维吾尔族妇女子宫颈鳞癌MGMT基因甲基化检测

目的 检测O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O⁶-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区甲基化与维吾尔族子宫颈鳞癌之间的相关性.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)对41例维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织及32名正常维吾尔族妇女子宫颈组织进行甲基化检测.结果 32名正常子宫颈组织MGMT基因启动子区均未发生甲基化,为非甲基化状态;41例子宫颈鳞癌组织中共有13例发生MGMT基因启动子区甲基化(32%).结论 MGMT基因启动子区甲基化可能部分参与维吾尔族妇女子宫颈癌的发生发展过程,是维吾尔族子宫颈鳞癌发生过程中常见的分子事件,有可能作为维吾尔族妇女子宫颈癌诊断的肿瘤标志物.     

燃煤污染型砷中毒人群MGMT基因甲基化、转录及表达的研究

目的了解O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动子区甲基化、转录及表达以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的转录及表达与砷中毒的关系。方法采集68例燃煤污染型砷中毒(以下简称砷中毒)患者(轻度24例、中度28例、重度16例)及23例非病区居民外周血。用甲基化特异性PCR法(MSP)检测MGMT基因启动子区甲基化,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测MGMT及DNMT1 mRNA的水平。利用自愿手术治疗的砷中毒患者皮肤组织标本(61例,其中34例为一般病变,21例为癌前病变,6例为癌变)和对照皮肤组织标本(15例),以免疫组织化学(IHC)法检测砷中毒患者及对照皮肤组织中MGMT及DNMT1蛋白的表达。结果 MGMT基因启动子区甲基化阳性率与砷中毒程度有关(χ2=13.739,P0.01)。砷中毒组MGMT mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);MGMT基因启动子区甲基化患者和非甲基化患者之间MGMT mRNA和DNMT1 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。但轻、中度患者DNMT1 mRNA表达明显低于对照组(P0.01);癌前病变组和癌变组皮肤组织中MGMT蛋白表达明显低于对照组(P0.01),与皮肤损害程度有关(rs=-0.446,P0.01);MGMT基因启动子区甲基化患者MGMT蛋白表达明显低于非甲基化组(P0.05)。砷中毒组皮肤组织中DNMT1蛋白表达强于对照组(P0.01),并与皮肤损害程度有关(rs=0.740,P0.01);且MGMT基因启动子区甲基化患者组织中DNMT1蛋白表达明显高于非甲基化组(P0.05)。结论 MGMT基因启动子区高甲基化抑制了燃煤污染型砷中毒患者皮肤组织中MGMT蛋白的表达,且DNMT1蛋白的高表达参与了此抑制过程。     

卵巢癌组织中MGMT表达意义

目的探讨6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）在卵巢癌中的表达及临床意义.方法应用免疫组化（SP）法对60例卵巢癌及癌旁正常组织中MGMT的表达进行检测.结果60例卵巢癌组织中MGMT的表达率为46.7%,癌旁正常组织MGMT的表达率为100%（P＜0.05）.MGMT的表达与卵巢癌的组织学类型和临床分期无关（P＞0.05）,但与卵巢癌的病理分级有关（P＜0.05）.结论卵巢癌组织中存在MGMT的表达缺失,MGMT的功能失活可能是卵巢癌发生的重要机制之一.     

DNA损伤修复基因MGMT在肿瘤发生与预后中的作用

通过对DNA损伤修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因的遗传多态性、高甲基化及蛋白表达与肿瘤发生和预后关系的探讨,反映MGMT基因在肿瘤遗传学研究中的重要性。     

