博莱霉素诱导肺纤维化小鼠模型的建立及特征

目的探讨博莱霉素气管灌注诱导肺纤维化小鼠模型在不同时期分子生物学及组织病理学的改变。方法 6～8周龄C57BL/6小鼠60只,30只为正常对照组,30只以博莱霉素2.5 mg/kg单次气管灌注建立小鼠肺纤维化模型（模型组）,以肺组织病理学形态及基因表达水平为指标,判断模型小鼠肺纤维化发展阶段。结果正常对照组小鼠的肺组织无明显病理改变,模型组小鼠肺部有不同程度的肺泡结构破坏、炎性细胞浸润以及大量以胶原为主的细胞外基质沉积。基因表达检测结果显示:模型组灌注博莱霉素1～2周,小鼠肺组织白介素（IL）-4、IL-13较正常对照组升高,而3～5周模型组与正常对照组无差异（P>0.05）。模型组肺组织中胶原基因Colla2、Cola13、结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）均较正常对照组有不同程度的升高,与组织病理学改变一致。结论博莱霉素2.5 mg/kg单次气管灌注可成功建立肺纤维化小鼠模型;博莱霉素灌注早期以肺部炎性浸润为主,第3周时肺纤维化达到高峰,第5周开始纤维化有所缓解。     

肺特灵Ⅲ对博莱霉素致小鼠肺纤维化的影响

目的观察肺特灵Ⅲ对博莱霉素致小鼠肺纤维化的干预作用。方法通过气管内注射博莱霉素制作小鼠肺纤维化模型,给予肺特灵Ⅲ灌胃（ig）治疗14d后,进行肺系数、肺组织病理形态及羟脯氨酸（HYP）、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）等血清和肺组织中生化指标水平的测定和分析,观察肺特灵Ⅲ对小鼠肺纤维化的影响。结果经肺特灵Ⅲ治疗后,与模型组相比,各组小鼠肺系数和HYP含量显著降低,小鼠血清中T-AOC增强、MDA含量明显降低,肺组织中GSH含量明显增加,肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻。上述变化均有统计学意义（皆P〈0.05或〈0.01）。结论肺特灵Ⅲ对博莱霉素致鼠肺纤维化早期病变有一定的治疗作用,其机制可能与抑制炎症细胞的浸润活化、抗氧化作用及抑制胶原的形成有关。     

肺特灵Ⅵ号对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的干预作用及其机制

目的观察肺特灵Ⅵ号对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的干预作用。方法采用气管内注入博莱霉素法制备小鼠肺纤维化模型。给药28d后处死,计算肺系数;观察肺脏病理形态学改变,并对肺泡炎和肺纤维化程度进行评分;测定小鼠肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T-AOC）与羟脯氨酸（HYP）等生化指标。结果与模型组相比,肺特灵Ⅵ号各剂量组可明显增加小鼠体质量,降低肺系数,减轻肺泡炎与肺纤维化程度,提高肺组织SOD活性与T-AOC,降低MDA与HYP含量（P〈0.05或〈0.01）。结论肺特灵Ⅵ号对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化有一定的防治作用。     

博莱霉素与博莱霉素A5诱导小鼠肺组织损伤的差异

目的探讨静脉注射博莱霉素(BLM)和博莱霉素A5(BLM-A5)对小鼠肺组织损伤的不同作用。方法8周龄雌性C57BL/6小鼠49只,随机分为BLM组19只、BLM-A5组20只和对照组10只,分别经尾静脉一次性注射BLM 150 mg/kg、BLM-A5 150 mg/kg和生理盐水。观察每组小鼠体重、生存率,肺组织病理改变及肺组织羟脯胺酸的含量。结果①BLM组和BLM-A5组小鼠最低体重分别为静脉注射处置前的65.46%和66.87%,均较对照组明显降低(P值均小于0.001)。②BLM组、BLM-A5组和对照组小鼠的生存率分别为:43%、55%和100%。③BLM组小鼠注射处置后28 d,在胸膜下及血管周围形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,而BLM-A5组无明显纤维化形成。BLM组与BLM-A5组、正常组比较,肺纤维化病理评分均明显增高(P值均小于0.001)。④BLM-A5组和对照组注射处置后28 d,右肺羟脯氨酸含量分别为471.6±49.4 nmol和405.0±74.6 nmol,两组间无统计学差异。BLM组为978.4±106.1 nmol,与BLM-A5组、对照组比较分别存在显著性差异(P值均小于0.01)。结论静脉注射BLM与BLM-A5,对小鼠肺组织损伤的作用存在着明显的差异,BLM可导致肺间质形成广泛的纤维化,而BLM-A5仅引起轻微的肺组织损伤,不形成明显的间质纤维化。     

