柯萨奇病毒B3诱导HeLa细胞凋亡

目的：观测柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导HeLa细胞凋亡的动态过程。方法：用CVB3感染HeLa细胞后,在不同时间点收集细胞,通过相差显微镜、电子显微镜、流式细胞仪和DNA缺口末端标记法（TUNEL）检测HeLa细胞的病变。结果：CVB3感染HeLa细胞4h后,细胞发生凋亡（11.79%±0.962%比4.07%±0.665%,P〈0.05）并呈时间依赖性增高,36~48h达高峰。但在病毒感染CVB3后1h时,CVB3则抑制细胞凋亡的发生（2.21%±0.448%比3.73%±0.637%,P〈0.05）。结论：CVB3可诱导HeLa细胞发生凋亡,但感染早期病毒则抑制细胞凋亡。     

槲皮素对宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达及其信号通路的影响

目的初步探讨信号转导子和转录激活子STAT3在宫颈癌发生发展中的作用以及槲皮素对宫颈癌细胞中STAT3表达的影响。方法用RT-PCR检测不同浓度的槲皮素作用人宫颈癌HeLa细胞中STAT3 mRNA的表达,并以细胞免疫荧光技术观察凋亡细胞内STAT3和磷酸化STAT3(P-STAT3)的改变。结果槲皮素处理HeLa细胞后,当槲皮素浓度从6.25μmol/L增加到50μmol/L,相同时间HeLa细胞内STAT3 mRNA表达逐渐降低,除6.25μmol/L组与溶剂对照组相比无统计学差异(P>0.05)外,余差异全部有统计学意义(P<0.05),且处理24h后,STAT3 mRNA表达量与给药浓度呈负相关,r1=-0.861,P=0.000;各时间段不同浓度组(6.25、12.5、25、50μmol/L)两两相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着时间变化,相同浓度组中STAT3 mRNA表达明显降低,在给予6.25μmol/L槲皮素后,STAT3 mRNA的表达量呈时间依赖性,r2=-0.539,P=0.000。运用免疫荧光技术观察到STAT3蛋白及磷酸化水平随槲皮素浓度及时间增加表达呈明显下降趋势。结论槲皮素能明显抑制HeLa细胞的生长;槲皮素可抑制细胞内STAT3表达,从而可能通过抑制JAK/STAT信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡。     

siRNA沉默细胞周期相关激酶基因对鼠结肠癌生长及其细胞凋亡的影响

目的探讨siRNA沉默细胞周期相关激酶(CCRK)基因对鼠结肠癌生长及其凋亡的影响。 方法将50只BALB/C(nu/nu)裸鼠皮下接种人类结肠癌SW480细胞,将其中建立移植瘤裸鼠模型成功的30只裸小鼠按照单纯随机抽样方法随机分为3组,分别接种siRNACCRK转染的人类结肠癌SW480细胞株(实验组)、正常培养的SW480细胞(空白对照组)和以转染携带无关序列片段sh RNA慢病毒的SW480细胞(阴性对照组)。第42天处死裸鼠后取下肿瘤组织,比较各组肿瘤重量、CCRKmRNA表达量、CCRK蛋白表达和细胞凋亡的变化。 结果转染siRNA组肿瘤重量、CCRK mRNA和CCRK蛋白表达[(0.54±0.15)g,1.14±0.24和0.18±0.05]表达显著低于空白对照组[(1.05 ± 0.14)g,2.41±0.42和0.49±0.07]和空siRNA载体组[(1.07 ±0 .12)g,2.39±0.47,0.47±0.09;F＝21.18,23.47,90.03;P<0.01];空白对照组与空siRNA载体组比较差异无统计学意义(q＝0.98,1.07,1.13;P>0.05)。实验组沉默CCRK基因后组织中细胞凋亡率为(21.23±1.12)%,明显高于空白对照组(6.78±0.37)%和阴性对照组(7.25±0.32)%,差异有统计学意义(F＝56.936,P<0.01);但空白对照组和空siRNA载体组之间差异无统计学意义(q＝1.78,P>0.05)。 结论CCRK靶向siRNA表达载体接种结肠癌裸鼠后能显著降低结肠癌瘤体的增长,抑制CCRK基因和蛋白表达;siRNA沉默CCRK基因能促进其凋亡,CCRK基因有望成为结直肠癌治疗的新靶点。     

