CD28/CTLA-4共刺激分子在再生障碍性贫血免疫发病机制中的作用

目的 研究CD28、CTLA-4在再生障碍性贫血（AA）免疫发病机制中的可能作用。方法 以流式细胞术分别分析23例发病期AA、10例恢复期AA患者和15名正常人骨髓细胞中CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、CTLA-4表达率，Th1、Th2细胞比例，评价CD28、CTLA4表达与Th1／Th2、中性粒细胞绝对值（ANC）之间的关系。结果 ①正常对照组CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、cTLA4表达率及CD28^＋／CTLA-4^＋比值分别为（31．40±10．83）％、（2．45±1．30）％、17．02±13．44，AA患者发病期分别为（39．84±10．89）％、（1．43±0．67）％、43．04±37．61，AA患者恢复期分别为（22．00±9．08）％、（3．46±2．26）％、10．49±7．80；与正常对照组比较，AA患者发病期CD28显著升高（P〈0．05），CTLA-4显著下降（P=〈0．01），CD28^＋／CTLA4^＋比值相应地亦显著升高（P〈0．05），而恢复期上述数值与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。②正常对照组Th1、Th2细胞、Th1／Th2比值分别为（4．21±2．11）％、（1．99±1．27）％、2．46±1．28，AA发病期为（11．13±4．96）％、（2．46±1．65）％、5．20±1．98，恢复期分别为（5．39±4．29）％、（2．53±2．41）％、2．87±1．43；与正常对照组比较，AA发病期Th1增高，Th1、Th2平衡向Thl偏移（P值均〈0．01），恢复期与正常对照组比较，差异无统计学意义。③AA患者CD28^＋／cTLA4^＋比值与Thl／Th2比值呈正相关（P〈0．05），ANC与CD3^＋CD4^＋CD28^＋T细胞数呈负相关（P〈0．01），与CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋T细胞数呈正相关（P〈0．01）。结论 ①AA发病期患者骨髓CD4^＋T细胞表面共刺激分子表达异常，CD28升高，而CTLA-4下降，AA患者骨髓T细胞处于“预激活”状态；②CD28／CTLA-4比值与Th1／T12．比值呈正相关提示：CD28、CTLA-4表达失衡可引起Th细胞格局偏移，Th1型细胞增多。③ANC和CD28、CTLA-4间相关分析进一步说明CD28、CTLA-4与AA的发生、发展有关。     

婴幼儿急性上呼吸道感染淋巴细胞亚群的改变

目的研究婴幼儿上呼吸道感染时细胞免疫状况的变化情况。方法采用流式细胞仪检测急性上呼吸道感染患儿及正常对照组外周血Th1和Th2的百分率，CD4^＋与CD8^＋细胞百分率，CD4^＋／CD8^＋比值及CD19^＋和CD19^＋CD23^＋的表达水平，以探讨婴幼儿急性上呼吸道感染T淋巴细胞亚群的变化及B淋巴细胞的活化状况。结果上呼吸道感染的患儿的外周血Th1，Th2的细胞百分率（13．15%±6．23%及4．57％±3．10％）均显著高于对照组（7．14％±5．09％及2．03％±0．95％），患儿组CD4^＋细胞百分率亦较对照组为高（P〈0．05）；CD8^＋，CD4^＋／CD8^＋比值均与正常对照组之间无统计学差异（P〉0．05），CD19^＋与CD19^＋CD23^＋的表达阳性率无明显升高。结论婴幼儿上呼吸道感染时可活化T辅助淋巴细胞亚群，表现为Th1扫Th2细胞百分率均增加，Th1和Th2细胞免疫反应增强，而B淋巴细胞状况无明显改变。     

