小檗碱通过抑制肝星状细胞自噬改善小鼠肝纤维化

目的 研究小檗碱(BBR)对肝星状细胞(HSC)自噬与活化的调控及其抗肝纤维化作用。方法分别采用不同质量浓度BBR(0、2、5、10、20、50μmol/L)干预血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB,20μg/L)处理的LX-2细胞24 h,使用CCK-8法检测细胞活力;采用不同质量浓度BBR(0、2、5、10μmol/L)干预PDGF-BB(20μg/L)处理的LX-2细胞24 h或48 h,使用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)方法检测细胞增殖率,细胞划痕实验检测细胞迁移率。实时荧光定量聚合酶链式反应、免疫印迹法检测小檗碱(5μmol/L)对LX-2细胞α-SMA,COL1A1 mRNA及蛋白表达的影响;检测Atg5、 Becn1、 Atg7、 LC3、p62的表达。动物实验共18只小鼠,随机分为3组,对照组[橄榄油(Oil)+磷酸盐缓冲液(PBS)]、模型组[四氯化碳(CCl₄)+PBS]和药物干预组(CCl₄+BBR),每组6只小鼠,造模5周,2次/周。第3周开始给与BBR干预,2次/周,连续给药3周。造模5周后处死小鼠,检...     

小分子干扰RNA下调星形细胞上调基因1的表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调星形细胞上调基因1(AEG-1)表达对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法卵巢癌细胞株SKOV3分为3组:空白对照组(不做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和观察组(AEG-1 siRNA转染)。用反转录聚合酶链反应观察AEG-1 siRNA对AEG-1基因表达的影响;甲基噻唑基四唑法观察AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测AEG-1 siRNA对卵巢癌SKOV3细胞凋亡和细胞周期的影响。结果空白对照组和阴性对照组AEG-1 mRNA表达、SKOV3细胞增殖、细胞凋亡率及在DNA合成前期(G0/G1期)、合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组SKOV3细胞AEG-1 mRNA表达显著低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞增殖在24、48、72 h较空白对照组和阴性对照组均显著减慢,差异有统计学意义(P<0.01)。观察组SKOV3细胞凋亡率显著高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组SKOV3细胞在DNA合成前期(G0/G1期)细胞比例显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),而合成期(S期)、合成后期(G2/M期)的细胞比例均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01),差异均有统计学意义。结论 siRNA可通过下调卵巢癌SKOV3细胞AEG-1基因的表达,抑制其增殖,促进其凋亡。     

蛇床子素下调MALAT1抑制骨肉瘤细胞U-2OS增殖与侵袭

目的:观察蛇床子素对骨肉瘤细胞U-2OS增殖与侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:(1)将骨肉瘤U-2OS细胞分为蛇床子素不同浓度(0、25、50、100、200μmol/L)组,各组分别予以相应浓度的蛇床子素干预。MTT法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭情况,PCR检测肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)mRNA表达。(2)应用慢病毒载体构建MALAT1过表达的转染U-2OS细胞。将转染细胞分为对照组、蛇床子素组、MALAT1过表达组、MALAT1过表达+蛇床子素组。蛇床子素干预组分别给予100μmol/L蛇床子素。MTT法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭情况;Western blot检测磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路相关蛋白的表达,包括磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)。结果:(1)不同浓度的蛇床子素作用后,可抑制U-2OS细胞的增殖、侵袭以及MALAT1 mRNA表达;与0μmol/L组相比,50μmol/L组和100μmol/L组细胞存活率、穿膜细胞数以及MALAT1 mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。(2)在转染细胞,蛇床子素组的细胞存活率和穿膜细胞数较对照组显著降低(P0.01);与蛇床子素组相比,MALAT1过表达+蛇床子素组细胞存活率显著升高(P0.05),穿膜细胞数显著增多(P0.05)。(3)与对照组相比,蛇床子素组细胞p-PI3K、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平及p-AKT/AKT蛋白表达比值均显著下调(P0.01);与蛇床子素组相比,MALAT1过表达+蛇床子素组的细胞p-PI3K、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平及p-AKT/AKT蛋白表达比值均显著上调(P0.05,P0.01)。结论:蛇床子素能够抑制骨肉瘤细胞U-2OS增殖与侵袭,其机制可能与下调MALAT1,进而阻断PI3K/AKT信号通路有关。     

