超声激活原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞膜功能的损伤研究

探讨超声结合原卟啉Ⅸ(PPⅨ)对S180肿瘤细胞膜功能的影响及其作用机制。采用频率为1.1 MHz,强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合1μg/mL的PPⅨ作用于S180肿瘤细胞,借助于流式细胞仪,采用荧光探针DCFH-DA(2',7'-二氯双氢荧光素双乙酸酯)、FD500(异硫氰酸荧光素钠标记的右旋糖酐)、DiBAC4(3)和Fluo3-AM分别检测胞内活性氧生成量、细胞膜通透性、质膜电位及胞内游离Ca2+的浓度变化。研究结果表明,超声结合PPⅨ比单纯超声或单纯PPⅨ对细胞膜功能损伤作用都强,这种损伤作用可能与影响质膜功能的活性氧含量、细胞膜通透性、质膜电位以及胞内游离Ca2+浓度变化相关。     

聚焦超声激活原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞的杀伤作用

目的初步研究超声激活原卟啉IX(PPIX)对S180肿瘤细胞的杀伤作用,并探讨其作用的生物学机制。方法采用频率为2·2MHz,强度为3W/cm2的聚焦超声,结合120μmol/L的PPIX作用于S180肿瘤细胞,通过台盼蓝拒染法检测细胞的存活率;扫描电镜观察细胞膜表面超微结构变化;活性氧试剂盒检测细胞悬液中活性氧的生成量;酶化学方法检测细胞内几种抗氧化物酶活性的变化。结果同等条件下,超声结合PPⅨ对细胞的损伤显著高于单纯超声组,而单纯PPⅨ表现出无明显的细胞毒作用;酶化学方法显示,超声激活PPⅨ后细胞内的丙二醛(MDA)含量显著增加,而细胞内的抗氧化物酶类均有不同水平的下降,并且与处理后细胞悬液中活性氧的生成量相关。结论超声激活原卟啉Ⅸ产生的活性氧自由基作用于细胞膜,增加膜脂质过氧化水平,降低细胞内的抗氧化物酶的含量,可能是其损伤S180肿瘤细胞的主要因素之一。     

聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞杀伤作用的研究

采用频率为2.2 MHz及不同强度的聚焦超声激活原卟啉Ⅸ对小鼠腹水型S180肿瘤细胞的杀伤作用进行研究.台盼蓝拒染法检测了不同处理后细胞的相对存活率,通过扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构的变化.实验结果表明:单纯原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞几乎没有影响,单纯超声和超声结合原卟啉Ⅸ对细胞均有一定的损伤,肿瘤细胞受损程度随着声照强度的增加而加剧,并且在一定范围内随着原卟啉剂量浓度的加大,细胞受损也逐渐增强.当原卟啉Ⅸ浓度为120 μM时,超声激活原卟啉Ⅸ对腹水型S180肿瘤细胞的协同杀伤效应表现最为明显.     

超声结合原卟啉Ⅸ对腹水型S180肿瘤细胞的损伤作用

目的：根据原卟啉Ⅸ（PpⅨ）在S180肿瘤细胞内的含量变化及亚细胞定位分析,研究聚焦超声结合PpⅨ对S180肿瘤细胞的损伤作用。方法：应用荧光分光光度法测定PpⅨ存S180肿瘤细胞内的富集;激光共聚焦扫描显微镜观察PpⅨ的亚细胞定位;台盼蓝拒染法检测超声结合不同浓度的PpⅨ作用后细胞的存活率;环境扫描电镜观察细胞膜表面超微结构变化。结果：PpⅨ在S180肿瘤细胞内的富集是一个动态变化过程．45 min达到最高点,此时为最佳声照处理时间点,且此时PpⅨ主要定位于细胞膜;超声激活PpⅨ对S180肿瘤细胞的杀伤作用明显大于单纯超声组,其膜损伤程度也更为严重。结论：细胞膜可能是超声激活PpⅨ作用的一个主要靶点。     

聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞杀伤作用的研究

采用频率为2.2MHz及不同强度的聚焦超声激活原卟啉对小鼠腹水型S180肿瘤细胞的杀伤作用进行研究。台盼蓝拒染法检测了不同处理后细胞的相对存活率,通过扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构的变化。实验结果表明:单纯原卟啉对S180肿瘤细胞几乎没有影响,单纯超声和超声结合原卟啉对细胞均有一定的损伤,肿瘤细胞受损程度随着声照强度的增加而加剧,并且在一定范围内随着原卟啉剂量浓度的加大,细胞受损也逐渐增强。当原卟啉浓度为120μM时,超声激活原卟啉对腹水型S180肿瘤细胞的协同杀伤效应表现最为明显。     