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性与胃癌遗传易感性的关系

目的探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因第3外显子上第84和第53密码子上的多态性改变与胃癌易感性的关系以及与环境因素在胃癌发生中的交互作用。方法应用以人群为基础的病例对照研究,采用PCR-RFLP技术检测191例胃癌病例组与251例健康对照组MGMT-Leu53Leu和MGMT-Leu84Phe多态改变的频率。结果MGMT-Leu84Phe各基因型在胃癌病例组(CC 74.3%,CT 23.6%,TT 2.1%)和对照组(CC 74.1%,CT 23.5%,TT 2.4%)的分布情况与MGMT-Leu53Leu基因型相似,差异无显著性;MGMT-Leu53Leu各基因型在胃癌病例组中的分布分别为CC型(75.4%)、CT型(21.5%)、TT型(3.1%),对照组分布为CC型(72.1%)、CT型(24.7%)、TT型(3.2%),两组比较差异无显著性;分别按年龄、性别、吸烟、饮酒、H.pylori感染以及胃癌家族史等因素分层分析也没有发现两个位点的突变基因型与胃癌遗传易感性的相关性。结论结果显示MGMT-Leu53Leu、Leu84Phe与胃癌的发生没有显著关联。     

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因多态性与胃癌遗传易感性的关系

目的探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因第3外显子上第84和第53密码子上的多态性改变与胃癌易感性的关系以及与环境因素在胃癌发生中的交互作用。方法应用以人群为基础的病例对照研究,采用PCR-RFLP技术检测191例胃癌病例组与251例健康对照组MGMT-Leu53Leu和MGMT-Leu84Phe多态改变的频率。结果MGMT-Leu84Phe各基因型在胃癌病例组（CC 74.3%,CT 23.6%,TT 2.1%）和对照组（CC 74.1%,CT 23.5%,TT 2.4%）的分布情况与MGMT-Leu53Leu基因型相似,差异无显著性;MGMT-Leu53Leu各基因型在胃癌病例组中的分布分别为CC型（75.4%）、CT型（21.5%）、TT型（3.1%）,对照组分布为CC型（72.1%）、CT型（24.7%）、TT型（3.2%）,两组比较差异无显著性;分别按年龄、性别、吸烟、饮酒、H.pylori感染以及胃癌家族史等因素分层分析也没有发现两个位点的突变基因型与胃癌遗传易感性的相关性。结论结果显示MGMT-Leu53Leu、Leu84Phe与胃癌的发生没有显著关联。     

MGMT在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨耐药酶O6甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义.方法 通过免疫组织化学方法检测60例脑胶质瘤患者MGMT蛋白表达情况,分析其与WHO分级的关系;同时对MG-MT表达为阳性的40例患者,分别采用化疗药物TMZ和CCNU进行化疗,观察比较两组的有效率、控制率. 结果 根据WHO分级,MGMT蛋白在Ⅰ～Ⅳ的阳性表达率分别为37.5%、66.7%、78.6%和100.0%.经χ2趋势检验,各等级之间差异有统计学意义(P<0.05).通过强化CT或增强MRI判断病灶变化情况,TMZ组有效率(CR+PR)为22.7%,CC-NU组有效率为5.6%,两组差异有统计学意义(P<0.05).TMZ组控制率(CR+PR+MR)为59.1%,CCNU组控制率为16.7%,两组差异有统计学意义(P<0.05). 结论 MGMT表达对判定肿瘤的恶性程度对于制定化疗方案有重要参考价值,TMZ较CCNU更适用于MGMT表达阳性恶性脑胶质瘤的治疗.     

甲醛对小鼠胸腺、脾、睾丸组织MGMT的影响

目的　研究甲醛对小鼠淋巴及睾丸组织O6-甲基鸟嘌呤 -DNA甲基转移酶 (MGMT)表达的影响。　方法选择健康雄性昆明小鼠 40只 ,随机分为 4组 :甲醛低剂量组 ( 2 .5mg/m3 )、中剂量组 ( 5mg/m3 )、高剂量组 ( 10mg/m3 )、对照组 (无甲醛暴露 ) ,每组 10只。除阴性对照组外 ,其余 3组每日吸入甲醛 1次 ,每次 4h ,连续 9周。应用链霉亲和素生物素—过氧化物酶 (SABC)免疫组化法对小鼠胸腺、脾及睾丸组织中MGMT进行检测。　结果　高剂量染毒组小鼠胸腺、脾和睾丸组织中MGMT表达降低 ,与对照组比较差异具有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。　结论　甲醛对小鼠淋巴和睾丸组织MGMT表达可能具有抑制作用。     

