miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34cmimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81．16％。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P〈0．05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长

目的 探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径。 方法 脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况。细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力。Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况。 结果 转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P<0.05)。miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P<0.05)。 结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标。     

芦荟大黄素调控miR-30b促进子宫内膜癌细胞自噬的研究

目的探讨芦荟大黄素(AE)调控子宫内膜癌细胞HEC-1-B中miR-30b表达促进细胞自噬的作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测miR-30b在正常子宫内膜细胞和不同子宫内膜癌细胞株HEC-1-A、HEC-1-B、RL95-2中的表达水平。取miR-30b表达水平最高的HEC-1-B癌细胞分为HEC-1-B癌细胞组、miR-30b inhibitor NC组(转染miR-30b inhibitor NC)、miR-30b inhibitor组(转染miR-30b inhibitor)以及AE组(30μmol/L AE,未转染)和AE+转染组:AE+miR-30b mimics NC组(30μmol/L AE,转染miR-30b mimics NC)、AE+miR-30b mimics组(30μmol/L AE,转染miR-30b mimics)。q RT-PCR法检测各组细胞miR-30b表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色法检测各组细胞自噬率;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3-I、LC3-II和p62表达水平。结果与人正常子宫内膜上皮细胞相比,HEC-1-A、HEC-1-B和RL95-2癌细胞中miR-30b表达水平显著升高(P0.05)。其中HEC-1-B癌细胞中miR-30b表达水平最高,所以后续将选择HEC-1-B癌细胞进行转染实验。与HEC-1-B癌细胞组和miR-30b inhibitor NC组相比,miR-30b inhibitor组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著升高(P0.05)。与HEC-1-B癌细胞组相比,AE组和AE+miR-30b mimics NC组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著升高(P0.05)。与AE+miR-30b mimics NC组相比,AE+miR-30b mimics组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著升高(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著降低(P0.05)。结论子宫内膜癌细胞中miR-30b表达较高,AE可能通过抑制miR-30b表达,促进癌细胞自噬和凋亡,抑制癌细胞增殖,而过表达miR-30b可逆转AE发挥的作用。     

miR-205对Ⅱ型子宫内膜癌细胞生物学行为的调控作用研究

目的 通过实验研究下调miR-205的表达对Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖、侵袭力的影响及对裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用,以探讨将miR-205作为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗的潜在靶点的可能性。方法 利用脂质体Lipofectamine 2000将miR-205抑制物转染入Ⅱ型子宫内膜癌细胞HEC-1-B中;利用Q-RT-PCR检测转染后各组细胞中miR-205的表达情况;CCK-8检测细胞增殖能力变化情况;Transwell实验检测穿膜细胞数变化情况;利用BALB/c免疫缺陷裸鼠建立Ⅱ型子宫内膜癌皮下移植瘤模型,并测量各组移植瘤的瘤体重量。结果 Q-RT-PCR结果显示,转染miR-205抑制物组细胞中的miR-205表达水平显著低于无关序列组和空白对照组（P<0.01）;下调miR-205表达量对HEC-1-B细胞的增殖和侵袭力均有抑制作用,并能显著降低裸鼠移植瘤的瘤体体积及重量（P<0.01）。结论 在Ⅱ型子宫内膜癌中,miR-205表现出癌基因的生物学行为,下调miR-205的表达可以显著降低Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的增殖侵袭能力,miR-205的过表达可能参与了Ⅱ型子宫内膜癌的发生、发展及侵袭转移过程,miR-205将有望成为Ⅱ型子宫内膜癌的生物靶向治疗的新靶点。     

曲古霉素A对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及相关机制

【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。【方法】应用不同浓度的TSA处理子宫内膜癌HEC-1B细胞72 h,Western blotting法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平及p21蛋白,荧光定量PCR方法检测p21基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】经TSA作用后,人子宫内膜癌HEC-1B细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA及蛋白表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。【结论】TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。     