小檗碱抑制JAK2/STAT3信号通路缓解高糖诱导的足细胞EMT和凋亡

目的 探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)环境诱导的足细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡的调节作用及部分机制。方法 将指数生长期的足细胞分为以下几组：正常组、高糖组、小檗碱(30、60和90μmol/L)给药组。流式细胞术检测足细胞凋亡情况;Transwell和划痕实验检测足细胞迁移能力;Western blot检测细胞凋亡蛋白Bim、足细胞EMT相关蛋白nephrin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)和酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)通路相关蛋白的表达水平;激光共聚焦法检测EMT相关蛋白nephrin、α-SMA和vimentin在足细胞中的表达情况。结果 流式细胞术结果表明BBR(30、60和90μmol/L)能够减少高糖环境下的足细胞凋亡;Transwell和划痕实验结果表明BBR(30、60和90μmol/L)能抑制高糖环境下的足细胞异常迁移;Western blot结果表明BBR(30、60和90μmol/L)可以降低高糖环境下足细胞中p-JAK2、p-STAT3、α-SMA、vimentin、Bim蛋白的表达,升高n...     

RhoC慢病毒干扰载体的构建及其对卵巢癌SKOV3细胞中RhoC mRNA表达的影响

目的:构建慢病毒介导的能够稳定沉默卵巢癌SKOV3细胞中RhoC基因的干扰载体,观察其对卵巢癌SKOV3细胞中RhoC基因表达的抑制作用。方法:人卵巢癌SKOV3细胞分为psiHIV-RhoC1组(转染Lenti-shRhoC1)、psiHIV-RhoC2组(转染Lenti-shRhoC2)、阴性对照组(转染Lenti-NC)和空白对照组(未经转染)。观察各组SKOV3细胞中绿色荧光蛋白的表达;采用RT-PCR法检测各组SKOV3细胞中RhoC mRNA的表达水平。结果:psiHIV-RhoC1、psiHIV-RhoC2和阴性对照组SKOV3细胞中均可见绿色荧光蛋白的表达。成功构建了特异性干扰载体,将其转染至SKOV3细胞后,psiHIV-RhoC1和psiHIV-RhoC2组SKOV3细胞中RhoC mRNA的表达水平较空白对照组明显降低。结论:构建的重组慢病毒RhoC shRNA干扰载体能有效抑制SKOV3细胞中RhoC mRNA的表达。     

小檗碱激活SIRT1/AMPK信号通路改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖和自噬功能

目的 研究小檗碱(BBR)对高糖(HG)环境下的系膜细胞增殖和自噬水平的影响及具体的分子机制。方法 将指数生长期的系膜细胞分成以下几组：正常组、高糖组、高糖+小檗碱治疗组(30、60、90μmol/L)、高糖+小檗碱(90μmol/L)+腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂组(CC组);高内涵细胞成像仪计算系膜细胞的数量；免疫荧光法检测Ⅳ型胶原蛋白(Col-IV)、纤连蛋白(FN)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)在系膜细胞中表达情况；Western blot法检测细胞上LC3B、Beclin-1、p62、Col-IV、FN和沉默信息调节因子1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路蛋白表达水平。结果 与正常组比较，高内涵细胞成像仪结果显示高糖组系膜细胞异常增殖；免疫荧光法和Western blot法结果显示高糖组系膜细胞外基质沉积蛋白Col-IV、FN的表达水平升高；Western blot法结果显示高糖组系膜细胞中SIRT1、p-AMPK、LC3B、Beclin-1蛋白表达降低，p-p65、p62蛋白表达升高。与高糖组比较，BBR对高糖诱导的系膜细胞异常增殖能力具...     

