光氧化反应处理牛颈静脉带瓣管道的理化性能与钙化实验研究

目的 通过光敏剂介导的光氧化反应处理牛颈静脉带瓣管道，观察其理化与抗钙化性能。方法 新鲜牛颈静脉带瓣管道24根，随机分为3组：光氧化反处理组（Ⅰ组）；戊二醛处理组（Ⅱ组）；新鲜对照组（Ⅲ组），不作固定处理。3组分别测组织含水量、最大应力值、组织蛋白含量；前两组植入活体1月后测组织含钙量。结果 与Ⅲ组相比，Ⅰ组和Ⅱ组的管道组织蛋白含量都明显减少（P〈0．05），最大应力值均明显提高；组织含水量方面，Ⅰ组与Ⅲ组无差异，Ⅱ组明显减低（P〈0．05）；但钙化程度上，Ⅰ组显著低于Ⅱ组（P〈0．001）。结论 经光氧化反应处理的牛颈静脉带瓣管道特性更接近于新鲜组织，但又同戊二醛处理的管道一样，具有组织稳定性，且钙化程度低，可望成为一种好的临床生物材料。     

环氧交联牛颈静脉带瓣管道的形态学和理化性能的研究

目的探讨环氧化合物交联牛颈静脉带辩管道的外观形态，组织稳定性及流体物理性能的特征。方法取新鲜牛颈静脉带辩管道24根，随机分为环氧化合物处理组（PC组,n=8），戊二醛处理组（GA组，n=8）及新鲜对照组（Control组，n=8）。分别测量各组处理前后管壁厚度，管腔外径及瓣膜的抗返流性能的变化。测定处理前后各组的组织含水量，热皱缩温度，组织断裂强度。断裂伸长率。结果PC组外观形态，管腔外径，瓣膜抗返流性能较对照组差异无显著性（P〉0．05），GA组血管变硬。呈淡黄色，抗返流性能下降，与PC组相比差异有显著性（P〈0．05）。PC组及GA组的组织含水量和断裂伸长率均低于Control组（P〈0．05），PC组和GA组的热皱缩温度，断裂强度较Control组均升高（P〈0．05）；PC组组织断裂强度GA组比较差异无显著性。结论环氧化合物能有效交联牛颈静脉带辩管道提高其组织的稳定性，且能较好的保护瓣膜的抗返流性能。     

去细胞光氧化处理牛颈静脉带瓣管道的形态学研究

目的:评价去细胞结合光氧化技术处理的牛颈静脉带瓣管道(BJVC)组织相容性及组织稳定性.方法:取新鲜牛颈静脉20根, 每根裁出4个带瓣血管片,随机分为4组,分别以染料介导光氧化(DMP)、戊二醛(GA)、去细胞(DC)及去细胞结合光氧化(DC DMP)4种技术处理.通过组织蛋白提取实验观察BJVC去细胞后光氧化交联的时效性;建立大鼠皮下包埋模型,两月后获取组织标本,通过HE染色及电镜观察,比较4组试片的形态结构变化.结果:DMP交联的BJVC有明显的时效性,处理48 h后交联程度至最大;与其他组比较,大鼠皮下包埋后去细胞结合光氧化组试片柔韧性好,纤维结构较完整,有轻度降解现象,细胞生长良好.结论:去细胞结合光氧化处理的BJVC组织相容性好,适于细胞浸润生长,组织稳定性较好,降解速率可通过DMP处理时间调节,是一种较理想的可降解带瓣血管支架材料.     