水通道蛋白4基因敲除对老年小鼠行为和脑形态变化的影响

目的：观察AQP4基因敲除（AQP4^-/-）对老年小鼠行为学和脑形态学变化的影响,揭示AQP4在脑老化中的作用。方法：58只CD-1小鼠按基因型与月龄分为4组：年轻（2~3个月龄）AQP4-/-组、老年（17~19个月龄）AQP4^-/-组、年轻AQP4^+/+组和老年AQP4^+/+组。采用开场试验测定小鼠运动量和探究行为,脑切片进行神经元特异性染色（甲苯胺蓝染色、NeuN染色）、星形胶质细胞特异性染色（GFAP染色）和小胶质细胞特异性染色（Iba-1染色）,观察并计数皮层和海马神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞的形态和数量。结果：与年轻小鼠比较,老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠在开场试验的总活动距离分别减少41.2%和44.1%（P<0.05）,各组小鼠在中心区域的活动距离和滞留时间无差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠皮层神经元密度分别降低19.6%和15.8%（P<0.05）,各组间CA1区神经元胞体层厚度无差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠海马CA3区星形胶质细胞密度分别增加57.7%和64.3%（P<0.001）,各组间星形胶质细胞的总面积无显著差异;老年AQP4^+/+和AQP4^-/-小鼠海马CA3区小胶质细胞的面积分别增加46.9%和52.0%（P<0.01）,各组间小胶质细胞密度无显著变化。与AQP4^+/+小鼠相比,AQP4^-/-小鼠在海马CA3区星形胶质细胞总面积明显减小,年轻小鼠减小18.0%（P<0.01）,老年小鼠减小23.6%（P<0.01）,其余指标均无显著差异。结论：AQP4可能影响小鼠星形胶质细胞形态及与星形胶质细胞相关的神经功能,对神经元、小胶质细胞的形态和部分相关神经行为无明显影响,AQP4基因敲除对小鼠脑老化过程发生的脑形态和神经行为变化无显著影响。     

乙胺嗪对博莱霉素致鼠肺纤维化影响的实验观察

博莱霉素(Bleomycin,BLM)是多肽类抗肿瘤药,单次气管内注射可复制出与人肺间质性疾病相似的动物模型,但其致病机制尚未完全阐明。我们观察了白三烯(leukotrienes,LTs)生物合成抑制剂乙胺嗪(Diethylcarbamazine,DEC)腹腔注射对BLM所致SD大白鼠肺间质纤维化实验及病理改变的影响,探讨白三烯在肺纤维化发病机理中的作用。1 材料与方法1.1 试剂及配制:博莱霉素A_5(天津河北制药厂)用生理盐水配成.2mg/ml;乙胺嗪(南京制药厂)配     

