CVB3m病毒致低硒低维生素E鼠心肌损伤的发病机制

目的 为深入研究CVB3m病毒感染导致的低Se低VE鼠心肌病变中氧化损伤的作用。方法 1周龄乳鼠给予低Se低VE饲料喂养，4周后腹腔接种病毒，7d后处死，测定全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px)活性以及肝脏中脂质过氧化物（LPO）含量，光镜下观察心肌的病理改变。结果 Se和VE联合缺乏鼠感染CVB3m病毒7d后，小鼠全血GSH－Px活性下降，肝脏中LPO水平增加，光镜下小鼠心肌病变检出率和严重程度均高于补Se常VE病毒组。结论 氧化应激损伤在病毒性心肌炎实验动物模型的发病机制中起重要作用。     

柯萨奇病毒B4''致低硒鼠心肌损伤及细胞凋亡机制的研究

目的 为了探讨柯萨奇病毒B4’致低硒鼠心肌损伤及细胞凋亡的机理。方法 用低硒和补硒饲料分别喂养昆明鼠，4周后交配，给其子代4周雄性鼠腹腔接种10—7TCID50柯萨奇病毒B4’0．1ml，对照组接种等量RPMI1640培养掖。7天后处死，取心脏制片，光镜观察病变，并采用TUNEL法和免疫组化法技术检测凋亡细胞及其相关基因。结果 低硒和补硒饲料病毒组的心肌病变检出率分别为78．1％和16．7％。低硒和补硒饲料对照组的心肌未见病变。低硒和补硒病毒组及低硒对照组的心肌均发生不同程度的细胞凋亡。补硒对照组未见心肌细胞凋亡。结论 柯萨奇病毒B4’感染低硒昆明鼠引起的心肌损伤有细胞凋亡机制参与。     

低硒小鼠柯萨奇B组病毒重叠感染与心肌损伤关系的研究

目的 探讨Se缺乏、CVB4、CVB3m重叠感染与心肌损伤的关系。方法 采用低Se及相对低蛋白合成饲料、饮用含Se元素水与不含硒的水的方法,饲养小鼠及其所产的幼鼠,于出生7d,幼鼠先后感染CVB4,CVB3m,2型病毒感染间隔为7d,感染CVB3m病毒后7、14、21d分别处死小鼠,取心脏做光镜、电镜检测。结果 Se缺乏组小鼠,心肌可见轻度损伤,心肌细胞色素氧化酶活力下降。病毒感染7d后,低Se 病毒组小鼠与补Se 病毒组小鼠比较,低硒病毒组血清CVB3m抗体效价1:256,补硒病毒组中和抗体效价为1:512,低硒组感染病毒的毒力增加,心肌中病毒分离滴度低硒组明显高于补硒组,心肌细胞色素氧化进一步下降,心肌损伤检出率达63.6%,心肌变性坏死的数量多,损伤面积大。结论 Se缺乏是克山病心肌损害因素之一,而柯萨奇B组2型病毒重叠感染在克山病心肌损伤过程中的作用也不能忽视。硒具有某种程度的抗病毒作用或抑病毒作用。     

柯萨奇病毒B4''致低硒鼠心肌损伤的实验研究

目的 探讨柯萨奇病毒B4‘致低硒鼠心肌损伤的特点。方法 用补硒和低硒饲料分别喂养昆明鼠4周后交配，给其子代雄性鼠（出生后4周）腹腔接种柯萨奇病毒B4‘0.1ml,对照组接种等量RPMI1640培养液。观察各组鼠的心肌光镜结果，全血中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性和肝脏组织中脂质过氧化物酶（LPO）含量。结果 低硒和补硒饲料病毒组的心肌病变检出率分别为78.1%和16.7%，低硒和补硒饲料对照组的心肌未见病变。低硒组全血中GSH-PX活性明显降低，LPO含量明显增高。结论 低硒可以使柯萨奇病毒B4‘致昆明鼠心肌损伤加重。     

