副溶血弧菌致食物中毒56例

1997年8月,某部发生一起经粪培养和血清学证实的副溶血性弧菌(嗜盐菌)致食物中毒56例。1　临床资料1.1　一般情况　56例均为男性,年龄22～26岁。1997年8月15日晚在本单位食堂集体就餐,所进食物为红烧肉、酸菜鱼、空心菜,次日凌晨2时许至19日相继出现头痛、乏力、发热、腹痛、腹泻、恶心、呕吐等症状56例,其中发热39例,最高体温达39.8℃,恶心、呕吐6例,腹泻呈稀水样或糊状29例,里急后重7例,经对症支持治疗3～4d后,有20例出现心率缓慢,其中50～59/min6例,40～49/min9例,34～40/min5例,2例伴心慌、胸闷、头晕。1.2　实验室检查　白细胞为(7～13…     

副溶血弧菌肠炎91例

海产食品常因被副溶血弧菌污染而引起食物中毒 ,也可通过皮肤引起伤口感染或侵入血流引起败血症[1] 。为提高对本病的认识 ,将我院 2 0 0 1年收治的副溶血弧菌肠炎 91例特点分析如下。1　临床资料1 1　一般情况　男 6 0例 ,女 31例 ;年龄 13～ 70岁 ,平均 2 8 8岁。均经大便培养鉴定证实为副溶血弧菌肠炎。有明确不洁饮食史 4 0例。其中食用海鲜类食物后发病 36例。均有腹泻 ,每日大便多于10次 19例 ,5～ 10次 5 2例 ,5次以下 2 0例。伴发热 4 2例 ,呕吐 5 7例 ,腹痛 81例 ,里急后重 2 0例。1 2　实验室检查　黄色黏液便 4 5例 ,黄色稀水样…     

副溶血弧菌calR的基因敲除株与回补株构建

目的 构建副溶血弧菌calR的基因突变株和回补株,为研究CalR的功能奠定基础.方法 PCR扩增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自杀质粒pDS132中.通过接合转移的方式将重组自杀质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重组的方法替换原始calR基因以构建calR无痕突变株(ΔcalR).PCR扩增calR的基因序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒中,构建回补质粒.将回补质粒转入到ΔcalR中,即得回补株(ΔcalR/calR∷pBAD33).将vopN的启动子区克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建LacZ重组质粒,并将该重组质粒分别转入WT/pBAD33、ΔcalR/pBAD33和ΔcalR/calR∷pBAD33中,通过测定并比较3株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对vopN的调控关系.结果与结论 LacZ结果表明,CalR负调控vopN的转录,且回补株的回补效果良好,表明成功构建了副溶血弧菌calR基因的突变株和回补株,为后续对CalR的功能研究打下了基础.     

盐度和温度对副溶血弧菌运动能力的影响

目的：研究盐度和温度调节副溶血弧菌（ Vibrio parahaemolyticus）的运动能力。方法将副溶血弧菌接种于不同盐度（0．5％、1．0％、2．0％和4．0％）的爬动和泳动平板上,37℃静置培养4．5 h后,通过比较不同盐度条件菌苔直径的差异来判定盐度对运动能力的影响。接种副溶血弧菌至含2．0％盐的爬动和泳动平板上,并分别置于37℃和26℃静止培养4．5 h后,通过比较不同温度下菌苔直径的差异来研究温度对运动能力的影响。结果与结论副溶血弧菌爬动不受盐度的影响,而其泳动与盐度呈正相关,2．0％时达到极值,4．0％时稍微下降;与26℃培养的结果相比,37℃培养时爬动和泳动均显著增强。这些结果表明盐度和温度能够调节副溶血弧菌的运动能力。     

拟核结合蛋白H-NS调控副溶血弧菌vp1667的转录

目的 研究副溶血弧菌H-NS对vp1667的转录调控机制.方法 提取副溶血弧菌hns突变株(Δhns)和野生株(WT)的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法验证H-NS对vp1667的转录调控关系;采用引物延伸实验研究vp1667的转录起始位点,并根据产物的丰度判断H-NS对vp1667的调控关系;将vp1667的启动子区克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建LacZ重组质粒,并将该重组质粒转入Δhns和WT中获得LacZ菌株.通过LacZ报告基因融合实验研究H-NS对vp1667的调控关系.PCR扩增vp1667的启动子区序列并纯化His-H-NS蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)研究His-H-NS对vp1667启动子区是否具有直接的结合作用;采用DNaseⅠ足迹实验研究His-H-NS对vp1667启动子区的具体结合位点.结果与结论 引物延伸结果显示,vp1667只有一个转录起始位点T(-28)(翻译起始位点为+1),且其转录活性受H-NS的抑制;EMSA和DNaseⅠ足迹实验结果显示,His-H-NS不能结合到vp1667的启动子区,表明H-NS只能间接抑制vp1667的转录.     