骨髓增生异常综合征患者外周血树突细胞数量、亚群及其表面协同刺激分子表达的研究

目的 检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血树突细胞（DC）总量、亚群（pDC和mDC）比例及其表面协同刺激分子（CD80、CD86和CIMO）表达，探讨MDS患者细胞免疫异常的形成机制。方法 选取38例MDS患者及19名正常对照，采用荧光素单克隆抗体标记法和流式细胞术检测MDS患者外周血中Lin1^—HLA-DR^＋细胞（DC）、Lin1^-HLA—DR^＋CD123^＋细胞（pDC）、Lin1—HLA—DR^＋CD11c^＋细胞（mDC）的数量以及CD80、CD86和CIMO在DC膜上的表达。结果低危MDS组、高危MDS组和正常对照组外周血DC总量分别为（33．7±7．0）×10^6／L、（56．3±29．0）×10^6／L和（12．1±1．4）×10^6／L（P〈0．05），pDC数量分另U为（12．6±4．1）×10^6／L、（3．6±1．0）×10^6／L和（6．6±0．7）×10^6／L（P〉0．05），mDC数量分别为（16．7±6．3）×10^6／L、（28．7±17．6）×10^6／L和（5．5±0．9）×10^6／L（P〈0．05）。低危MDS组、高危MDS组和正常对照组DC占外周血单个核细胞（PBMNC）百分比分别为（2．37±0．53）％、（3．58±1．39）％和（0．68±0．08）％（P〈0．05），pDC占PBMNC百分比分别为（0．82±0．29）％、（0．31±0．06）％和（0．37±0．04）％（P〉0．05），mDC占PBMNC百分比分别为（0．96±0．35）％、（1．51±0．70）％和（0．32±0．05）％（P〈0．05）。低危MDS组、高危MDS组和正常对照组外周血中CD80^＋DC分别为（30．6±11．8）×10^6／L、（2．3±0．9）×10^6／L和（2．3±0．6）×10^6／L（P〈0．05），CD86^＋DC分别为（25．1±7．4）×10^6／L、（12．4±6．3）×10^6／L和（6．2±3．2）×10^6／L（P〈0．05），CD40^＋DC分别为（2．8±1．0）×10^6／L、（1．5±0．9）×10^6／L和（3．2±2．3）×10^6／L（P〉0．05）。结论 MDS患者外周血中DC数量增多、比例异常；以mDC增多为主，pDC无明显增多；MDS患者DC高表达CD80和CD86，CD40表达不增高。提示MDS患者诱导抗肿瘤细胞免疫的抗原呈递细胞（pDC）数量及功能不足；而与正常造血克隆炎性损伤有关的抗原呈递细胞（mDC）却增多。这可能是导致MDS患者细胞免疫异常的重要机制之一。     

Notch配体δ-1对IL-6/sIL-6R融合蛋白诱导红系祖细胞分化成熟的影响

目的 探讨Notch配体δ-1在红系造血细胞分化过程中对可溶性IL-6受体（sIL-6R）生物效应的影响。方法 用CD34免疫磁珠和FACS Vantage流式细胞仪筛选脐血单个核细胞中的CD34^＋CD38^-细胞；将CD34^＋CD38^-细胞用含SCF、Flt3L、TPO和IL-3四种生长因子组合（4GFs）的培养基培养7d，然后用CD36免疫磁珠分离CD36^＋红系祖细胞，用流式细胞术检测IL-6R和血型糖蛋白（GPA）的表达，并分选CD36^＋GPA—IL-6R^＋和CD36^＋GPA—IL-6R^-细胞，将这两种表型的细胞分别进行集落分析；将CD36^＋GPA—IL-6R^-细胞用含有4GFs、4GFs＋IL-6或4GFs＋IL-6／sIL-6R融合蛋白（FP6）培养基并在加与不加Notch配体δ-1的情况下培养14d，并对CD36^＋GPA^high成熟红细胞进行计数。结果 CD36^＋GPA^＋细胞中IL-6R^-细胞占95％；CD36^＋GPA^-细胞可分为IL-6R^＋和IL-6R^-两部分，分别占46％和54％；IL-6R^＋细胞形成的粒-单核细胞集落形成单位（CFU—GM）数为2．1±1．8，IL-6R^-细胞形成的红系祖细胞爆式集落形成单位（BFU—E）数为58．2±18．1，明显高于IL-6R^＋细胞形成的CFU—GM数（P〈0．05）；在含有FP6的培养体系中，CD36^＋GPA^high细胞计数为（1．400±0．180）×10^6；在含FP6和Notch配体δ-1的培养体系中，CD36^＋GPA^high细胞计数为（2．460±0．190）×10^6，明显高于单独含有FP6的培养体系（P〈0．05）。结论 Notch配体δ-1可增强IL-6-红系细胞分化过程中sIL-6R所介导的生物学效应。     

CD4+CD25+调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜患者中的变化

目的探讨CD4^＋CD25^＋T细胞在特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者发病机制中的作用。方法应用流式细胞术检测ITP患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4^＋CD25^highT细胞、CD4^＋FOXP3^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞的数量；实时荧光定量PCR检测外周血FOXP3 mRNA的表达水平。将ITP患者和正常人CD4^＋CD25^highT细胞与自身CD4^＋CD25^-T细胞混合培养，检测CD4^＋CD25^high T细胞免疫抑制功能。结果ITP患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞约占CD4^＋T细胞的（15．64±5．82）％，明显高于正常对照组（9．30±3．95）％（P〈0．01），CD4^＋CD25^high T细胞比例为（1．53±0．66）％，与对照组[（1．36±0．55）％]比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4^＋FOXP3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞分别为（1．82±1．42）％和（1．25±0．94）％，均明显低于对照组[（3．90±1．37）％和（2．65±0．92）％]（P值均〈0．01）。ITP患者外周血FOXP3 mRNA表达水平较正常人明显下调（P〈0．01），CD4^＋CD25^high T细胞的抑制活性较正常人减弱（P〈0．01）。结论ITP患者中CD4^＋CD25^＋T细胞FOXP3表达水平降低，抑制活性减弱。     