甲醛对小鼠脏器MGMT的影响

目的　研究甲醛对小鼠脏器O6 -甲基鸟嘌呤 -DNA甲基转移酶 (MGMT )表达的影响。方法　选择健康昆明小鼠 40只 ,随机分为 4组 :甲醛低剂量组 (2 5mg/m3)、中剂量组 (5mg/m3)、高剂量组 (10mg/m3)、对照组 (无甲醛暴露 ) ,每组 10只。除阴性对照组外 ,其余 3组每日吸入甲醛 1次 ,每次 4h ,连续 9周。应用链霉亲和素生物素-过氧化物酶 (SABC)免疫组化法对小鼠脑、肺、肝及肾组织中MGMT进行检测。结果　 3个染毒组小鼠肝和肺组织中MGMT表达降低 ,与对照组比较具有显著性差异 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;脑和肾组织MGMT表达各组之间无显著性差异 (P >0 0 5)。结论　甲醛对小鼠肝和肺组织MGMT表达可能具有抑制作用     

乳腺癌组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶的表达

采用原位杂交方法检测30例乳腺癌组织O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）表达水平。结果显示,MGMT阳性率为93．4％（28／30）,其中高表达28．6％（8／28）,中、低表达71．4％（20／28）。乳腺癌组织MGMT的表达与临床分期无关。     

哈萨克族食管癌组织肿瘤修复基因表达及相关性

目的研究2种肿瘤修复基因人O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)与错配修复基因1(hMLH1)在哈萨克族食管癌患者癌组织及其远癌正常组织中的表达及其与病程特征的关系。方法采用逆转录聚合酶链式反应方法(RT-PCR)检测48例哈萨克族食管癌切除标本中MGMT与Hmlh1 mRNA表达水平,并分析两者与临床病理特征的关系。结果 48例食管癌癌组织中,MGMT mRNA表达阳性42例,阳性率为87.5%;正常组织者中34例,阳性率为70.8%,差异有统计学意义(t=3.032,P<0.05);hMLH1 mRNA表达阳性38例,阳性率为79.2%,正常组织中23例,阳性率为47.9%,差异有统计学意义(t=4.156,P<0.05);MGMT表达与浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分期等关系有统计学意义(P<0.05);hMLH1表达与浸润深度、淋巴结转移、分化程度及肿瘤分期等关系有统计学意义(P<0.05);哈萨克族食管癌组织中MGMT与hMLH1表达呈正相关(k=0.560,P<0.05)。结论 MGMT与hM-LH1在哈萨克族食管癌的发生、进展、转移等过程中起到一定作用。     

镍冶炼烟尘对小鼠胚胎成纤维细胞CpG岛甲基化的影响

目的探讨镍冶炼烟尘对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)以及死亡相关蛋白激酶1(DAPK 1)启动子CpG岛甲基化程度的影响。方法采集某镍冶炼厂的镍冶炼烟尘,玛瑙研钵研磨磨至直径≤5μm的颗粒占95%以上,称取一定量研磨后的镍冶炼烟尘用PBS溶液配制浓度为2 mg/ml的悬浊液。将处于对数生长期的NIH/3T3细胞分别接触浓度为0、25、50、75、100、125、150μg/ml的镍冶炼烟尘悬浊液24 h后,使用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)对接触不同浓度镍冶炼烟尘的NIH/3T3细胞进行MGMT和DAPK 1启动子CpG岛甲基化程度检测。结果与阴性对照组相比,接触镍冶炼烟尘后,NIH/3T3细胞的MGMT启动子CpG岛甲基化程度随着受试物浓度的升高,分别升高了0.5%、0.5%、1.0%、1.0%、2.0%、2.5%;DAPK 1启动子CpG岛甲基化程度随着受试物浓度的升高,分别升高了0.4%、0.5%、0.7%、1.0%、1.7%、1.7%。经Cochran-Armitage趋势检验,MGMT启动子CpG岛甲基化程度与接触镍冶炼烟尘浓度之间呈线性变化趋势,甲基化程度随着接触浓度增加而呈增加的趋势,P值分别为0.0274和0.0281。结论接触不同浓度的镍冶炼烟尘后,NIH/3T3细胞的MGMT以及DAPK 1启动子CpG岛甲基化程度均发生不同程度的升高,且启动子CpG岛甲基化程度与接触镍冶炼烟尘浓度之间呈线性变化趋势,甲基化程度随着接触浓度增高呈增加的趋势。     