副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

目的 建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法.方法 根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法.结果 以副溶血弧菌DNA为模板克隆了tdh基因,得到阳性质粒.利用阳性质粒建立了定量PCR方法,得到标准曲线y=-4.9197x+58.72,决定系数(R2)为0.9864.此方法具有很好的特异性,在对15种肠道致病菌的检测中,只有副溶血弧菌基因组DNA的扩增结果为阳性.对粪便和食物模拟标本进行检测,敏感性均为102cfu/μl.此方法重复性较好,对4种浓度(105、104、103、102cfu/μl)的菌液各进行3次检测,结果均为阳性,且Ct值的变异系数＜2%.结论 建立了一种检测副溶血弧菌的荧光定量PCR方法,该法的敏感性和特异均较好,适用于快速、准确地检测食品和粪便中的沙门菌.     

多重环介导等温扩增快速检测沙门菌、副溶血弧菌和单核细胞增生性李斯特菌方法的建立

目的：建立能够同时检测沙门菌、副溶血弧菌（VPH）和单核细胞增生性李斯特菌（LM）的多重环介导等温扩增（mLAMP）方法。方法分别针对沙门菌 bcfD 基因、VPH 的 tlh 基因和 LM的 iap 基因设计 mLAMP 引物,以LAMP 进行单重 LAMP 检测。实时浊度监测扩增结果,优化引物浓度配比,进而建立此3种食源性致病菌的mLAMP 检测体系,以 PCR 检测灵敏性作为比较,进行特异性和灵敏性分析。结果实时浊度监测表明,该 mLAMP体系具有良好特异性,可在45 min 内一次性检测以上3种致病菌,且无非特异扩增产生。这3种菌的检测最低限分别为300 fg／μl、4．2 pg／μl 和4．5 pg／μl,与 PCR 检测灵敏度相当。结论该多重 LAMP 可同时检测食品中的沙门菌、VPH 和 LM,可作为大规模样品的初筛或传统方法的辅助方法,用于快速判定样品中是否含有这3种致病菌。     

多重荧光定量PCR法检测食品中的沙门菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌

目的 建立一种可同时检测沙门菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌3种食源性致病菌的多重荧光定量PCR技术。方法 利用沙门菌invA毒力基因、副溶血弧菌gyrase基因和金黄色葡萄球菌Sa442基因的特异性引物、探针,建立多重荧光定量PCR反应体系,完成特异性、敏感性评价,并用该法与国标法进行40份留样食品的检测比较。结果 各对引物、探针均能扩增出目标靶序列,3种检测通道无交叉干扰,对非目标菌无扩增信号,对沙门菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的核酸检测限均达到102拷贝/μl;用多重荧光定量PCR法在40份食品样本中检出3份金黄色葡萄球菌阳性样本,其中1份国标法检测为阴性,其他样本检测结果完全一致。结论 建立了一种针对沙门菌、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的多重荧光定量PCR检测方法,该方法具有良好的特异性与敏感性,可为食品安全提供技术支持。     

亚洲副溶血弧菌临床菌株的基于碱基序列和肽链序列的多位点序列分型研究

目的：了解来自亚洲的副溶血弧菌临床菌株的群组结构和克隆复合体构成。方法在 pubMLST 公共数据中筛选具有完整 ST 型及 pST 型的来自亚洲的副溶血弧菌临床菌株数据,进行亚群分析和克隆复合体分析,并分别构建基于 ST 型和 pST 型的最小生成树。结果从数据库中共筛选到具有 ST 型及 pST 型的来自亚洲的副溶血弧菌临床菌株数据341条,共含有157个 ST 型,以 ST3型为最多。其中有214条菌株数据来自中国（包括港台地区）,覆盖了133个 ST 型,其中仍以 ST3型为最多。利用 eBURST 软件对数据进行分析,共发现了17个组,94个单体。STRUCTURE 软件分析显示,来自亚洲的副溶血弧菌临床菌株的适宜亚群数为7,各亚群内的样品平均距离为0．9113。结论来自亚洲的副溶血弧菌临床菌株具有高度多态性,可细分为7个亚群,MLST 分型时以 ST3型为多,AA-MLST 分型时以 pST2型为主。     