染料介导光氧化处理的牛颈静脉的遗传毒理学评价

目的对染料介导光氧化处理的牛颈静脉的遗传毒性进行评价。方法采用微核试验、染色体畸变试验及AMES试验进行遗传毒性评价。结果试验组股骨骨髓细胞微核率及染色体畸变率与阴性对照纽之间X^2检验分析差异无显著性（P〉0.05）；与阳性对照环磷酰胺组差异有显著性（P〈0.05）；AMES试验中试验组菌落数均未超过阴性对照组菌落数的2倍，试验结果为阴性。结论染料介导光氧化处理的牛颈静脉无遗传毒性作用。     

丹宁酸改性处理对戊二醛固定牛颈静脉管道理化特性的影响

目的 评估丹宁酸改性处理对戊二醛固定牛颈静脉管道理化性质的影响.方法 新鲜牛颈静脉分别经戊二醛固定(对照组)和戊二醛固定/丹宁酸改性处理后(研究组),采用热收缩温度、抗蛋白酶解性能、生物力学性能及傅立叶变换红外线光谱法进行理化性质评价.结果 研究组牛颈静脉管壁的热收缩温度(P<0.01)、抗胶原纤维酶和抗弹性蛋白酶酶解性能(P<0.01)、管壁最大拉伸强度(P<0.01)及断裂伸长率(P<0.05)等指标均明显高于对照组,且管壁示红外线峰值偏移.结论 丹宁酸改性处理可显著改善戊二醛固定牛颈静脉管道的理化性质.     

牛颈静脉带瓣管道结构特性及流体动力学的实验研究

目的 :探讨牛颈静脉带瓣管道结构形态及其流体动力学特性。方法 :取新鲜牛颈静脉带瓣管道 ,应用自制的流量测定装置 ,在相同压力下测定其在一定时间内顺行和逆行灌注量 ,根据逆行与顺行流量的百分比将瓣膜功能分级。重复测量以 0 .6 2 5 %戊二醛液固定的牛颈静脉管道的顺逆行灌注流量 ,观察静脉瓣膜解剖结构。结果 :牛颈静脉管道常有 2～ 3组瓣膜 ,瓣叶菲薄、透明。每组瓣可为三叶或两叶 ,少数为四叶。各组瓣叶发育程度不一 ,发育良好的组瓣呈散在分布。瓣膜抗返流功能和瓣膜与瓣窦高度之比值呈正相关 (r =0 .70 9,P <0 .0 0 1 ) ;瓣膜抗返流功能与瓣叶数和管径之间不相关 (P >0 .0 5 )。固定前后其逆行与顺行灌注流量百分比差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :部分牛颈静脉具有发育良好的瓣膜 ,抗返流特性好。常用的戊二醛固定处理降低了牛颈静脉管道的抗返流性能     

牛颈静脉带瓣管道重建右室流出道后免疫学研究

目的 应用牛颈静脉带辩管道(BJVC)进行心脏右室流出道(RVOT)的重建,探讨BJVC植入人体内后免疫反应的程度.方法 2005年10月～2009年5月共应用牛颈静脉带瓣血管片(BJVCP)重建重症法洛四联症(TOF)患者右心室流出道13例(A组),并与同期自体心包跨瓣环加宽13例(B组)进行比较,通过免疫学方法,监测患者术后免疲球蛋白、T细胞亚群、补体,研究其免疫排斥反应.结果 体外循环术后患者免疫球蛋白、T细胞亚群、补体等免疫指标下降,这些免疫指标术后7～14 d恢复正常.血清特异性抗体水平检测,心包重建组13例经测试结果全部为阴性.BJVC重建右心室流出道组有5例阳性,余为阴性.结论 戊二醛交联的牛颈静脉带瓣血管片植入人体后,可监测到特异性抗体,但机体未出现明显排斥反应.     

戊二醛鞣制的牛颈静脉带瓣管道钙化的实验研究

目的探讨戊二醛鞣制的牛颈静脉带瓣管道是否易于钙化。方法本研究以戊二醛鞣制的牛颈静脉作为研究对象,通过建立大鼠皮下包埋动物模型11例加速体内钙化的方法,应用原子吸收光谱法测定组织钙含量。结果血管壁和瓣膜钙含量分别为(211.00±25.83)μg/m g和(4.218±3.879)μg/m g,后者为前者的2%,统计学上差异有显著性(P<0.001)。结论戊二醛交联鞣制的牛颈静脉血管壁较易发生钙化,与之相比瓣膜较不易钙化。     