微囊藻毒素-LR对小鼠肝细胞DNA甲基化的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)暴露对小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平及DNA甲基转移酶(DNMTs)mRNA表达的影响。方法将40只健康SPF级昆明小鼠随机分为4组,分别为对照组(含0.02%DMSO)和5、10、20μg/kg MCLR染毒组,每组10只,雌雄各半。采用腹腔注射方式进行染毒,连续染毒20 d。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠肝细胞DNA中的脱氧胞苷和5-甲基脱氧胞苷含量,并计算DNA的总体甲基化水平;采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B m RNA的表达水平。结果 10、20μg/kg MC-LR染毒组小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平,DNMT1、DNMT3A及DNMT3B mRNA的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平与DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达水平均呈正相关(P0.05)。结论 MC-LR可抑制小鼠肝细胞DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA的表达,降低DNA总体甲基化水平。     

槲皮素及其甲基化产物对大鼠肝细胞DNMTs蛋白表达与活性影响的研究

目的观察槲皮素及其甲基化产物(异鼠李素和柽柳黄素)对DNA甲基转移酶(DNMTs)表达和活性的影响。方法体外培养BRL大鼠肝细胞,以MTT法测定槲皮素甲基化产物和DNMTs活性抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza)对BRL细胞活力的影响;采用HPLC法测定细胞内S-腺苷蛋氨酸(SAM)、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的含量;采用试剂盒法检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平,DNMTs活性及细胞总DNA甲基化水平。结果根据MTT的结果,确定异鼠李素和柽柳黄素的处理浓度为5μmol/L,5-Aza的浓度为20μmol/L,处理时间均为24h。与对照组相比,槲皮素组细胞内SAH含量显著降低(P<0.05)。异鼠李素组细胞内SAM含量、SAM/SAH比值显著升高(P<0.05),柽柳黄素组细胞内SAM含量显著增加。与对照组比较,槲皮素组DNMT1表达显著降低(P<0.05);与槲皮素组和异鼠李素组比较,柽柳黄素组DNMT1则显著增加(P<0.05);与异鼠李素组比较,柽柳黄素组DNMT3b表达显著增加(P<0.05)。与对照组比较,5-A...     

铀矿工GSTP1基因多态与MGMT基因和p16基因甲基化的关系

目的探讨氡职业暴露人群谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)基因多态与痰细胞6-氧-甲基嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和p16基因甲基化的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)确定70例氡职业暴露人群GSTP1的基因型;用聚合酶链反应-甲基化特异性法(MSP)确定痰细胞中MGMT和p16基因的甲基化与非甲基化状态。结果在70名铀矿工中,GSTP1基因A105G位点的纯合子(Ile/Ile)42例,杂合子(Ile/Val)25例和纯合子(Val/Val)3例。MGMT、p16基因甲基化率和总甲基化率分别为14.2%、8.6%和18.6%。与携带Ile/Ile人群相比,携带异常等位基因(Ile/Val与Val/Val)的人群MGMT基因甲基化和总甲基化率增加[P=0.037,OR=4.8,95%CI(1.1~21.0);P=0.016,OR=5.1,95%CI(1.4~19.6)];p16基因甲基化率差异无统计学意义[P=0.057,OR=4.6,95%CI(0.8~29.2)]。结论GSTP1(A105G)基因多态性与氡致MGMT基因甲基化和总甲基化的易感性有关。     