聚焦超声激活原卟啉IX对S180 肿瘤细胞的杀伤作用

目的 初步研究超声激活原卟啉IX(PPIX)对S180肿瘤细胞的杀伤作用,并探讨其作用的生物学机制.方法 采用频率为2.2 MHz,强度为3 W/cm2的聚焦超声,结合120 μmol/L的PPIX作用于S180肿瘤细胞,通过台盼蓝拒染法检测细胞的存活率;扫描电镜观察细胞膜表面超微结构变化;活性氧试剂盒检测细胞悬液中活性氧的生成量;酶化学方法检测细胞内几种抗氧化物酶活性的变化.结果 同等条件下,超声结合PPIX对细胞的损伤显著高于单纯超声组,而单纯PPIX表现出无明显的细胞毒作用;酶化学方法显示,超声激活PPIX后细胞内的丙二醛(MDA)含量显著增加,而细胞内的抗氧化物酶类均有不同水平的下降,并且与处理后细胞悬液中活性氧的生成量相关.结论 超声激活原卟啉IX产生的活性氧自由基作用于细胞膜,增加膜脂质过氧化水平,降低细胞内的抗氧化物酶的含量,可能是其损伤S180 肿瘤细胞的主要因素之一.     

超声结合原卟啉IX对腹水型S180肿瘤细胞的损伤作用

目的:根据原卟啉IX(PpIX)在S180肿瘤细胞内的含量变化及亚细胞定位分析,研究聚焦超声结合PpIX对S180肿瘤细胞的损伤作用.方法:应用荧光分光光度法测定PpIX在S180肿瘤细胞内的富集;激光共聚焦扫描显微镜观察PpIX的亚细胞定位;台盼蓝拒染法检测超声结合不同浓度的PpIX作用后细胞的存活率;环境扫描电镜观察细胞膜表面超微结构变化.结果:PpIX在S180肿瘤细胞内的富集是一个动态变化过程,45 min达到最高点,此时为最佳声照处理时间点,且此时PpIX主要定位于细胞膜;超声激活PpIX对S180肿瘤细胞的杀伤作用明显大于单纯超声组,其膜损伤程度也更为严重.结论:细胞膜可能是超声激活PpIX作用的一个主要靶点.     

5-ALA在口腔鳞状细胞癌中诱导内生原卟啉Ⅸ荧光强度的研究

目的 应用酶标仪检测5-ALA在不同分化程度的人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中产生原卟啉Ⅸ(PpⅨ)的荧光强度,以期指导临床鉴别和诊断OSCC.方法 将2×104个SAS细胞接种到96孔板中,应用酶标仪检测不同浓度的PpⅨ水溶液荧光强度,制作PpⅨ浓度的标准曲线,计算判定系数R2.在SAS、HSC-3和HSC-4细胞中分别加入浓度为0、0.5、1、1.5、2mmol/L的5-ALA,孵育0、2、4、6、8、10小时后应用酶标仪检测细胞荧光强度.结果 酶标仪检测的荧光强度与PpⅨ含量呈线性相关(判定系数R2=0.9982),5-ALA在OSCC细胞中最佳的代谢浓度为1mmol/L,代谢时间为4小时.并且5-ALA在中分化的SAS细胞中产生的荧光强度显著高于高分化的HSC-3和HSC-4细胞(P＜0.05).结论 5-ALA在不同分化程度的OSCC细胞中产生不同的荧光强度,可辅助用于临床鉴别诊断OSCC.     

