白细胞介素-12基因转染的人肺巨细胞癌克隆的建立及其生长特性的观察

白细胞介素１２（ＩＬ１２）是由ｐ３５和ｐ４０两个亚单位组成的异二聚体［１］。有研究提示ＩＬ１２具有一定的抑制血管形成的作用［２］。大量实验证实重组ＩＬ１２对较多的小鼠肿瘤具有较强的抗肿瘤活性，表现为抑制肿瘤生长、诱导肿瘤消退、降低肿瘤转移［３...     

基质金属蛋白酶—9反义寡核苷酸对前单核细胞THP—1粘附及基质金属蛋白酶—9表达的实验研究

目的：探讨基质金属蛋白酶－9（Matrix Metalloproteinase-9,MMP-9)在前单核细胞THP－1分化过程中的作用。材料和方法：采用硫化修饰的正,反义寡核苷酸,通过基因转染,观测其对THP－1粘附及用流式细胞仪检测MMP－9的表达。结果：MMP－9反义寡核苷酸可有效的抑制THP－1的粘附和MMP－9的表达。结论：MMP－9在前单核细胞的分化过程中起重要的作用。     

反义VEGF165基因转染对人神经母细胞瘤生物学行为的影响

目的探讨反义VEGF165基因转染在抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长中的作用。方法构建正义和反义VEGF165真核表达载体,用脂质体转染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,G418筛选稳定表达细胞克隆。应用RT-PCR证实外源性反义VEGF mRNA的表达,免疫细胞化学和EUSA检测VEGF蛋白的表达水平,MTT法检测肿瘤细胞体外生长情况,并接种于裸鼠皮下,观察体内肿瘤增殖能力。结果RT-PCR证实转染反义VEGF的细胞中有外源性反义VEGF mRNA的表达,免疫细胞化学和EUSA显示VEGF蛋白表达明显降低,MTT实验显示转染前后细胞体外生长速度基本一致。而转染反义VEGF的肿瘤细胞裸鼠体内生长速度明显减慢。结论反义VEGF基因转染能够有效抑制SH-SY5Y细胞内源性VEGF蛋白的表达,抑制裸鼠体内肿瘤的生长。     

巨细胞病毒感染对人内皮细胞金属基质蛋白酶-2表达的影响

目的观察巨细胞病毒感染对人内皮细胞金属基质蛋白酶-2表达的影响。方法原代培养人脐静脉内皮细胞并传代,以巨细胞病毒感染3～6代细胞。逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测金属基质蛋白酶-2mRNA表达,凝胶酶谱法检测金属基质蛋白酶-2活性。结果巨细胞病毒感染6h人脐静脉内皮细胞金属基质蛋白酶-2mRNA表达及其活性与对照相似,感染12、24h与对照比明显增强。结论巨细胞病毒感染上调人内皮细胞金属基质蛋白酶-2表达,这可能是巨细胞病毒参与动脉粥样硬化的机制之一。     

基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9与类风湿性关节炎关节破坏的关系

目的：观察血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9与类风湿性关节炎患者（Rheumatoid arthritis，RA）关节破坏的关系。方法：用双抗体夹心ELISA法测定90例未经治疗的早期RA患者及20例健康人血清中MMP-2、MMP-9，并分析其与RA患者X线表现积分（△Larsen）及健康评分（△HAQ）、CRP的关系。结果：血清MMP-2、MMP-9水平与C反应蛋白（CRP）、△Larsen、△HAQ显著相关，其相关系数及P值分别为r=0．40和0．46，P〈0．01；r=0．28和0．31，P〈0．05；r=0．30和0．34，P〈0．01。18例最初CRP正常的患者，MMP-2及MMP-9水平与观察12个月后出现关节侵蚀改变相关（r=0．59和0．48，P〈0．05）。回归分析发现，最初无骨侵蚀改变的患者，Larsen积分显示的骨侵蚀进展与MMP-2含量密切相关（r=0．32，P〈0．01）。结论：血清MMP-2、MMP-9水平与RA患者的病情活动及早期关节的骨侵蚀显著相关，可以作为无骨破坏的早期RA患者出现骨侵蚀的有益预测指标。     

自泌性白细胞介素-6对人肺巨细胞癌系PG生长的刺激作用

目的探讨白细胞介素－６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）对人肺巨细胞癌系ＰＧ生长的影响。方法应用逆转录ＰＣＲ技术，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法分析ＩＬ－６及其受体基因表达；应用生物活性检测方法测定ＩＬ－６分泌；应用抗ＩＬ－６中和抗体鉴定ＩＬ－６对ＰＧ细胞生长的作用。结果ＰＧ细胞表达ＩＬ－６受体，重组人ＩＬ－６刺激ＰＧ细胞增殖；ＰＧ细胞表达ＩＬ－６且产生有生物活性的ＩＬ－６，抗ＩＬ－６抗体可特异性地抑制ＰＧ细胞生长。结论ＩＬ－６为ＰＧ细胞自泌性生长刺激因子。     