帕夫林通过抑制NLRP3形成减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的：探讨帕夫林（paeoniflorin,PA）对博莱霉素（bleomycin,BLM）诱导的小鼠肺纤维化的影响及其作用机制。方法：将60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：对照组（sham operation,SH）、对照组+帕夫林组（SH+PA）、模型组（BLM）、模型组+帕夫林（BLM+PA）;气管内滴注博莱霉素（2 mg/kg）建立小鼠肺纤维化模型,对照组气管内滴注生理盐水,从造模当天开始,SH+PA、BLM+PA组小鼠每日给予50 mg/kg帕夫林灌胃,SH、BLM组小鼠每日给予等量生理盐水灌胃;在造模第14天处死小鼠,留取小鼠肺组织。记录各组小鼠体重变化;统计各组小鼠生存率;HE染色法观察小鼠肺组织纤维化程度;肺组织匀浆羟脯氨酸定量评估肺组织胶原蛋白含量;ELISA法测定肺组织匀浆中白介素（interleukin,IL）-18、IL-1β含量;Western blot法检测肺组织匀浆中NLRP3、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）表达水平。结果：与对照组相比,帕夫林可显著提高小鼠生存率;经帕夫林治疗14 d后,小鼠肺组织纤维化病变较模型组减轻;小鼠肺组织胶原蛋白含量显著降低（P＜0.05）;小鼠外周血及肺组织中IL-18、IL-1β含量较模型组相比明显减少（P＜0.05）;与模型组相比,NLRP3蛋白水平以及TGF-β1蛋白表达水平显著下调（P＜0.05）。结论：帕夫林可减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度,其作用可能是通过抑制NLRP3炎症小体的形成发挥的。     

罗格列酮对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的影响

目的 采用博莱霉素(BLM)腹腔注射诱导大鼠肺纤维化的模型,探讨过氧化物体增殖活化受体γ激动剂(PPAR-γ)--罗格列酮对肺纤维化的治疗作用.方法 经腹腔给予BLM致大鼠肺纤维化模型,将实验大鼠随机分为3组,即对照组、模型组(BLM组)、干预组(罗格列酮组).于造模完成后第21天处死大鼠,取肺组织制备病理切片,行HE,Masson染色后评价各组模型肺组织形态学变化,测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)含量.结果 BLM组的肺组织炎症反应较明显;罗格列酮组与BLM组相比,肺组织HYP下降,肺纤维化程度减轻.结论 罗格列酮能通过活化PPAR-γ信号通路减轻大鼠肺纤维化,机制与干预炎症因子产生及纤维化过程有关.     

复方松及片提取物对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响

目的观察复方松及片(CFRB)对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响,初步探究复方松及片对肺纤维化的作用及其机制。方法采用气道滴入博莱霉素(2.5 mg/kg)制备肺纤维化模型,在造模后每日采用灌胃方式给予复方松及片提取物,对照组腹腔注射地塞米松。连续用药14 d后,采用生理盐水进行支气管肺泡灌洗(bronchoalveolarlavage fluid,BALF),收集BALF,ELISA法测定转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的含量。液氮速冻肺组织,-80℃保存,检测各组肺组织羟脯氨酸含量,以及PDE8A mRNA的表达。结果复方松及片提取物对博莱霉素气道滴入诱导的肺纤维化变化有一定的抑制作用,能改善肺组织的纤维化病理改变。复方松及片提取物能明显降低BALF中TGF-β的含量,且对磷酸二酯酶8A(PDE8A)的mRNA表达也有一定的抑制作用。结论复方松及片对博莱霉素诱导的肺纤维化有一定作用,提示复方松及片可能用于肺纤维化的治疗,同时PDE8A可能是肺纤维化的新靶点。     

槲皮素对博莱霉素致鼠肺纤维化的防治作用

目的：观察SD大白鼠腹腔内注射槲皮素对实验性博莱霉素致肺纤维化的防治作用。方法：通过博莱霉素致鼠肺纤维化的动物模型。动态观察各实验组与肺纤维化形成相关的第3、7、14、28天肺组织匀浆羟脯氨酸、脂质过氧化物（LPO）含量,动态观察肺组织病理学变化及形态学定量测量肺组织中炎症细胞数/每高倍视野、肺泡间隔宽度、单位过氧化物（LPO）含量,动态观察肺组织病理学变化及形态学定量测量肺组织中炎症细胞数/每高倍视野、肺泡间隔宽度、单位面积肺纤维化灶所占的分面积。结果：实验组与对照组相比,槲皮素组能显著地降低博莱霉素致肺纤维化程度。结论：槲皮素对博莱霉素致肺纤维化有一定的防治作用。     

温阳散纤汤对博来霉素诱导的小鼠肺间质纤维化的保护作用

目的 探讨温阳散纤汤对博来霉素诱导的小鼠肺间质纤维化的保护作用.方法 构建肺间质纤维化C57BL/6小鼠模型,并将造模成功小鼠随机分为模型组,温阳散纤汤低、中、高剂量组,阳性组,另设假手术及正常对照组,每组15只小鼠.HE染色观察肺组织结构变化.结果 正常组、假手术组小鼠肺组织结构正常;模型组小鼠肺间隔增宽,肺泡结构被...     