运动对大鼠骨矿盐含量的影响

目的：分析运动对正常成年大鼠和切除双侧卵巢后的大鼠骨矿盐代谢的影响。 方法：本实验于2002—10／2003—05在广东医学院生理学教研室完成。普通级4月龄SD雌性大鼠30只。随机分成5组：正常对照组；正常大鼠＋运动组；假去卵巢组；去卵巢组；去卵巢＋运动组。然后重复，每组6只。正常大鼠＋运动组和去卵巢＋运动组大鼠于术后第7天开始进行运动训练．5d／周．45min／d．16m／min．跑道倾角0°．持续10周。第10周末．麻醉状态下动脉放血处死各组大鼠，观察骨干重、骨干重／体质量、骨灰重、骨灰重／体质量、骨灰重／骨干重（％）代谢变化。 结果：30只大鼠均进入结果分析。大鼠骨干重、骨干重／体质量、骨灰重、骨灰重／体质量、骨灰重／骨干重（％）各指标代谢变化：正常大鼠＋运动组各指标均显著高于正常对照组[（645±48），（567±32）mg；（1．97±0．06），（1．73±0．10）g／kg；（440±30），（374±91）mg；（135±0.04），（1．14±0.06）g／kg；（68．2±0．7）％，（65．9±0．9）％，t=3．46-6．92，P〈0.01]；去卵巢组各指标均明显低于假去卵巢组[（504±24），（569±40）mg；（1．55±0．61），（1．83±0．19）g／kg；（293±14），（381±23）mg；（0．90±0．04），（1．21±0．14）g／kg；（58．6±0．8）％，（66．3±1．5）％，t=3．64-15．58，P〈0．01]；去卵巢＋运动组各指标均较去卵巢组明显增加（627±70），（504±24）mg；（1．76±0．11），（155±0．61）g／kg；（409±43），（293±14）mg；（1.15±0．08），（0．90±0．04）g／kg；（65．2±1．2）%，（58．6±0．8）％。t=3．90-11．21。P〈0．01）。 结论：中等强度运动是增加成年大鼠骨矿盐含量和预防去卵巢大鼠骨矿盐丢失的有效措施。     

不同来源人造血干/祖细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢能力的差异

目的 比较不同来源的人造血干／祖细胞在NOD／SCID小鼠体内归巢能力的差异性，并探讨其体内归巢能力与膜表面归巢相关分子CXCR4表达水平的相关性。方法 采用流式细胞术（FACS）检测新鲜脐血、冻存脐血、动员后外周血（mPB）及骨髓来源的CD34^＋细胞表面CXCR4表达水平；将荧光染料CFSE标记的人CD34^＋细胞移植人接受照射的NOD／SCID小鼠，移植后20小时检测已归巢于NOD／SCID小鼠骨髓及脾脏中不同来源的人CD34^＋细胞，计算其相应的骨髓及脾脏归巢效率；并将小鼠股骨制成组织切片，荧光显微镜下观察人CD34^＋细胞在小鼠骨髓腔内的分布。结果 新鲜脐血、冻存脐血、mPB和骨髓CD34^＋细胞膜表面CXCR4表达阳性率分别为（49.52±1．12）％。（46．12±2．29）％，（48．50±2．48）％和（65．39±1．27）％，CD34^＋细胞在NOD／SCID小鼠骨髓的归巢效率分别为（3．00±0．44）％，（2．84±0．46）％，（4．06±0．70）％及（5．76±0．52）％；在脾脏的归巢率分别为（1．88±0．12）％，（1．80±0．15）％，（1．90±0．22）％，（2．16±0．34）％。归巢的CD34^＋细胞主要分布于小鼠股骨的骨内膜区域。结论 脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平低于mPB和骨髓。经冻存复苏后脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平略有下调。脐血CD34^＋细胞在照射NOD／SCID小鼠的骨髓归巢效率低于mPB和骨髓。     

