维吾尔族妇女子宫颈鳞癌MGMT基因甲基化检测

目的 检测O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区甲基化与维吾尔族子宫颈鳞癌之间的相关性.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation spe-cific PCR,MSP)对41例维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织及32名正常维吾尔族妇女子宫颈组织进行甲基化检测.结果 32名正常子宫颈组织MGMT基因启动子区均未发生甲基化,为非甲基化状态;41例子宫颈鳞癌组织中共有13例发生MGMT基因启动子区甲基化(32%).结论 MGMT基因启动子区甲基化可能部分参与维吾尔族妇女子宫颈癌的发生发展过程,是维吾尔族子宫颈鳞癌发生过程中常见的分子事件,有可能作为维吾尔族妇女子宫颈癌诊断的肿瘤标志物.     

燃煤污染型砷中毒人群MGMT基因甲基化、转录及表达的研究

目的了解O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动子区甲基化、转录及表达以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的转录及表达与砷中毒的关系。方法采集68例燃煤污染型砷中毒(以下简称砷中毒)患者(轻度24例、中度28例、重度16例)及23例非病区居民外周血。用甲基化特异性PCR法(MSP)检测MGMT基因启动子区甲基化,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测MGMT及DNMT1 mRNA的水平。利用自愿手术治疗的砷中毒患者皮肤组织标本(61例,其中34例为一般病变,21例为癌前病变,6例为癌变)和对照皮肤组织标本(15例),以免疫组织化学(IHC)法检测砷中毒患者及对照皮肤组织中MGMT及DNMT1蛋白的表达。结果 MGMT基因启动子区甲基化阳性率与砷中毒程度有关(χ2=13.739,P0.01)。砷中毒组MGMT mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);MGMT基因启动子区甲基化患者和非甲基化患者之间MGMT mRNA和DNMT1 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。但轻、中度患者DNMT1 mRNA表达明显低于对照组(P0.01);癌前病变组和癌变组皮肤组织中MGMT蛋白表达明显低于对照组(P0.01),与皮肤损害程度有关(rs=-0.446,P0.01);MGMT基因启动子区甲基化患者MGMT蛋白表达明显低于非甲基化组(P0.05)。砷中毒组皮肤组织中DNMT1蛋白表达强于对照组(P0.01),并与皮肤损害程度有关(rs=0.740,P0.01);且MGMT基因启动子区甲基化患者组织中DNMT1蛋白表达明显高于非甲基化组(P0.05)。结论 MGMT基因启动子区高甲基化抑制了燃煤污染型砷中毒患者皮肤组织中MGMT蛋白的表达,且DNMT1蛋白的高表达参与了此抑制过程。     

卵巢癌组织中MGMT表达意义

目的探讨6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）在卵巢癌中的表达及临床意义.方法应用免疫组化（SP）法对60例卵巢癌及癌旁正常组织中MGMT的表达进行检测.结果60例卵巢癌组织中MGMT的表达率为46.7%,癌旁正常组织MGMT的表达率为100%（P＜0.05）.MGMT的表达与卵巢癌的组织学类型和临床分期无关（P＞0.05）,但与卵巢癌的病理分级有关（P＜0.05）.结论卵巢癌组织中存在MGMT的表达缺失,MGMT的功能失活可能是卵巢癌发生的重要机制之一.     

铀矿工GSTP1基因多态与MGMT基因和p16基因甲基化的关系

目的探讨氡职业暴露人群谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)基因多态与痰细胞6-氧-甲基嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和p16基因甲基化的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)确定70例氡职业暴露人群GSTP1的基因型;用聚合酶链反应-甲基化特异性法(MSP)确定痰细胞中MGMT和p16基因的甲基化与非甲基化状态。结果在70名铀矿工中,GSTP1基因A105G位点的纯合子(Ile/Ile)42例,杂合子(Ile/Val)25例和纯合子(Val/Val)3例。MGMT、p16基因甲基化率和总甲基化率分别为14.2%、8.6%和18.6%。与携带Ile/Ile人群相比,携带异常等位基因(Ile/Val与Val/Val)的人群MGMT基因甲基化和总甲基化率增加[P=0.037,OR=4.8,95%CI(1.1~21.0);P=0.016,OR=5.1,95%CI(1.4~19.6)];p16基因甲基化率差异无统计学意义[P=0.057,OR=4.6,95%CI(0.8~29.2)]。结论GSTP1(A105G)基因多态性与氡致MGMT基因甲基化和总甲基化的易感性有关。     