牛颈静脉带瓣管道的抗钙化研究进展

应用带瓣管道重建右心室流出道是治疗复杂先天性心脏病的一项重要手段。近年来,戊二醛处理的牛颈静脉带瓣管道被广泛应用于临床,但术后管道钙化、衰败问题一直未得到解决。目前抗钙化处理方法有去细胞、染料介导光氧化、环氧化合物、组织工程等,但单一方法往往不能取得令人满意的效果,多种方法联合处理将是组织工程技术发展的方向。     

牛颈静脉带瓣管道重建犬右室-肺动脉连接后的钙化研究

目的研究牛颈静脉用于重建右室-肺动脉连接后的钙化情况。方法以戊二醛鞣制的牛颈静脉带瓣管道为研究对象,建立犬重建右心室-肺动脉连接动物模型,观察9￣10个月,通过原子光谱吸收法测定组织钙含量,以评价在体内循环系统中与血流接触的情况下,牛颈静脉带瓣管道的钙化情况。结果管壁钙含量为(22.05±10.78)μg/mg,瓣膜钙含量为(0.88±0.69)μg/mg,后者仅为前者的3.99%,经配对t检验分析,在统计学上差异均有显著性(P<0.001)。瓣下管壁钙含量为(16.04±4.25)μg/mg,瓣上管壁钙含量为(28.07±17.98)μg/mg,配对t检验显示二者在统计学上差异无显著性(P>0.05);瓣膜的基底部、交界部及游离缘3者之间的钙含量在统计学均无显著性差异,配对t检验显示P>0.05;结论牛颈静脉带瓣管道重建右室-肺动脉连接后,血管壁远较瓣膜容易钙化;瓣上管壁和瓣下管壁钙化程度无明显差异,瓣膜各部分钙化程度无明显差异。     

牛颈静脉带瓣管道与自体心包管道重建右心室流出道的中期疗效比较

目的 比较应用牛颈静脉带瓣管道与自体心包管道重建右心室流出道的中期疗效差异。方法 回顾性分析2013年5月至2016年7月接受外管道重建右心室流出道术的18例先天性心脏病患者的临床资料,患者年龄为2~16（5.22±4.12）岁,男11例、女7例,肺动脉闭锁合并室间隔缺损7例、右心室双出口合并肺动脉瓣狭窄4例、永存动脉干3例、永存动脉干合并右肺动脉缺如1例、矫正型大动脉转位合并肺动脉瓣狭窄1例、完全大动脉转位合并肺动脉瓣狭窄2例。术中采用完整国产牛颈静脉带瓣管道重建右心室流出道11例（牛颈静脉管道组）,采用自体心包管道重建右心室流出道7例（自体心包管道组）,记录围手术期情况。术后随访4~56个月,应用心脏超声及心脏计算机断层扫描血管成像（CTA）评估疗效。结果 牛颈静脉管道组11例患者无围手术期死亡;自体心包管道组7例患者死亡2例,其中1例死于术后肺动脉高压危象,1例死于低心排出量综合征。牛颈静脉管道组右心室压/桡动脉压比值、术后机械通气时间、重症监护病房（ICU）时间均小于自体心包管道组,差异均有统计学意义（P均< 0.05）;两组患者体外循环时间、主动脉阻闭时间、停机后右心室流出道跨瓣压差、输血量及住院总费用差异均无统计学意义（P均> 0.05）。两组随访期间均无死亡病例,牛颈静脉管道组无再次手术病例,自体心包管道组1例因严重右心功能不全于术后2年行机械瓣膜带瓣管道植入术。超声测量结果显示,牛颈静脉管道组术后最后一次随访时右心室流出道跨瓣压差与出院前相比差异无统计学意义[（22.91±7.31）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）vs（20.45±6.70）mmHg,P>0.05],自体心包管道组术后最后一次随访时右心室流出道跨瓣压差高于出院前[（29.20±18.09）mmHg vs（16.14±4.02）mmHg,P<0.05];牛颈静脉管道组术后最后一次随访时发现轻度反流8例、中度反流3例,自体心包管道组发现轻度反流1例、中度反流2例、重度反流2例,两组间差异有统计学意义（P<0.05）。术后超声检查显示牛颈静脉管道内瓣叶组织均有不同程度的增厚,但未见钙化,瓣叶活动良好,无血栓形成及感染性心内膜炎发生;自体心包管道未见钙化、血栓形成及感染性心内膜炎发生。术后随访期间心脏CTA检查发现牛颈静脉管道有1例中段、1例近端吻合口出现瘤样扩张情况,自体心包管道均未见扩张。结论 国产牛颈静脉带瓣管道适用于各类复杂先天性心脏畸形患者右心室流出道重建术,中期随访显示牛颈静脉管道抗反流性能良好,无严重梗阻或钙化发生,优于自体心包管道。但部分国产牛颈静脉带瓣管道术后中期随访有瘤样扩张发生,制备工艺有待进一步改进。     

