荧光定量PCR检测传染性非典型肺炎冠状病毒的分析

目的 探讨荧光定量PCR在检测传染性非典型肺炎(SARS)冠状病毒(SARS—CoV)中的应用。方法 对2003年1～4月广州市各大医院送检的临床确诊或疑似的SARS病例以及密切接触的咽漱液和咽拭子进行荧光定量PCR检测。结果 从57份确诊患标本中检出SARS-CoV阳性38份，检出率为66．7％。14份密切接触标本中检出阳性7份。59份疑似患标本中检出阳性12份。SARS发病10～12d时SARS—CoV检出率最高，达87．5％。结论 荧光定量PCR能早期、快速检出SARS—CoV，临床符合率达66．7％，采样时间在发病1～12d最佳。     

改良分子信标-双重实时荧光PCR快速检测SARS病毒

目的建立改良分子信标-双重实时荧光PCR检测SARS病毒的方法,用于SARS的早期诊断和动物溯源。方法利用改良分子信标技术、装甲RNA和双片段双色荧光技术,根据GenBank公布的SARS病毒聚合酶基因1b的阅读开放框架结构的保守序列,自行设计一对引物和探针,以部分临床标本的酶联吸附实验结果和传统细胞培养方法作为对照,建立分子信标检测SARS病毒的方法。对368份临床标本(咽漱液、血液、粪便、尿液)、52份细胞培养液和50份动物标本进行荧光PCR扩增。结果分子信标检测SARS病毒的方法灵敏度为10～100个拷贝ml,与流感病毒等呼吸道病毒无交叉反应。分子信标检测368份临床标本,20份阳性。其中确诊病例阳性率为21.27%(1047),确诊病例的咽漱液阳性率为43.48%,还分别从粪便和血清中检测到SARS病毒。52份细胞培养液,29份阳性,阳性率为55.77%。50份动物标本,23份阳性,阳性率为46%。结论改良分子信标-双重实时荧光PCR检测SARS病毒方法灵敏度高、特异性强,可用于SARS的临床早期诊断和动物溯源。     

广东省各类SARS病例标本实验室检测结果与临床诊断结果比较

目的 比较不同发病时间、有无明确接触史的SARS临床确诊病人和疑似病人实验室检测结果与临床诊断结果，分析实验室检测结果、流行病学资料和临床诊断之间的相互关系，为临床诊断提供更可靠的参考依据。方法 应用荧光定量PCR和巢式PCR技术检测病人咽拭子中SARS病毒特异基因，应用ELISA和间接免疫荧光法检测病人恢复期血清中的SARS病毒IgG抗体。结果 1～5月份，每月临床确诊病例PCR阳性率分别为：100％(2／2)、76．19％(16／21)、73．17％(30／41)、24．56％(14／57)和11．11％(2／18)，IgG抗体阳性率分别为100％(2／2)、78．57％(13／18)、58．33％(32／67)、30．30％(10／35)和9．52％(2／21)，阳性率逐月下降。4～5月份阳性率较低；1～4月份的临床确诊病例中，有明确接触史的病例，PCR和IgG抗体阳性率分别为73．58％(39／53)和74．42％(32／43)，无明确接触史的病例，PCR和IgG抗体阳性率分别为32．14％(27／84)和25．58％(22／86)，有无明确接触史临床确诊病例阳性率差异有显性。4～6月份，疑似病人PCR和IgG抗体的阳性率分别为11．89％(54／454)和7．78％(21／270)，阳性率很低。结论 综合临床症状、流行病学资料和实验室检测结果进行分析，可以得到更准确可靠的诊断结果。     

实时荧光定量RT—PCR和血清学方法联合应用检测风疹病毒

目的探讨实时荧光定量RT-PCR和血清学方法联合应用检测风疹病毒。方法采用实时荧光定量RT—PCR及酶联免疫吸附试验对临床标本进行检测。结果在58份临床标本中,实时荧光定量RT—PCR法检测阳性率为100％,酶联免疫吸附试验风疹IgM抗体阳性率为82．8％。结论实时荧光定量PCR法适合用于疾病的早期诊断和鉴别诊断,可作为酶联免疫吸附试验的一个补充诊断方法。     

101例严重急性呼吸综合征患者粪便中SARS冠状病毒RNA的检测

目的　研究严重急性呼吸综合征 (SARS)患者粪便中排出SARS冠状病毒 (SARS CoV)RNA的情况。方法　采用荧光定量聚合酶链反应法 (FQ PCR)检测 10 1例病程为 10～ 5 5d的SARS患者、2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群粪便中SARS CoVRNA。结果　 10 1例SARS患者的粪便标本中 5 8例 (5 7 4 % )SARS CoVRNA阳性 ;2 7例非SARS患者和 4 0 0名健康体检人群的粪便标本均为阴性。SARS患者发病后 10～ 19、2 0～ 2 9、30～ 39和 4 0～ 5 5d ,粪便中SARS CoVRNA阳性率分别为 10 0 % (8/ 8)、6 7 7% (2 1/ 31)、4 7 4 % (2 7/ 5 7)和 4 0 0 % (2 / 5 )。粪便中SARS CoVRNA载量对数值分别为 6 0 6± 2 0 5、4 5 1± 1 2 3、3 82± 1 4 4和 3 5 7± 1 2 5。结论　SARS患者急性期粪便中SARS CoVRNA阳性率和载量对数值最高 ,且随病程延长而下降     