苦豆子总碱对大鼠实验性结肠炎CD4^＋CD25^＋,CD8^＋CD28^-表达的影响

目的：观察苦豆子总碱对实验性结肠炎大鼠的外周血和结肠组织中调节性T细胞CD4^＋CD25^＋，CD8^＋CD28^-表达的影响。方法：实验于2006—03／08在南方医科大学实验室进行。①分组：将72只SD大鼠数字表法随机分成正常对照组，模型组，5-氨基水杨酸组，苦豆子15，30，60mg／kg组共6组，每组12只。②造模：除正常对照组外，其他5组采用三硝基苯磺酸灌肠法制备结肠炎大鼠模型，正常对照组给予等量生理盐水灌肠。③给药：造模第2天开始灌胃给药，2mL／只，1次／d。5-氨基水杨酸组灌胃5-氨基水杨酸400mg／kg，苦豆子15，30，60mg／kg组灌胃酸苦豆子总碱15，30，60mg／kg，其他2组灌等量生理盐水。④取材：在第1周和第3周各组分别取6只大鼠处死，测定结肠黏膜组织和外周血中CD4^＋CD25^＋，CD8^＋CD28^-的表达水平，观察苦豆子总碱对模型大鼠急慢性期T细胞亚群的影响。结果：72只大鼠进入结果分析。①建模第1周：模型组结肠内T细胞亚群CD4^＋CD25^＋，CD4^＋CD25＋／CD25^-，CD8^＋CD28^-及CD8^＋CD28^-／CD28^＋高于正常对照组（P〈0．05，0．01），苦豆子各剂量组数据虽低于模型组，但经统计学处理后差异不显著（P〉0．05）。②建模第3周：模型组大鼠外周血中的CD8^＋CD28和CD8^＋CD28^-／CD28^＋的表达高于正常对照组和苦豆子30，60mg／kg组[CD8^＋CD28：（11.3&;#177;1．3）％，（5．4&;#177;2．2）％，（5．8&;#177;3．2）％，（6．0&;#177;4．2）％；CD8^＋CD28^＋／CD28^＋：（1．2&;#177;0．8）％．（0．4&;#177;0．1）％，（0．5&;#177;0．2）％，（0．5&;#177;0．4）％；P〈0．05，0．01]；结肠组织中的CD8^＋CD28^-和CD8^＋CD28^-／CD28^＋的表达也高于正常对照组和苦豆子30，60mg／kg组[CD8^＋CD28^-：（17．4&;#177;4．2）％，，（3．8&;#177;4．5）％，（3．9&;#177;4．0）％．（4．2&;#177;3．6）％；CD8^＋CD28^-／CD28^＋：（1．8&;#177;0．3）％，（0．7＋0．3）％．（0．7＋0．2）％，（0．7&;#177;0．3）％：P〈0．05，0．01]。结论：苦豆子总碱30，60mrg／kg能下调实验性结肠炎大鼠慢性期高表达的CD8^＋CD28-T细胞。     

支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞CD19~+CD23~+和CD4~+CD25~+的表达及意义

目的探讨支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞CD19＋CD23＋和CD4＋CD25＋的表达及意义。方法采用流式细胞分析技术及免疫化学发光法分别检测34例哮喘发作期（哮喘发作组）和32例哮喘缓解期（哮喘缓解组）外周血CD19＋CD23＋表达率、CD4＋CD25＋表达率和血清总IgE水平,并与25例体检儿童（对照组）进行比较。结果哮喘发作组外周血CD19＋CD23＋表达率为（19.31±9．08）％分别高于哮喘缓解组（8．63±3．54）％和对照组;哮喘发作组CD4＋CD25＋表达率为（2．79±1．69）％和哮喘缓解组为（3.36±1．17）％均低于对照组;哮喘发作组IgE水平为（177．01±90．38）IU/ml和哮喘缓解组为（160．76±77．54）IU／ml均高于对照组．三组的差异均有统计学意义（F分别=36．62、24．67、24．35,P均〈0．05）。CD19＋CD23＋表达率与IgE呈正相关,CD4＋CD25＋表达率和IgE呈明显负相关,CD19＋CD23＋表达率和CD4＋CD25＋表达率亦呈明显负相关,差异均有统计学意义（r分别：0．22、-0．41、-0．34,P均〈0．05）。结论哮喘急性发作时外周血CD19＋CD23＋和CD4＋CD25＋改变明显。     

基质细胞衍生因子-1及其受体在G-CSF诱导的造血干/祖细胞动员中的作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其特异性受体CXCR4在G-CSF诱导的造血干／祖细胞（HSPC）动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫组织化学、流式细胞术等方法检测健康供者稳态及G-CSF动员过程中骨髓、外周血SDF-1／CXCR4的变化，并应用SDF-1中和性抗体阻断BALB／c小鼠SDF-1信号通路，进一步验证SDF-1／CXCR4在动员中的作用。结果G-CSF动员前骨髓和外周血的SDF-1浓度分别为（7．23±0．66）μg/L和（5．43±0．35）μg／L，动员后分别为（5．88±1．03）μg／L和（5．42±0．52）μg/L。动员后骨髓SDF-1蛋白水平下降（P＜0．05），骨髓和外周血之间的SDF-1浓度梯度消失（P＞0．05）；稳态骨髓、动员后骨髓和动员后外周血的CD34^＋ CXCR4^＋细胞在CD34^＋细胞群中的比例分别为（40．98±21．56）％、（65．80±24．68）％和（27．54±26．03）％。动员后CXCR4在骨髓CD34^＋胞上表达增加（P＜0．05），而外周血CD34^＋细胞CXCR4表达降低（P＜0．05）。SDF-1中和性抗体可降低G-CSF动员的BALB／c小鼠外周血成熟白细胞和祖细胞集落数量（P＜0．05）。结论骨髓中SDF-1水平的降低以及CXCR4在HSPC上表达的下降促进了G-CSF介导的动员的发生。     