26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响及凋亡机制的研究

目的 探讨26S蛋白酶抑制剂b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖及细胞凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 无菌条件下对Jurkat细胞与RS4;11细胞进行培养,根据有无b-AP15处理,将其分为4组:①Jurkat细胞实验组;②Jurkat细胞对照组;③RS4;11细胞实验组;④RS4;11细胞对照组.其中,Jurkat细胞实验组与RS4;11细胞实验组采用浓度分别为0.05,0.10,0.50,1.00,5.00 μmol/L b-AP15处理24,48 h;Jurkat细胞对照组与RS4;11细胞对照组采用RPMI 1640培养基进行同步培养.采用CCK-8法绘制4组细胞增殖曲线;采用Annexin Ⅴ-别藻蓝蛋白(APC)/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记流式细胞术检查4组细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测细胞4组细胞周期分布情况;采用实时定量PCR检测4组细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2相关Ⅹ蛋白(Bax)基因、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2基因、Ⅹ连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、周期素依赖性激酶(CDK)1基因及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3基因mRNA表达水平.结果 ①b-AP15对Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖均具有抑制作用,且该抑制效应呈时间与剂量依赖性;Jurkat细胞经b-AP15处理24,48 h后,半数抑制浓度(IC50)分别为(1.52±0.35)μmol/L与(0.54±0.01) μmol/L,RS4;11细胞经b-AP15处理24,48 h后IC50分别为(0.97±0.02)μmol/L与(0.08±0.03)μmol/L.②使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组后,其与Jurkat细胞对照组相比细胞凋亡率显著增高,且差异有统计学意义(P＜0.001);使用浓度为1.0 μmol/Lb AP15处理RS4;11细胞实验组后,其与RS4;11细胞对照组相比细胞凋亡率亦显著增加,且差异亦有统计学意义(P＜0.001);且Jurkat细胞与RS4;11细胞经b-AP15处理48 h后,与处理24 h后者相比细胞凋亡率增高,且差异均有统计学意义(t=11.887,7.449;P＜0.001).③与Jurkat细胞对照组相比,使用浓度为1.5 μmol/L b-AP15处理Jurkat细胞实验组24 h后,Jurkat细胞周期明显被阻滞于G2/M期,且差异有统计学意义(t=10.672,P＜0.05);同时伴S期细胞比例减低,且差异亦有统计学意义(t=19.053,P＜0.05).与RS4;11细胞对照组相比,使用浓度为1.0 μmol/L b-AP15处理RS4;11细胞实验组24 h后,RS4;11细胞周期亦明显被阻滞于G2/M期,且差异有统计学意义(t=13.643,P＜0.05);同时伴S期细胞比例减低,且差异亦有统计学意义(t=6.992,P＜0.05).④使用b-AP15处理Jurkat细胞与RS4;11细胞24 h后,荧光定量PCR检测结果显示,凋亡相关基因Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平增高,Bcl-2、XIAP mRNA相对表达水平减低,同时伴细胞周期相关基因CDK1 mRNA相对表达水平减低,与各自细胞对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05);且RS4;11细胞实验组caspase-3 mRNA相对表达水平较Jurkat细胞实验组相比,增高程度更为显著,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 b-AP15能有效抑制Jurkat细胞与RS4;11细胞增殖,并促进其细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达水平、下调Bcl-2与XIAP基因表达水平相关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平减低相关.     

上调人1型大麻素受体表达诱导人宫颈癌细胞凋亡的实验研究

目的通过构建基因真核表达载体,探讨人1型大麻素受体(hCB1R)对人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制。方法构建GV230-hCB1R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HeLa细胞,免疫印迹(Western blot)法及免疫荧光细胞化学染色(ECL)联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测hCB1R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hCB1R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果 hCB1R转染HeLa细胞后表达相对分子质量为40 000的hCB1R蛋白,细胞膜和细胞质中均有hCB1R表达;过表达的hCB1R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,流式细胞术检测结果显示HeLa细胞株呈现凋亡,hCB1R对宫颈癌HeLa细胞株的生长表现出明显的抑制作用,促进宫颈癌HeLa细胞凋亡。结论上调HeLa细胞hCB1R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。     