甲醛对小鼠脏器MGMT的影响

目的　研究甲醛对小鼠脏器O6 -甲基鸟嘌呤 -DNA甲基转移酶 (MGMT )表达的影响。方法　选择健康昆明小鼠 40只 ,随机分为 4组 :甲醛低剂量组 (2 5mg/m3)、中剂量组 (5mg/m3)、高剂量组 (10mg/m3)、对照组 (无甲醛暴露 ) ,每组 10只。除阴性对照组外 ,其余 3组每日吸入甲醛 1次 ,每次 4h ,连续 9周。应用链霉亲和素生物素-过氧化物酶 (SABC)免疫组化法对小鼠脑、肺、肝及肾组织中MGMT进行检测。结果　 3个染毒组小鼠肝和肺组织中MGMT表达降低 ,与对照组比较具有显著性差异 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;脑和肾组织MGMT表达各组之间无显著性差异 (P >0 0 5)。结论　甲醛对小鼠肝和肺组织MGMT表达可能具有抑制作用     

哈萨克族食管癌组织肿瘤修复基因表达及相关性

目的研究2种肿瘤修复基因人O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)与错配修复基因1(hMLH1)在哈萨克族食管癌患者癌组织及其远癌正常组织中的表达及其与病程特征的关系。方法采用逆转录聚合酶链式反应方法(RT-PCR)检测48例哈萨克族食管癌切除标本中MGMT与Hmlh1 mRNA表达水平,并分析两者与临床病理特征的关系。结果 48例食管癌癌组织中,MGMT mRNA表达阳性42例,阳性率为87.5%;正常组织者中34例,阳性率为70.8%,差异有统计学意义(t=3.032,P0.05);hMLH1 mRNA表达阳性38例,阳性率为79.2%,正常组织中23例,阳性率为47.9%,差异有统计学意义(t=4.156,P0.05);MGMT表达与浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分期等关系有统计学意义(P0.05);hMLH1表达与浸润深度、淋巴结转移、分化程度及肿瘤分期等关系有统计学意义(P0.05);哈萨克族食管癌组织中MGMT与hMLH1表达呈正相关(k=0.560,P0.05)。结论 MGMT与hM-LH1在哈萨克族食管癌的发生、进展、转移等过程中起到一定作用。     

甲醛对小鼠胸腺、脾、睾丸组织MGMT的影响

目的　研究甲醛对小鼠淋巴及睾丸组织O6-甲基鸟嘌呤 -DNA甲基转移酶 (MGMT)表达的影响。　方法选择健康雄性昆明小鼠 40只 ,随机分为 4组 :甲醛低剂量组 ( 2 .5mg/m3 )、中剂量组 ( 5mg/m3 )、高剂量组 ( 10mg/m3 )、对照组 (无甲醛暴露 ) ,每组 10只。除阴性对照组外 ,其余 3组每日吸入甲醛 1次 ,每次 4h ,连续 9周。应用链霉亲和素生物素—过氧化物酶 (SABC)免疫组化法对小鼠胸腺、脾及睾丸组织中MGMT进行检测。　结果　高剂量染毒组小鼠胸腺、脾和睾丸组织中MGMT表达降低 ,与对照组比较差异具有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。　结论　甲醛对小鼠淋巴和睾丸组织MGMT表达可能具有抑制作用。     

DNA损伤修复基因MGMT在肿瘤发生与预后中的作用

通过对DNA损伤修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因的遗传多态性、高甲基化及蛋白表达与肿瘤发生和预后关系的探讨,反映MGMT基因在肿瘤遗传学研究中的重要性。     

乳腺癌组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶的表达

采用原位杂交方法检测30例乳腺癌组织O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）表达水平。结果显示,MGMT阳性率为93．4％（28／30）,其中高表达28．6％（8／28）,中、低表达71．4％（20／28）。乳腺癌组织MGMT的表达与临床分期无关。     