阿托伐他汀在C57BL/6小鼠肺纤维化ROCKⅡ信号通路中的作用

目的:探讨阿托伐他汀对小鼠肺纤维化模型的治疗作用及ROCKII信号转导通路在肺间质纤维化发病中的机制。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组,肺纤维化模型组(M),阿托伐他汀(5、10、20、40mg)干预组(B+A5、B+A10、B+A20、B+A40)。应用HE染色、免疫组化、Western-Blot方法,检测ROCKII的表达。结果:经阿托伐他汀干预后,形态学:B+A组纤维化较M组减轻(P<0.01)。免疫组化:B+A组的ROCKⅡ蛋白表达较M组减少(P<0.01);Western-Blot:B+A组ROCKⅡ蛋白表达量减少(P<0.01)。结论:阿托伐他汀可减轻小鼠肺纤维化ROCKII信号通路的通路表达。     

白介素-4在博莱霉素致大鼠肺纤维模型中的表达

目的:检测IL-4在博莱霉素致大鼠肺纤维化模型中的表达,从而探讨IL-4在肺纤维化发病机制中的作用.方法:体重170～190g的雌性wistar大鼠,立即气管内灌注博莱霉素5mg/(kg·bw)建立肺纤维化模型,设立生理盐水对照组.第7、14天分别处死大鼠,收获肺组织及血清,右肺行苏木精-伊红(HE)染色,左肺经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肺组织中IL-4mRNA的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中IL-4的水平.结果:灌注博莱霉素后第7天肺组织病变以肺泡炎为主,第14天肺内有纤维化病灶形成.模型组大鼠IL-4mRNA相对表达强度和IL-4蛋白质水平明显高于对照组,差异有显著性(P＜0.05).结论:在肺纤维化大鼠模型中IL-4的产生明显增高,IL-4在肺纤维化发病机制中具有重要作用.可将调节IL-4的产生及拮抗IL-4的作用作为肺纤维化治疗研究的新方向.     

替米沙坦对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用

目的研究替米沙坦对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用，并探讨其机制。方法雌性SD大鼠45只随机等分为三组：生理盐水对照组、博来霉素组（气管内注入博来霉素）及替米沙坦组（气管内注入博来霉素，并给予替米沙坦灌胃）。采用HE染色了解肺泡炎和肺纤维化的情况，酸解法测羟脯氨酸含量，ELISA检支气管肺泡灌洗液（BALF）中转化生长因子-β1（TGF—β1）水平的变化，并观察BALF中的细胞总数变化。结果替米沙坦组与博来霉素组比较，灌注后第7和14天肺泡炎轻；第28天肺纤维化减轻。博来霉素组肺羟脯氨酸含量增高，替米沙组减少。替米沙坦组BALF中的细胞总数第7和14天较博来霉素组少。替米沙坦组BALF中TGF—β1水平于各时间点低于博来霉素组。结论替米沙坦对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型有抑制作用，其机制可能与抑制TGF-β1水平有关。     

实验性小鼠肺纤维化过程中IL-31mRNA的动态表达及意义

目的:探讨博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠各时期肺组织中白细胞介素31(IL-31)mRNA的表达规律及其意义。方法:将48只雄性昆明种小鼠随机分为对照组(n=24)和实验组(n=24)。分别给予生理盐水和博莱霉素(5mg/kg)一次性气管内灌注,于灌注第7、14、21和28天处死小鼠,取肺组织,应用RT-PCR法测定其中的IL-31mRNA的相对转录水平。结果:1实验组肺组织中IL-31mRNA表达水平在第7、14、21天均高于对照组(P<0.05)。2实验组中IL-31mRNA表达从第7天开始升高,第21天达到高峰。结论:IL-31在肺纤维化形成过程中存在高表达,尤其在介导中后期肺纤维化进程中发挥重要作用。     

