实时荧光PCR法、胶体金快速检测法及病毒分离培养法在甲型流感病毒检测中的临床应用分析

目的:评估三种常见甲型流感病毒检测方法临床应用领域。方法:采用实时荧光PCR法、胶体金快速检测法及病毒分离培养法同时对244份临床标本进行甲型流感病毒检测,进行统计分析,评估不同方法灵敏度、特异性差异。结果:实时荧光PCR法、胶体金快速检测法、病毒分离培养法检测阳性率分别为73.77%,59.02%,40.16%;与实时荧光PCR法相比,胶体金快速检测法灵敏度、特异度分别为68.33%,67.19%;病毒分离培养法分别为54.44%,100%;与病毒分离培养法相比,胶体金快速检测法灵敏度、特异度分别为92.86%,63.70%。结论:实时荧光PCR法灵敏度、特异度高,适于确诊;胶体金快速检测法灵敏度较低,特异度最低,适于初筛;病毒分离培养法灵敏度较低,特异度高,适于做深入抗原分析。     

胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较

目的对胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)做比较,了解胶体金试纸法的灵敏度和特异度。方法采用两种方法检测0~65岁人群血清标本3 578份。结果胶体金试纸法检测出HBsAg阳性标本189份,阳性率5.28%;ELISA法检测出阳性标本200份,阳性率5.59%;两种方法阳性检出率差异无显著统计学意义。胶体金试纸法与ELISA法检测标本符合率为97.74%。胶体金试纸法的灵敏度为77.00%,特异度为98.96%。结论胶体金试纸法操作简便、快速,检测的特异度较好,但其灵敏度有待提高。     

实时荧光PCR技术在预防性健康检查沙门菌与志贺菌检测中的应用

目的将实时荧光PCR技术应用于食品及公共场所从业人员肛拭标本的沙门菌与志贺菌检测,评价其作为快速检测方法的适用性。方法采集肠道门诊粪便与肛拭标本分别利用实时荧光PCR法与传统培养法进行平行对照实验,验证实时荧光PCR法的灵敏度与特异度;然后将此法与列联表结合应用于从业人员肛拭标本的检测。结果 515份肠道门诊标本的检测结果表明,实时荧光PCR法阳性率高于培养法(P0.05),沙门菌与志贺菌的灵敏度均为100.00%,特异度分别为98.98%、97.02%。检测2013年采集的从业人员肛拭标本21 590份,检出沙门菌18株,阳性率为0.83‰;未检出志贺菌。实时荧光PCR法检出率高于2014年同期传统培养法检出率。结论实时荧光PCR技术有助于提升预防性健康检查中沙门菌与志贺菌的检出率,而且特异度强、灵敏度高,兼具时效性与客观性,适合基层实验室对从业人员进行沙门菌与志贺菌的快速筛查。     

儿科门诊腹泻婴幼儿轮状病毒检出情况及检测方法学比较

目的 了解儿科门诊腹泻婴幼儿A组轮状病毒感染情况以及2种检测方法的比较。方法 收集2020年1月—12月龙游县妇幼保健院儿科门诊疑似病毒性腹泻的235份腹泻物,以荧光定量PCR和胶体金技术进行A组轮状病毒的检测,并对结果进行统计学分析。结果 235份样本荧光定量PCR检出A组轮状病毒阳性67份,检出率为28.51%(67/235),感染以> 1岁～2岁婴幼儿为主且以10月—12月阳性构成比最高。胶体金法检出A组轮状病毒阳性62例,检出率为26.38%(62/235),2种方法检出率比较差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 > 1岁～2岁婴幼儿是A组轮状病毒的高发年龄段,2020年10月—12月是A组轮状病毒的高发季节。胶体金检测与荧光定量PCR 2种方法均可用于A组轮状病毒的病原学检测。     

三种流感病毒检测方法的对比分析

目的对实时荧光定量PCR法、MDCK细胞培养法、鸡胚培养法进行对比分析,筛选出准确的检测方法,为流感的监测与防控提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用实时荧光定量PCR法、MDCK细胞培养法、鸡胚培养方法对2016年10月～2017年3月的602例流感样病例咽拭子进行检测,比较各方法的阳性率以及灵敏度和特异度。结果 602例流感样病例咽拭子中,实时荧光定量PCR法、MDCK细胞培养法、鸡胚培养法检测的阳性率分别为18.27%、13.79%、1.66%;相对于实时荧光定量PCR法,MDCK细胞培养法的灵敏度为75.45%,特异度为100.00%,鸡胚培养法的灵敏度为9.09%,特异度为100.00%;与MDCK细胞培养法相比,鸡胚培养法的灵敏度为12.05%,特异度为100.00%。结论实时荧光定量PCR法与MDCK细胞培养法和鸡胚培养法相比,其检测速度快,阳性率和灵敏度高,适用于流感病毒的快速检测;MDCK细胞培养法和鸡胚培养法是有效的病毒分离法,可用于流感毒株的制备,并且可对其抗原性、基因特性和耐药性进行深入研究。     