聚焦超声结合血卟啉对S180肿瘤细胞的杀伤作用

初步研究聚焦超声激活血卟啉对S180肿瘤细胞的杀伤作用,并探讨其作用的生物学机制。通过台盼蓝拒染法检测频率为2.2MHz的聚焦超声激活血卟啉作用于S180肿瘤细胞的存活率,筛选出最佳的超声处理参数,采用自由基清除剂检测超声激活血卟啉产生的起主要作用的活性氧成分,通过丙二醛含量测定法检测细胞内脂质过氧化含量变化。单纯血卟啉组表现出无明显的细胞毒作用;同等条件下,超声结合血卟啉组对细胞的损伤显著高于单纯超声组,且这种协同杀伤作用可以被组氨酸和甘露醇所抑制,而不被SOD抑制;同时,超声激活血卟啉后细胞内的脂质过氧化含量显著增加。超声结合血卟啉对S180肿瘤细胞有协同杀伤作用,可能由于声动力学处理过程中产生的活性氧自由基作用于细胞膜,增加膜脂质过氧化水平,最终导致细胞死亡。     

锌原卟啉测定对孕妇缺铁性贫血的临床诊断意义

为探讨锌原卟啉（ZPP）作为缺铁性贫血诊断指标的意义及孕妇早、中、晚期缺铁发病率，本文对139例孕早期，280例孕中期以及208例孕晚期共627例孕妇ZPP含量进行了测定分析，另对17例孕早期，182例孕中期以及152例孕晚期共351例孕妇的（血红蛋白）Hb、（红细胞）RBC、（红细胞压积）HCT、（红细胞平均容积）MCV、（红细胞平均血红蛋白）MCH及（红细胞平均血红蛋白浓度）MCHC共6项指标进行了测定，结果表明：孕晚期ZPP含量显著高于孕早、中期组（P＜0．01），而孕早、中期间无显著性差异。孕晚期组的Hb、RBC、MCH及MCHC与早孕期组相比显著降低（P＜0．01），HCT各组间无显著性差异（P＞0．05），ZPP含量与Hb呈显著负相关，与RBC呈正相关，综上结果看出孕晚期ZPP含量增高明显，提示ZPP的检测可作为监测孕妇缺铁性贫血一项指标。     

儿童缺铁性贫血与锌原卟啉间的关系

目的探讨微量血锌原卟啉（Ｚｐｐ）测定对儿童缺铁性贫血（ＩＤＡ）的早期诊断及治疗效果评估的临床意义，方法对６７例贫血患儿末梢血 Ｈｂ＜１１０ｇ／Ｌ进行 Ｚｐｐ测定，并对Ｚｐｐ升高的 ２５例患儿进行铁试验治疗．结果 ６７例患儿中有６５例Ｚｐｐ量不同程度升高，铁试验治疗显示，随治疗的继续，Ｈｂ逐渐升高，Ｚｐｐ值逐渐下降．治疗８周贫血纠正，Ｚｐｐ下降至正常结论Ｚｐｐ作为缺铁性贫血的诊断及疗效观察的可靠指标，具有重要的临床意义．     

亚甲基蓝介导的光动力疗法联合小檗碱对牙龈卟啉单胞菌抑制作用的体外研究

目的探讨亚甲基蓝介导的光动力疗法(PDT)联合小檗碱对牙龈卟啉单胞菌(P.g)的体外抑制作用。方法培养P.g至对数期中后期,将不同质量浓度亚甲基蓝加入P.g菌悬液中,作用5 min,激光(波长660 nm,功率140 mW/cm^(2))照射2 min,寻找亚甲基蓝结合激光体外抑制P.g的最佳浓度;观察亚甲基蓝介导的PDT体外抑制P.g的效果以及小檗碱对P.g生长曲线的影响;探讨亚甲基蓝介导的PDT与小檗碱先后联合应用对P.g的抑制作用;扫描电子显微镜观察亚甲基蓝介导的PDT及小檗碱对P.g形态的影响;紫外分光光度仪测量各成分吸收峰。结果在660 nm激光激发下,亚甲基蓝质量浓度为24.4141μg/ml时,抑菌效果最好。与对照组比较,亚甲基蓝组和PDT组差异均有统计学意义(均P<0.001)。0.05 mg/ml小檗碱对P.g浮游细菌具有抑制作用。与对照组比较,0.05 mg/ml小檗碱组菌落数降低,其差异有统计学意义(P<0.01);0.05 mg/ml小檗碱+光照组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。当PDT与小檗碱联用时对P.g有协同抑制作用,且先PDT后小檗碱组较先小檗碱后PDT组菌落数降低,其差异均有统计学意义(均P<0.01)。P.g经亚甲基蓝介导的PDT处理后,细菌细胞壁皱缩成团,经小檗碱处理后,细菌表面变得光滑且菌体长度较对照组增长。结论亚甲基蓝介导的PDT对P.g有抑制作用,当与小檗碱联用时,对P.g有协同抑制作用,且联合应用中先PDT后小檗碱作用时抑菌效果更好。     