小檗碱通过激活 Nrf2-HO-1/GPX4 通路抑制小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡

目的 探讨小檗碱对于Erastin诱导小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡的保护作用及其可能机制。方法 以HT22小鼠海马神经元细胞为研究对象,分为对照组、Erastin模型组、Erastin+30 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR组。采用CCK-8法、特异性 Fe2+ 荧光探针、荧光染料（DAPI）检测和荧光探针（H2DCFH-DA）检测各实验组细胞的增殖情况、活性铁水平、细胞凋亡和活性氧（ROS）变化。 RT-qPCR和Western blot分别检测各实验组细胞的Nrf2、HO-1、GPX4 mRNA和蛋白表达情况。以60 μmol BBR的最适浓度来进一步探究其作用机制,分为对照组、Erastin模型组、Erastin+60 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/LBBR+2 μmol Nrf2抑制剂 ML385组。通过使用荧光探针和Western blot检测Nrf2抑制剂（ML385）作用后的活性铁的水平、活性氧含量以及Nrf2、HO-1、GPX4蛋白的表达来验证小檗碱调节的Nrf2-HO-1/GPX4通路对Erastin处理的HT22细胞的保护作用。结果 0.5 μmol/L Erastin作用于HT22细胞8 h,细胞存活率与对照组相比显著被抑制（P<0.05）;同时细胞凋亡、ROS以及活性铁含量增加（P<0.05）。与Erastin组比较,Erastin+30 μmol/L BBR组和Erastin+60 μmol/L BBR组的细胞存活率明显升高（P<0.05）,同时显著降低细胞凋亡、ROS以及活性铁含量（P<0.05）。小檗碱增加 HT22细胞中Nrf2、HO-1、GPX4基因及蛋白的 表达量（P<0.05）。加入Nrf2抑制剂ML385后,Nrf2-HO-1/GPX4通路被抑制,并且ROS以及活性铁含量升高（P<0.05）。结论 Erastin诱导HT22细胞发生铁死亡,小檗碱抑制Erastin诱导的铁死亡,可能机制是激活了Nrf2-HO-1/GPX4通路。     

人磷脂磷酸水解酶3基因真核表达载体的构建及其对卵巢癌细胞生长的抑制作用

目的:构建人磷脂磷酸水解酶3(hLPP3)基因的真核表达载体pLenExpress-hLPP3并转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,初步观察重组表达载体对卵巢癌细胞的转染效率、目的基因表达情况及对卵巢癌细胞生长的影响.方法:采用RT-PCR法从正常胎盘组织中提取hLPP3基因,先克隆人克隆载体pGEM-T easy质粒得到pGEM-T-hLPP3,再用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ进行双酶切,切下的hLPP3基因亚克隆入真核表达载体pLenExpress,得到pLenEx-press-hLPP3重组质粒,采用脂质体转染法转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞.实验分为3组:A组为实验组(转染表达hLPP3基因重组质粒)、B组为空质粒对照(转染空表达质粒)、C组为无转染对照.荧光显微镜观察细胞转染效率,实时荧光定量PCR法检测hLPP3 mRNA的表达,化学法测定转染前后细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况.结果:重组表达质粒经限制性酶切鉴定得到与hLPE,基因长度一致(936 bp)的酶切产物,测序分析证实,目的基因序列与GenBank上登录的hLPP3基因(BC009196)序列完全一致.荧光显微镜下见A、B 2组SKOV3细胞内有大量绿色荧光信号,转染率分别为67%和69%,C组细胞中无荧光信号.实时荧光定量PCR测定显示A组细胞中hLPP3 mRNA的相对表达量较B、C组明显增加(A、B、C组分别为0.510 9±0.058 4、0.149 9±0.025 5、0.143 3±0.0181,P<0.05).A组卵巢癌细胞上清液中的LPA含量较B、C组明显下降[A、B、C组分别为(2.37±0.76)μmol/L、(6.71±2.03)μmol/L、(6.84±1.49)μmol/L,P<0.05];流式细胞仪检测显示A组卵巢癌细胞凋亡率明显增加[A、B、c组分别为(30.50±2.12)%、(1.26±0.43)%、(0.10±0.03)%,P<0.05],细胞周期无明显变化.结论:成功构建了表达目的基因hLPP3的重组真核表达载体pLenEx-press-hLPP3,并能高效转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,使细胞中hLPP3基因表达水平明显升高.增强hLPP3基因表达可以降低细胞外LPA水平,诱导细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的生长.     