胶体金免疫层析法应用于环境水体中霍乱检测的效果评价

目的验证胶体金免疫层析法应用于环境水样本中霍乱检测的特异性、灵敏性和实用性,寻求简便、可靠的环境水中霍乱检测方法。方法环境水样置36.5℃经6 h增菌培养后,用胶体金免疫层析法检测,同时用传统分离培养法,培养后的菌落用血清玻片凝集方法作为鉴别霍乱弧菌的金标准,且用统计学方法对这两种方法检测的结果进行比较。结果 747份水样中胶体金试验阳性19份,分离培养法培养出16株霍乱弧菌,经χ2检验,差异无统计学意义(χ2=0.61,P>0.05),表明胶体金免疫层析法与传统分离培养法检测外环境水中霍乱的结果之间差异无统计学意义。胶体金免疫层析法检测外环境水中霍乱的灵敏度为100.00%,特异性为99.59%,假阳性率为0.41%,假阴性率为0.00%,与传统分离培养法的结果一致率为99.60%。结论胶体金免疫层析法检测外环境水中霍乱的敏感度好(100.00%),特异性高(99.59%),与传统分离培养法的结果一致性较高,对外环境水中霍乱检测具有可靠性、简便性、实用性,适宜在基层作为辅助检测方法推广应用。     

两种胶体金免疫层析诊断试剂检测轮状病毒效果比较

目的比较两种A组轮状病毒胶体金免疫层析诊断试剂的灵敏度和特异度。方法用两种胶体金免疫层析试剂(万泰和拜发试剂盒)对166份腹泻患者粪便标本进行轮状病毒检测,与酶联免疫吸附试验(ELISA)的检测结果进行比较。结果以ELISA方法为参照,万泰公司胶体金试剂的敏感度为84.6%(33/39),特异度为96.1%(122/127),阳性预测值和阴性预测值分别为86.8%(33/38)和95.3%(122/128);拜发公司胶体金试剂的敏感度为82.1%(32/39),特异度为96.9%(123/127),阳性预测值和阴性预测值分别为88.9%(32/36)和94.6%(123/130)。结论本实验结果表明,胶体金免疫层析诊断试剂简便可靠,可用于A组轮状病毒的快速检测。     

实时荧光PCR快速检测创伤组织中繁殖状态金黄色葡萄球菌的方法研究

目的为解决临床对创口组织金黄色葡萄球菌培养鉴定时间偏长、阳性率低的不满意现象,探讨建立一种检测时间显著缩短而阳性率得到明显提高的方法。方法以金黄色葡萄球菌检测的国家标准方法为金标准,选用246份原始组织样本与其增菌后组织样本同时用实时荧光PCR法检测,与创口组织标本的金黄色葡萄球菌常规培养法作平行检测比对,经统计分析评估实时荧光PCR法和常规培养法的7项指标及标准方法的一致性与检测时间的比较。结果常规培养法与实时荧光PCR法的灵敏度分别为40.91%、100%;特异度分别为100%、100%;约登指数分别为0.41、1.00;阳性预测值分别为40.91%、100%;阴性预测值分别为88.60%、100%;与标准方法的一致性检验Kappa值分别为0.53、1.00;常规培养法的检出阳性率为7.32%,时间需3 d~4 d;实时荧光PCR法的检出阳性率为18.70%,所需时间仅为2 h~26 h。结论实时荧光PCR法的灵敏度、约登指数、检测时间和检出阳性率等均优于常规培养法,基本解决了临床对创口组织金黄色葡萄球菌培养鉴定时间偏长、阳性率低的不满意现象。     

免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液MPB64对肺结核的诊断价值

目的探讨免疫胶体金法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)结核杆菌特异性分泌抗原MPB64在肺结核诊断中的应用价值。方法对113例肺结核患者和80例非结核患者的BALF进行免疫胶体金法检测MPB64、荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌DNA及改良酸性罗氏培养基法结核分枝杆菌培养,比较分析3种方法的检测结果。结果 MPB64免疫胶体金法与荧光定量PCR法、改良酸性罗氏培养基法的符合率分别为58.03%和57.51%;以临床诊断结果为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为61.95%、87.50%、72.54%。以荧光定量PCR法为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为49.30%、63.11%、58.03%;以改良酸性罗氏培养基法为参照,免疫胶体金法检测MPB64的敏感度、特异度与准确度分别为48.21%、61.31%、57.51%。结论免疫胶体金法检测MPB64应用于支气管肺泡灌洗液对肺结核的临床诊断有辅助诊断价值,但检测的假阳性、假阴性值得进一步分析研究。     