microRNA在柯萨奇B3病毒诱导的心肌微血管内皮细胞凋亡中的差异表达

目的本研究通过体外培养心脏微血管内皮细胞(CMVECs),经柯萨奇B3病毒(CVB3)感染后,利用miRNA寡核苷酸基因芯片技术筛选差异表达的miRNAs,进一步探讨miRNA在CVB3诱导CMVECs凋亡中的潜在作用机制。方法原代分离培养大鼠CMVECs细胞,以100TCID50CVB3病毒感染48 h后检测Caspase-3活性和细胞凋亡;提取CMVECs细胞RNA,用Agilent大鼠miRNA寡核苷酸基因芯片进行检测,并通过TargetScan、miranda、mirbase和mirdb数据库选取出差异表达明显并与心血管疾病相关的miRNA,经qPCR对其进行验证,通过生物信息学分析预测其调控靶基因;合成miRNA21 mimics转染CMVECs细胞,同时合成miRNA21 inhibitor,与CVB3共转染CMVECs细胞,检测各组细胞Caspase-3活性变化和细胞凋亡。结果 CVB3感染CMVECs细胞48 h后与正常对照组比较Caspase-3活性显著上调(P<0.01),细胞凋亡明显增加;通过基因芯片检测及生物信息学分析后发现,与心血管系统疾病密切相关的miRNA为miRNA21,经qPCR验证结果一致,预测其靶基因为PDCD4;miRNA21mimics转染CMVECs细胞后与正常对照组相比Caspase-3活性显著上调,细胞凋亡增加(P<0.05);而miRNA21 inhibitor与CVB3共转染CMVECs细胞后与CVB3感染组相比Caspase-3活性显著下调,细胞凋亡明显减少(P<0.05)。结论 miRNA21在CVB3感染的CMVECs细胞中的表达有显著变化,并与CMVECs细胞凋亡密切相关,提示miRNA21在CVB3诱导的病毒性心肌炎发病过程中可能起着重要作用。     

凋亡基因Bcl-2和Bad在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达

目的 观察凋亡基因Bcl-2(B-cell leukemia-2,B细胞淋巴瘤/白血病-2)和凋亡基因Bad(bcl-xl/bcl-2-associated death promoter,Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动子)在急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中的表达.方法 在苏州大学附属第一医院中心实验室里,24只BALB/C小鼠随机分为正常生理盐水对照组(n=6)和ALI模型组(n=18).从尾静脉注射油酸0.9 mL/kg制备ALI模型,以肺部特征性病理改变作为ALI模型成功的主要指标;ALI模型组又按注射油酸后4 h,6 h,8 h三个时间点分为3组,每组6只,分别观察肺组织病理改变,RT-PCR法定量检测肺组织中Bcl-2和Bad的表达.采用SPSS 13.0统计软件行单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义.结果 ALI 4 h,6 h,8 h组肺组织中Bcl-2相对值分别为(58.00±5.31),(42.00±4.30),(32.51±10.40),较正常对照组(24.30±1.00)升高(P<0.05);Au 4 h,6 h,8 h组肺组织中Bad的相对值分别为(29.32±1.19),(58.64±4.45),(95.12±4.34),较正常对照组(4.01±0.34)升高(P<0.05);Au 4 h,6 h,8 h组的肺损伤评分分别为(1.82±0.14)分,(2.52±0.25)分,(3.45±0.29)分)较正常对照组(0.27±0.03)分升高(F值为260.512,P<0.05);各组间比较差异亦有统计学意义(P<0.05).结论 油酸致小鼠急性肺损伤的加重与肺组织中凋亡基因Bcl-2的表达下调和凋亡基因Bcl-2的表达上调可能有关.     

甘草酸对感染人巨细胞病毒的人胚肺成纤维细胞凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨甘草酸对感染人巨细胞病毒(HCMV)的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外培养MRC-5细胞,并将其分为对照组、病毒组、更昔洛韦组(50μg/mL)、甘草酸低剂量组(0.25 mg/mL)、甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)、甘草酸高剂量组(1.00 mg/mL)。接种HCMV不同时间后,分别使用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)等蛋白表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 CCK8实验结果显示,经HCMV感染48、72 h时,病毒组增殖活性均低于对照组,更昔洛韦组、甘草酸中剂量组、甘草酸高剂量组增殖活性均高于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05);甘草酸中剂量组与甘草酸高剂量组增殖活性比较,差异无统计学意义(P>0.05),故选择甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)进行后续实验,并...     