钴-原卟啉诱导大鼠血红素加氧酶-1适度过表达的研究

目的研究钴-原卟啉(CoPP)诱导大鼠血红素加氧酶-1(HO-1)的适度过表达,并观察其抗肝缺血/再灌注损伤(IRI)的作用。方法建立大鼠肝脏IRI模型,按体重给予不同诱导剂量的CoPP(5、2.5mg/kg及2.5mg/kg体重2次),关用锌原卟啉(ZnPP)来抑制HO-1的活性。观察血浆谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝组织丙二醛(MDA)的变化,肝组织光镜和电镜下的改变,肝组织HO-1蛋白表达的Western印迹。结果CoPP诱导组中均有明显的HO-1蛋白表达;与缺血/再灌注(IR)组比较,CoPP诱导组动物血浆AST、LDH活性以及肝MDA含量明显降低,肝组织损伤减轻。3个剂量组中以2.5mg/kg体重诱导2次效果最佳。ZnPP的加入阻断了CoPP诱导组的这些保护作用。结论CoPP诱导HO-1适度过表达的诱导剂量为2.5mg/kg体重2次,在这一诱导剂量下HO-1过表达对肝IRI具有重要的保护作用。     

亚氨基二乙酸修饰四苯基卟啉光敏剂介导的光动力疗法对H22肝癌小鼠体内抗肿瘤作用的研究

目的 评价本实验室自行合成的亚氨基二乙酸修饰四苯基卟啉光敏剂的理化性质及对H22小鼠肝癌的光动力治疗作用.方法 采用紫外分光光度法测定亚氨基二乙酸修饰四苯基卟啉光敏剂的紫外吸收光谱、脂水分配系数和单线态氧产率;以肝癌H22小鼠为研究对象,随机分为空白对照组、光照组、光敏剂组、光动力治疗1次组和光动力治疗2次组,考察亚氨基二乙酸修饰四苯基卟啉光敏剂介导的光动力疗法(PDT)对实体瘤的抑制率和荷瘤动物免疫机能的影响.结果 亚氨基二乙酸修饰四苯基卟啉光敏剂在650 nm波长处存在紫外吸收,脂水分配系数和单线态氧产率分别为2.30和0.52;单纯激光照射和单纯给予亚氨基二乙酸修饰四苯基卟啉光敏剂对肝癌H22小鼠无治疗作用(P＞0.05),而亚氨基二乙酸修饰四苯基卟啉光敏剂介导的光动力疗法对小鼠肝癌H22的生长具有极其显著的抑制作用(P＜0.001),光动力治疗2次组肿瘤抑制率高达95.15％.各治疗组对荷瘤小鼠的体质量增长、肝、脾、肺、胸腺指数几乎无影响.结论 亚氨基二乙酸修饰四苯基卟啉光敏剂单线态氧产率高、两亲性好,介导的PDT抗肿瘤活性强,适合作为光动力抗肿瘤候选新药进行开发.     

原卟啉钠对急性肝损伤小鼠肝组织SOD、MDA的影响

 目的 探讨原卟啉钠对四氯化碳（CCl4）致急性肝损伤小鼠血清转氨酶和肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的影响。方法 60只ICR小鼠随机分为正常对照组、CCl4模型组、联苯双酯组、原卟啉钠低、中、高剂量组。各治疗组每天灌胃给药及造模16h后,摘眼球取血测定血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性,剖腹取肝测定肝脏SOD活力和MDA含量。结果 CCl4模型组小鼠血清ALT和AST活力分别为（1879±1219）、（2210±1585）U/L,与正常对照组比较,降低显著（P<0.01）;联苯双酯组、原卟啉钠低、中、高剂量组的SOD活力和MDA含量分别为（207.61±16.02）、（184.35±13.42）、（190.88±17.77）、（199.38±14.43）U/mgprot和（1.08±0.15）、（1.35±0.26）、（1.07±0.16）、（0.92±0.18）nmol/mgprot,与CCl4模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05～P<0.01）。结论 原卟啉钠能有效阻止CCl4致急性肝损伤小鼠肝组织SOD活性降低,脂质过氧化产物MDA含量升高,具有一定的保肝降酶作用。     

