小鼠骨髓巨噬细胞雌激素膜表面受体的检测

目的使用不同方法检测小鼠骨髓巨噬细胞（BMM）雌激素膜受体,突破雌激素作用机制的传统观念,为临床更好地防治相关疾病提供新思路。方法六周龄C57BL／6j雄性小鼠,体外诱导培养BMM。收集细胞,与17β-estradi01-BSA-FITC或BSA-FITC孵育,用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞仪检测其与巨噬细胞的结合状况。将巨噬细胞与17β-estradiol-BSA-FITC孵育的同时,分别加入十倍浓度的17β-estradiol、17β-estradiol-BSA、Tamoxifen、Testosterone,用流式细胞仪检测不同处理组荧光强度的变化。结果激光共聚焦扫描显微镜显示17β-estradiol-BSA-FITC结合于巨噬细胞膜上,而BSA-FITC对照组未检测到相应荧光。流式细胞仪检测显示17β-estradiol、17β-estradiol。BSA竞争性抑制17β-estradi01-BSA-FITC与巨噬细胞的结合,而Tamoxifen、Testosterone对17β-estradiol-BSA-FITC与巨噬细胞的结合无影响。结论小鼠骨髓巨噬细胞表面存在雌激素膜受体。     

受体介导内吞引起的巨噬细胞膜磷脂流动性的改变

用光敏感磷脂荧光探针ＮＢＤ－Ｃ６－ＨＰＣ和ＦＲＡＰ技术，测量了刀豆素Ａ、麦芽凝集素（ＷＧＡ）、酵母多糖（Ｚ．Ａ）３处配体刺激前后巨噬细胞膜磷脂扩工系数及荧光恢复率的变化。结果显示，静息状态下膜磷脂的扩散系数Ｄ＝（１１．３７±１．２２）×１０＾－１０ｃｍ＾２／ｓ，荧光恢复率Ｒ＝８６．２±７．７（％，漂白后２００ｓ）；３处配体刺激３０ｍｉｎ后，膜磷脂扩散系数和荧光恢复率Ｄ＝（３．２４±１．３８）×１０     

IL-10对Aa-LPS刺激的兔肺泡巨噬细胞功能的影响

目的研究白细胞介素10(IL-10)在伴放线放线杆菌(Aa)脂多糖(LPS)刺激兔肺泡巨噬细胞(AM)产生炎症反应过程中的免疫调节作用及其机制。方法分离纯化AM,100ng/mL IL-10预孵2h,加入Aa-LPS刺激继续培养24h,流式细胞术检测AM对荧光标记Aa(FITC-Aa)的吞噬指数(PI)情况及AM的活性氧(ROS)水平;荧光定量PCR法检测CD14、TLR4、SRA和MHC-Ⅱ基因表达的变化;硝酸还原酶法检测AM的NO分泌情况。结果 IL-10上调Aa-LPS诱导的AM的PI(P<0.05),下调Aa-LPS诱导的AM膜表面受体CD14、TLR4、MHC-ⅡmRNA的表达(P<0.01),而SRA mRNA表达量升高(P<0.05);IL-10抑制Aa-LPS诱导的AM的ROS和NO水平(P<0.01)。结论 IL-10可以通过上调Aa-LPS诱导的AM SRA基因表达,下调CD14、TLR4、MHC-Ⅱ基因表达,并且抑制其产生ROS和NO的水平,从而调节免疫反应,限制炎症介质的大量释放,同时增强AM的吞噬作用,清除感染。     

高脂饮食诱导的肥胖小鼠中缺氧对胰岛素抵抗及脂肪组织巨噬细胞浸润的影响

 目的  研究缺氧在高脂饮食诱导的肥胖(diet-induced obesity,DIO)小鼠模型中对胰岛素抵抗及脂肪组织巨噬细胞浸润的影响。   方法  建立DIO小鼠模型,动态观察高脂饮食(high-fat diet,HFD)喂养小鼠4、8、12周时的体质量、白色脂肪(white adipose tissue,WAT)量及其与体质量的比值、空腹血糖、空腹胰岛素、糖耐量和胰岛素抵抗、脂肪组织中F4/80标记的巨噬细胞浸润,采用hypoxyprobeTM-1试剂盒(哌莫硝唑标记法)评价DIO小鼠的脂肪组织是否存在缺氧及其出现时间,分析缺氧与上述指标异常出现的时间先后,探讨缺氧在HFD致胰岛素抵抗、脂肪组织巨噬细胞浸润中的作用。  结果  DIO小鼠4周时即出现糖耐量异常,8周时出现胰岛素抵抗;WAT存在局部缺氧,与巨噬细胞浸润增加同步出现在HFD后12周时间点,迟于糖耐量异常和胰岛素抵抗的出现。  结论  缺氧可能不是DIO时糖代谢异常和胰岛素抵抗的启动因素。     