口岸适用性登革病毒检测模式的建立

目的优化我国口岸登革热检测模式。方法考核登革热快速检测试剂(胶体金法)和实时荧光定量PCR试剂(通用型及分型)的检测性能,再将两种方法联合应用于口岸登革热检测,在口岸现场完成胶体金快速筛查,在实验室完成确认。结果利用8份不同亚型的登革病毒阳性血清进行考核,胶体金法和实时荧光定量PCR的检测灵敏度均为100.00%。2019年1-6个月,在厦门口岸收集了108份入境发热旅客的血液样本,用实时荧光定量PCR方法从中检出25份登革病毒阳性,用胶体金法检出24份;胶体金法漏检1份,符合率为96.00%。结论初筛和确认相结合的检测方法能提高登革热疫情时登革病毒的检测效率,满足口岸登革病毒快速筛查的需求。     

三种乙型肝炎表面抗原检测方法在口岸体检中的应用评估

目的循证检验医学(EBLM)指导下,对电化学发光法(ECLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析法等3种乙型肝炎表面抗原(HBsAg)检测方法进行评价,为口岸出入境人员寻求最佳的快速HBsAg检测方法和检测程序提供科学依据。方法ECLIA、ELISA、胶体金免疫层析法检测40份(HBsAg)标准血清盘标本,以血清盘预期结果为标准,比较3种方法灵敏度、特异度、总符合率。同时应用成本最小化分析方法,分别计算3种方法的成本。结果在血清盘HBsAg检测中,ECLIA法的灵敏度、特异性和总符合率皆达100.0%,Kappa值为1.000;而ELISA法国产科华试剂灵敏度76.9%、特异性100.0%和总符合率85.0%,Kappa值为0.432;胶体金免疫层析法灵敏度34.6%、特异性100.0%和总符合率57.5%,经Kappa检验其值为0.216。成本最小化分析结果显示:ECLIA法成本20元,ELISA法(科华,国产试剂)成本3元,胶体金免疫层析法成本3元,ECLIA法成本最高。结论ECLIA方法适用于需评估免疫状态,为接种疫苗做准备的出国留学人员、出国商务人员、入境留学生、入境商务人员的HBsAg检测。ELISA国产试剂适用于出国劳务人员、海员等一般人群。胶体金免疫层析法适用于紧急事情人员和日常复查的检测。     

两种检测乙肝表面抗原方法的比较

目的了解两种检测乙型肝炎方法的优缺点,为实验室提供快速、准确的检验方法。方法先后采用胶体金免疫层析测试条法和做血清学检测乙型肝炎表面抗原,并将资料进行整理、分析。结果胶体金免疫层析法检出阳性250份,阳性率为54．82％;ELISA法检出阳性275份,阳性率为60.31％。两法检测结果的总符合率为94．52%。以ELISA法为常规法验证胶体金免疫层析法的敏感性,敏感性为90．91％,特异性为100％。结论胶体金免疫层析法敏感性较酶联免疫法(ELISA)差,认为检测HBsAg仍然以ELISA法为主。     

两种实验室检测方法在小儿巨细胞病毒感染诊断中的比较

目的探讨胶体金法与实时荧光定量PCR法在临床小儿巨细胞病毒(HCMV)感染中的诊断效果。方法收集浙江衢化医院2011年6月-2016年6月收治的疑似HCMV感染患儿100例。采集患儿血清及尿液,采用实时荧光定量PCR法(A组)及胶体金法(B组)检测患儿血清中HCMV的感染情况;采用实时荧光定量PCR法检测患儿尿液中HCMV的感染情况。比较两组血清中HCMV阳性率。参考HCMV感染诊断方案及临床诊断标准,统计HCMV感染阳性例数,并以此为金标准,统计两组对血清中HCMV感染的诊断效能(计算准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。比较实时荧光定量PCR法对血液中、尿液中HCMV感染的检测阳性率及诊断效能。结果 A组HCMV检测阳性率为19.0%,明显高于B组的9.0%(P0.05)。在对血中HCMV诊断效能方面,A组准确度、敏感度、阴性预测值均明显高于B组(P0.05)。通过比较实时荧光定量PCR法对血液及尿液中HCMV的诊断效能,发现尿液中HCMV诊断的准确度明显高于血液(P0.05)。结论实时荧光定量PCR法在检测HCMV感染方面较胶体金法更准确、敏感;在选择检测标本方面应优先选择尿液。     

