二氢杨梅素对H202诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的：研究二氢杨梅素（DMY）对过氧化氢（H02）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响并探讨其作用机制。方法：用不同浓度DMY（5μg·mL^-1,20μg·mL^-1,80μg·mL^-1）预处理保护HUVECs 12h,再用0．5mmol·L^-1H202干预12h,用MTT法检测细胞活力;用Hoechst33258进行细胞核染色;并取上清液检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;用流式细胞仪分别测活性氧（ROS）和细胞内钙离子含量。结果：DMY能明显提高H202（0．5mmol·L^-1）损伤后HUVECs存活率（P〈0．05）,增加上清液SOD活性,降低MDA含量,减少细胞内ROS表达,下调细胞内钙离子浓度,其中DMY5ug-mL。时效果最明显。结论：DMY对H202诱导内皮细胞损伤具有保护作用,其机制与清除细胞内ROS,抑制细胞内钙离子介导的细胞凋亡相关,浓度以DMY5μg·mL^-1时效果最明显。     

穿山龙多糖影响NADPH氧化酶/ROS信号通路抗H2O2诱导的HUVECs细胞损伤作用研究

目的 检测穿山龙多糖(RDNP)是否可以通过影响NADPH氧化酶/ROS信号通路对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤产生保护作用.方法 H2O2作用HUVECs 4 h造成损伤,分别给予25、50、100、200、400、800 μg/mL RDNP进行干预,选取适当浓度进行后续实验.采用MTT法测定细胞活力;试剂盒检测 LDH、MDA、SOD、T-AOC、GSH-Px、ROS水平;Western Bolt及 qRT-PCR法检测Nox4、p22phox的蛋白及mRNA表达.结果 加入50、100和200 μg/mL浓度的RDNP与H2O2模型组间相比,活力增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).因此选择50、100、200 μg/mL RDNP剂量组进行实验.不同浓度RDNP均可以显著改善H2O2损伤,使细胞形态逐渐趋于正常,以200 μg/mL RDNP给药组的效果最为显著.RDNP可以降低H2O2损伤HUVECs模型中LDH、MDA及ROS的水平,并增强细胞内SOD、 GSH-Px、T-AOC活力;且从mRNA水平及蛋白水平抑制Nox4、p22phox的表达.结论 RDNP可以通过干扰NADPH氧化酶/ROS信号通路抑制H2O2造成的HUVECs氧化损伤,保护内皮细胞.     

阿魏酸川芎醇酯对氧化损伤内皮细胞ICAM-1表达的影响

观察川芎嗪衍生物阿魏酸川芎醇酯(TMPF)对H2O2引起的脐静脉内皮细胞(ECV304)氧化性损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法以H2O2损伤ECV304细胞建立氧化损伤模型,以川芎嗪(TMP)作为阳性对照药物,观察TMPF对氧化损伤的ECV304细胞的保护作用[按试剂盒说明测量微量丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用Real-Time PCR测定ICAM-1mRNA含量;采用Elisa检测ICAM-1蛋白表达]。结果与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内的MDA含量明显升高(P<0.01),TMP与TMPF各浓度保护组MDA含量明显低于H2O2损伤组(P<0.05或P<0.01),且TMPF保护组MDA含量均低于同剂量TMP保护组(P<0.05);与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞内的SOD水平明显降低(P<0.05或P<0.01),在12.5μmol.L-1 TMP保护组和TMPF保护组与H2O2损伤组相比差异无统计学意义(P>0.05),在TMP和TMPF的其他浓度上与H2O2损伤组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。H2O2可上调ICAM-1mRNA的含量,正常对照组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.245倍,25.0μmol.L-1 TMP保护组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.454倍,25.0μmol.L-1 TMPF保护组ICAM-1mRNA的含量为H2O2损伤组的0.376倍。H2O2损伤组细胞ICAM-1蛋白的表达量显著高于正常对照组(P<0.01),25.0μmol.L-1 TMP保护组ICAM-1蛋白的表达量低于H2O2损伤组(P<0.05),而25.0μmol.L-1 TMPF保护组ICAM-1蛋白的表达量显著低于H2O2损伤组(P<0.01)。结论 TMPF对H2O2引起内皮细胞氧化性损伤有明显的保护作用,能减少内皮细胞脂质过氧化物MDA的生成,提高SOD活性,TMPF能降低损伤细胞ICAM-1mRNA的含量及其蛋白表达。TMPF对氧化损伤内皮细胞中ICAM-1表达上调有较强的抑制作用,这可能是TMPF对内皮细胞氧化损伤保护作用的重要机制。     