某铀矿工人痰细胞中p16和MGMT基因的甲基化状态

目的检测某铀矿氡职业暴露人群痰细胞中6-氧-甲基嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因和p16基因的甲基化状态，为寻找氡致肺癌高危人群的分子标记物提供试验依据。方法91名氡职业暴露工人按氡子体累积暴露剂培工作水平月（WLM）分为高（〉120WLM）、中（60～120WIN）、低（30～60WLM）和较低（2～30WLM）4个剂量组，用聚合酶链反应-甲基化特异性（MSP）检测4组人群痰细胞中的p16和MGMT基因的异常甲基化状态。结果随着氡子体累积暴露剂量的增加，p16基因甲基化率（0．00％，20．00％）、MGMT基因甲基化率（0．00％～28．00％）、总甲基化率（0．00％～40．00％）均呈明昆上升趋势，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论p16和MGMT基因甲基化与氡子体累积暴露剂量有关。     

三氯乙酸对L-02细胞DNA甲基化转移酶1蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨三氯乙酸(TCA)染毒对L-02细胞DNA甲基化转移酶1(DNMT1)蛋白及mRNA表达的影响。方法取处于对数生长期的正常肝细胞(L-02细胞),分别加入含0(对照)、0.1、0.3、0.9 mmo/L TCA的培养液继续培养24、48、72 h,同时,设DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-aza-d C,5μmol/L)处理组,TCA-re组(0.9 mmol/L TCA处理后换正常培养基继续培养24 h)和人肝癌(HepG2)细胞组作为对照。检测细胞DNMT1蛋白和mRNA的表达水平。结果与对照组比较,各浓度TCA染毒组及5-aza-d C处理组、TCA-re组L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均较低,而HepG2细胞组DNMT1 mRNA的表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.05)。与相同剂量TCA染毒24 h比较,各浓度TCA染毒48、72 h后L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均较低,除0.1、0.9 mmol/L TCA染毒48 h外,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着TCA染毒浓度的升高和染毒时间的延长,L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平均呈下降趋势。与0.9 mmol/L TCA染毒组比较,TCA-re组L-02细胞DNMT1 mRNA的表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度TCA染毒组及5-aza-d C处理组L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均较低,除0.1 mmol/L TCA染毒24、48 h及0.3mmol/L TCA染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05);而TCA-re组L-02细胞和HepG2细胞组DNMT1蛋白的表达水平均无明显变化。与相同剂量TCA染毒24 h比较,各浓度TCA染毒48、72 h后L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。除TCA染毒24 h时L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平随染毒浓度的升高而呈先升高后下降的趋势外,随着TCA染毒浓度的升高和染毒时间的延长,L-02细胞DNMT1蛋白的表达水平均呈下降趋势。与0.9 mmol/L TCA染毒组比较,TCA-re组L-02细胞DNMT1蛋白表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TCA体外染毒可能通过抑制DNMT1的表达维持或者促进细胞的DNA低甲基化状态。     

居室空气中主要挥发性化学物对小鼠脏器O6-DNA甲基转移酶表达的影响

目的探讨居室空气中主要挥发性化学物对小鼠肺、肝、肾、睾丸组织O6-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)表达的影响。方法根据20户新装修居室空气中甲醛、苯、甲苯、二甲苯和氨的平均质量百分构成比采用化学纯品配制混合染毒液(0.9124g/ml)。将昆明种小鼠随机分为4组,低剂量组(7.5mg/m)3、中剂量组(15mg/m3)、高剂量组(30mg/m3),每组10只。在静式染毒柜中每天染毒1次,每次4h,共染毒9周。对照组不加混合物,在染毒柜中放置时间与染毒组相同。应用链霉亲和素生物-过氧化物酶(SABC)免疫组化法对小鼠肺、肝、睾丸、肾组织中MGMT进行检测。结果高、中、低剂量染毒组小鼠肝、肺、睾丸组织中MGMT表达降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。肾组织中MGMT表达各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论居室空气中主要挥发性化学物对小鼠肝、肺、睾丸组织MGMT表达可能具有抑制作用。     