自泌性白细胞介素—6对人肺巨细胞癌系PG生长的刺激作用

探讨白细胞介素－６对人肺巨细胞癌系ＰＧ生长的影响。     

PRL-2基因转染对肝细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响

目的:研究PRL-2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。 方法:采用脂质体转染的方法将PRL-2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中，G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分泌MMPs 酶谱变化，Western blotting 及RT-PCR检测转染肝细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的变化。以PRL-2磷酸酯酶特异性抑制剂处理转染细胞，观察抑制PRL-2活性对上述指标的影响。 结果:经过 8周G418筛选及RT-PCR和Western blotting鉴定,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1。转染后的CL1细胞分泌MMP－9 、活性型MMP－9 和MMP－2 ,均显著高于转染前CL1细胞的MMPs 分泌(P<0.01);使用特异性抑制剂后， MMP－9 、活性型MMP－9 和MMP－2活性显著降低(P<0.01)。Western blotting及RT-PCR检测显示PRL-2-CL1细胞MMP2、MMP9蛋白及mRNA含量均较转染前显著升高(P<0.05)，TIMP-2则显著降低(P<0.05)；使用抑制剂后，可以逆转上述变化。 结论:PRL-2在永生化肝细胞中获得稳定、高效表达，PRL-2基因增强肝细胞侵袭及转移能力与其提高细胞MMP2、MMP9表达，降低TIMP-2有关。     

小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞黏附特性的影响

目的：研究小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞黏附特性的影响，以探讨其抑制肿瘤侵袭转移的可能机制。方法：小檗碱（5、10μg／m1）处理PG细胞24小时，采用MTF法观察PC细胞与PG细胞的黏附（同质黏附），PG细胞与细胞外基质（FN和Martrigel）的黏附；用虎红染色法观察PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的黏附。通过SABC免疫细胞化学法及图像分析软件，半定量PG细胞E—cadherin、CD44的表达；RT—PCR法检测PG细胞E-cadherinmRNA和CD44mRNA的表达。结果：小檗碱（10μg/ml）可促进PG细胞的同质黏附（P〈0．05）；小檗碱（5、10μg／ml）可抑制PG细胞与FN和Martrigel的黏附（P〈0．01），并可抑制PG细胞与HUVEC的黏附（P〈0．05．P〈0．01）。经小檗碱（10μg／ml）作用的PG细胞，E-cadherinm及其mRNA表达明显增高（P〈0．01），而CD44及其mRNA的表达明显减少（P〈0．05）。结论：小檗碱通过促进PG细胞E—cadherin的表达而促进PG细胞间的同质黏附，抑制PG细胞CD44的表达而抑制其与细胞外基质及血管内皮细胞的黏附，这可能是小檗碱抗肿瘤转移的机制之一。     

抗人肺巨细胞癌单克隆抗体的制备与鉴定

在抗人肺巨细胞癌单克隆抗体(简称单抗)的研制中,建立了裸鼠人肺巨细胞癌移植模型,并对荷瘤裸鼠进行免疫重建、取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经筛选克隆出两株单抗LD13和LD15。融合率为100％,首次检测阳性孔率为70％,优于对照组常规免疫的方法。     

抗人肺巨细胞癌单克隆抗体的制备与鉴定

本组开展了抗人肺巨细胞癌单克隆抗体(简称单抗)的研制,建立了裸鼠人肺巨细胞癌移植模型,并对荷瘤裸鼠进行免疫重建,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp 2/0融合,经筛选克隆出两株单抗LD_(13)和LD_(15)。融合率为100％,首次检测阳性孔率为70％,优于对照组常规免疫的方法。LD_(13) 和LD_(15)对人肺巨细胞癌的阳性反应率为100％,对正常组织无交叉反应,与非     

可调控型反义基质金属蛋白酶9表达抑制人黑色素瘤细胞侵袭转移表型的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9与肿瘤转移的相关性。方法 利用基因重组技术构建反义MMP—9 cDNA四环素可调控型表达载体,用脂质体法转染反义MMP—9至转移性人黑色素瘤细胞株WM451(高表达MMP—9)。检测转染后细胞MMP—9表达水平的改变以及体外生长、侵袭、裸鼠体内成瘤及自发转移能力的变化。结果 转染反义基因后,WM451细胞MMP—9的表达及活性明显下降,同时MMP—2的表达也受到一定抑制,细胞生长速度、体外侵袭能力及棵鼠体内成瘤性及自发转移能力均受到一定程度抑制;运用四环素可以抑制四环素负调控逆转录病毒载体上的外源基因的表达。结论 反义MMP—9基因下调MMP—9的表达,可使人黑色素细胞转移能力受到一定程度的抑制,说明MMP—9在人黑色素瘤细胞转移过程中起重要作用。同时,四环素负调控逆转录病毒载体可以调控外源基因的表达。     

