miRNA-21提高骨髓间充质干细胞心肌样分化和旁分泌的作用

目的 探讨miRNA-21提高BMSC向心肌样细胞分化和促进旁分泌的作用。方法 分离培养骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cell,BMSC）,行BMSC性质鉴定;通过构建缺血心肌动物模型;健康SD大鼠20只,随机分为miR-21-OE组、miR-21-KD组和对照组,每组各5只;将成功构建的miR-21-OE和miR-21-KD慢病毒载体侵染BMSC,使用western-blot检测cTnI、Ajuba、isl1的表达情况。分组将BMSC移植到急性缺血心肌SD大鼠动物模型中,western-blot鉴定各组中BMSC体内分化为心肌样细胞VEGF、bFGF等的表达情况。结果 成功分离培养BMSC,成功构建miR-21-OE和miR-21-KD慢病毒感染BMSC;WB检测到c TnI在miR-21-OE组高表达,当miR-21表达增高时,抑制Ajuba的表达,加强Isl1表达。生物细胞学技术检测miR-21-OE组心肌梗死区域缩小,VEGF及bFGF表达增高。结论 miRNA-21能够提高BMSC向心肌样细胞分化能力和促进BMSC的旁分泌作用,从而提高缺血心肌...     

骨髓间充质干细胞通过旁分泌作用治疗心肌缺血研究进展

骨髓间充质于细胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs）是一种多能干细胞，具有自我更新和多向分化的能力。MSCs治疗缺血性心脏病可能机制包括直接分化为心肌细胞、血管内皮细胞及旁分泌等机制。其中目前研究最多的旁分泌机制主要表现为促进新生血管生成、抗心肌细胞凋亡、趋化其他细胞参与心肌修复等三个方面。     

干细胞因子对骨髓间充质干细胞的促增殖分化作用

本研究探讨干细胞因子 (SCF)促进骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖及促进其向心肌细胞分化的作用。1.材料与方法 :将SD大鼠随机分成SCF组和对照组 ,每组 12只。SCF组用rhSCF(2 0 μg·kg-1·d-1)连续 5d皮下注射 ,对照组用等剂量的生理盐水连续 5d皮下注射 ,第 7天处死大鼠。取股、胫骨的骨髓液 ,加入培养基 ,接种于 35mm培养皿 ,CO2 培养箱培养。通过不断的换液与传代逐渐纯化扩增MSCs。流式细胞仪检测第 4代MSCs细胞周期。胶原酶加胰蛋白酶共同消化法分离乳鼠的心肌细胞 ,培养 3d。用DAPI(2 5 μg/ml)标记第 4代MSCs ,2h后将DAP…     

甲状旁腺素联合骨髓间充质干细胞对骨质疏松大鼠股骨颈骨密度相关指标的影响

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSCs)联合甲状旁腺激素(PTH)与二者单独使用对骨质疏松性大鼠骨密度相关指标的影响。方法将50只SD雌性大鼠分为A、B、C、D、E组,每组10只,B、C、D、E组切除双侧卵巢,A组大鼠仅切除卵巢周围同等大小的脂肪组织。术后12周各组抽取3只大鼠,检测大鼠的雌激素水平及骨密度相关指标骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和骨体积分数(BV/TV)。脱颈法处死SD健康雄性大鼠取骨髓进行BMSCs细胞培养,流式细胞技术单标法检测BMSCs是否培养成功。术后12周,各组剩余7只大鼠。其中A和B组不做后期干预处理;C组按60μg/kg剂量背部皮下注射Rat PTH 1-34,隔日1次,连续12周;D组显露双侧股骨颈,注入浓度为5×108/ml的BMSCs;E组在D组的基础上在皮下注射PTH,注射浓度、频率与C组一致。所有大鼠均在干预12周后处死,Micro-CT测量5组大鼠股骨颈Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp和BV/TV,观察成骨情况。使用SPSS 20.0软件进行统计分析。组间比较采用单因素方差分析,有统计学意义再进行LSD两两比较。结果术后12周,与A组比较,B、C、D及E组大鼠雌激素水平、Tb.N、Tb.Th及BV/TV显著下降,Tb.Sp明显升高,差异有统计学意义(P0.05),但B、C、D及E组各组间上述指标差异不明显(P0.05),可证明B、C、D及E组大鼠为骨质疏松模型。流式细胞技术单标法显示,P3代BMSCs表达CD29(99.86%)和CD90(99.73%),几乎不表达CD34(6.48%)和CD45(0.94%),证明BMSCs培养成功。干预12周后,Micro-CT数据显示,单独使用PTH或BMSCs及联合使用均可改善骨微观结构,但均未达到A组水平。与B组比较,C、D、E组的Tb.N、Tb.Th及BV/TV显著增加,Tb.Sp显著下降,差异有统计学意义(P0.05);与C或D组比较,E组Tb.N、Tb.Th及BV/TV显著增加,Tb.Sp显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论 BMSCs联合PTH治疗局部骨质疏松的效果优于单独使用治疗的效果。     

骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的研究

骨髓间充质干细胞(MSC)是一类具有自我增殖和分化潜能的细胞.在特定条件诱导下可向多系细胞分化.近年来,MSC向肝系细胞分化的研究越来越受到人们的关注.一系列实验证明MSC在一定条件下可向肝细胞分化.其向肝细胞分化的机理以及诱导分化条件的优化还在进一步研究之中.     

骨髓间充质干细胞体外诱导神经干细胞分化的观察

来源于人胚脑组织的神经干细胞及来源于16岁非造血系统疾病患者的胸骨骨髓间充质干细胞(BMSCs),采用Transwell培养板在体外共同培养(共培养组),观察神经干细胞的形态变化,在共培养第7天用免疫荧光染色检测神经干细胞中神经元细胞特异性标志物特异性烯醇化酶(NSE),并与单纯低糖DMEM培养基培养的神经干细胞(对照组)进行比较.结果显示,共培养组中的NSE阳性细胞达32.7%±11. 5%,而对照组未见NSE阳性细胞,两组相比,P＜0.05.认为BMSCs在体外可诱导神经干细胞分化为神经元.     

骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞的研究进展

<正>骨髓间充质干细胞(BMSCs)又称骨髓基质干细胞,是骨髓内的一类非造血干细胞,它能够分化为多种中胚层来源的间质细胞。心肌细胞不具备再生能力,故损伤的心肌细胞无法通过自身的增殖和分化来修复,心肌梗死、心衰、心肌重构等均为传统医学方法难以医治的顽疾。近年研究发现,BMSCs在一定的诱导条件下,可以分化为心肌细胞。BMSCs具备易获得性、多     

大鼠骨髓间充质干细胞体外向心肌细胞诱导分化的机制

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外向心肌细胞(CM)定向诱导分化的机制.方法 全骨髓贴壁法体外获取大鼠BMSC,流式细胞术检测CD44、CD45和CD105的表达率对其进行鉴定,以未加一抗只加二抗的BMSCs作为平行对照组.选用生长良好、纯度达到95％的P5代BMSCs,用5-氮杂胞苷(5-Aza)10 μmol/L进行诱导,对诱导后的细胞进行心肌特异性标志TroponineI的免疫组化检测.在诱导前及诱导2e以RT-PCR方法检测RhoA的表达变化.结果 体外分离纯化培养扩增出大鼠BMSCs,表达CD44、和CD105.经10 μmol/L 5-Aza诱导分化的BMSCs表达心肌特异性标记TroponineI;RT-PCR的结果显示,诱导后的BMSCs表达RhoA.结论 BMSCs可体外分离培养扩增,并具有向心肌细胞分化的潜能,5-Aza最佳诱导浓度为10 μmol/L.5-Aza体外可能通过RhoA途径在BMSCs分化为心肌细胞过程中起着重要调控作用.     

骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的研究进展

骨髓间充质干细胞（MSCs）在不同的诱导条件下可向心肌细胞（CM）分化,但目前对于MSCs心肌化过程中的信号分子、具体途径及基因调控等均不太明确。本文对MSCs向心肌细胞分化的实验条件及目前研究可能包含的分子机制作一综述。     

低氧、无血清培养对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡的影响

目的观察人骨髓间充质干细胞（hBM—MSCs）对低氧环境的适应能力,为其临床应用提供依据。方法体外培养hBM—MSCs,根据培养条件分为四组,常氧正常血清组培养条件为20％O2及10％FBS／HD、常氧无血清组为20％O2及0％FBS／HD,低氧正常血清组为1．5％O2及10％FBS／HD,低氧无血清组为1．5％O2及0％FBS／HD,细胞培养6、12、24、48、72、96h后采用MTT法检测四组增殖状况;流式细胞术检测四组凋亡情况。结果在10％FBS培养下,48h时低氧可显著促进细胞增殖;在整个观察时间内,低氧培养不会促进hBM—MSCs凋亡;同时元血清培养时细胞增殖受抑。结论在正常的血清培养条件下,hBM—MSCs对低氧有较好的耐受性,但是无血清培养不利于hBM—MSCs增殖,hBM-MSCs可作为缺氧相关组织修复的种子细胞。     