原发性胆汁性肝硬化动物模型的建立及外周血T淋巴细胞表面CD40配体分析

目的用聚肌苷酸胞苷酸（polyinosinic polycytidylic acid，PolyI：C）注射C57BIL/6小鼠以研究建立原发性胆汁性肝硬化（PBC）动物模型，探讨CD40配体（CD40L）在外周血T淋巴细胞表面的表达，和在PBC中T淋巴细胞的活化情况。方法20只C57BIM6小鼠随机分对照组和模型组。将polyI：C以5ms／kg的剂量腹腔注射模型组小鼠，对照组注射PBS，每周2次，120d后处死，留取外周血和肝组织，间接免疫荧光法检测血清抗线粒体抗体（AMA），HE染色观察胆管病理变化，生化分析仪测定血清碱性磷酸酶（ALP）含量，流式细胞术分析外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例及CD40L在T淋巴细胞表面的表达情况。结果PolyI：C注射120d后模型组小鼠均出现AMA阳性，肝组织小胆管周围有不同程度的炎性细胞浸润，血清ALP明显高于对照组（P〈0．001）；对照组胆管及血清ALP均未发生明显变化；模型组小鼠CD40L^＋／CD4^＋、CD40L^＋／CD8^＋T淋巴细胞[（4．35±0．34）％，（1．42±0．10）％）显著高于对照组[（0．78±0．10）％，（0．43±0．04）％，P〈0．01]；而模型组小鼠CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例[（25．83±1．80）％，（24．84±2．70）％]与对照组[（20．51±3．46）％，（17．84±1．53）％]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PolyI：C腹腔注射C57BIM6小鼠120d可引起PBC病变，活化的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞在PBC发病中起重要作用。     

BMP-4与VEGF促进拟胚体中原始造血干细胞发生的实验研究

本研究旨在探讨骨形态发生蛋白-4（BMP-4）和血管内皮生长因子（VEGF）在诱导胚胎干细胞（ESC）形成拟胚体（EB）过程中促进原始造血干细胞形成的作用。将小鼠E14ESC在半固体培养基中诱导为EB，根据培养体系中有无添加因子分组：未添加因子的自然分化组、含不同浓度（5、15、25、50ng／ml）的BMP-4组，在BMP-4单因子实验的基础上联合10ng／ml VEGF组及单因子VEGF组。分别于3,6,9,12、15天时收获EB，用流式细胞术检测Flk-1^＋细胞含量。结果表明：随着添加BMP-4因子浓度的逐渐升高，EB中Flk-1^＋细胞形成比例也逐渐增加，在第3天（D3）和第6天（D6）两个时点，25ng／ml BMP-4作用组Flk-1^＋细胞达到峰值，分别为（6．51±1．02）％和（7．70±1．12）％，与无BMP-4对照组及5ng／ml组比较有统计学意义的差异（P〈0．05）。然而在BMP-4浓度升高至50ng／ml条件下Flk-1^＋细胞形成比例有减少趋势。在BMP-4单因子实验的基础上，以25ng／ml BMP-4联合10ng／mlVEGF共同作用于ESC→EB诱导过程，Flk-1^＋细胞百分比明显提高，在9天达到峰值，为（27．53±8．14）％，与自发分化组[（8．77±2．35）％]及VEGF单因子组[（11．21±2．23）％]相比均有显著性差异（P〈0．05）。结论：BMP-4和VEGF联合使用可促进EB中胚层原始造血干细胞的形成，为进一步模拟造血微环境定向诱导ESC造血分化提供了实验依据。     

