将不同浓度的紫杉醇作用于成骨肉瘤细胞系U-2OS,应用形态学观察、台盼蓝染色、流式细胞术、电镜、原位末端标记(TUNEL)等方法,检测其诱导骨肉瘤细胞凋亡的时间效应和剂量效应,并与其它化疗药物比较。结果紫杉醇对U-2OS细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用,且呈时间依赖和剂量依赖性。表现为细胞G2/M期阻滞、出现明显的凋亡峰;有核碎裂、染色体凝集、DNA断裂等凋亡特征,并出现大量多核细胞。经其它化疗药物诱导的U-2OS细胞未出现多核现象。结论紫杉醇通过抑制细胞有丝分裂,对骨肉瘤细胞有明显的生长抑制及促凋亡作用,且其作用有独特的机制。     

腺病毒介导的野生型p53基因逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A耐药性的研究

目的 探讨野生型p53基因对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A耐药性的逆转作用及其机制.方法 选用含野生型p53基因的重组腺病毒载体,转染乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A,绘制细胞生长曲线,利用流式细胞计数仪检测细胞周期分布及凋亡分析、TUNEL法检测细胞凋亡的发生,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹转移检测p53基因的表达情况.结果 野生型p53基因转染MCF-7/A后的24、48 h均检测到p53基因的表达,并显著抑制MCF-7/A细胞的增殖;细胞周期发生改变,转染后的MCF-7/A的G0%G1期DNA百分含量(76.22%)明显高于对照组(43.64%,P<0.05),凋亡率(10.76%)与对照组(1.48%)之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 重组腺病毒介导的野生型p53基因对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A的耐药性有明显的逆转作用,其机制可能是引起明显的G1期阻滞并诱导细胞凋亡.     

外泌体微小RNAs介导的胰腺癌耐药机制研究进展

近年来,多项研究结果显示：微小RNAs（miRNAs）在胰腺组织、胰腺癌细胞和胰腺癌耐药细胞中具有差异性表达,且miRNAs可通过对下游靶基因的作用改变胰腺癌细胞对化疗药物敏感性。肿瘤的耐药分子机制错综复杂,在胰腺癌耐药中,miRNAs可以通过影响胰腺癌细胞中上皮-间质转化、DNA的损伤和修复、下游信号通路、非编码RN...     

GADD45β基因表达诱导对不同p53状态的肝癌细胞作用

目的：体外合成GADD45β基因全序列表达质粒后，研究GADD45β基因表达诱导对呈不同p53状态的肝癌细胞的作用及可能机制。方法：采用RT-PCR法获得GADD45β基因全序列，插入pDrive穿梭克隆载体和pIRES2-EGFP荧光表达载体后大量扩增获得DNA，结合p53全基因表达质粒pp53-EGFP转染HepG2、Hep3B细胞后，以[^3H]胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法(^3H—Tdr)和细胞克隆形成法分析DNA合成变化及细胞生长能力；以双抗体夹心ELISA法测定TGF-β1表达变化。结果：成功合成GADD45β基因全序列和表达质粒，通过流式细胞仪收集转染阳性的荧光表达细胞能显著提高转染效率；转染GADD45β后．具有野生型p53基因的HepG2细胞的细胞克隆形成能力和DNA合成能力明显受到抑制，细胞凋亡明显增加，TGF-β1的表达亦明显受抑。与之相反，缺失p53基因的Hep3B需要同时共转染p53基因后，方出现抑制效应。结论：GADD45β基因能够有效抑制肝癌细胞的生长．其功能需要完整p53基因的辅助和(或)调控。GADD45表达和（或)功能异常，导致p53介导的DNA损伤修复途径异常或阻断，是肝脏细胞恶性转化及形成肿瘤的可能机制。