柯萨奇B2病毒致低硒乳鼠心肌损伤的实验研究

目的：探讨柯萨奇B2病毒（CVB2）在低硒足蛋白条件下对乳鼠心肌损伤的作用。方法：应用低硒合成饲料（硒含量0．016mg/kg）喂养昆明鼠5周后交配，取其子代7日龄乳鼠经腹腔注入CVB210^7TCID500.1ml,9d后处死，取其心脏。常规石蜡包埋、切片、HE染色光镜检查；部分心肌做电镜观察。结果：低硒、补硒合成饲料感染病毒组鼠光镜下心肌病检出率分别为44．1％和15．7％，低硒和补硒对照组均未检出病变。结论：足蛋白条件下硒缺乏仍可增强CVB2病毒对昆明乳 鼠的致病作用。     

柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌硫氧还蛋白的表达

目的研究硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)在柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌炎模型中表达的变化,探讨Trx在病毒性心肌损伤中的作用。方法建立柯萨奇B3病毒感染鼠心肌炎模型,采用光镜检测心肌形态改变,应用RT鄄PCR技术比较接种病毒后不同时间点(7,14,21d)TrxmRNA表达变化。结果7d时心肌病损严重;14d时部分心肌病损开始修复;21d时心肌修复较完全。接种病毒后21d时,硫氧还蛋白mRNA表达与对照组比较明显上调(P<0.01),7d和14d时同对照组相比表达无显著性差异(P>0.05)。结论在急性柯萨奇B3病毒性心肌炎中,Trx可能被急性炎症刺激素特异地诱导,在疾病的后期TrxmRNA表达上调,促进心肌修复,提示适当剂量的Trx可能对急性柯萨奇B3病毒性心肌炎有潜在治疗作用。     

腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂对鼠模型急性病毒性心肌炎的影响

目的 探讨不同时期腹腔注射一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对用柯萨奇病毒B3组亲心肌株制造的鼠模型急性病毒性心肌炎(acute viral myocarditis,AVM)的影响。方法 雄性4周龄(15~16 g)Balb／C鼠130只随机分成阴性对照组10只(腹腔注射等容量的注射用水)、阳性对照组30只(腹腔接种0.05ml柯萨奇病毒B3组亲心肌株)、干预对照组30只(于0天开始每天给予5 mg／kg L-NAME腹腔注射)和L-NAME实验组60只(在接种病毒后分别于0、7、14天开始每天给予5 mg／kg L-NAME腹腔注射)。观察小鼠的一般情况、病死率,接种病毒后第7、14、21天处死小鼠,检测血清一氧化氮含量、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)含量和iNOSmRNA表达情况及心肌病理变化半定量结果。结果 与阴性对照组比较,感染病毒组小鼠7-21天iNOS信号和iNOSmRNA表达均增高(P<0.01),与病理改变相平行。初期和极期对AVM鼠腹腔注射L-NAME各组心肌内iNOS生成和iNOSmRNA表达及病理损伤不同程度低于阳性对照组(P<0.01),越早干预越明显。后期对AVM鼠腹腔注射L-NAME,也能降低心肌内iNOS生成和iNOSmRNA表达,但病理损伤与阳性对照组差异无显著性。与阴性对照组比较,干预对照组小鼠无一般状况和心肌病理形态学改变。结论 AVM病程中有     

克山病与病毒感染关系的实验研究

目的为了探讨克山病与肠道病毒特别与柯萨奇病毒(CVB)的关系.方法①选择用CVB3病毒的cDNA探针,应用原位核酸杂交的方法,检测克山病尸检心肌组织;②采用CVB5病毒VP1壳蛋白的单克隆抗体应用免疫组化法检测克山病尸检心肌组织;③用不同配方的低硒合成饲料喂养小鼠,分别感染CVB2、CVB4m'、CVB3m以及先后感染CVB4和CVB3m的病毒.结果①原位杂交法急型克山病、亚急型克山病、慢型克山病的阳性率分别为61.5%、75.8%和68%;②免疫组化法克山病阳性率分别为89.2%,两种方法阳性检出率均显著高于健康人,高于心肌炎及扩张型心肌病,但无差异;③光镜下低硒病毒组心肌病变位于心肌实质、乳头肌等.为多发性灶状坏死伴少量炎性细胞浸润,补硒组心肌病变为间质炎性细胞浸润,病变程度及检出率、低硒病毒组均重/高于补硒病毒组.结论以上实验结果均支持克山病的发生与肠道病毒,特别CVB病毒的感染高度相关.     