慢性再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群和粒-单核细胞集落形成单位的检测

目的探讨慢性再生障碍性贫血(CAA)发病的免疫因素,为CAA的临床治疗提供依据。方法采用骨髓细胞半固体集落培养法检测粒-单核细胞集落形成单位(GM-CFU),同时用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果CAA骨髓细胞培养GM-CFU产率明显少于正常对照组,(7.9±0.5)个/ml vs(88.7±2.7)个/ml(P<0.01);CAA骨髓细胞加正常血清培养GM-CFU的产率与正常对照组比较差异无统计学意义,(82.4±2.6)个/ml vs(88.7±2.7)个/ml(P<0.05),其中有21例的GM-CFU的产率(60.1±2.1)个/ml与对照相比较明显减少;CAA血清与正常骨髓细胞培养的GM-CFU为(105.6±3.2)个/ml,显著高于正常组。CAA组的CD3 、CD4 和CD4 /CD8 均比对照组降低,分别为(49.8±0.6)%vs(64.3±0.9)%(、29.7±0.4)%vs(38.6±0.3)%和(1.2±0.1)%vs(1.7±0.1)%(均P<0.01);CD8 细胞明显高于正常,(28.9±0.3)%vs(24.5±0.3)%(P<0.01)。结论CAA患者普遍存在着T细胞亚群失衡的免疫异常;CAA患者骨髓细胞中可能有抑制患者GM-CFU形成的因素,而血清中存在着升高的粒-单核细胞集落刺激因子等,其临床意义尚需进一步观察。GM-CFU体外培养联合T细胞亚群检测,可作为CAA异常免疫机制的诊断指标。     

二维激光法和电阻法计数血小板的比较研究

目的对二维激光法和电阻法血小板计数进行比较研究。方法用德国拜耳ADVIA 2120（Bayer-2120,二维激光法）、美国雅培3700（CD-3700,电阻法）2台仪器及手工法分别对70份血液样本进行血小板计数,其中对照组30例、大血小板组（大血小板＋＋＋）20例、小红细胞组（平均红细胞容积〈60f1）20例。结果对照组检测结果为Bayer-2120：（172．9&#177;89．2）&#215;10^9／L,CD-3700：（165．8&#177;82．7）&#215;10^9／L,手工法：（169．8&#177;78．7）&#215;10^9／L;大血小板组检测结果为Bayer-2120：（70．0&#177;31．8）&#215;10^9／L,CD-3700：（30．9&#177;17．4）&#215;10^9／L,手工法：（65．2&#177;30．1）&#215;10^9／L。小红细胞组检测结果为Baye-2120：（150．6&#177;100．6）&#215;10^9／L,CD-3700：（194．8&#177;124．3）&#215;10^9／L,手工法：（144．6&#177;91．3）&#215;10^9／L。对照组3种计数方法差异无统计学意义（P〉0．05）;在病理情况下,大血小板组：二维激光法与手工法比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;而电阻法与二维激光法和手工法比较,其结果明显偏低,差异有统计学意义（P〈0．01）。小红细胞组：二维激光法与手工法结果接近,差异无统计学意义（P〉0．05）;而电阻法结果明显高于其他2种方法所得结果,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在正常情况下,3种计数方法呈高度相关,差异无统计学意义;在病理情况下的大血小板、小红细胞,特别是临界值的血小板计数,电阻法结果差异较大,而二维激光法更接近手工法所检测结果,计数结果比较准确、可靠。     

湿疹患者外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞和血清IL-4,IL-10,TGF-β检测及临床研究

目的通过对湿疹患者外周血单个核细胞（PBMC）中转录调节因子3（FOXP3）阳性的天然调节性T细胞（nTreg,CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋）表达率及其血清白介素4（IL-4）、白介素10（IL-10）、转化生长因子β（TGF—β）水平的检测结合心理评定并与对照组进行对比分析,探讨其在湿疹发病过程中的作用及患者发病的可能机制。方法应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）和ELISA法对湿疹患者（n=32）、对照组（n=32）分别进行PBMC中nT表达率及血清IL-4,IL-10,TGF-β水平进行检测,同时应用症状自评量表（SCL-90）进行心理评定。结果湿疹患者PBMC中nTreg细胞表达率（％）为4．86&#177;1.69,明显低于对照组6．10&#177;2．21;血清IL-4（96．21&#177;20．07pg／ml）,IL-10（12．6&#177;1．95pg／ml）含量高于对照组相应检测值53．93&#177;13．10,9．82&#177;1．34pg／ml;TGF-β 15．76&#177;3．11ng／ml含量明显低于对照组（24．39&#177;4．44ng／ml）,各项检测指标两纽之间比较差并均有统计学意义（P〈0．01）,患者心理健康状态与对照组比较也有显著性差异。结论nTreg数量降低减弱了对Th2细胞的抑制作用是湿疹患者发病的关键环节,Th1／Th2失衡、细胞因子分泌异常在疾病的发生发展中起重要作用,是湿疹发病和慢性化的重要原因,加强对湿疹患者的心理疏导以减少对患者精神、躯体造成的伤害,提高疗效具有重要临床意义。     

慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统抑制移植物抗宿主病的实验研究

目的研究慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶／更昔洛韦（HSV-TK／GCV）系统对小鼠异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的防治作用。方法将转染HSV-TK基因的慢病毒感染供鼠（C57BL／6小鼠）脾脏淋巴细胞，将感染后的淋巴细胞与供鼠骨髓细胞混合，移植给经。Co1射线照射后的受鼠（BALB／c小鼠）。分别于移植后当天、移植后7天（＋7天）和＋12天腹腔注射GCV25mg／kg×7d，观察受鼠生存期、GVHD发生率及严重程度、T细胞亚群（CD3、CD4、CD8）及异基因嵌合等指标。结果HSV-TK／GCV使用0天、＋7天、＋12天组受鼠生存时间分别为（30．10±5．21）d、（36．40±5．28）d、（28．20±4．82）d，三组生存时间均较移植对照组[（15．10±0．43）d]明显延长（P〈0．05）；HSV-TK／GCV＋7天组小鼠50d存活率达60％，高于HSV-TK／GCV0天（40％）和＋12天组（30％）（P〉0．05）。对照组小鼠全部发生Ⅲ～Ⅳ级GVHD，实验组死亡小鼠有Ⅱ～Ⅲ级GVHD病理学改变，而长期生存小鼠仅出现Ⅰ～Ⅱ级GVHD。在＋5，＋10，＋15d，3个时间点实验组小鼠CD4^＋细胞明显高于对照组（P〈0．05），CD8^＋细胞均低于对照组（P〈0．05）。＋30天受鼠异基因嵌合率为100％。结论慢病毒载体介导的HSV-TK／GCV系统能有效控制小鼠allo—BMT后GVHD；＋7天外周血白细胞数开始回升时用GCV控制GVHD效果最佳。     

保肝益胃合剂对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用

目的 观察保肝益胃合剂对四氯化碳（CCl4）所致大鼠急性肝损伤的保护作用。方法 腹腔注射CCl42ml／kg建立大鼠急性肝损伤模型。分别用保肝益胃合剂（30g&#183;kg^-1&#183;d^-1）、多烯磷脂酰胆碱胶囊（易善复，180mg&#183;kg^-1&#183;d^-1）、甘草酸二铵胶囊（甘利欣，30mg&#183;kg^-1&#183;d^-1）灌胃，联合治疗组则用保肝益胃合剂（30g&#183;kg^-1&#183;d^-1）＋易善复（180mg&#183;kg^-1&#183;d^-1）灌胃。检测各组大鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）活性，同时观察肝脏组织病理学变化以及肝细胞坏死评分和大鼠死亡率。结果 保肝益胃合剂组ALT、AST活性和肝细胞坏死评分[（1．168&#177;1．066）kU／L、（1．845&#177;2．212）kU／L、（0．56&#177;0．53）分]均显著低于模型组[（4．982&#177;3．502）kU／L、（7．030&#177;3．616）kU／L、（1．38&#177;0．92）分，P均〈0．013。正常对照组大鼠无死亡；保肝益胃合剂组和保肝益胃合剂＋易善复组大鼠死亡率（分别为37．5％、25．0％）均较模型组（60．0％）明显降低，以联用组为最低（P〈0．05）。结论 保肝益胃合剂对CCl4所致大鼠急性肝损伤有明显的保护作用。     

人工肝和肝移植术后的乙肝三系统定量观察

目的观察人工肝技术和肝移植手术对重症乙肝患者乙肝病毒标志物的影响。方法乙肝三系统定量采用时间分辨免疫荧光技术,乙肝病毒DNA定量采用实时荧光定量PCR法。结果28例实施人工肝技术的重型肝炎患者治疗前后的乙肝三系统定量和HBVDNA定量结果为：HBsAg171．19&#177;32．10ng／mL,HBeAg0．03&#177;0．029NCU／mL,抗-HBe3．97&#177;4．61NCU／mL,抗-HBc5．98&#177;3．31NCU／mL,HBVDNA（1．1&#215;10^7）&#177;（6．81&#215;10^6）copy／mL和HBsAg168．14&#177;39．40ng／mL,HBeAg0．02&#177;0．023NCU／mL,抗-HBe3．95&#177;4．34NCU／mL,抗-HBc6．41&#177;3．13NCU／mL,HBVDNA（1．1&#215;10^7）&#177;（6．23&#215;10^6）copy／mL。P值均大于0．05,差异无统计学意义。26例施行肝移植手术的患者治疗前后的乙肝三系统定量和HBVDNA定量结果分别为HBsAg144．65&#177;77．00ng／mL,HBeAg0．02&#177;0．028NCU／mL,抗-HBe4．32&#177;6．43NCU／mL,抗-HBc6．04&#177;4．88NCU／mL,HBV DNA（1．0&#215;10^7）&#177;（6．89&#215;10^6）copy／mL和HBsAg6．54&#177;3．32ng／mL,HBeAg0．02&#177;0．016NCU／mL,抗-HBe4．79&#177;6．44NCU／mL,抗-HBc5．97&#177;4．64NCU／mL,HBV DNA（1．04&#215;10^2）&#177;（3．40&#215;10^2）copy／mL。除抗-HBe和抗-HBc,P值大于0．05外,其他项目P值均小于0．05,差异有统计学意义。结论肝移植手术可有效清除乙肝患者体内的乙肝病毒,人工肝支持系统虽不能有效清除乙肝患者体内的乙肝病毒,但可改善重型肝炎患者体内严重紊乱的内环境,为肝移植手术创造合适的条件和机会,赢得宝贵时间。     