miR-34c抑制人子宫内膜癌的机制分析

目的 MicroRNAs (miRNAs)是内源性表达长度约为22个核苷酸的小RNA分子,通过结合到靶mRNA上而抑制基因的表达。近年的研究表明某些miRNAs可以调节肿瘤细胞的增殖与迁移,然而miRNA在子宫内膜癌中的作用有待于进一步探索。本研究旨在探讨miR-34c在人子宫内膜癌中的表达规律、功能和分子机制。 方法 通过荧光定量PCR技术检测20例人子宫内膜癌组织标本中miR-34c的表达。通过阳离子脂质体介导的方法将miR-34c转染入人子宫内膜癌细胞RL95-2中,应用MTS法检测子宫内膜癌细胞的增殖,克隆形成实验检测子宫内膜癌细胞的生长,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测子宫内膜癌细胞的迁移。生物信息学和荧光素酶报告基因实验确认miR-34c作用的靶基因。RNAi技术下调c-Met的表达。通过蛋白印迹检测miR-34c对c-Met蛋白以及细胞内重要信号通路与细胞周期相关蛋白的影响。 结果 miR-34c在子宫内膜癌中表达明显降低。miR-34c能使子宫内膜癌细胞RL95-2细胞周期滞留在G₁期,显著抑制细胞的增殖。细胞移形实验发现miR-34c能够显著抑制RL95-2细胞迁移。生物信息分析表明c-Met是miR-34c作用的靶基因,进一步通过荧光素酶报告基因实验得以证实。蛋白印迹分析发现miR-34c能下调RL95-2细胞中的c-Met蛋白、p-Akt蛋白以及p-ERK1/2蛋白表达情况,同时还能够下调CDK4、CDK6蛋白以及p-Rb蛋白的表达水平。RNAi技术下调c-Met的表达能够明显抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移。 结论 本研究结果证明miR-34c通过作用于靶基因c-Met而抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移,说明miR-34c是子宫内膜癌中的重要抑癌基因。      

芦荟大黄素诱导人子宫内膜癌细胞HEC-1-B凋亡及其机制的研究

目的探讨芦荟大黄素对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B凋亡及机制的研究。方法应用芦荟大黄素(0、20、40、80μmol/L)处理HEC-1-B细胞后,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;用Western Blot方法检测Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果芦荟大黄素明显抑制HEC-1-B细胞增殖,能够诱导HEC-1-B凋亡,Caspase-3、Bax蛋白表达水平明显增加,Bcl-2蛋白表达水平明显下降。结论芦荟大黄素能明显抑制HEC-1-B生长,促进HEC-1-B凋亡,这可能与Caspase-3和Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达降低相关。     

MiR-200c调控ZEB1抑制子宫内膜癌细胞增殖和侵袭

目的:探讨miR-200c调控子宫内膜癌(EC)细胞增殖和侵袭的机制。方法:蛋白印迹和RT-PCR法检测miR-200c、ZEB1和E-cadherin在EC细胞株中的表达。CCK-8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭力。结果:miR-200c在Ⅱ型EC细胞(HEC-1A和AN3CA)中显著低表达(2.63±0.41和2.83±0.47)。ZEB1在Ⅰ型EC细胞中不表达,而在Ⅱ型EC细胞中高度表达(0.52±0.34和0.81±0.45)。E-cadherin在Ⅰ型EC细胞中高度表达(1.58±0.44和1.01±0.36),而在Ⅱ型EC细胞中极低表达。转染pre-miR-200c后抑制Ⅱ型EC细胞增殖和侵袭能力,A450值分别为1.38±0.27和1.91±0.31,增加AN3CA细胞中E-cadherin的表达。结论:在Ⅱ型EC细胞中miR-200c表达与ZEB1表达呈显著负相关,与E-cadherin表达呈正相关。miR-200c过表达明显抑制Ⅱ型EC细胞增殖和侵袭,miR-200c负性调控ZEB1,参与E-cadherin介导的肿瘤上皮-间质转化。     

罗哌卡因诱导子宫内膜癌生长阻滞和氧化损伤

目的 研究罗哌卡因对子宫内膜癌生长阻滞和氧化损伤的影响。方法 选择子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞进行研究。采用CCK8法检测HEC-1B和Ishikawa细胞活性,最终选择1 mM的罗哌卡因处理HEC-1B和Ishikawa 细胞。克隆形成试验,流式细胞术,Transwell试验和微管形成试验分别检测细胞增殖,凋亡,侵袭及微管形成结节数;采用Western Blot检测E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达量。试剂盒检测HEC-1B和Ishikawa细胞中ROS、8-OHdG、ATP和线粒体超氧化物的表达量。结果 罗哌卡因能抑制HEC-1B和Ishikawa细胞增殖,侵袭及微管形成,并促进细胞凋亡。同时罗哌卡因能抑制 Vimentin和VEGF蛋白的表达量,促进E-cadherin蛋白的表达量。另外,HEC-1B和Ishikawa细胞中ROS、8-OHdG 和线粒体超氧化物的表达水平显著增加,ATP的表达水平显著降低。结论 罗哌卡因抑制HEC1B和Ishikawa 细胞增殖,侵袭及微管形成,并促进细胞凋亡和氧化损伤。     