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1在苯并(a)芘诱导人支气管上皮细胞DNA甲基化改变中的作用

目的 观察苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]诱导体外细胞DNA甲基化水平改变,探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP1]在该过程中的作用.方法 以1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、30.0 μmol/L浓度B(a)P分别处理人支气管上皮细胞(16HBE)及其PARP1缺陷细胞(16HBE-shPARP1)72 h.采用免疫荧光和高效毛细管电泳检测其基因组DNA整体甲基化水平改变,同时动态监测PARP1和DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferases 1,DNMT1)表达的变化.结果 16HBE和16HBE-shPARP1细胞基因组整体甲基化百分比(mCpG%)分别为(4.04±0.08)%和(9.69±0.50)%.经5-氮杂脱氧胞苷(DAC)处理72 h后,mCpG%值分别下降为(3.15±0.14)%、(6.07±0.54)%.经B(a)P染毒72 h后,16HBE细胞基因组mCpG%值[B(a)P浓度由低到高]分别为(5.10±0.13)、(4.25±0.10)、(3.91±0.10)、(4.23±0.27)、(3.70±0.15)、(3.08±0.07);16HBE-shPARP1细胞基因组mCpG%值(浓度由低到高)分别为(10.63±0.60)、(13.08±0.68)、(9.75±0.55)、(7.32±0.67)、(6.90±0.49)、(6.27±0.21).两种细胞不同处理组间mCpG%差异有统计学意义(F值分别为61.67、60.91,P值均＜0.01).16HBE细胞各剂量组[B(a)P浓度由低到高]PARP1基因mRNA相对表达水平分别为对照组的141.0%、158.0%、167.0%、239.0%、149.0%、82.9%,差异均有统计学意义(t值分别为11.45、17.32、32.24、33.44、20.21、9.87,P值均＜0.01);16HBE-shPARP1细胞各剂量组(浓度由低到高)PARP1基因mRNA相对表达水平分别为对照组的169.0%、217.0%、259.0%、323.0%、321.0%、256.0%,差异有统计学意义(t值分别为9.06、15.92、22.68、26.23、37.19、21.15,P值均＜0.01).当B(a)P染毒剂量达5.0 μmol/L后,16HBE细胞各剂量组(浓度由低到高)DNMT1基因mRNA相对表达水平分别为对照组的125.0%、162.0%、275.0%、233.0%,差异有统计学意义(t值分别为12.74、24.92、55.11、59.07,P值均＜0.01);当B(a)P染毒剂量达2.0 μmol/L后,16HBE-shPARP1细胞各剂量组(浓度由低到高)DNMT1基因mRNA相对表达水平分别为对照组的135.0%、151.0%、180.0%、229.0%、186.0%,差异有统计学意义(t值分别为23.82、40.17、32.69、74.85、46.76,P值均＜0.01).结论 B(a)P诱导的16HBE细胞基因组整体甲基化水平降低可能是其恶性转化过程中早期重要的分子事件,PARP1可通过抑制DNMT1的酶活性来调节B(a)P诱导的16HBE细胞DNA甲基化水平,这种效应可因PARP1的缺失而缓解.