脐血CD34^＋细胞体外扩增脐血巨核祖细胞的研究

本研究探讨人脐血CD34^＋细胞体外扩增的巨核祖细胞的生物学特性及其免疫原性变化，为体外扩增脐血巨核祖细胞的临床应用提供实验依据。采用Ficoll-Hapaque分离法分离人脐血单个核细胞，应用免疫磁珠法（MACS）再分离富集CD34^＋细胞，在含血小板生成素（TPO，50ng／ml）、白介素-1]（IL—11，50ng／ml）和肝素（25U／ml）的无血清液体培养体系中培养14天。用流式细胞术检测扩增产物免疫表型（CD34^＋、CD41a^＋、CD61^＋、CD34^＋CD41a^＋及CD34^＋CD61^＋）、巨核细胞凋亡率及其表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达，并进行巨核细胞集落形成单位（CFU—Mk）的检测。结果显示：脐血CD34^＋细胞能够有效地向巨核细胞分化，CD41a^＋和CD61^＋细胞比例在培养第14天达到峰值，CD34^＋CD41^＋和CD34^＋CD61^＋细胞比例在扩增第7天达到最高峰[分别为（3．41±2．80）％和（1．89±1．43）％]；CFU—Mk大集落在扩增第7天达到高峰（（20．66±32．79）倍]，小集落在扩增第10天达到高峰[（435．62±482．65）倍]；在培养7、10和14天时巨核细胞的凋亡率分别为（19．48±9．64）％、（26．87±9．03）％和（52．46±11．74）％，其中培养7天和10天的凋亡率无显著性差异（P〉0．05），培养14天的凋亡率显著高于7天和10天（P均〈0．05）；巨核细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达随着扩增天数的延长逐渐降低，其中培养0到10天阶段下降明显．结论：采用TPO＋IL 11＋肝素组合．可以有效地扩增脐血巨核祖细胞；培养7天，CFU—Mk大集落扩增倍数、CD34^＋CD41^＋和CD34^＋CD61^＋细胞比例均达高峰，这是巨核祖细胞体外扩增的较佳培养时间。     

BacT/ALERT和伯泰血培养瓶对模拟菌血症标本检测能力对比分析

目的对比BacT／ALERT和伯泰血培养瓶对模拟菌血症标本的检测能力。方法将已知待检细菌配制成100和10CFU／ml两个菌液浓度的模拟菌血症标本,加入BacT／ALERT和伯泰血培养瓶,装载于BacT／ALERT3D120快速血液培养仪,比较需氧瓶对需氧菌、厌氧瓶对厌氧菌和兼性厌氧菌的阳性率和平均检测时间。结果两种需氧瓶对需氧菌检测的阳性率均为100％,100和10CFU／ml两个菌液浓度的平均检测时间,BacT／ALERT需氧瓶分别为19．0&#177;5．2h和22．6&#177;6．2h,伯泰需氧菌分别为20．2&#177;4．4h和23．5士6．1h,两者差异无统计学意义0=1．219,0．709,P〉0．05）;两种厌氧瓶对兼性厌氧菌检测的阳性率均为100％,100和10CFU／ml两个菌液浓度的平均检测时间,BacT／ALERT厌氧瓶分别为13．7&#177;4．1h和17．8士5．4h,伯泰厌氧瓶分别为17．7&#177;8．0h和22．6&#177;10．8h,两者差异无统计学意义（t=0．387,0．426,P〉0．05）;对专性厌氧菌,BacT／ALERT和伯泰厌氧瓶100CFU／ml菌液浓度检测的阳性率均为100％,平均检测时间分别为36．9&#177;3．0h和70．4&#177;14．9h,两者差异有统计学意义0—4．856,P〈0．05）;10CFU／ml菌液浓度的阳性检测率分别为100％和33．3％,BacT／ALERT厌氧瓶的平均检测时间为59．5&#177;19．9h,伯泰厌氧瓶三株细菌中有两株未能得到阳性结果。结论使用Bact／ALERT3D120快速血液培养仪,对于怀疑需氧菌或兼性厌氧菌感染,可以选用BacT／ALERT或伯泰需氧瓶,对于怀疑厌氧菌感染,应当选用BacT／ALERT厌氧瓶。