血管内皮生长因子反义基因转染对高转移人巨细胞肺癌细胞系生 …

目的 探讨反义血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因转染在抑制恶性肿瘤生长和转移的抗肿瘤血管基因治疗中的意义。方法 利用基因重组技术构建正义和反义ＶＥＧＦ１２１ ｃＤＮＡ真核表达载体,用脂质体法转染高转移性人巨细胞肺癌细胞（ＰＧ）,经Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹免疫化学检测ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平,并对转染前后细胞进行体外生长和裸鼠体内生长转移等多项生物学行为实验,结果 转染反义转     

肺舒胶囊对慢性阻塞性肺病大鼠肺基质金属蛋白酶9表达的影响

目的探讨肺舒胶囊对慢性阻塞性肺病（COPD）大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法将30只Wistar大鼠随机分为对照组、COPD模型组和肺舒胶囊治疗组各10只,取各组大鼠肺组织作MMP-9免疫组化染色,进行图像分析。结果模型组大鼠肺组织MMP-9免疫染色后的光密度值较对照组增大（P〈0．05）;而治疗组大鼠肺组织MMP-9的光密度值较模型组减小（P〈0．05）。结论肺舒胶囊可降低COPD大鼠肺组织中MMP-9的表达。     

反义VEGF165基因转染抑制裸鼠体内人神经母细胞瘤的生长

目的研究反义VEGF165cDNA转染对裸鼠移植性人神经母细胞瘤血管生成及超微结构的影响。方法将稳定转染正义VEGF165cDNA、反义VEGF165cDNA及空载体的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;HE染色观察肿瘤组织病理变化;透射电镜观察肿瘤组织超微结构;免疫组化染色比较裸鼠移植瘤微血管密度(MVD)。结果与空载体组相比,反义组裸鼠肿瘤瘤块体积小(P<0.05),MVD显著减少(P<0.01),肿瘤组织内血管稀疏,核分裂相少见,内皮细胞变性、肿胀,血液淤滞,凋亡细胞多见。结论反义VEGF165cDNA转染能抑制裸鼠人神经母细胞瘤的生长,降低瘤块内微血管生成,促使肿瘤细胞凋亡。     

基质金属蛋白酶-9基因与牙周病的相关性研究进展

MMP-9即基质金属蛋白酶-9,在人体多种组织均有表达。编码该蛋白酶的基因称MMP-9基因,该基因不仅在决定个体对某些疾病的易感性上起重要作用,而且其表达与某些疾病的发生、发展密切相关。牙周病为发生在牙周支持组织（牙龈、牙周膜、牙槽骨、牙骨质）的疾病。近年研究发现MMP-9基因表达及单核苷酸多态性（SNP）在牙周病发病机制中起到重要作用。     

u-PAR反义核酸载体的构建与高侵袭人前列腺癌细胞PC-3M亚系的转染

目的:为了特异封闭PC-3M高侵袭亚系尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u-PAR)的表达,观察其对侵袭能力的抑制效应。方法: 应用RT-PCR获得u-PAR的cDNA片段,反向插入pcDNA3质粒载体中,构建u-PAR反义核酸载体并导入高侵袭亚系中;借助RT-PCR和免疫组化检测转染细胞u-PAR的表达。 结果:u-PAR反义核酸载体转染株的u-PAR mRNA和蛋白质水平明显低于对照组,抑制率分别为53%和73%,同时其体外侵袭能力亦明显降低,抑制率为79%。 结论: u-PAR反义核酸在PC-3M高侵袭亚系中发挥了特异封闭作用,为进一步观察u-PAR反义核酸抑制高侵袭前列腺癌细胞亚系的侵袭效应提供了细胞模型。     

组织金属蛋白酶抑制剂TIMP-2基因转染对胃癌细胞体内外侵袭能力的影响

目的了解ＴＩＭＰ２基因转染对胃癌细胞侵袭行为的影响，进行阻断肿瘤细胞侵袭转移的筛选尝试。方法采取脂质体将外源基因ＴＩＭＰ２导入人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，经体外Ｂｏｙｄｅｎ小室测定肿瘤细胞侵袭能力与体内肾包膜下瘤组织种植侵袭模型对比分析，观察Ⅳ型胶原酶前体（ＭＴＭＭＰ）与基底膜Ⅳ型胶原免疫组化改变。结果发现转染ＴＩＭＰ２基因的胃癌细胞其表达ＭＴＭＭＰ的能力降低，成瘤时间延长，成瘤率降低，体外与体内的侵袭能力受到抑制。结论ＴＩＭＰ２基因转染可使胃癌细胞的侵袭表型得到下调。