黄秋葵总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的 观察黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）氧化应激损伤的影响。方法 采用MTT法检测黄秋葵总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）及一氧化氮（nitric oxide,NO）含量,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中内皮素-1（endothelin-1,ET-1）含量,采用二氯荧光乙酰乙酸盐法检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的表达水平。结果 黄秋葵总黄酮可以提高氧化应激损伤的HUVECs存活率,增加SOD活性,升高NO水平,降低MDA、ET-1水平,降低细胞ROS水平,升高eNOS的表达水平。结论 黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD、MDA、ET-1、NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白eNOS的表达有关。     

齐墩果酸对损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨齐墩果酸(oleanic acid,OA)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及其机制?方法:培养HUVECs,分为正常组?H2O2模型组?H2O2+OA (0.25 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (0.50 ?滋mol/L)组?H2O2+OA (1.00 ?滋mol/L)组?H2O2+维生素C(1.50 mmol/L)组?各组培养24 h后,通过MTT法检测细胞增殖能力,酶生化法测定上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,酶生化法测定细胞裂解液中的丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量?谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,流式细胞仪测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡率?结果:OA能够恢复H2O2损伤的细胞活力,减轻H2O2诱导的LDH释放,减少H2O2诱导的MDA生成,恢复H2O2损伤的GSH-Px和SOD活力,清除H2O2诱导的ROS,减轻H2O2诱导的细胞凋亡,提高HUVECs细胞NO的生成?结论:OA对损伤血管内皮细胞有保护作用,这与OA能够启动HUVECs细胞内抗氧化防御机制,清除细胞内的ROS,提高HUVECs细胞NO的生成,抑制H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡有关?     

桔梗多糖对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 研究桔梗多糖（PGP）对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法 建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;比色法测定细胞内乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性;DCFH-DA检测细胞内ROS;qPCR、Western Blot方法分别检测NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达。结果 与模型组相比,PGP预处理24h后,加入终浓度为600 μmol/L H2O2处理2h,LDH、MDA含量和细胞内ROS减少,SOD与GSH-Px活性增强,同时,PGP下调NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达水平。结论 PGP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制NADPH氧化酶2(NOX2)过表达有关。      

丹酚酸A 对H2O2 所致大鼠脑微血管内皮细胞氧化损伤保护的实验研究

目的 观察丹酚酸A 对H2O2所致大鼠脑微血管内皮细胞（RCMECs）氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机 制。方法 分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞,用H2 O2 损伤的方法建立氧自由基损伤模型。采用丹酚酸A 进行干预后,分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、血栓素B2（TXB2）水平、6- 酮基前列腺素1α（6-keto-PGF1α）的含量,以及细胞内和培养液中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果 H2O2致RCMECs 氧化损伤后,细胞LDH 释放水平、TXB2和MDA 的含量均明显增加,同时6-keto-PGF1α 含量和SOD 活性显著下降;而丹酚酸A 预处理后能呈浓度依赖性的降低RCMECs 氧化损伤后LDH 水平、TXB2含量和细胞内外的MDA 含量,提高受损细胞6-keto-PGF1α 的表达和细胞内外SOD 活性。结论 丹酚酸A 对H2O2所致RCMECs 氧化损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

内钙拮抗剂TMB-8对过氧化氢所致的培养牛主动脉内皮细胞损伤的保护作用

目的：观察内钙拮抗剂TMB－8对过氧化氢（H2O2）介导的血管内皮细胞损作的作用,方法：用10umol/L H2O2损伤内皮细胞,观察不同浓度TMB－8对损伤内皮细胞形态学的作用,检测乳酸脱氢酶（LDH）释放量,丙二醛（MDA）生成量,超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－PX）活性,结果：TMB－B能减轻内皮细胞形态学的改变,明显降低LDH释放,抑制MDA产物生成,保护SOD和GSH－PX的活性,结论：TMB－8对H2O2损伤的内皮细胞具有保护作用。     

柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护机制研究

目的探讨柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护作用及机制。方法培养H9c2细胞,利用H2O2（400μM,4h）建立心肌细胞损伤模型。设立空白对照组、心肌损伤模型组（H2O2组）、柴胡皂苷D组（4滋M）,加入柴胡皂苷D预作用3h后,换成含浓度为400滋MH2O2的完全培养基,继续培养4h后,应用多功能酶标仪检测细胞内活性氧水平,Hoechst33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡变化,利用检测试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）含量,同时利用荧光定量PCR（real-timePCR）技术检测过氧化物酶体增殖子活化受体（PPAR酌）、核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）基因水平的表达变化。结果Hoechst33258染色和流式细胞检测结果显示：与对照组比较,H2O2组凋亡细胞升高,而柴胡皂苷D组的凋亡细胞量明显少于H2O2组（均P＜0.05）;细胞内活性氧（ROS）含量检测结果显示：H2O2组的细胞内ROS含量明显高于对照组,而柴胡皂苷D组明显低于H2O2组（均P＜0.05）;与对照组比较,H2O2组细胞LDH、MDA含量明显升高,柴胡皂苷D组细胞LDH、MDA含量明显降低（均P＜0.05）;柴胡皂苷D组的PPARγ、Nrf2、HO-1在mRNA水平的表达较H2O2组升高（均P＜0.05）。结论柴胡皂苷D能够降低H2O2诱导H9c2心肌细胞产生的氧化应激反应,对心肌细胞具有保护作用。     

心脏微血管内皮细胞缺氧复氧时氧化应激时效研究

目的：研究不同缺氧复氧（H/R）时程下,心脏微血管内皮细胞内氧化应激的时效变化。方法：原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞。采用制备缺氧液与氮气饱和相结合方法制造细胞缺氧模型,复氧换用无血清DMEM培养基。培养的心脏微血管内皮细胞分为对照组和H∶1～4/R∶1 h组。用荧光显微镜、流式细胞仪定性或定量观测细胞内活性氧（ROS）水平。TBA法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛（MDA）产量。噻唑蓝法检测细胞生存率。结果：在H1～3 h内（R均为1 h）,细胞内ROS、MDA生成逐渐增加,H∶3 h/R∶1 h组ROS、MDA浓度最高,H∶4 h/R∶1 h组较H∶3 h/R∶1 h组ROS浓度降低（P〈0.05）,与对照组比,ROS、MDA浓度仍显著增加（P〈0.05）。细胞存活率随H/R时间延长逐渐降低。结论：H/R可造成心脏微血管内皮细胞内氧化应激水平增加,且在一定时程内呈进行性加重。     

木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞氧化损伤的作用及其机制。方法:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷预作用12 h后,采用H2O2诱导培养乳鼠心肌细胞氧化损伤模型,测定细胞存活率、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量、细胞内活性氧(ROS)水平及细胞内钙(Ca2+)超载的变化。结果:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷能明显提高H2O2损伤细胞存活率,提高细胞内SOD活性,降低胞内MDA和ROS生成量,同时使细胞内钙含量降低。结论:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对H2O2氧化损伤心肌细胞具有明显的保护作用,机制可能与其抑制脂质过氧化、抑制细胞内钙超载有关。     

维生素E对神经细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨维生素E对FeSO4和H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤模型的保护作用及其可能的机制。方法采用FeSO4和H2O2作用产生自由基的方法诱导建立PC12细胞氧化应激损伤模型。MTT比色法测定细胞活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力,免疫细胞化学法测定α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)阳性表达及dot blot法测定α7nAchR亚单位水平。结果与FeSO4和H2O2损伤组(0.136±0.015)进行比较,维生素E组(0.178±0.025)和EGCG组(0.181±0.029)均能明显提高PC12细胞的活细胞数量(P<0.01),提高SOD活力(15.29±0.79)U.mL-1对(17.37±0.76)U.mL-1、(17.90±0.44)U.mL-1,P<0.01,有效降低MDA的含量(4.51±0.20)mmol.L-1对(3.39±0.11)mmol.L-1、(3.20±0.15)mmol.L-1,P<0.01,明显上调α7nAChR的表达(0.0910±0.0272)对(0.1895±0.0392)、(0.1956±0.0322),P<0.01。结论维生素E对FeSO4和H2O2诱导建立PC12细胞氧化损伤模型具有明显的保护作用,其作用机制可能与维生素E清除自由基,抑制脂质过氧化过程和保护α7nAchR有关。     