燃煤污染型砷中毒患者MGMT基因启动区甲基化及MGMT mRNA的表达

[目的]了解燃煤污染型砷中毒患者血中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因（MGMT基因）启动区甲基化及患者皮肤组织中MGMT mRNA转录表达的情况，探讨两者间关系及其在砷中毒发生发展乃至癌变中的作用。[方法]采用甲基化特异性PCR法（MSP）检测99例砷中毒患者和103例正常对照MGMT基因启动区甲基化情况；同时采用原位杂交技术检测其中61例砷中毒患者皮肤组织中MGMT mRNA的表达情况。[结果]①砷中毒组MGMT基因启动区甲基化阳性率为40．4％，对照组为2．91％；随病情加重砷中毒患者甲基化阳性率逐渐升高，轻、中、重度砷中毒组甲基化阳性率分别为22．73％、39．02％和52．78％，非癌变组与癌变组甲基化阳性率分别为27．78％和65．00％，均显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。②随着砷中毒患者皮肤病变的加重，MGMT mRNA阳性表达率逐渐降低，其表达率在非癌变组与癌变组分别为71．05％和30．43％，两组间差异有统计学意义（P〈0．01）。③MGMT基因启动区甲基化阳性率升高与该基因mRNA表达降低有关联（r=0．456，P=0．01）。[结论]MGMT基因启动区高甲基化是砷中毒发生发展乃至癌变发生的早期事件；MGMT基因启动区高甲基化可导致MGMT mRNA转录水平下降并可能是进一步导致蛋白活性降低的重要原因之一。     

免疫组织化学染色检测食管组织MGMT和P53蛋白的表达及其相关性

目的探讨MGMT在食管上皮单纯增生、非典型增生、原位癌和浸润癌组织的表达及其与P53的关系。方法应用免疫组化(EnVision二步法)检测21例正常上皮、39例单纯增生上皮、17例非典型增生、12例原位癌以及140例浸润癌组织中MGMT及P53蛋白的表达及其相关性。结果MGMT蛋白表达强度在原位癌和非典型增生上皮最高,浸润癌组织次之,单纯增生上皮和正常上皮表达较低,统计学分析其差别有统计学意义(F=3.022,p<0.05)。P53在正常上皮不表达,从单纯增生上皮→非典型增生上皮表达逐渐增强,在原位癌和浸润癌组织中表达强度最强。统计学分析各组表达强度存在差异(F=16.18,p<0.01)。MGMT和P53的相关分析结果显示,在癌组织MGMT与P53蛋白之间的表达呈负的相关关系,(rs=-0.415,p<0.01)。结论MGMT和P53蛋白在食管组织癌变的过程中的表达改变可能与食管癌发生有关。     

脑胶质瘤IDH1突变与MGMT表达的相关性研究

目的探讨脑胶质瘤IDH1突变与MGMT表达的相关性。方法收集60例脑胶质瘤组织标本与30例因良性疾病行手术治疗切除的正常脑组织,以免疫组化SP法检测IHD1突变及MGMT表达。结果脑胶质瘤组织中IHD1突变和MGMT表达阳性率为53.33%、45.00%,正常脑组织中均表现为阴性,比较差异有统计学意义(P<0.01)。Ⅲ~Ⅳ级脑胶质瘤组织中IHD1突变与MGMT表达阳性率分别为68.97%、58.62%,显著高于Ⅰ~Ⅱ级患者37.50%、32.26%,比较差异有统计学意义(P<0.01)。IHD1突变及MGMT表达之间有正相关性(P<0.05)。结论脑胶质瘤中明显存在IHD1突变及MGMT表达,两者之间有密切相关性,并与病情恶性程度密切相关。     