Abstract：

Objective To investigate DNA methylation variation in human cells induces by B (a)P, and to explore the role of PARP1 during this process. Methods The changes of DNA methylation of 16HBE and its PARP1-deficient cells exposed to B ( a ) P ( 1.0, 2. 0, 5.0, 10. 0, 15.0, 30. 0 μ mol/L ) were investigated by immunofluorescence and high performance capillary electrophoresis, and simultaneously, the expression level of PARP1 and DNMT1 were monitored dynamically. Results The percentage of methylated DNA of overall genome ( mCpG% ) in 16HBE and 16HBE-shPARP1 cells were separately (4. 04 ±0. 08) %and (9. 69 ±0. 50)%. After being treated by 5-DAC for 72 hours,mCpG% decreased to (3.15 ±0. 14)%and (6. 07 ± 0. 54 ) %. After both being exposed to B (a) P for 72 hours, the mCpG% in 16HBE group ( ascending rank ) were separately ( 5. 10 ± 0. 13 ), ( 4. 25 ± 0. 10 ), ( 3.91 ± 0. 10 ), ( 4. 23 ± 0. 27 ),(3.70 ± 0. 15 ), ( 3.08 ± 0. 07 ); while the figures in 16HBE-shPARP1 group ( ascending rank ) were respectively (10.63 ±0.60), (13.08 ±0.68), (9.75 ±0.55), (7.32 ±0.67), (6.90 ±0.49) and (6. 27 ±0. 21 ). The difference of the results was statistically significant ( F values were 61.67 and 60. 91,P＜ 0.01 ) . For 16HBE group, expression of PARP1 and DNMT1 were 141.0%, 158.0%, 167.0%,239. 0%, 149. 0% ,82. 9% and 108. 0%, 117.0%, 125.0%, 162. 0% ,275. 0% ,233.0% comparing with the control group, whose difference also has statitical significance (t values were 11.45,17. 32,32. 24,33.44,20.21 and 9. 87 ,P ＜ 0. 01 ). For 16HBE-shPARP1 group, expression of PARP1 and DNMT1 were 169.0% ,217.0%, 259.0%, 323.0% , 321.0% , 256.0% and 86.0% , 135.0% , 151.0% , 180.0%,229. 0%, 186. 0% comparing with the control group,with statitical significance (t values were 9. 06,15. 92,22. 68,26. 23,37. 19 and 21.15, P ＜ 0. 01 ). When the dose of B (a) P reached 5.0 μmol/L, the mRNA expression of DNMTI in 16HBE group (ascending rank) were 125.0%, 162. 0% ,275.0% ,233.0% times of it in control group, with statistical significance ( t values were 12. 74,24.92,55. 11,59. 07, P ＜ 0. 01 );while the dose of B(a) P reached 2.0 μmol/L, the mRNA expression of DNMT1 in 16HBE-shPARP1 group were 135.0%, 151. 0%, 180. 0% ,229.0%, 186. 0% of the results in control group, and the differences were statistically significant ( t values were 23. 82,40. 17,32. 69,74. 85,46. 76, P ＜ 0. 01 ). Conclusion The hypomethylation of 16HBE cells induced by B(a)P might be one important molecular phenomenon in its malignant transformation process. It suggests that PARP1 could regulate DNA methylation by inhibiting the enzyme activity of DNMT1, and this effect could be alleviated by PARP1-deficiency.     

免疫组织化学染色检测食管组织MGMT和P53蛋白的表达及其相关性

目的探讨MGMT在食管上皮单纯增生、非典型增生、原位癌和浸润癌组织的表达及其与P53的关系。方法应用免疫组化(EnVision二步法)检测21例正常上皮、39例单纯增生上皮、17例非典型增生、12例原位癌以及140例浸润癌组织中MGMT及P53蛋白的表达及其相关性。结果MGMT蛋白表达强度在原位癌和非典型增生上皮最高,浸润癌组织次之,单纯增生上皮和正常上皮表达较低,统计学分析其差别有统计学意义(F=3.022,p<0.05)。P53在正常上皮不表达,从单纯增生上皮→非典型增生上皮表达逐渐增强,在原位癌和浸润癌组织中表达强度最强。统计学分析各组表达强度存在差异(F=16.18,p<0.01)。MGMT和P53的相关分析结果显示,在癌组织MGMT与P53蛋白之间的表达呈负的相关关系,(rs=-0.415,p<0.01)。结论MGMT和P53蛋白在食管组织癌变的过程中的表达改变可能与食管癌发生有关。