阳离子脂质体介导提高反义寡聚脱氧核苷酸转染卵巢癌细胞株SKOV3/mdr1的效率

多药耐药基因(MDR1)编码的P-糖蛋白(Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一.本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3/mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响.反义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-AS)通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3/mdr1细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-S)同样导入细胞为对照.经以脂质体介导的1.6μmol/LMDR1-AS转染后,PgP阳性的细胞百分数从100%降至48.7%,经过16μmol/L和10μmol/L两个浓度的单纯MDR1-AS转染后,Pgp阳性细胞的百分数也从100%分别降至52.6%和86.7%.因此,通过阳离子脂质体介导可大大提高反义寡核苷酸转染的效率.     

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞系OVCAR3增殖、侵袭及凋亡的影响及作用机制。方法 应用实时PCR检测lncRNA MALAT1和miR-218在人卵巢癌细胞系（OVCAR3）和正常人卵巢上皮细胞系（HOSE）中的表达。利用脂质体转染法将无意义序列阴性对照（si-NC）组、MALAT1干扰序列（si-MALAT1）组以及si-MALAT1+miR-218抑制剂组分别转染卵巢癌细胞，MTT法检测各组细胞增殖情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况，Transwell实验检测各组细胞侵袭情况。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1和miR-218的靶向关系。实时PCR检测各组OVCAR3细胞中MALAT1、miR-218的表达；Western blotting检测各组OVCAR3细胞中Runx2的表达。结果 与人正常卵巢上皮细胞比较，卵巢癌OVCAR3细胞中MALAT1表达升高（P <0.05）,miR-218表达下降（P <0.05）。与si-NC组比较，si-MALAT1组OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力...     

外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响

目的探讨外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法设定质量浓度为45 mg/L的SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞,并将SKOV3细胞分为3组:未转染的细胞组(空白对照组),SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(阴性对照组),培养皿底部外加磁场的SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(实验组)。采用流式细胞术检测细胞转染率,CCK-8法检测细胞增殖及活性,Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白水平,荧光定量PCR检测EGFR mRNA水平,磁共振(MR)扫描检测细胞内信号强度变化。结果与阴性对照组比较,实验组的细胞转染率[(79.20±3.31)%]显著增加(P=0.001);实验组的细胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表达量均明显降低(P均<0.05);实验组的MR图像信号强度明显降低(P=0.0004)。结论外加磁场可以诱导SPIO-shRNA分子探针进入卵巢癌SKOV3细胞,从而提高细胞的转染率。     

外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染卵巢癌SKOV3细胞的影响

目的 探讨外加磁场对SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞的影响。方法 设定质量浓度为45 mg/L的SPIO-shRNA分子探针转染人卵巢癌SKOV3细胞,并将SKOV3细胞分为3组:未转染的细胞组(空白对照组),SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(阴性对照组),培养皿底部外加磁场的SPIO-shRNA分子探针转染的细胞组(实验组)。采用流式细胞术检测细胞转染率,CCK-8法检测细胞增殖及活性,Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白水平,荧光定量PCR检测EGFR mRNA 水平,磁共振(MR)扫描检测细胞内信号强度变化。结果 与阴性对照组比较,实验组的细胞转染率[(79.20±3.31)%]显著增加(P=0.001);实验组的细胞活性(P=0.011)、EGFR蛋白及mRNA表达量均明显降低(P均＜0.05);实验组的MR图像信号强度明显降低( P=0.0004)。结论 外加磁场可以诱导SPIO-shRNA分子探针进入卵巢癌SKOV3细胞,从而提高细胞的转染率。     