应用实时荧光聚合酶链反应检测婴幼儿腹泻标本中的腺病毒

目的 建立实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测腺病毒,并分析浙江省温州地区散发性婴幼儿腹泻患者不同型别腺病毒的感染情况.方法 根据GenBank中腺病毒六邻体基因序列设计一对通用引物,建立Real-time PCR方法检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA,并与免疫层析法比较;同时对Real-time PCR方法 检测阳性的标本进行PCR产物测序和病毒分离培养及酶切鉴定.结果 建立快速、特异检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA的Real-time PCR技术.157份婴幼儿腹泻标本中免疫层析法检测阳性3份,阳性率为1.91%;Real-time PCR检测阳性5份,阳性琦率为3.18%(5/157);154份免疫层析法检测阴性标本中,有2份Real-time PCR法检测为阳性.5份Real-time PCR检测阳性标本经测序鉴定,Ad3型占1.91%(3/157),Ad7型占1.27%(2/157);经病毒分离培养检出阳性2例,酶切鉴定为Ad3型.结论 Real-rime PCR技术结合PCR产物直接测序分析具有敏感、特异等优点,适用于腹泻标本中腺病毒的检测及分型.2008年2-4月浙江省温州地区散发性婴幼儿腹泻的腺病毒主要为Ad3型和Ad7型.     

国境口岸疟疾快速联合检测方法应用评估

目的对疟疾快速检测方法的联合应用进行评价,探索适用于口岸的疟疾快速检测方法。方法选取来源于中国科学院寄生虫病研究所的疟原虫镜检阳性滤纸血样本,其中30例恶性疟,28例间日疟和20例正常人对照样本;同时使用检测疟疾的实时荧光PCR方法、交叉引物恒温扩增方法、胶体金技术对其进行检测;分析各方法检测的敏感性和特异性。结果实时荧光PCR法检测恶性疟原虫的灵敏度高于交叉引物恒温扩增法和胶体金法(P值分别为0.019、0.043,P<0.05);对低原虫密度的恶性疟样本(原虫密度10～100及101～1000个/μl),实时荧光PCR法检测的灵敏度较高,交叉引物恒温扩增法和胶体金法对于低原虫密度的恶性疟样本检测灵敏度显著低于PCR法;交叉引物恒温扩增和胶体金法联合检测在恶性疟各原虫密度下的灵敏度均高于使用单一方法的灵敏度,与实时荧光PCR法的灵敏度比较,差异无统计学意义(各原虫密度下,两者比较的P值分别为0.29、0.302、1.000、1.000,P>0.05)。实时荧光PCR法对间日疟样本检测灵敏度较高,交叉引物恒温扩增和胶体金法的灵敏度显著低于实时荧光PCR法,两者共检能提高检测的灵敏度。结论交叉引物恒温扩增法和胶体金法联合检测,可以较好地筛选出各种原虫密度的感染者,该联合检测方法的灵敏度和特异性与实时荧光PCR法相当,适合国境口岸对疟疾现场快速检测的要求。     

胶体金法与荧光免疫层析法检测新型冠状病毒特异性IgM和IgG的比较分析

目的 对胶体金法与荧光免疫层析法检测新型冠状病毒(简称新冠病毒)特异性IgM和IgG的结果进行比较分析,探讨抗体产生规律及特征.方法 用胶体金法和荧光免疫层析法两种方法对28例新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎)患者87份血液样本和对照组42份血液样本(经核酸检测排除感染新冠病毒)同时检测新冠病毒特异性IgM和IgG,并对...     

实时荧光PCR法、胶体金法和培养法检测甲鱼中霍乱弧菌

目的优化水产品甲鱼中霍乱弧菌的检测程序,提高甲鱼中霍乱弧菌检出率。方法用实时荧光PCR、常规细菌培养、胶体金法同时对甲鱼中霍乱弧菌进行检测,并用实时荧光PCR法检测标本中霍乱弧菌ctx基因。结果共检测185份甲鱼样品,其中实时荧光PCR法检出28份霍乱弧菌核酸阳性,阳性率为15.14%;6份ctx基因核酸阳性,阳性率21.43%(6/28)。常规细菌培养法分离出2株菌株,一株为O139群霍乱弧菌,一株为小川型霍乱弧菌,用实时荧光PCR检测这两株纯培养菌株或原始标本,霍乱弧菌ctx基因均为阴性;胶体金法未检出阳性标本。结论对于水产品标本,可先用实时荧光PCR法筛检霍乱弧菌,阳性标本再进行传统细菌分离培养,以提高霍乱弧菌菌株的检出率;同时阳性标本进行霍乱弧菌ctx基因核酸检测,如也为阳性,需提高警惕,加强流行病学上的预防控制措施,及时防范霍乱疫情的发生。     