柯萨奇病毒B3诱导大鼠心肌成纤维细胞骨桥蛋白及Ⅰ型胶原的表达情况

目的 检测柯萨奇病毒B3( CVB3)对大鼠心肌成纤维细胞骨桥蛋白(OPN)及Ⅰ型胶原表达的影响,探讨OPN在病毒性心肌炎的可能发病机制.方法 用重复感染率(MOI)为0.5 PFU/cell的CVB3感染体外培养的大鼠心肌成纤维细胞,细胞分对照组(12 h)、病毒组(感染后12 h、ld、2d及3 d).用RT-PCR及Western Blot、免疫组化检测OPN及Ⅰ型胶原表达,并将OPN表达与Ⅰ型胶原表达进行直线相关分析.结果 (1)RT-PCR测得对照组12h、病毒组12 h、1d、2d及3d5组OPN/β-actin吸光度比值分别为:0.38±0.06、0.56±0.06、0.72 ±0.05、0.98 ±0.06、0.86 ±0.02;Western Blot测得上述5组的OPN/β-actin灰度值分别为:0.26±0.03、0.36±0.03、0.52±0.04、0.76±0.05、0.62±0.02;感染后12 h,OPN表达即增高,于2d达到高峰,3d呈下降趋势,OPN/β-actin吸光度比值、灰度值比较差异均有统计学意义(F值分别为74.965、53.004,P均＜0.05);(2)RT-PCR测得心肌成纤维细胞对照组12 h、病毒组12h、1d、2d、3dⅠ型胶原/β-actin吸光度比值分别为:1.12±0.03、1.18±0.01、1.22±0.02、1.33±0.02、1.28±0.03,感染后12h Ⅰ型胶原表达即增高,于2d达到高峰,3d呈下降趋势,差异有统计学意义(F=38.241,P＜0.05);(3)OPN表达与Ⅰ型胶原有正相关关系(r=0.948,P＜0.001).结论 CVB3可诱导心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原及OPN表达,OPN表达与Ⅰ型胶原表达呈正相关,提示OPN可能促进心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原表达,参与病毒性心肌炎心肌纤维化的发病机制.     

SETDB1-siRNA对卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的 探讨转染SETDB1-siRNA对卵巢癌SKOV-3细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法 将体外培养的SKOV-3细胞分为(1)组(正常培养)、(2)组(转染阴性对照NC-siRNA)和(3)组(转染SETDB1干扰序列SETDB1-siRNA),采用实时荧光定量PCR检测细胞中SETDB1 mRNA表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡情况,Western blot检测蛋白表达情况。结果 与(1)组相比,转染NC-siRNA后SKOV-3细胞中SETDB1 mRNA和蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染SETDB1-siRNA可使SKOV-3细胞中SETDB1 mRNA和蛋白的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染NC-siRNA后SKOV-3细胞的增殖能力与(1)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染SETDB1-siRNA后SKOV-3细胞从2 d开始增殖能力明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。与(1)组相比,转染NC-siRNA对SKOV-3细胞穿膜...     

NOD相关蛋白在烟曲霉感染小鼠肺组织中的表达

目的:研究核苷酸结合寡聚化结构域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)相关蛋白在烟曲霉(Af)感染小鼠肺组织中的表达。方法:通过经鼻气道滴人Af孢子的方法建立小鼠感染Af的模型,对照组小鼠经鼻气道内滴人等量的生理盐水。分别在不同时间点观察肺部Af负荷及病理学改变,采用RT-PCR方法检测各时间点的NOD1、NOD2及受体相互作用蛋白2(receptor- interacting protein 2,RIP2)mRNA在肺组织中的表达。结果:1)感染组小鼠肺部Af负荷24h达最高峰,48h迅速下降。2)两组小鼠均表现为支气管周围炎症为主的病理改变,感染组小鼠24 h炎症细胞浸润最显著,48 h炎症细胞浸润减轻。对照组小鼠病理损害明显轻于感染组。3)NOD1、NOD2、RIP2 mRNA表达在接种Af后12 h、24 h、48 h显著升高(P<0．05)。对照组各时间点NOD1、 NOD2、RIP2 mRNA表达无显著差异。结论:NOD蛋白可能为Af的胞浆内模式识别受体(pattern。recognition receptors,PRRs),在抗 Af肺部感染的免疫反应中发挥一定作用。     