C型钠尿肽对博莱霉素介导的小鼠肺纤维化的保护作用

目的 观察C型钠尿肽对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的抑制作用.方法 经气管注射博莱霉素制作肺纤维化小鼠模型,将实验动物分为三组,包括空白对照组、博莱霉素处理组(BLM组)和C型钠尿肽干预组(CNP组),于第1、3、7、14天进行肺泡灌洗,回收各组肺泡灌洗液并检测炎性细胞和IL-1β量;记录药物处理后小鼠死亡率;第14天处死小鼠,取肺组织制备病理切片后评价各组模型肺组织形态学变化,测定肺组织匀浆中羟脯氨酸含量.结果 BLM组的肺纤维化和炎症反应较明显,死亡率高;CNP组与BLM组相比,肺纤维化程度减轻,炎性细胞较少,组织羟脯氨酸含量减低,死亡率下降.结论 C型钠尿肽能减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,与干预炎症因子的产生及纤维化过程有关.     

Krtippel样因子4在实验性肺纤维化小鼠肺组织中的表达及意义

目的探讨博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型中,Krtippel样因子4（KLF4）的表达及其意义。方法C57BL／6小鼠随机分为生理盐水对照组（Contr01）和博莱霉素组（BLM）,经气管内注入博莱霉素（2．5mg／kg）建立实验性小鼠肺纤维化模型,注入等量生理盐水作为对照组,分别于术后第12h、1d、2d、3d、7d、14d及28d取材,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原的沉积部位和数量,实时定量PCR法和免疫组织化学法分别检测各组肺组织中KLF4mRNA和蛋白表达水平。结果博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中,第1、2及3d表现为急性炎症;第7d炎症加重,并出现胶原沉积;第14d肺泡结构塌陷,胶原沉积明显;第28d肺泡结构基本正常,炎症程度和胶原沉积较轻。与对照组相比,博莱霉素组小鼠肺组织中KLF4mRNA的表达水平第1d开始升高,而后降低,第3d达最低后逐渐升高直至第28d。博莱霉素组小鼠肺组织中KLF4蛋白的表达趋势与mRNA水平基本一致,第1d开始升高,而后降低,第3d达最低后逐渐增加至第14d后再次降低。结论KLF4在博莱霉素致肺纤维化过程中呈现明显的动态变化,并可能参与了肺纤维化的发生与发展。     

当归对肺纤维化大鼠肺形态学及胶原的影响

目的　观察当归对博莱霉素所致的肺间质纤维化大鼠的肺形态学及胶原的影响 ,探讨其作用机制。方法　 36只大鼠随机分为对照组、模型组及当归组。气管内注入博莱霉素复制大鼠肺间质纤维化模型 ,次日当归组每日腹腔内注射当归注射液 15 0mg/kg,于第 7及第 2 8天每组分别处死 6只大鼠 ,观察肺间质纤维化形成的病理变化及血清Ⅰ型胶原的含量。结果　当归能明显减轻肺泡炎和肺纤维化程度 ,与模型组比较 ,当归组血清Ⅰ型胶原含量于第 7、 2 8天明显降低 (P均 <0 0 5 )。结论　当归能减慢肺间质纤维化的进程 ,对肺间质纤维化有一定的保护作用。     

水通道蛋白AQP4基因缺失加重NMDA诱导的小鼠脑损伤

目的:评价水通道蛋白AQP4在兴奋性氨基酸NMDA诱导脑损伤中起的作用。方法:在AQP4基因敲除小鼠,皮层注射NMDA 150 nmol诱导损伤。甲苯胺蓝染色评价损伤面积,Fluro-Jade B染色评价变性神经元,免疫组化法评价血脑屏障通透性增高。结果:与野生型小鼠比较,AQP4基因缺失加重NMDA诱导的皮层损伤,增加损伤区变性神经元密度,加重血脑屏障通透性的增高。结论:AQP4在NMDA诱导的脑损伤中可能起保护作用。