镍冶炼烟尘对小鼠胚胎成纤维细胞CpG岛甲基化的影响

目的探讨镍冶炼烟尘对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)以及死亡相关蛋白激酶1(DAPK 1)启动子CpG岛甲基化程度的影响。方法采集某镍冶炼厂的镍冶炼烟尘,玛瑙研钵研磨磨至直径≤5μm的颗粒占95%以上,称取一定量研磨后的镍冶炼烟尘用PBS溶液配制浓度为2 mg/ml的悬浊液。将处于对数生长期的NIH/3T3细胞分别接触浓度为0、25、50、75、100、125、150μg/ml的镍冶炼烟尘悬浊液24 h后,使用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)对接触不同浓度镍冶炼烟尘的NIH/3T3细胞进行MGMT和DAPK 1启动子CpG岛甲基化程度检测。结果与阴性对照组相比,接触镍冶炼烟尘后,NIH/3T3细胞的MGMT启动子CpG岛甲基化程度随着受试物浓度的升高,分别升高了0.5%、0.5%、1.0%、1.0%、2.0%、2.5%;DAPK 1启动子CpG岛甲基化程度随着受试物浓度的升高,分别升高了0.4%、0.5%、0.7%、1.0%、1.7%、1.7%。经Cochran-Armitage趋势检验,MGMT启动子CpG岛甲基化程度与接触镍冶炼烟尘浓度之间呈线性变化趋势,甲基化程度随着接触浓度增加而呈增加的趋势,P值分别为0.0274和0.0281。结论接触不同浓度的镍冶炼烟尘后,NIH/3T3细胞的MGMT以及DAPK 1启动子CpG岛甲基化程度均发生不同程度的升高,且启动子CpG岛甲基化程度与接触镍冶炼烟尘浓度之间呈线性变化趋势,甲基化程度随着接触浓度增高呈增加的趋势。     

居室空气中主要挥发性化学物对小鼠脏器O6-DNA甲基转移酶表达的影响

目的探讨居室空气中主要挥发性化学物对小鼠肺、肝、肾、睾丸组织O6-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)表达的影响。方法根据20户新装修居室空气中甲醛、苯、甲苯、二甲苯和氨的平均质量百分构成比采用化学纯品配制混合染毒液(0.9124g/ml)。将昆明种小鼠随机分为4组,低剂量组(7.5mg/m)3、中剂量组(15mg/m3)、高剂量组(30mg/m3),每组10只。在静式染毒柜中每天染毒1次,每次4h,共染毒9周。对照组不加混合物,在染毒柜中放置时间与染毒组相同。应用链霉亲和素生物-过氧化物酶(SABC)免疫组化法对小鼠肺、肝、睾丸、肾组织中MGMT进行检测。结果高、中、低剂量染毒组小鼠肝、肺、睾丸组织中MGMT表达降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。肾组织中MGMT表达各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论居室空气中主要挥发性化学物对小鼠肝、肺、睾丸组织MGMT表达可能具有抑制作用。     

p16、MGMT甲基化在肺癌早期断诊中意义

目的 通过联合检测血清DNA中p16、MGMT基因的异常甲基化以及血清细胞角蛋白19血清片段21-1(CYFRA21-1)的含量,以探讨联合检测在肺癌早期诊断中的临床意义.方法 分离提取72例肺癌患者的外周血血清DNA,采用巢式甲基化特异性PCR方法检测p16、MGMT基因的甲基化状态,同时应用放射免疫法测定血清cYFRA21-1的含量,并以20例肺部良性疾病患者(BLD)和25例健康体检者作对照,分析两者联合应用的诊断价值.结果 在52例肺癌患者血清中检测到p16基因的甲基化,阳性率为72.2%;47例肺癌患者血清中检测到MGMT基因的甲基化,阳性率为65.3%,而CYFRA21-1的阳性率为63.8%;平行联合检测时敏感性增至92.4%.BLD组p16、MGMT基因甲基化与CYFRA21-1阳性率分别为10.0%,5.0%和20.0%;健康对照者血清中p16、MGMT基因均无异常甲基化.结论 联合检测血清p16、MGMT基因甲基化与CYFRA21-1含量可提高肺癌诊断的敏感性和特异性,对于肺癌的早期诊断具有重要意义.     