siRNA沉默PTTG表达对子宫内膜癌细胞生长及放疗敏感性的影响

目的:观察垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)干扰对子宫内膜癌细胞HEC-1A的生长及放疗敏感性的影响?方法:构建PTTG干扰载体(pSilencer3.0-Hl-PTTG-siRNA),利用脂质体将其转染至HEC-1A细胞,Western blot检测PTTG蛋白表达水平,筛选干扰效果最强的序列?另用2Gy X线作用于转染PTTGsiRNA的HEC-1A细胞,同时设不予任何处理的对照组?只转染PTTGsiRNA的处理组?只用X线处理的放疗组?MTT检测细胞生长状况,流式细胞仪检测细胞凋亡?结果:成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体?MTT实验结果显示,与对照组相比,放疗组?PTTGsiRNA转染组?PTTGsiRNA联合放疗组细胞增殖抑制率分别为(31.39 ± 5.62)%?(38.37 ± 5.48)%?(54.65 ± 6.27)%?流式细胞仪检测显示细胞凋亡率在对照组? 放疗组?PTTGsiRNA转染组?PTTGsiRNA转染联合放疗组中分别为(6.53 ± 0.80)%?(32.72 ± 4.56)%?(38.96 ± 4.37)%?(64.76 ± 6.53)%?PTTGsiRNA转染组或放疗组与对照组比较,细胞凋亡率及细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P < 0.01),而PTTGsiRNA转染联合放疗组的凋亡率及细胞增殖抑制率较PTTGsiRNA转染组或放疗组明显增高,组间比较差异均有统计学意义(P < 0.01)?结论:成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体,PTTG siRNA可抑制子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖,诱导其凋亡,增强其对放疗的敏感性?     

微小RNA-1180转染对肾癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-1180(miR-1180)转染对肾癌细胞系786-O和ACHN生长的影响.方法 肾癌细胞分为两组:dsControl组和miR-1180组.实时定量(qRT)-PCR检测p21 mRNA的表达变化.Western blot检测p21、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达变化.流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化,使用多靶扫描法(MTS)和集落形成实验检测细胞活力和增殖能力.结果 qRT-PCR结果显示,与对照组相比,转染miR-1180后786-O和ACHN细胞中p21 mR-NA水平分别上调2.54倍(P＜0.01)和2.49倍(P＜0.01).p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调.FCM结果显示,转染miR-1180后,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,表明细胞周期被阻滞在Go/G1期.MTS结果显示,与dsControl组相比,转染miR-1180后,两种肾癌细胞活力明显降低.集落形成实验显示,miR-1180组的集落数数量明显较少,表明细胞增殖能力降低.结论 miR-1180能显著激活肾癌细胞中p21蛋白的表达,并抑制肾癌细胞786-O和ACHN的生长.     

蛋白酶体抑制剂MG132对人子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞增殖、凋亡和周期的影响

【摘要】 目的 了解蛋白酶体抑制剂三肽基乙醛（Z-Leu-Leu-Leu-cho, MG132）抗人子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞的活性,研究MG132治疗人子宫内膜癌的潜在应用价值。方法 用不同浓度的MG132(0,0.2,0.5,1.0 μmol/L)处理HEC-1B和Ishikawa细胞24 h、48 h,采用MTT法检测MG132对HEC-1B和Ishikawa细胞增殖的影响;应用流式细胞术分别检测0.5 μmol/L MG132处理24 h后两种细胞的凋亡率和细胞周期分布。结果 MG132能抑制HEC-1B和Ishikawa细胞增殖,在本研究浓度范围内MG132浓度增高对两种细胞的抑制作用增强（P<0.01）,48 h抑制作用强于24 h(P<0.01),Ishikawa细胞对MG132的敏感程度大于HEC-1B细胞。MG132处理HEC-1B和Ishikawa细胞后凋亡率均增加（P=0.000）,细胞周期分析显示HEC-1B细胞G2期细胞比例增加（P<0.05）,Ishikawa细胞G1和G2细胞比例增加（P<0.05）。结论 蛋白酶体抑制剂MG132对HEC-1B和Ishikawa细胞有增殖抑制、诱导凋亡和阻滞细胞周期的作用。MG132可能成为潜在的子宫内膜癌化疗药物。     