柯萨奇病毒B3诱导大鼠心肌成纤维细胞骨桥蛋白及I型胶原的表达情况

目的检测柯萨奇病毒B3（CVB3）对大鼠心肌成纤维细胞骨桥蛋白（OPN）及I型胶原表达的影响,探讨OPN在病毒性心肌炎的可能发病机制。方法用重复感染率（MOI）为0．5PFU／cell的CVB3感染体外培养的大鼠心肌成纤维细胞,细胞分对照组（12h）、病毒组（感染后12h、1d,2d及3d）。用RT·PCR及WesternBlot、免疫组化检测OPN及I型胶原表达,并将OPN表达与I型胶原表达进行直线相关分析。结果（1）RT-PCR测得对照组12h、病毒组12h、1d、2d及3d5组OPN／13-actin吸光度比值分别为：0．38±0．06、0．56±0．06、0．72±0．05、0．98±0．06、0．86±0．02;WesternBlot测得上述5组的OPN／13-actin灰度值分别为：0．26±0．03、0．36±0．03、0．52±0．04、0．76±0．05、0．62±0．02;感染后12h,OPN表达即增高,于2d达到高峰,3d呈下降趋势,OPN／13-actin吸光度比值、灰度值比较差异均有统计学意义（F值分别为74．965、53．004,P均〈0．05）;（2）RT-PCR测得心肌成纤维细胞对照组12h、病毒组12h、1d、2d、3dI型胶原／13-actin吸光度比值分别为：1．12±0．03、1．184-0．01、r．22±0．02、1．33±0．02、1．28±0．03,感染后12hI型胶原表达即增高,于2d达到高峰,3d呈下降趋势,差异有统计学意义（F=38．241,P〈0．05）;（3）OPN表达与I型胶原有正相关关系（r=0．948,P〈0．001）。结论CVB3可诱导心肌成纤维细胞I型胶原及OPN表达,OPN表达与I型胶原表达呈正相关,提示OPN可能促进心肌成纤维细胞I型胶原表达,参与病毒性心肌炎心肌纤维化的发病机制。     

黄芪甲苷对病毒性心肌炎小鼠TLR4、NF-κB及TNF-α表达的影响

目的探讨黄芪甲苷对病毒性心肌炎小鼠Toll样受体4(TLR4) mRNA、核因子-κB(NF-κB) mRNA表达及血清肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法将80只雄性BALB/c小鼠随机分为柯萨奇病毒感染组(感染组,30只)、黄芪甲苷治疗组(治疗组,30只)和正常对照组(对照组,20只)。感染组和治疗组小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3),建立病毒性心肌炎模型。治疗组于注射病毒后30min开始灌服黄芪甲苷,每日1次×7d;感染组以生理盐水灌胃;对照组用不含病毒的Eagle液腹腔注射、生理盐水灌胃。各组分别在7d、14d各随机抽取8只小鼠处死,HE染色后检测心肌病理积分、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达,ELLSA法检测血清TNF-α的含量。结果感染组心肌病理积分、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及血清TNF-α的含量较对照组明显增加(P<0.01),治疗组心肌病理积分、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达及血清TNF-α的含量较感染组明显降低(P<0.05)。结论黄芪甲苷可以通过调节TLR4、NF-κB及TNF-α在病毒性心肌炎中的表达,减轻心肌损伤。     