杭州市某医院5岁以下A群轮状病毒感染腹泻病例特征分析

目的了解2011—2018年杭州市大江东医院5岁以下A群轮状病毒感染腹泻病例特征,为轮状病毒感染防控提供科学依据。方法收集2011—2018年杭州市大江东医院5岁以下腹泻患儿粪便标本,采用胶体金标记双抗体夹心免疫层析法检测A群轮状病毒抗原,并对A群轮状病毒流行时间、易感人群等进行描述性分析。结果纳入杭州市大江东医院2011—2018年5岁以下腹泻患儿26 254例,共检出A群轮状病毒阳性6 287例,阳性率为23.95%。2011—2018年A群轮状病毒阳性率有逐年下降趋势(P0.05)。男童检出阳性3 616例,阳性率为23.17%;女童检出阳性2 671例,阳性率为25.09%;女童阳性率高于男童(P0.05)。2岁患儿轮状病毒阳性率最高,为30.10%。A群轮状病毒阳性率时间分布曲线呈U型,感染高发集中在11月至次年2月,4 669例占74.26%。结论 2011—2018年杭州市大江东医院5岁以下腹泻患儿A群轮状病毒阳性率呈逐年下降趋势,2岁患儿A群轮状病毒阳性率最高,轮状病毒感染主要集中在秋冬季。     

双抗原夹心免疫层析法在新型冠状病毒感染诊断中的应用

目的:探讨双抗原夹心免疫层析法抗体检测在新型冠状病毒(2019-nCoV)感染中的诊断价值。方法:选取在医院就诊的179例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者为临床诊断阳性病例,另选同期就诊的85例确诊未感染2019-nCoV患者为临床诊断阴性病例。采用基于双抗原夹心法的胶体金免疫层析法和上转发光免疫层析法进行血清总抗体(IgG、IgM和IgA)检测,分析两种方法2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)检测结果与临床诊断的灵敏度、特异度和总符合率。结果:建立针对2019-nCoV抗体检测的双抗原夹心免疫层析方法,胶体金免疫层析法检测血清2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)与临床诊断的灵敏度、特异度和总符合率分别为97.77%、100%和98.48%;上转发光免疫层析法分别为98.88%、100%和99.24%。两种检测方法检测血清2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)的总符合率与临床诊断结果比较,差异有统计学意义(χ²=246.5,χ²=225.0;P<0.05)。结论:双抗原夹心法对于2019-nCoV抗体检测具有重要应用价值。     

新型冠状病毒感染核酸和抗体检测方法比较

目的比较实时荧光RT-PCR法和胶体金法在新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染中的诊断价值。方法本研究采用回顾性研究,收集无锡市各医疗机构及集中隔离点2020年1月25日—2020年2月12日送至无锡市疾病预防控制中心实验室的新型冠状病毒冠肺炎(COVID-19)相关的实验室检测血清标本和鼻咽拭子标本各192份。33份为核酸检测阳性样本,159份为核酸检测阴性样本,包括68例确诊患者的密切接触者和91例门诊发热病例样本。采用胶体金法对所有研究对象的血清进行IgM、IgG抗体检测,比较抗体检测和核酸检测结果,进行统计学差异分析。结果病毒核酸阳性率17.19%(33/192),IgM抗体阳性率7.29%(14/192),IgG抗体阳性率11.46%(22/192),IgM和IgG联合检测阳性率11.46%(22/192)。病毒核酸和IgM、IgG、联合IgM和IgG抗体检测结果分别进行Kappa一致性检验,一致性较好,Kappa值分别为0.502、0.726、0.726,P值均0.001。两种检测方法总符合率93.23%(179/192)。以实时荧光RT-PCR法为金标准,联合IgM和IgG抗体检测灵敏度63.64%,特异度99.37%,阳性预测值95.45%,阴性预测值92.94%,准确度63.01%。结论胶体金法具有方便、快捷、灵敏度和特异度高等优点,实现SARS-CoV-2的快速筛查,可用作实时荧光RT-PCR检测阴性病例的补充检测。两种检测方法联合应用,发挥各自优势,对SARS-CoV-2感染的诊断和防控具有重要的意义。