雷奈酸锶对大鼠骨髓间充质干细胞增生和成脂分化的影响

目的从细胞和基因水平研究不同浓度雷奈酸锶对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响。方法分离培养并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞。以不同浓度雷奈酸锶（0、0．05、0．1、0．5、1．0和5．0mmol／L）刺激骨髓问充质干细胞,测定其增生活性。在成脂诱导条件下,加入不同浓度雷奈酸锶（0、1．0、5．0mmol／L）,倒置显微镜下检测油红染色并进行成脂相关基因检测。结果在非诱导条件下,浓度为1．0和5．0mmol／L的雷奈酸锶对细胞增生具有明显促进作用。在成脂诱导6及9d后,1．0和5．0mmol／L雷奈酸锶均对细胞成脂分化具有抑制作用,表现为细胞内脂滴缩小,油红染色阳性细胞数量减低,成脂分化关键基因PPAR-γ／EBP—β、aP-2以及Glut-4的表达量降低。结论在体外雷奈酸锶具有促进骨髓间充质干细胞增生作用,并抑制其向脂肪细胞分化,这可能与其具有促进前体干细胞成骨分化并维持成骨与成脂分化平衡作用有关。     

Melatonin promotes proliferation and differentiation of neural stem cells subjected to hypoxia in vitro

Melatonin, an endogenously produced neurohormone secreted by the pineal gland, has a variety of physiological functions and neuroprotective effects. It can modulate the functions of neural stem cells (NSCs) including proliferation and differentiation in embryonic brain tissue but its effect and mechanism on the stem cells in hypoxia remains to be explored. Here, we show that melatonin stimulates proliferation of NSCs during hypoxia. Additionally, it also promoted the differentiation of NSCs into neurons. However, it did not appear to exert an obvious effect on the differentiation of astrocytes. The present results have further shown that the promotional effect of NSCs proliferation by melatonin involved the MT1 receptor and increased phosphorylation of ERK1/2. The effect of melatonin on differentiation of NSCs is linked to altered expression of differentiation-related genes. In the light of these findings, it is suggested that melatonin may be beneficial as a supplement for treatment of neonatal hypoxic-ischemic brain injury for promoting the proliferation and differentiation of NSCs.     

PTH and PTHrP Effects on the Skeleton

Reviews in Endocrine and Metabolic Disorders -     

PI3K／Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用

目的：研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,加入PI3K抑制剂LY294002（1、10μmol/L）,应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7d,采用碱性磷酸酶（ALP）染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Westernblot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强（P＜0.05）。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组（P＜0.05）。成骨诱导培养3和7d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组（P＜0.05）。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7d也显著高于1μmol/L组（P＜0.05）。Westernblot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix4种基因mRNA表达（均P＜0.05）。结论PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。     

体外诱导间充质干细胞向心肌细胞方向分化的研究

目的证实来源于胎儿肝脏的间充质干细胞(FMSCs)具有向心肌细胞方向分化的潜能。方法取6~9代细胞,用不同浓度的诱导剂组合诱导细胞,分别置于不同的条件下进行培养,包括不同温度、不同氧浓度及不同培养液。结果在使用心肌分化培养液及常规培养条件下(37℃、20%O2),5-氮胞苷(50μmol/L)、维甲酸(10-3μmol/L)、二甲基亚砜(0.8%)的联合应用,诱导了FMSCs发生向心肌方向的分化。分化细胞呈小圆形细胞,具有相互聚集并形成球样细胞团结构的趋势,同时表达结蛋白及心肌肌钙蛋白Ⅰ。结论FMSCs具有向心肌细胞分化的潜能,FMSCs发生向心肌方向的分化所需条件与来源于其他动物种属的间充质干细胞的分化条件不同。     