Slit2/Robo4信号通路在输血相关急性肺损伤体外模型中的表达及作用

目的探讨Slit2/Robo4信号通路在输血相关急性肺损伤（TRALI）体外模型中的表达及作用。 方法采用两次打击多形核中性粒细胞（PMNs）介导的人肺微血管内皮细胞（HMVECs）损伤模型作为TRALI体外模型,培养0、0.5、1、2、4、6 h后,采用Western-blotting法检测Robo4和血管内皮细胞钙粘连蛋白（VE-cadherin）表达,反转录酶PCR（RT-PCR）检测Robo4和Slit2信使RNA（mRNA）表达,体外内皮细胞通透性实验测定HMVECs通透性。加入不同浓度Slit2-N（0、0.5、1、4、10、20 μg/L）与HMVECs一起温孵24 h后,检测HMVECs完整性和通透性。 结果在TRALI体外模型中,Robo4和Slit2 mRNA的表达在各时间点的比较,差异均有统计学意义（F=12.880、11.060,P均< 0.001）;两者在2 h（0.72 ± 0.04、0.78 ± 0.05）、4 h（0.49 ± 0.04、0.49 ± 0.06）和6 h（0.34 ± 0.03、0.43 ± 0.11）均显著低于0 h（1.29 ± 0.06、1.40 ± 0.09）,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。Robo4蛋白表达在各时间点的比较,差异有统计学意义（F=11.560,P < 0.001）;其在2、4和6 h（0.99 ± 0.04、0.66 ± 0.03、0.45 ± 0.04）均显著低于0 h（1.44 ± 0.04）,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。同时发现,VE-cadherin蛋白表达在各时间点的比较,差异也有统计学意义（F=9.667,P < 0.001）;与0 h（1.46 ± 0.09）比较,VE-cadherin的表达在2、4和6 h（0.91 ± 0.08、0.78 ± 0.05、0.50 ± 0.04）也均有减少,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。体外内皮细胞渗透性试验提示,HMVECs通透性在各时间点的比较,差异有统计学意义（F=21.940,P < 0.001）;与0 h（1.42 ± 0.16）比较,HMVECs通透性在2、4、6 h（4.00 ± 0.35、5.70 ± 1.71、10.02 ± 2.24）均有增加,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。加入外源性Slit2-N后,VE-cadherin蛋白表达的比较,差异有统计学意义（F=13.220,P < 0.001）;与0 μg/L Slit2-N组（0.41 ± 0.08）相比,VE-cadherin在4、10、20 μg/L Slit2-N组表达（1.19 ± 0.35、1.49 ± 0.13、2.12 ± 0.21）均有增加,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。体外内皮细胞渗透性实验提示,HMVECs通透性比较,差异有统计学意义（F=19.430,P < 0.001）;与0 μg/L Slit2-N组（10.0 ± 2.2）相比,HMVECs通透性在4、10、20 μg/L Slit2-N组（4.2 ± 1.1、2.1 ± 0.7、1.8 ± 0.8）均有降低,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。 结论Slit2/Robo4信号通路可能参与TRALI的病理生理过程;使用外源性Slit2-N能调节TRALI体外模型中HMVECs的完整性和通透性,为治疗TRALI提供新的思路。     

Coxsackievirus B3 induces apoptosis in the early phase of murine myocarditis: a comparative analysis of cardiovirulent and noncardiovirulent strains

OBJECTIVE: To investigate the relationship between enteroviral infection and myocardial tissue apoptosis during the development of viral myocarditis in a murine model. METHODS: C3H/HeJ mice were inoculated with two strains of coxsackievirus B3, specifically CVB3 (cardiovirulent Nancy strain) and CVB3/0 (noncardiovirulent strain). Mice were sacrificed at 4, 7 and 10 days postinfection (p.i.). Hearts were removed, and plaque assays and RT-PCR were performed to detect the presence of viruses. Myocardial tissue sections were additionally evaluated by hematoxylin and eosin staining for inflammation, VP1 and Bax immunohistochemical staining for detection of virus and Bax expression, and TUNEL and Apostain for localization of apoptosis. RESULTS: CVB3 replicated to significantly higher titers than CVB3/0 at all time points. Histopathological analyses revealed significant inflammatory changes at all time points in CVB3-infected mice, in contrast to minimal changes in CVB3/0-infected mice. TUNEL and Apostain assays of myocardial tissues from mice infected with CVB3 disclosed maximum apoptotic lesions at 4 days p.i. and to a lesser extent at 7 and 10 days p.i. Moreover, CVB3-infected myocardial tissues displayed significantly enhanced Bax expression at 4 days p.i., and lesions overlapped with VP1-stained areas. CONCLUSIONS: These data indicate that (1) the cardiovirulent strain CVB3 induces more severe inflammation and apoptosis than the noncardiovirulent CVB3/0 strain, (2) viral replication is localized in inflammatory and apoptotic lesions in myocardial tissues, (3) apoptotic changes are observed in the early stages of myocarditis and (4) Bax may be associated with the apoptosis process in CVB3-induced myocarditis.     