小檗碱对高脂饮食诱导的小鼠慢性肾脏损伤和巨噬细胞的影响

目的:观察小檗碱对高脂饮食诱导的小鼠慢性肾脏损伤的影响及肾脏内巨噬细胞的变化?方法:将30只6周龄C57BL/6小鼠随机分为正常对照组?高脂饮食组?小檗碱治疗组,每组10只,检测总胆固醇?甘油三酯?血肌酐?尿素氮?胱抑素C(Cys C)?24 h尿量和尿白蛋白,HE染色观察肾脏形态病理学变化?Western blot检测白细胞介素(IL)-1β和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平?免疫荧光染色检测巨噬细胞标记物F4/80的表达变化?免疫组化染色观察M1型巨噬细胞标记物iNOS的表达情况?结果:高脂饮食组小鼠血脂?Cys C?24 h尿量和尿白蛋白水平显著升高(P < 0.05);IL-1β?F4/80和iNOS在肾脏表达显著增高(P < 0.05)?小檗碱治疗组小鼠血脂?Cys C?24 h尿量和尿白蛋白水平有所降低;IL-1β?F4/80和iNOS的表达均较高脂饮食组减少(P < 0.05)? 结论:小檗碱可以减轻高脂饮食诱导的小鼠慢性肾脏损伤,这种保护作用是通过减少肾脏组织浸润的巨噬细胞,尤其是减少M1型巨噬细胞的浸润而发挥的?     

高脂饮食对兔血脂及氧化修饰低密度脂蛋白的影响

目的：研究高脂饮食对血浆中TG、TC、HDL-C、LDL-C及oxLDL的影响。方法：选用健康雄性新西兰纯种大耳白兔20只,随机分为对照组和实验组,对照组喂饲基础颗粒兔饲料,实验组喂高脂饲料。40天后抽血测定各项生化指标。结果：实验组Th、TC、LDL-C、oxLDL、MDA均高于对照组,而HDL—C、SOD低于对照组,两组比较均有显著差异。结论：高脂饮食可促进LDL的氧化修饰及脂质过氧化反应。     

受体介导内吞引起的巨噬细胞膜磷脂流动性的改变

用光敏感磷脂荧光探针NBD－C6－HPC和FRAP（FluorescenceRecoveryAfterPhotobleaching）技术，测量了刀豆素A（ConA）、麦芽凝集素（WGA）、酵母多糖（Z．A）3种配体刺激前后巨噬细胞膜磷脂扩散系数及荧光恢复率的变化．结果显示，静息状态下膜磷脂的扩散系数D＝（11．37±1．22）×10－10cm2／s，荧光恢复率R＝86．2±7．7（％，漂白后200s）；3种配体刺激30min后，膜磷脂扩散系数和荧光恢复率（漂白后200s）分别为D＝（3．24±1．38）×10-10，R＝80.5±9．5（ConA）；D＝（5．30±1．55）×10－10，R＝50．9±9．8（WGA）;D＝（1．45±1．4）×10－10，R＝56.4±8．7（Z.A）．膜磷脂扩散系数的降低，与配体-受体复合体流动性的降低相关．     

亚硫酸盐对大鼠肺巨噬细胞膜Fc受体和ConA受体的影响

本文研究了亚硫酸盐对大鼠肺巨噬细胞Fc和ConA受体的影响,及Fc、ConA受体在肺巨噬细胞上的分布。结果发现亚硫酸盐能抑制ConA和Fc受体的活性。Fc受体大多分布在PM的边缘部位,ConA受体在不同形态的PM上分布是不一样的,在圆细胞上分布于周边部,而于膜性细胞和扁平细胞则分布于整个细胞表面。     

肿瘤相关巨噬细胞肝X受体的激活对抗瘤应答的影响

［摘要］目的： 研究肿瘤微环境、肝X受体（ liver X receptors,LXRs）与肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophage, TAM）的形成及其功能之间的关系。方法： 提取肿瘤组织中的肿瘤相关巨噬细胞,同时提取腹腔巨噬细胞作为对照。在体外实验中巨噬细胞与肿瘤细胞共培养或者使用肿瘤上清处理巨噬细胞, 实时PCR检测巨噬细胞LXRs、IL 10、IL 12的mRNA水平;分别激活LXR和阻断LXR信号通路,观察其对TAM形成的影响。结果： 肿瘤微环境可诱导巨噬细胞LXRs受体高表达,并表现为M2型巨噬细胞的表型,激活LXRs可以促进巨噬细胞向TAM转变,而阻断LXR信号通路则抑制TAM的形成。 结论： 肿瘤微环境能激活LXRs,从而诱导TAM的形成,并促进肿瘤生长、转移和免疫逃逸。     