广东省SARS病例血清学调查与分析

目的　分析广东省严重急性呼吸综合征 (SARS)病例SARS CoV抗体检出情况。方法　分别对 2 92份广东省SARS临床确诊病例、39份疑似病例和 30 3份健康体检人员 (一般人群 )血清标本 ,采用酶联免疫方法进行SARS冠状病毒IgG抗体检测。结果　SARS临床确诊病例的SARS CoVIgG抗体阳性率为 5 8 90 % (1 72 / 2 92 ) ,高于疑似病例及一般人群抗体阳性率 (分别为 1 8 0 0 %、2 31 % )(P <0 0 1 )。分析 2 92份临床确诊病例血清标本 ,结果显示有明确接触史者抗体阳性率 (72 6 7% )高于无明确接触史者 (4 1 98% ) (P <0 0 1 )。不同性别抗体阳性率差异无显著性 ,不同年龄组抗体阳性率差异有显著性 ,4 0～ 5 9岁年龄组最高 (P <0 0 1 )。流行早期病例抗体阳性率 (6 7 4 3% )高于后期(31 94 % )。SARS冠状病毒IgG抗体在发病 1 0d后能较可靠检出且能维持较长时间。结论　SARS冠状病毒IgG抗体检测结果与临床诊断存在一定差异 ,IgG抗体检测是有效的辅助诊断手段 ,但不能用于早期诊断。实验室血清学检测结果进一步证明接触史是SARS病例诊断的重要依据之一。     

间接免疫荧光法在检测SARS冠状病毒特异性抗体中的应用

目的 利用间接免疫荧光技术(IFA)建立SARS冠状病毒(SARS—CoV)特异性抗体血清学诊断方法。方法 采用组织培养技术，用SARS病人的咽漱液样本，在Vero—E6细胞中培养，分离SARS冠状病毒；用已制备的SARS病毒抗原片与临床确诊为SARS的病人双相血清和正常人对照血清作用，再用荧光标记羊抗人IgM/IgG抗体与之结合，在荧光显微镜下观察荧光图像。结果 通过建立检测SARS冠状病毒特异性抗体的间接免疫荧光方法，在44份SARS临床病例标本中，检出IgG抗体阳性3l份，与临床诊断符合率为70．45％。31份IgG阳性者的急性期血清中IgM检出率为38．70％，IgM最早产生于发病第3天，发病7d以上的6例的IgM抗体均为阳性，滴度在发病12～15d达到高峰(1：80)；恢复期血清中IgG抗体最早产生于发病第8天，滴度在发病15～20d达到高峰(1：320～1：640)。97份正常人的血清标本中IgG抗体阳性率为3．09％，IgM抗体为阴性。结论 利用此方法，证实被SARS冠状病毒感染后，在机体中产生有特异性的IgM／IgG抗体；本方法检测结果与临床诊断符合率较高，可以用于早期临床诊断SARS病毒感染和辅助临床做出鉴别诊断。     

脑脊液中单纯疱疹病毒Ⅰ型DNA与IgM/IgG抗体检测的研究

目的通过比较单纯疱疹性脑炎患者不同的年龄和发病时间脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中单纯疱疹病毒I型(HSV1)DNA与IgM/IgG抗体的检出率,为临床症状不典型的患者提供更快速、灵敏的检测方法。方法将已确诊为单纯疱疹病毒性脑炎的79例患者的脑脊液均分为2份,1份用于荧光定量PCR,1份用于IgM/IgG抗体检测,分别比较不同年龄段和不同发病天数的检出率。结果从不同年龄段的比较可以看出,4个月～14岁的儿童多为原发感染,HSV1IgM阳性率较高。从不同的发病天数比较可以看出,在2～15 d的疾病早期,PCR检测HSV1DNA阳性率较高,同时疾病早期HSV1IgM检出率较高,而在20 d以后HSV1IgM很难检出,HSV1IgG检出率较高。结论临床要根据单纯疱疹性脑炎患者不同的年龄和发病时间采取不同的检查方法。     

与SARS相关的卫生医疗机构内鼠形动物携带SARS冠状病毒的调查分析

目的　调查与SARS相关的卫生医疗机构内鼠形动物携带SARS冠状病毒 (CoV )情况 ,为寻找SARS的源头和传染途径提供证据。方法　常规方法捕捉老鼠 ,采用巢式PCR技术、荧光定量PCR技术、基因序列检定技术、病毒细胞培养技术进行测试。结果　在广州市与SARS相关的卫生医疗机构内捕捉的鼠形动物共 3种 5 9只 ;用SARS CoV特异性引物对 3 2份肛拭子样本进行PCR检测 ,结果显示肛拭子样本有 4份阳性 ,阳性率为 12 .5 % ;阳性片段基因序列与SARS CoV同源性为 90 %～ 96% ;PCR扩增片段阳性样本细胞培养结果未能分离到SARS CoV。结论　鼠形动物能否携带和传播SARS CoV ,仍需作进一步研究。     

脑脊液中单纯疱疹病毒I型DNA与IgM/IgG抗体检测的研究

目的 通过比较单纯疱疹性脑炎患者不同的年龄和发病时间脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中单纯疱疹病毒I型( HSV1) DNA与IgM/IgG抗体的检出率,为临床症状不典型的患者提供更快速、灵敏的检测方法.方法 将已确诊为单纯疱疹病毒性脑炎的79例患者的脑脊液均分为2份,1份用于荧光定量PCR,1份用于IgM/IgG抗体检测,分别比较不同年龄段和不同发病天数的检出率.结果 从不同年龄段的比较可以看出,4个月～14岁的儿童多为原发感染,HSV1 IgM阳性率较高.从不同的发病天数比较可以看出,在2～15 d的疾病早期,PCR检测HSV1DNA阳性率较高,同时疾病早期HSV1IgM检出率较高,而在20 d以后HSV1 IgM很难检出,HSV1 IgG检出率较高.结论 临床要根据单纯疱疹性脑炎患者不同的年龄和发病时间采取不同的检查方法.