核因子-κB与脑膜瘤细胞增殖的关系

[目的]探讨核因子-kB(NF-KB)在脑膜瘤的表达及其与脑膜瘤细胞增殖的关系.[方法]采用免疫组化SP法测定50例脑膜瘤组织、10例正常硬脑膜组织中NF-kBp65和增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear anti-gen,PCNA)的表达水平.[结果]正常硬脑膜组织中NF-kBp65无表达,脑膜瘤组织中NF-kBp65有不同程度的表达,两者之间的差异有统计学意义(P<0.05).各型脑膜瘤之间NF-kB的表达差异有统计学意义(P<0.05).NF-kB与PCNA在脑膜瘤组织中表达呈正相关(r=0.452 4,P=0.001<0.05). [结论]NF-kB在脑膜瘤组织中存在过度表达,可能与脑膜瘤的发生、增殖及对放疗、化疗不敏感有关.对NF-kB在脑膜瘤的进一步深入研究,可能获得药物治疗脑膜瘤的有效途径.     

MSP法检测膀胱移行细胞癌PTEN启动子甲基化的实验研究

目的:探讨甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌PTEN基因启动子甲基化的方法及意义。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态。结果:膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:MSP法检测膀胱移行细胞癌PTEN基因启动子甲基化可行。     

氡对铀矿工MGMT基因甲基化及超氧化物歧化酶活力的影响

目的探讨氡及其子体对职业人群致肺癌的早期生物效应标志物。方法91名氡职业暴露工人按氡子体累积暴露剂量分为高[>120WLM(工作水平月)]、中(60~120WLM)、低(30~59WLM)和最低(2~29WLM)4个剂量组,用聚合酶链反应-甲基化特异性(MSP)检测4组人群痰细胞中的6-氧-甲基嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因的异常甲基化状态,用黄嘌呤氧化酶法测定血浆超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果随着氡子体累积暴露剂量增加,MGMT基因甲基化率呈上升趋势(0.00%~28.00%),且差异有统计学意义(P<0.01);在最低、低、中和高剂量职业氡暴露人群外周血中,SOD活力分别为(116.5±12.3)、(89.6±8.3)、(63.6±8.9)和(40.9±7.6)kU/L,组间差异有统计学意义(P<0.05),SOD活力呈逐渐下降趋势,线性回归方程y=138.78-16.32x(r=-0.96,P<0.05)。结论MGMT基因甲基化和SOD活力与氡子体累积暴露剂量有关。     

某铀矿工人痰细胞中p16和MGMT基因的甲基化状态

目的检测某铀矿氡职业暴露人群痰细胞中6-氧-甲基嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因和p16基因的甲基化状态，为寻找氡致肺癌高危人群的分子标记物提供试验依据。方法91名氡职业暴露工人按氡子体累积暴露剂培工作水平月（WLM）分为高（〉120WLM）、中（60～120WIN）、低（30～60WLM）和较低（2～30WLM）4个剂量组，用聚合酶链反应-甲基化特异性（MSP）检测4组人群痰细胞中的p16和MGMT基因的异常甲基化状态。结果随着氡子体累积暴露剂量的增加，p16基因甲基化率（0．00％，20．00％）、MGMT基因甲基化率（0．00％～28．00％）、总甲基化率（0．00％～40．00％）均呈明昆上升趋势，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论p16和MGMT基因甲基化与氡子体累积暴露剂量有关。     

MGMT在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨耐药酶O6甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义.方法 通过免疫组织化学方法检测60例脑胶质瘤患者MGMT蛋白表达情况,分析其与WHO分级的关系;同时对MG-MT表达为阳性的40例患者,分别采用化疗药物TMZ和CCNU进行化疗,观察比较两组的有效率、控制率. 结果 根据WHO分级,MGMT蛋白在Ⅰ～Ⅳ的阳性表达率分别为37.5%、66.7%、78.6%和100.0%.经χ2趋势检验,各等级之间差异有统计学意义(P<0.05).通过强化CT或增强MRI判断病灶变化情况,TMZ组有效率(CR+PR)为22.7%,CC-NU组有效率为5.6%,两组差异有统计学意义(P<0.05).TMZ组控制率(CR+PR+MR)为59.1%,CCNU组控制率为16.7%,两组差异有统计学意义(P<0.05). 结论 MGMT表达对判定肿瘤的恶性程度对于制定化疗方案有重要参考价值,TMZ较CCNU更适用于MGMT表达阳性恶性脑胶质瘤的治疗.