雄激素通过细胞膜表面受体引起巨噬细胞的快速应答

雄激素主要是指由睾丸间质Leydig细胞合成、分泌的睾酮及其在靶细胞内的活性代谢产物———二氢睾酮 ,是类固醇激素的一种。它的主要作用是在胚胎期诱导男性内外生殖器官的分化 ,在青春期促进男性第二性征的出现及在成年期维持男性性功能和生育能力 ,此外雄激素还能增加蛋白质的合成。长期以来 ,人们就注意到两性在免疫应答和免疫效应方面存在着差别 ,这种差别主要是由于男 (雄 )性与女 (雌 )性的性激素种类和表达水平的不同。近年来性激素影响机体免疫系统的有关研究报道逐渐增多 ,研究热点集中在性激素对免疫细胞的调节 ,其中雄激素通过…     

764—3对大鼠肺泡巨噬细胞膜ConA受体的影响

用辣根过氧化物酶-胶体金标记技术(HRP-Gold),观察肺泡巨噬细胞(AM)膜刀豆素球蛋白受体(ConA-R)的变化。结果发现:正常大鼠肺泡巨噬细胞表面胶体金颗粒平均为1.985±0.097个/μm,分布较均匀;博来霉素A_6(BLMA_6)体外激活的AM表面金颗粒为3.909±0.314个/μm,与正常组比较差异显著,P<0.001;预先与764-3培养的AM,其表面金颗粒平均为1.577±0.090个/μm,较单纯BLMA_6组明显降低。提示764-3对BLMA_6激活的AM膜ConA-R表达有一定的抑制作用。     

高温环境对腹腔巨噬细胞表面C3b受体的影响

报道高温环境对腹腔巨噬细胞表面Ｃ３ｂ受体的影响．将９１只ＳＤ大鼠随机分为七组：①受热１ｈ（４０．０±０．５℃）组，②单纯游泳组（３０．０—３２．０℃），③受热１ｈ（４０．０±０．５℃）延期４ｈ）（室温）活杀组，④受热１ｈ（４０．０±０．５℃）延期２４ｈ（室温）活杀组，⑤受热２ｈ（４０．０±０．５℃）组，⑥受热１ｈ（４０．０±０．５℃）加游泳（３０．０～３２．０℃）组，⑦对照组（室温）。处死各组大鼠，以绵羊红细胞作花环试验检测腹腔巨噬细胞表面Ｃ３ｂ受体。结果显示：①、②、③、④组花环率分别为１１．９８±４．４０，１１．３０±３．１３，１２．１４±４．２６及１１．７５±３．３０，与⑦组（１１．３８±３．２２）比较无明显差异（Ｐ＞０．０５）；⑤、⑥组花环率分别为８．３０±３．０５和１４．３１±４．８１，与⑦组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。本实验通过模拟高温环境，以了解高温环境对机体巨噬细胞免疫功能的影响程度，从而为高温环境下作业人员的健康保健提供卫生指导     

熊胆粉对豚鼠肝脂肪变性的预防

目的 探讨熊但粉对高指饮食豚产肝脂肪变性的预防及其作用机理。方法 ８０只豚鼠随机分４组,为空白组、高脂组、熊胆粉组、熊去氧但酸（ＵＤＣＡ）组,分别检测胆汁生化和肝脏病理。结果 熊胆粉能降低胆汁胆固醇深度,提高胆汁胆汁酸浓度,缓解肝脂肪变性。结论 熊胆粉能有效缓解高脂高热量饮食引起的肝脂肪变性,且无明显的不良反应。     

黄连素对巨噬细胞清道夫受体表达的影响

目的:探讨黄连素(berberine)对巨噬细胞清道夫受体CD36、LOX-1、CD68等表达的影响.方法:以佛波醇酯(PMA)诱导分化的单核源巨噬细胞为细胞模型,黄连素(50 μmol/L)预处理1h后,加入氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激,采用流式细胞仪检测巨噬细胞表面清道夫受体的表达.结果:单核细胞分化成巨噬细胞后,CD36表达明显升高,而黄连素预处理显著抑制CD36的表达.oxLDL刺激巨噬细胞24 h后,巨噬细胞表面清道夫受体CD36、LOX-1和CD68表达明显升高(P＜0.01),黄连素预处理后巨噬细胞表面CD36、LOX-1的表达受到抑制,但CD68的表达未受影响(P＞o.05).结论:黄连素抑制巨噬细胞表面清道夫受体CD36、LOX-1的表达,一定程度上可减少巨噬细胞通过清道夫受体途径对脂质oxLDL的吞噬.     