紫杉醇诱导人子宫内膜癌细胞增殖凋亡的实验研究

目的:探讨紫杉醇对体外培养的人子宫内膜癌细胞(HEC-1-B)凋亡的诱导作用. 方法:体外培养的HEC-1-B细胞,用终浓度2, 4, 8,16,20 nmol/L的紫杉醇作用48 h后,荧光染色检测细胞凋亡的发生情况、caspase-3及其抑制剂紫杉醇在诱导细胞凋亡中的作用. 结果:共聚焦检测活细胞内钙离子的动态变化与Caspase-3半胱氨酸蛋白酶中细胞凋亡,使HEC-1-B细胞在活化过程中起了关键性的因素. 结论:HEC-1-B对紫杉醇具有药物敏感性,紫杉醇对HEC-1-B细胞的杀伤作用,是通过诱导细胞凋亡途径实现的.     

Phosphatase and tensin homolog gene inhibits the effect induced by gonadotropin-releasing hormone subtypes in human endometrial carcinoma cells

Background Type I gonadotropin-releasing hormone （GnRH-l） agonists have been applied for the treatment of steroid-dependent tumors such as breast carcinoma, ovarian cancer and prostatic carcinoma. But the mechanism has not been clarified yet. There are few reports about the treatment of endometrial carcinoma using GnRH-l agonists. Type II GnRH （GnRH-ll） is a new subtype of GnRH. Our aim was to investigate the effects of GnRH-l agonists and GnRH-ll on estrogen receptor-negative human endometrial carcinoma cells and the effect from phosphatase and tensin homolog gene （PTEN） to them.Methods A lentiviral vector-mediated RNAi method was used to establish a PTEN-negative HEC-1A cell clone （HEC-1A-ND）. MTT and flow cytometry were used to detect the cell proliferation, cell cycle and apoptosis of HEC-1A, HEC-1A-NC and HEC-1A-ND cells after treatment with GnRH-l agonist Triptorelin （10-11 mol/L to 10-5 mol/L） or GnRH-ll （10-11 mol/L to 10-5 mol/L）. Western blotting was used to detect AKT and ERK1/2 activation after treatment with different concentrations of Triptorelin or GnRH-ll for 30 minutes in the above mentioned three kinds of cells. Results Triptorelin and GnRH-ll induced apoptosis and inhibited proliferation of HEC-1 A, HEC-1A-ND and HEC-1A-NC in a dose-dependent manner. This effect was augmented in HEC-1 A-ND cells in which PTEN gene was knocked-down. Furthermore, Triptorelin and GnRH-ll inhibited the AKT and ERK activity in HEC-1 A-ND cells.Conclusions Triptorelin and GnRH-ll can promote apoptosis rate and inhibit cell proliferation of estrogen receptor-negative endometrial carcinoma cells in a dose-dependent manner. PTEN gene can inhibit the effects of Triptorelin or GnRH-ll on human endometrial carcinoma cells.     

二甲双胍在体外对人子宫内膜癌细胞增殖的影响

目的流行病学研究表明二甲双胍可以降低糖尿病患者患癌的风险性和癌症相关的死亡率,本实验进一步探讨二甲双胍在体外对人子宫内膜癌细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法二甲双胍干预人子宫内膜癌Ishikawa和HEC-1A细胞不同时间后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blotting法检测ERα及PTEN的表达。结果二甲双胍显著抑制两种子宫内膜癌Ishikawa和HEC-1A细胞的增殖。流式细胞术检测显示二甲双胍使子宫内膜癌细胞停滞在G0/G1期,并且可以诱导细胞的凋亡。Western blotting法检测显示二甲双胍能够促进子宫内膜癌细胞ERα的表达;Ishikawa细胞无PTEN蛋白的表达,HEC-1A细胞则高表达PTEN。结论二甲双胍能抑制子宫内膜癌细胞的生长,其作用机制可能与促进ERα的表达有关。