以大黄素为声敏剂介导声动力疗法对小鼠 动脉粥样硬化治疗作用的研究

目的 探讨以大黄素为声敏剂介导声动力疗法对小鼠动脉粥样硬化治疗作用。方法 高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠发生动脉粥样硬化。将50只ApoE-/-小鼠分为不做任何处理的模型对照组、以5-氨基酮戊酸介导的阳性对照组、大黄素高、中、低剂量介导SDT组,每组 10只。除模型组外,其余各组自高脂4周起,分别进行相应的声动力治疗,隔天1次,于12周处死小鼠。取心脏,制备切片,通过油红染色检测斑块大小。取主动脉,进行荧光定量PCR检测基质金属蛋白酶TMP-2、TMP-9和TIMP-1,分析对斑块稳定性的影响。同样检测细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-10和TGF-β,分析对炎症的影响。结果 大黄素介导声动力疗法能减轻动脉粥样硬化斑块大小;显著增加TIMP-1而降低TMP-2和TMP-9在主动脉的表达。显著降低促炎性细胞因子TNF-α和IFN-γ而增加抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β在主动脉局部的表达。结论 大黄素介导声动力疗法可能通过降低炎症反应发挥抗动脉粥样硬化作用,该方法对于动脉粥样硬化的治疗具有积极意义。     

基于氨乙酰丙酸(ALA)脂类衍生物的光动力疗法(PDT)

AL A脂类衍生物是目前光动力疗法领域中最活跃的光敏剂前体物 ,它因能够有效地通过外源加入的方式在肿瘤细胞内内源生成进而积聚的原卟啉 (Pp IX)光敏剂而在光动力疗法领域独树一帜。本文将沿着 AL A脂类衍生物的光动力疗法实验过程这一主线而对它的光动力疗法机理及实验研究结果作一综述。主要包括 :细胞对外源 AL A脂类衍生物的摄取及转化为 AL A的生化机制 ;由 AL A生成内源原卟啉 Pp IX的生化机理 ;由 AL A内源生成的光敏剂引起的光致敏过程     

阳离子卟啉衍生物的体外光动力抗菌活性研究

目的 研究阳离子卟啉衍生物介导的光动力抗菌化学疗法(CPD-PACT)对体外培养的绿脓杆菌的抑制作用,为研究其高效的抗菌作用特点提供依据.方法 采用二倍稀释法考察培养条件对CPD最小抑菌浓度(MIC)的影响,扩散法测定CPD的抑菌圈,活菌计数法测定CPD的体外抗菌后效应,并通过激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察绿脓杆菌的活力和形态变化.结果 细菌接种量对MIC值存在一定的影响;培养基pH值的升高会使化合物的MIC值相应升高;血清蛋白体积分数的增加会使光反应的MIC值升高,而暗反应的MIC值降低.抑菌圈的大小主要取决于激光能量密度的强弱,而受光敏剂浓度的影响较小.CPD对绿脓杆菌有较强的抑制和杀灭作用,且存在明显的抗菌后效应,但光疗结束后存活的细菌会继续增殖.CLSM观察结果表明,CPD-PACT可破坏细菌外膜完整性,使细菌内容物泄露,活力减弱,最终导致细菌死亡.结论 CPD-PACT对绿脓杆菌具有高效的抗菌活性和明显的抗菌后效应,适合作为新一代抗菌候选药物进行深度开发.     

原卟啉钠减轻四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤

原卟啉钠(protoporphyrin disodium,NAPP)是一种卟吩衍生物,可由动物血液中血红素提取制得,具有改善肝功能、促进组织细胞呼吸、改善蛋白质和糖代谢等作用,主要作为保肝药物应用于临床。目前有关原卟啉钠的保肝降酶机制尚不清楚。因此,为探讨原卟啉钠保肝作用是否与其增强机体     

声化学激活血卟啉对S180肿瘤作用的研究

声化学激活血卟啉对Ｓ＿（１８０）肿瘤作用的研究马玉英，张伊立，张军平（陕西师范大学应用声学研究所，西安７１００６２）关键词：声化学；血卟啉；Ｓ１８０瘤细胞；抗肿瘤效应血卟啉是一种有机光敏剂，具有优先在肿瘤组织聚集的特点，用激光激活血卟啉的光动力学疗法...