去细胞处理对牛颈静脉带瓣管道细胞外基质骨架的影响

目的:探讨去细胞处理对牛颈静脉带瓣管道细胞外基质骨架成分及组织稳定性的影响,为确立构建组织工程化的人工血管技术提供依据.方法:采集新鲜牛颈静脉,筛选瓣膜功能良好的血管,采用曲那通X-100、胰蛋白酶/EDTA和DNase-I/RNase-A三步法去细胞处理,组织化学染色和透射电镜观察细胞外基质骨架成分(胶原和弹力蛋白)的变化.对新鲜和去细胞处理的牛颈静脉血管壁(n=10)分别进行弹力蛋白(Fastin弹性蛋白法)和羟脯氨酸(碱水解、分光光度法)含量测定;并测定处理前后的热皱缩温度和抗张强度以比较组织稳定性.结果:去细胞处理牛颈静脉血管壁光镜和透射电镜检测提示细胞及其成分完全去除,组织间隙增宽,但胶原成分较好保留,弹力蛋白部分减少及断裂.与新鲜组织比较,去细胞组羟脯氨酸含量相对增加[(25.73±2.97)mg/g vs.(29.25±2.99)mg/g,P＜0.05],弹力蛋白含量相对减少[(159.71±21.06)ng/g vs.(134.91±35.40)mg/g,P＜0.05],热皱缩温度降低[(72.50±0.53)℃ vs.(69.75±0.54)℃,P＜0.05],抗张强度也下降明显[(5.19±0.65)MPa vs.(3.13±0.94)MPa,P＜0.05].结论:去细胞处理对牛颈静脉细胞外基质骨架有一定损害,牛颈静脉的组织稳定性有所下降,得到的细胞外基质基本成分需经进一步交联处理才可以作为组织工程支架材料.     

经戊二醛固定的牛颈静脉带瓣管道改性方法评价

目的:改性后的牛颈静脉带瓣管道植入犬的右室流出道,观察其长期的防钙化性能.方法:从屠宰场取新鲜牛颈静脉,筛选后放入循环固定槽内,用体积分数为0.625%的戊二醛固定1 d,取出分为2组,分别于体积分数为100%2,3-丁二醇和体积分数为0.3%戊二醛中保存60 d,然后分组植入犬的右室-肺动脉之间,将犬的肺动脉近端结扎,饲养1 a后行牛颈静脉带瓣管道的组织病理学观察及钙含量测定.结果:2,3-丁二醇保存组管道内腔及瓣膜表面发现有内皮样细胞存在.戊二醛保存组较2,3-丁二醇组管道组织均存在较严重的炎性反应.2,3-丁二醇改性后的牛颈静脉管壁平均钙含量((8.72±0.71)mg/g)明显比戊二醛组((22.05±10.78)mg/g)低,P＜0.05;2组瓣膜平均钙含量相比(2,3-丁二醛组:(1.38±0.86)mg/g),戊二醛组:((0.88±0.69)mg/g)差异无统计学意义(P＞0.05).结论:戊二醛鞣制的生物组织材料经2,3-丁二醇改性后可明显减轻组织钙化程度.