氧化修饰低密度脂蛋白对巨噬细胞线粒体膜的损伤及云芝多糖…

采用ＡＣＡＳ５７０测定小鼠腹腔巨噬细胞线粒体膜电位及细胞内酯质过氧化物（ＬＰＯ），观察了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）对巨噬细胞线粒体膜的损伤及云芝多糖（ＰＳＫ）的保护作用。结果发现ＯＸ－ＬＤＬ可使巨噬细胞线粒体膜电位消失，细胞内ＬＰＯ含量升高。而正常ＬＤＬ和乙酰化ＬＤＬ对线粒体膜电位的影响较小。非特异性免疫增强剂ＰＳＫ能降低巨噬细胞内ＬＰＯ含量，对ＯＸ－ＬＤＬ引起的巨噬细胞线粒体膜损伤有保     

高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗及肝胰岛素受体底物1、2表达的影响

目的 探讨高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗（IR）及肝胰岛素受体底物（IRS）1、2表达的影响。方法 将10只西藏小型猪随机分为正常对照组（Ctr）5只饲喂普通饲料、IR模型（IR model）组5只饲喂高脂饲料,连续造模12周。造模12周后,称重并测量体长,计算体质量指数（BMI）,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、空腹血糖（FBG）和胰岛素（insulin）,计算胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment-estimated insulin resistance,HOMA-IR）;同时进行糖耐量试验,并计算糖耐量曲线下面积（AUC）;取肝组织检测IRS-1和IRS-2基因和蛋白表达,并行油红O、PAS和HE染色,分别观察肝脂质沉积、糖原及组织病理变化。结果 与正常对照组比,IR模型组体重、BMI指数、TC、LDL-C、HDL-C、FFA、FBG、insulin和HOMA-IR指数均显著升高（P<0.05,P<0.01）;糖耐量试验显示血糖和胰岛素水平曲线下降延缓,而AUC_血糖和AUC_胰岛素均明显升高（P<0.05,P<0.01）;肝组织中出现脂质沉积、糖原增加和局部肝细胞浊肿、部分胞核消失或被挤向一端,偶见淋巴细胞浸润;同时肝组织中IRS-1和IRS-2 mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论 高脂饮食可引起西藏小型猪胰岛素抵抗,肝组织IRS-1和IRS-2表达降低是高脂饮食影响西藏小型猪胰岛素敏感性的分子机制之一。     

氧化修饰低密度脂蛋白的蛋白组份可引起巨噬细胞线粒体膜…

采用ＡＣＡＳ５７０测定小鼠腹腔巨噬细胞线粒体膜电位,观察了氧化修饰低密度脂蛋白对巨噬细胞线粒体膜的损伤及春不同组份（ｍｉｏｅｔｙ）在致损伤中的作用,结果显示Ｏｓ－ＬＤＬ可使巨噬细胞线粒体膜产生抽伤,用ＧＳＨＰｘ模拟物ｅｂｓｅｌｅｎ清除Ｏｘ－ＬＤＬ上的脂氢过氧化（ＬＯＯＨ）可使损伤减轻２０％,单独的脂质份虽然含有大量的ＬＯＯＨ,但在噬细胞线粒体膜电位无显著影响,而单独的蛋白组份则可引起线粒体膜一下降     

δ阿片受体激动剂对LPS诱导的巨噬细胞凋亡及坏死的影响

目的研究δ阿片受体激动剂DADLE对LPS诱导的巨噬细胞凋亡和坏死的影响。方法用LPS（100μg/L）刺激大鼠腹腔巨噬细胞,在LPS后立即或4h后加入DADLE（104M）。流式细胞仪和共聚焦成像检测巨噬细胞凋亡及坏死,ELISA法检测巨噬细胞细胞核NF—KB的活化水平,Westemblot法检测p38MAPK活化水平。ELISA法检测细胞培养上清TNF-α、IL-1β和HMGB1水平。结果DADLE明显抑制了LPS诱导的巨噬细胞凋亡及坏死,降低了细胞培养上清中TNF—α、IL-1β和HMGBl的水平,而且对巨噬细胞NF—kB及p38MAPK的活化均有抑制作用。结论DADLE通过抑制NF—kB及p38MAPK的活化。减少了LPS诱导的巨噬细胞凋亡、坏死及细胞因子的释放。     

肺巨噬细胞膜ConA受体的电镜观察

本实验先将刀豆素A(ConA),结合在肺巨噬细胞膜上的ConA受体,再用辣根过氧化物酶)HRP)结合ConA,用3-3二氨基联苯胺(DAB)酶底物结合HRP,从而在肺巨噬细胞膜表面可显现ConA受体结合ConA所形成的密集的颗粒状反应物。利用这种电镜组化技术,制备标本,观察肺巨噬细胞膜ConA受体的存在及分布,并对ConA受体与吞噬作用及抗感染免疫的关系进行了讨论。