人鼻咽癌吉西他滨耐药细胞系的建立及其生物学特性

目的 建立人鼻咽癌吉西他滨耐药细胞系并研究其生物学特性.方法 采用药物大剂量冲击法和浓度梯度递增法建立人鼻咽癌吉西他滨多药耐药细胞亚系CNE2/Gem,MIT法检测CNE2和CNE2/Gem对几种常用抗肿瘤药物的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI),流式细胞术测定细胞周期及细胞内荧光药物罗丹明的蓄积,绘制细胞生长曲线,计算倍增时间并在光镜下观察细胞形态.结果 从生长曲线计算出(CNE2和CNE2/Gem的倍增时间分别为17.13和23.13h.CNE2和(CNE2/Gem对吉西他滨的IC50分别为2.84±1.63和42.95±7.53μg/ml,RI为23.61(P＜0.001),对顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)及长春新碱(VCR)的RI分别为15.00(P＜0.001)、6.98(P＜0.01)及12.80(P＜0.05),表明其具有多药耐药特征.流式细胞测定显示(CNE2/Gem内罗丹明的蓄积明显低于CNE2(3.56 vs 220.35).光镜下见CNE2/Gem胞体变圆,大小不一,胞质内有较多颗粒.结论 成功建立了稳定的人鼻咽癌吉西他滨耐药细胞系CNF2/Gem,且耐药性能显著,可作为进一步研究鼻咽癌吉西他滨耐药机制较为理想的模型.     

过氧化氢诱导间充质干细胞衰老模型的建立

目的：建立间充质干细胞（ MSCs）衰老模型,探讨其衰老的相关生物学改变,从而为衰老相关研究提供有效的细胞模型工具。方法取新生胎盘组织利用酶消化法分离纯化获得人胎盘源间充质干细胞（ MSCs ）。将第3代细胞接种到培养皿。在完全培养基基础上分别加入终浓度100、200、300μmol／L的过氧化氢（ H2 O2）培养2 h,处理结束后更换为完全培养基继续培养24 h。进行MTT、细胞周期分析、分化诱导实验和β－半乳糖苷酶染色验证衰老MSCs模型的建立,应用RT－PCR法检测衰老相关基因p16、p21、p53 mRNA的表达变化。结果与对照组比较,200μmol／L H2 O2作用2 h,倒置显微镜下见MSCs形态较为宽大扁平;MTT 光密度值显著下降,流式检测结果显示细胞周期处于G0／G1期细胞比例增加;成脂、成骨和成软骨分化能力减弱;β－半乳糖苷酶阳性细胞百分比显著升高;p16、p21、p53 mRNA表达水平显著升高。结论200μmol／L H2 O2作用2 h可建立MSCs体外衰老模型,该模型细胞的生物学变化可能是由p16、p21、p53细胞周期蛋白的活性调节引起的。     

The development of a conceptual model for evaluating dental patient satisfaction

The purpose of this study was to identify levels and predictors of patient satisfaction and develop a conceptual model for dental patient satisfaction in military treatment facilities. Respondents completed 658,443 surveys during 17 fiscal quarters, beginning with the fourth quarter of 2000. The final data set contained 309,261 surveys, with no missing data. Principal component factor analysis was used for data reduction and hierarchical multiple linear regression to assess the predictive effects of the dependent variables on the two independent variables: (1) overall satisfaction with today's visit and (2) overall satisfaction with the clinic. On a 7-point, bipolar adjective rating scale, patients' mean score was 6.53 regarding satisfaction with visit, suggesting that patients are highly satisfied. Patients' beliefs about care received and environment of care were the most important satisfaction attributes. These findings are useful in educating providers about the relationship of consumer satisfaction with the interpersonal experience.     

Fluorine-19 MRI for visualization and quantification of cell migration in a diabetes model.

This article describes an in vivo imaging method for visualizing and quantifying a specific cell population. Cells are labeled ex vivo with a perfluoropolyether nanoparticle tracer agent and then detected in vivo using (19)F MRI following cell transfer. (19)F MRI selectively visualizes only the labeled cells with no background, and a conventional (1)H image taken in the same imaging session provides anatomical context. Using the nonobese diabetic mouse, an established model of type 1 diabetes, (19)F MRI data were acquired showing the early homing behavior of diabetogenic T cells to the pancreas. A computational algorithm provided T cell counts in the pancreas. Approximately 2% of the transferred cells homed to the pancreas after 48 hr. The technique allows for both unambiguous detection of labeled cells and quantification directly from the in vivo images. The in vivo quantification and cell trafficking patterns were verified using (19)F spectroscopy and fluorescence microscopy in excised pancreata. The labeling procedure did not affect T-cell migration in vivo. This imaging platform is applicable to many cell types and disease models and can potentially be used for monitoring the trafficking of cellular therapeutics.