柯萨奇B3m病毒致T-2毒素染毒鼠心肌损伤的病理观察

目的：观察T－2毒素染毒小鼠感染柯萨奇B3m病毒（CVB3m）后心肌损伤的特点。方法：BALB／C小鼠随机分成4组，病毒组腹腔接种病毒液；毒素＋病毒组接种病毒前T－2毒素隔日灌胃，3周后腹腔接种与病毒组同等剂量的病毒液;毒素组单纯T－2毒素隔日灌胃；对照组生理盐水灌胃，腹腔接种1640营养液。观察各组小鼠心肌光镜、普通电镜、酶学电镜改变以及心肌病毒核酸持续感染情况。结果：毒素＋病毒组心肌损伤明显重于病毒组和毒素组，病灶纤维化明显，可见结缔组织增生、瘢痕形成。线粒体空泡变明显，酶活性产物严重脱失。结论：T－2毒素梁毒小鼠感染CVB3m后，心肌病变加重，心肌出现慢性损伤。     

穿孔素在慢性心肌损伤中的表达及其意义

目的：探讨穿孔素在阿萨奇病毒B组3型（CVB3m)至T－2毒素染毒小鼠心肌损伤中的表达及其意义,方法：实验组BALB／C小鼠1．0mg/kg体重T－2毒素隔日灌胃,3周后腹腔接种0．1ml内含1000TCID50的CVB3m病毒液,对照组生理盐水灌胃,腹腔接种0．1ml 1640营养液,观察心肌病理改变,同时用RTPCR技术对心肌组织中CVB3m RNA和穿孔素mRNA表达进行检测,结果：CVB3m感染T－2毒素染毒小鼠心肌出现慢性损伤,可见纤维结缔组织增生和坏死灶癜痕修复。心肌组织中持续表达CVB34m RNA和穿孔素mRNA。结论CVB3m RNA和穿孔素mRNA的持续表达可能是CVB3m致T－2毒素染毒小鼠心肌慢性损伤的机制之一。     

低硒与Coxsackie B_(3m)病毒感染对BALB/c小鼠肝脏脂质过氧化物代谢的影响

用国产低硒食用酵母合成低硒饲料（硒０．０１３ｍｇ／ｋｇ，ＶＥ含量为２０ｍｇ／１００ｇ）喂养断奶后ＢＡＬＢ／Ｃ雄性小鼠，５周后腹腔接种嗜鼠心肌病毒ＣＶＢ３ｍ１０３ＴＣＤ５００．１ｍｌ，７天后处死建立低硒状态下病毒性心肌炎模型，测定肝脏组织中脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量及全血中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性。结果表明低硒感染ＣＶＢ３ｍ小鼠肝组织中ＬＰＯ含量明显高于常硒病毒感染组及常硒对照组（Ｐ＜０．０１）；低硒感染ＣＶＢ３ｍ病毒组小鼠全血ＧＳＨ－Ｐｘ活力也最低。结果提示：低硒因素加重病毒感染引起ＧＳＨ－Ｐｘ活力降低，ＬＰＯ堆积，降低机体的抗氧化能力     

Selenium supplementation decreases coxsackievirus heart disease during murine AIDS

Coxsackievirus B3 (CVB3) induces myocarditis, especially in the immunodeficient or immature. To investigate whether CVB3 induced pronounced cardiomyopathy during the severe immune dysfunction of murine acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), female C57BL/6 mice were infected with LP-BM5 retrovirus and then coinfected with CVB3. C57BL/6 mice, essentially resistant to CVB3-induced cardiomyopathy, became susceptible to this cardiomyopathy because of the immune dysfunction caused by murine AIDS. This susceptibility suggests that retrovirus infection causes conditions favoring the CVB3 induction of cardiac lesions. Mice were fed a diet supplemented with selenium (Se) at nine times the recommended daily dose for mice (0.933 mg/ kg of diet). Heart tissues were analyzed histopathologically 12 d after CVB3 challenge. Mice experiencing concurrent retrovirus and CVB3 infection had a high degree of cardiac lesions that were consistent with myopathy compared to that in uninfected mice (p<0.05). Se supplementation during murine retrovirus infection significantly diminished the pathogenesis caused by concurrent CVB3 infection in mice that had murine AIDS. There was a significant increase in the survival of dually retrovirus and CVB3-infected mice that were fed Se, compared to that of identically treated mice that were not fed Se. Hepatic lipid per-oxides were significantly diminished in the Se-supplemented mice as compared to those in immunodeficient mice without supplementation (p<0.1). Increased oxidation occuned in mice that had murine AIDS, which was also shown by reduced tissue vitamin E. Therefore, the reduction of retrovirally induced oxidation and inflammation by Se produced conditions that improved the survival of mice during CVB3 infection.     