异氟醚对Aβ25-35诱导大鼠PC12细胞氧化应激损伤的影响及海藻糖的保护作用

目的:探讨吸入麻醉药异氟醚对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠PC12细胞氧化应激损伤的影响,阐明海藻糖对其可能的预防及保护作用。方法:将大鼠PC12细胞随机分为正常对照组(Control组)、异氟醚组(Iso组)、Aβ25-35组(Aβ组)、异氟醚+Aβ25-35组(Iso+Aβ组)、异氟醚+Aβ25-35+海藻糖组(Iso+Aβ+Tre组)和海藻糖组(Tre组)。正常对照组,PC12细胞给予正常细胞培养基培养;Iso组,PC12细胞给予2%异氟醚;Aβ组,PC12细胞给予10 μmol·L^-1 Aβ25-35;Iso+Aβ组,PC12细胞给予2%异氟醚和10 μmol·L^-1 Aβ 25-35;Iso+Aβ+Tre组,PC12细胞给予2%异氟醚、10 μmol·L^-1 Aβ25-35和200 mmol·L^-1海藻糖;Tre组,PC12细胞给予200 mmol·L^-1海藻糖。采用MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33342荧光染色检测细胞凋亡率;二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光法检测细胞中活性氧(ROS)水平;化学发光法测定细胞中丙二醛(MDA)水平,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化氢酶(CAT)活性。结果:与正常对照组比较,Iso组、Aβ组和Iso+Aβ组PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞中ROS和MDA水平(P<0.05或P<0.01)明显升高,细胞中SOD、GSH-Px和CAT活性明显降低(P<0.05或P<0.01);与Iso和Aβ组比较,Iso+Aβ组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),但细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞中ROS、MDA水平(P<0.05)明显升高,细胞中SOD和GSH-Px和CAT活性明显降低(P<0.05);与Iso+Aβ组比较,Iso+Aβ+Tre组细胞凋亡率(P<0.05)明显降低,细胞存活率明显升高(P<0.05),细胞中ROS和MDA水平明显降低(P<0.05),细胞中SOD、GSH-Px和CAT活性明显升高(P<0.05)。结论:吸入麻醉药异氟醚能够加剧Aβ25-35诱导PC12细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,海藻糖能够通过抗氧化和抗凋亡作用拮抗异氟醚的细胞毒性。     

曲前列环素通过下调Erk磷酸化水平抑制血小板衍生生长因子诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖

目的: 探讨曲前列环素(Trep)对血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PAMSCs)增殖的影响及其潜在的机制。方法: 体外培养大鼠PASMCs,实验分2阶段进行。第1阶段将细胞分为4组：对照组、PD98059(Erk磷酸化抑制剂)组、PDGF组和PDGF+ PD98059组;第2阶段也分为4组：对照组、Trep组、PDGF组和PDGF+Trep组。PD98059组用50 μmol·L-1 PD98059处理,Trep组用5 μmol·L-1 Trep处理,PDGF组均用20 μg·L-1 PDGF处理, PDGF+PD98059组用50 μmol·L-1 PD98059+20 μg·L-1 PDGF共处理,PDGF+Trep组用5 μmol·L-1 Trep和20 μg·L-1 PDGF共处理。24 h后光镜下观察细胞形态;MTT法测定PAMSCs增殖活性;蛋白质印迹法测定各组细胞内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、p-Erk1/2及t-Erk1/2蛋白的相对表达量,并计算p-Erk/t-Erk比值。结果： 第1阶段：PDGF组细胞密度、细胞增殖活性、PCNA表达量及p-Erk/t-Erk比值均明显高于对照组(P均<0.05);PDGF+ PD98059组细胞增殖活性、PCNA表达量及p-Erk/t-Erk比值明显低于PDGF组(P均<0.05)。第2阶段：PDGF组细胞密度、细胞增殖活性、细胞内PCNA表达量及p-Erk/t-Erk比值明显高于高于对照组;PDGF+Trep组细胞密度、细胞增殖活性、PCNA表达量及p-Erk/t-Erk比值明显低于PDGF组(P<0.05)。结论： 曲前列环素通过可抑制血小板衍生生长因子诱导的大鼠PASMCs增殖,与下调Erk1/2磷酸化水平有关。     

灰树花多糖对四氯化碳肝L-02细胞损伤的保护作用

目的 探讨灰树花多糖（PGF）对四氯化碳诱导的肝L-02细胞损伤的保护作用。 方法 培养人肝L-02细胞,建立CCl4肝细胞损伤模型,分组实验：正常对照组、CCl4损伤组和不同浓度的PGF（50 、100、200和400μg/mL）保护组。采用形态学观察,MTT检测,生化分析培养液中ALT、AST活性及细胞内SOD活性、MDA含量,流式细胞仪检测线粒体膜电位、荧光探针观测胞内Ca2+浓度;Western blot检测细胞bcl-2、bax蛋白表达。结果与CCl4损伤组相比,各PGF保护组细胞活力明显增强,上清液中ALT、AST活性明显降低; 细胞内SOD明显升高、Ca2+浓度MDA含量降低,细胞bcl-2的表达上调、 bax的表达下调。以100μg/mL浓度保护效果最佳。结论 PGF对CCl4诱导的肝L-02细胞损伤有明显的保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制肝细胞内Ca2+浓度的升高、改变凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达水平,有效地防止线粒体膜电位的下降、减少细胞凋亡有关。