超声引导下腹横肌平面阻滞用于≥70岁患者腹股沟疝修补术术后镇痛的临床观察

目的观察超声引导下腹横肌平面（TAP）阻滞对于≥70岁患者开放性腹股沟疝修补术术后镇痛的影响。 方法选择择期行开放性腹股沟疝无张力修补术患者60例,采用蛛网膜下腔阻滞麻醉,均为男性,年龄≥70岁,美国麻醉师协会分级Ⅰ~Ⅱ级,采用随机数字表法将患者分为对照组和试验组,每组30例。试验组于手术结束后于患侧行超声引导下TAP阻滞。观察2组患者术中、术后有无恶心、呕吐、心慌、胸闷、呼吸困难及头晕、嗜睡等不良反应;记录试验组术中、术后有无血管、神经及腹腔脏器损伤,局部麻醉药物中毒、穿刺部位感染等不良事件发生;记录2组患者术后4、6、8、12、24 h时静息状态下和咳嗽时视觉模拟量表（VAS）评分;记录术后下床时间、术后住院天数、总住院天数、麻醉费用以及住院总费用,记录2组术后非甾体类镇痛药的使用例数。 结果2组患者术中、术后均无恶心、呕吐、心慌、胸闷、呼吸困难及头晕、嗜睡等不良反应。试验组患者术中、术后无血管、神经及腹腔脏器损伤,无局部麻醉药物中毒及穿刺部位感染等不良事件。对照组在静息状态下［4 h：（3.8±1.2）分vs （1.6±0.5）分;6 h：（4.2±1.5）分vs （1.8±0.8）分;8 h：（4.8±1.5）分vs （2.0±0.7）分;12 h：（5.2±1.4）分vs （2.2±0.6）分;24 h：（3.2±?.?）分vs （1.6±0.6）分］和咳嗽时［4 h：（3.9±1.3）分vs （1.8±0.8）分;6 h：（4.6±1.5）分vs （2.0±0.8）分;8 h：（5.5±1.6）分vs （2.2±0.9）分;12 h:（5.8±1.8）分vs （2.4±0.8）分;24 h：（4.6±1.4）分vs （1.8±0.7）分］不同时间点的VAS评分均大于试验组（P<0.01）;2组住院总费用差异无统计学意义,试验组麻醉费用高于［（780.06±63.10）元vs （566.69±93.23）元］、下床活动时间早于［（5.26±1.43）天vs （8.62±1.62）天］、非甾体类药物使用例数少于（2 vs 28）对照组（P<0.01）。 结论超声引导下TAP阻滞因其镇痛效果确切,且操作简单,相关并发症少,对于≥70岁患者的开放性腹股沟疝修补术是一种安全有效的术后镇痛方法。     

不同时间点电针治疗对脑梗死大鼠Bcl-2 mRNA转录及caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点电针治疗对其Bcl-2 mRNA转录水平及caspase-3蛋白表达的影响。方法:SD大鼠100只,随机分为正常组、假手术组、模型组及电针组,每组根据术后干预时间点再分为术后6 h、12 h、24 h、48 h及72 h共5个亚组。线栓法制作大鼠左侧大脑中动脉栓塞/再灌注模型。电针组各亚组分别于脑缺血再灌注后不同时间点进行电针治疗,其它3组各亚组均于相同时间点进行捆扎,不给予电针治疗。各组大鼠均于治疗14 d后取脑,采用实时荧光定量PCR技术检测脑梗死侧Bcl-2 mRNA的转录水平,免疫组织化学染色检测脑梗死侧caspase-3蛋白的表达。结果:电针组各亚组Bcl-2 mRNA转录水平及caspase-3蛋白表达水平与其它3组相同时间点各亚组比较,差异有统计学意义(P0.05);电针组各亚组间Bcl-2 mRNA转录水平及caspase-3蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05),电针组12 h亚组Bcl-2 mRNA转录水平较高,24 h亚组caspase-3表达水平较低。结论:脑缺血再灌注12 h～24 h内给予电针治疗,能促进脑梗死大鼠Bcl-2 mRNA转录并抑制caspase-3蛋白的表达。     