脑淋巴引流阻断对大鼠蛛网膜下腔出血后神经干细胞增殖、分化和可塑性的影响

目的 探讨脑淋巴引流途径对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经干细胞增殖、分化和可塑性的影响.方法 采用枕大池内新鲜自体动脉血二次注入法建立成年大鼠SAH模型,用颈淋巴管结扎和颈淋巴结摘除法制作大鼠脑淋巴引流阻断(cerebral lymphatic blockade,CLB)模型.30只大鼠随机分为正常对照组、SAH组和SAH+CLB组(n=10),各组再分为3 d和14 d组(n=5).应用5-溴脱氧脲嘧啶(5-bromodeoxytridine,BrdU)标记增殖的神经干细胞,免疫荧光双重染色检测大鼠皮质、海马和室下区BrdU~+/胶质纤维酸性蛋白(gtial fibrillary acidic protein,GFAP)~+、神经源性分化蛋白(neurogenic differemiation,NeuroD)~+、多聚唾液酸-神经细胞黏附因子(polysialic acid-neural cell adhesion molecule,PSA-NCAM)~+细胞,应用激光共聚焦显微镜观察并计数.结果 与正常对照组比较,SAH组BrdU~+细胞、NeuroD~+/BrdU~+细胞、GFAP~+/BrdU~+细胞以及PSA-NCAM~+/BrdU~+细胞均有不同程度增加(P<0.05或0.01);与SAH组相比,SAH+CLB组BrdU~+细胞、GFAP~+/BrdU~+细胞有所增加(P<0.05或0.01),而NeuroD~+/BrdU~+细胞、PSA-NCAM~+/BrdU~+细胞显著减少(P<0.05或0.01).结论 脑淋巴引流阻断可促进神经干细胞增殖,但不利于神经干细胞向神经元方向分化和可塑性.     

雌三醇对MG-63细胞增殖和分化的影响

目的 研究雌三醇（Estri01）对成骨肉瘤样细胞株MG-63的作用，并与雌二醇（17-β—estradiol）对MC-63细胞的作用进行比较，从而探讨雌三醇防治骨质疏松的作用机制。方法 用雌三醇或雌二醇处理成骨样细胞株MC-63，^3H掺入法（3H—TdR）测定细胞的增殖，通过测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性的变化和细胞分泌的骨钙素（osteocalcin）水平的变化来分析细胞功能。结果 以浓度为0mol／L的雌三醇为对照，10^-10、10、10^～8、10^-7、10^-6mol／L雌三醇分别增加MG-63细胞增殖达0．00％、18．10％、31．62％、23．81％、14．86％；以浓度为0mol／L的雌二醇为对照，10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-8mol／L雌二醇分别增加MG-63细胞增殖达16．95％、30．86％、62．48％、28．19％、24．76％。雌二醇促进MC-63细胞增殖的作用比雌三醇的作用强。不同浓度（10^-10～10^-6mol／L）的雌三醇或雌二醇对MG-63细胞内ALP活性及骨钙素分泌量均无显著影响。Western杂交法检测到雌激素受体α和β在MG-63细胞中均有表达，雌激素受体的拮抗剂ICI 182780可以消除雌二醇和雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用。结论雌三醇可以促进MG-63细胞的增殖，但对分化无影响；雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用由雌激素受体介导。     

剔毒护肝方及其拆方对大鼠骨髓干细胞增殖分化的影响

目的：观察剔毒护肝方及其拆方含药血清对大鼠骨髓干细胞增殖作用和向肝系分化的影响。方法：40只Wistar大鼠被随机分为剔毒护肝方组、黄芪组、莪术组、叶下珠组、生理盐水对照组、肝再生血清组，制作药物血清；使用密度梯度离心和贴壁筛选相结合，分离骨髓干细胞；通过噻唑氮蓝（MTT）比色法检测含药血清处理48小时时骨髓干细胞的增殖率；采用免疫组化法检测骨髓干细胞肝系标志（AFP、白蛋白）表达情况。结果：经各组血清培养48小时后，剔毒护肝方组、黄芪组和肝再生血清组对大鼠骨髓干细胞增殖率分别为10.4％、14．3％和26．5％；剔毒护肝方组、黄芪组、肝再生血清组，AFP和白蛋白表达情况强于其他组；剔毒护肝方组、黄芪组、肝再生血清组可见糖原阳性表达。结论：剔毒护肝方组、黄芪组合药血清对骨髓干细胞有增殖作用，可诱导骨髓干细胞横向分化为肝实质细胞。剔毒护肝方中发挥主要作用的药物可能是黄芪，但剔毒护肝方的作用强于黄芪组，说明组成剔毒护肝方的三味药不是简单的叠加。