柯萨奇B_4和B_(3M)病毒重叠感染对低硒昆明鼠T细胞亚群的影响

目的：观察低硒,补硒鼠先后感染ＣＶＢ４,ＣＶＢ３Ｍ两种病毒七天后,小鼠脾脏Ｔ细胞亚群的变化。方法：小鼠先后感染ＣＶＢ４,ＣＶＢ３Ｍ两种病毒七天后,检测脾脏Ｔ细胞亚群细胞数,血清中和抗体及心肌组织病毒滴度。结果：在低硒感染组ＣＤ４,ＣＤ８,ＣＤ３均显著下降,而补硒感染组ＣＤ３,ＣＤ４,ＣＤ８Ｔ淋巴细胞亚群都明显升高,心肌组织病毒,病变程序及检出率低硒病毒组显著重于补硒组。血清中和抗体效价低硒组显著低于补硒组。结论：硒缺乏可以导致机体免疫功能的低下,而ＣＶＢ４,ＣＶＢ３Ｍ病毒的二重感染导致低硒鼠的免疫功能进一步低下。     

重组人硫氧还蛋白对小鼠病毒性心肌炎的保护作用

目的 观察重组人硫氧还蛋白(TRX)对病毒性心肌炎小鼠心肌损伤的保护作用.方法 给予Balb/c小鼠腹腔注射0.1 ml 100TCID50(50%细胞感染率)的柯萨奇B3m病毒(CVB3m),建立病毒性心肌炎模型,同时给予尾静脉注射2 mg/kg的重组人TRX加以保护,对照组给予等量的生理盐水,7 d后处死动物,检测血清乳酸脱氢酶(LDH) 活性,采用光镜观察心肌组织损伤情况.结果 病毒感染组小鼠血清LDH活性[(313030±390.57)U/L)]明显高于对照组[(1617.86±155.42)U/L]和TRX保护组[(1959.43±540.75)U/L],两两比较差异有统计学意义(P<0.05);TBX保护组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05).光镜结果显示,病毒感染组8只小鼠有5只检出心肌病变,小鼠心脏病理切片可见局灶性心肌坏死和炎细胞浸润;而TRX保护组小鼠未出现心肌损伤.结论 重组人TBX可以减轻CVB3m病毒感染导致的心肌损伤,起到心肌保护作用.     

饲料低硒对大鼠血清VE含量的影响

用分别补充100ppm VE 的大骨节病区低硒粮配制的低硒饲料和加饲料饲硒养并繁殖大鼠,组织学上未发现母代或子代大鼠有肝坏死和骨骼肌病变。在母代大鼠中,低硒组的血硒含量明显地低于加硒组(P<0.01),而血清 VE 含量在低硒与加硒组间几乎相同。提示低硒不影响母代大鼠的血清 VE 含量。在子代大鼠中,各组动物血硒含量的变化与其母代基本相同;而低硒组的血清 VE 含量明显地高于加硒组(P<0.05),并且血清 VE 含量与血硒含量之间呈负相关关系(r=-0.658,P<0.05)。结果表明饲料低硒能使子代低硒大鼠血清 VE 含量增加。     

反复感染CoxsackieB3m病毒小鼠心肌NOSⅡ蛋白的表达

应用嗜鼠心肌Coxsackie B_3病毒(CVB_(3m))给BALB/C小鼠重复腹腔注射,连续3次,间隔30d,末次注射后10d处死小鼠。光学显微镜检查发现,小鼠心肌可见不同时期的病灶(坏死灶、瘢痕灶),心肌损伤检出率达100％。应用免疫组化法检测发现,72.50％感染组鼠心肌中可见NOS_Ⅱ蛋白的表达,与对照组(26.92％)比较,P<0.01,有极显著差异。提示CVB_(3m)重复感染可致BALB/C小鼠慢性心肌损伤,NO参与心肌损伤的发生与发展。