微小RNA-320检测在体外循环所致急性呼吸窘迫综合征中的临床价值及其机制研究

目的研究微小RNA（microRNA）在体外循环（CPB）诱导的急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者中表达,并初步探讨其机制。 方法设定体外循环转流开始前（T1）、转流结束后4 h（T2）、术后8 h（T3）、术后16 h（T4）等4个时间点,采用microRNA微阵列芯片分析32例因CPB诱发ARDS患者microRNA变化,并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术加以验证。酶联免疫分析法检测患者肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）在T1~T4等4个时间点的水平变化,同时计算呼吸指数和氧合指数。Pearson相关性分析研究microRNA-320（miR-320）与TNF-α、IL-6、呼吸指数、氧合指数、Murray急性肺损伤评分以及急性病生理学和长期健康评价（APACHE）Ⅱ评分的相关性。体外培养人肺腺癌A549细胞,并转染pcDNA3.1-miR-320,采用细胞增殖检测试剂盒8（CCK-8）法和流式细胞术分析pcDNA3.1-miR-320转染对A549细胞48 h存活和凋亡率的影响。 结果在T1与T4时间点,ARDS患者血液标本中共有8个microRNA表达差异有统计学意义（t=28.313、30.014、25.313、20.312、29.442、21.443、18.427、22.369,P均< 0.001）,其中5个出现降低,3个出现增高,其中miR-499的降低程度（0.28 ± 0.09）最为显著,而miR-320的增高程度（1.62 ± 0.12）最为显著（P均< 0.05）。qRT-PCR证实从T1至T4时间点,miR-320相对表达水平（1.00、1.14 ± 0.07、1.34 ± 0.06、1.71 ± 0.08）逐渐升高,差异有统计学意义（F=20.648,P < 0.05）。CPB诱发ARDS的患者T1与T4时间点相比,TNF-α[（110 ± 10）ng/L vs.（254 ± 16）ng/L]、IL-6[（86 ± 8）ng/L vs.（165 ± 11）ng/L]、呼吸指数[（0.182 ± 0.021）vs.（0.381 ± 0.032）]均增高,氧合指数[（350 ± 22）vs.（245 ± 18）]下降,差异均有统计学意义（P均< 0.05）。Pearson相关性分析发现,miR-320的表达水平与Murray急性肺损伤评分,APACHEⅡ评分,T4时间点TNF-α、IL-6、呼吸指数均呈正相关（r=0.685、0.744、0.737、0.711、0.846,P均< 0.05）,而与氧合指数呈负相关（r=-0.745,P < 0.05）。pcDNA3.1-miR-320转染的A549细胞组与对照组48 h细胞存活率[（82% ± 8%）vs. 100%]、凋亡率[（20.0% ± 1.1%）vs.（9.4% ± 0.8%）]相比,差异均具有统计学意义（P均< 0.05）。 结论miR-320水平与TNF-α、IL-6等肺部损伤指标具有相关性,miR-320的高表达可能介导CPB导致的ARDS,作用机制为诱导肺泡上皮细胞的凋亡,因此miR-320具有临床诊断、评估ARDS生物学指标的潜能。     

黄芪甲苷对病毒性心肌炎小鼠TLR4、NF-KB及TNF—α表达的影响

目的探讨黄芪甲苷对病毒性心肌炎小鼠Toll样受体4（TLR4）mRNA、核因子-KB（NF-KB）mRNA表达及血清肿瘤坏死因子（TNF-α）的影响。方法将80只雄性BALB／c小鼠随机分为柯萨奇病毒感染组（感染组,30只）、黄芪甲苷治疗组（治疗组,30只）和正常对照组（对照组,20只）。感染组和治疗组小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3（CVB3）,建立病毒性心肌炎模型。治疗组于注射病毒后30min开始灌服黄芪甲苷,每日1次×7d;感染组以生理盐水灌胃;对照组用不含病毒的Eagle液腹腔注射、生理盐水灌胃。各组分别在7d、14d各随机抽取8只小鼠处死,HE染色后检测心肌病理积分、逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌中TLR4mRNA和NF-KBmRNA的表达,ELLSA法检测血清TNF-α的含量。结果感染组心肌病理积分、TLR4mRNA、NF-KBmRNA表达及血清TNF-α的含量较对照组明显增加（P〈0．01）,治疗组心肌病理积分、TLR4mRNA、NF-KBmRNA表达及血清TNF．仅的含量较感染组明显降低（P〈0．05）。结论黄芪甲苷可以通过调节TLR4、NF-KB及TNF-α在病毒性心肌炎中的表达,减轻心肌损伤。     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注后p-Bad的作用

目的：探讨促凋亡蛋白Bad的磷酸化p-Bad在局灶性脑缺血再灌注中的表达及依达拉奉的作用机制。方法：建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型;HE染色观察脑组织形态病理学变化;免疫组织化学法测定大鼠脑缺血再灌注不同时间磷酸化Bad的平均光密度值（A值）。结果：与假手术组比较,p-Bad在缺血再灌注2 h明显升高,于4 h达到峰值（P〈0.05）,随灌注时间延长表达逐渐减少并低于假手术组;依达拉奉干预组阳性表达在各时间点明显增加（P〈0.05）。结论：脑缺血再灌注损伤可能导致Bad磷酸化活性增强,依达拉奉可通过上调p-Bad来发挥脑保护作用。