干扰ATF5功能对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性影响

目的探讨干扰转录激活因子5(ATF5)功能对卵巢癌细胞SKOV3紫杉醇(PTX)敏感性的影响。方法应用RT-PCR、Western blot方法检测SKOV3细胞中ATF5的表达;WST-8法检测不同浓度PTX(0、10、20、40、80、100nmol/L)与SKOV3细胞作用不同时间(24、48、72h)后细胞增殖情况;将SKOV3细胞分为空质粒组(vector组)、干扰质粒组(dnATF5组)、药物组(PTX组)、联合治疗组(dnATF5+PTX组),对vector组、dnATF5组、dnATF5+PTX组进行质粒转染,转染后24hPTX组和dnATF5+PTX组给予PTX(70nmol/L)作用48h,WST-8法和流式细胞术检测各组细胞的增殖抑制率或细胞凋亡率;Western blot检测干扰质粒转染SKOV3不同时间(0、24、48h)后Bcl-2蛋白的表达。以急性视网膜色素上皮-19(ARPE-19)二倍体细胞作为正常对照。结果卵巢癌SKOV3细胞中高表达ATF5;PTX对SKOV3细胞生长具有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性(F=497.68～11 286.93,P<0.05);干扰ATF5功能后明显促进PTX诱导的SKOV3细胞增殖抑制或细胞凋亡(t=11.40、13.86,P<0.05);与ARPE-19细胞相比,干扰ATF5功能联合PTX作用对SKOV3细胞增殖和凋亡的影响更明显(t=11.50、13.86,P<0.05);干扰ATF5功能后SKOV3细胞Bcl-2蛋白的表达明显下调(F=158.38,P<0.05)。结论 ATF5在卵巢癌SKOV3细胞中高表达,干扰ATF5能明显增强卵巢癌SKOV3细胞对PTX的敏感性,其机制可能与Bcl-2的下调有关;干扰ATF5功能联合PTX作用对肿瘤细胞的疗效强于二倍体细胞。     

沉默PARP-1对卵巢癌上皮细胞耐药性及肿瘤相关生物学行为的影响

目的 研究探讨沉默聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)后,卵巢癌上皮细胞对顺铂药物的敏感性及相关生物学行为的变化。 方法 以人卵巢癌细胞株A2780为研究对象,采用小RNA干扰技术,沉默PARP-1的表达后,采用Western blot实验、RT-PCR实验、MTT实验等观察PARP-1蛋白、mRNA的表达及细胞存活率的变化趋势,采用方差分析进行比较。 结果 PARP1小RNA干扰序列(PARP1-siRNA)转染组PARP-1 mRNA表达量明显低于A2780组和阴性对照组接种转染组(NC-siRNA),3组PARP-1 mRNA表达量分别为(45.22±3.99)%、(24.13±5.24)%、(46.28±6.19)%(P＜0.05);PARP1-siRNA转染组PARP-1蛋白表达IOD值明显低于A2780组和NC-siRNA转染组(P＜0.05);与0 μmol/L相比,5 μmol/L和10 μmol/L组的PARP-1蛋白表达IOD值明显降低(P＜0.05);随着顺铂浓度的增高,PARP1-siRNA转染组的细胞存活率下降的速度最快。 结论 PARP1-siRNA转染明显下调人卵巢癌细胞株A2780的PARP-1表达后,该细胞对顺铂药物的敏感性增强,细胞的存活率明显下降。      

酪氨酸激酶3对赫赛汀耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/H增殖和成瘤能力的影响

探索erb-b2受体酪氨酸激酶3（HER-3）对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/H的体外增殖和体内成瘤能力的影响。方法采用赫赛汀浓度递增法构建SKOV3 耐药细胞株（赫赛汀起始浓度为5 mg/L,经5～8 次浓度递增,每次提高50%）。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测HER-3在15 对非耐药卵巢癌组织和耐药卵巢癌组织中的表达（SKOV3 和SKOV3/H 细胞中的表达）。MTT 实验验证分别转染sh-HER-3 及其对照质粒vector对SKOV3/H细胞增殖能力的影响。将包含sh-HER-3的重组慢病毒质粒及其阴性对照慢病毒空载体质粒vector（均带egfp荧光标签）分别以病毒/细胞数量=15 的比例感染SKOV3/H 细胞,加入2.0μg/ml 的嘌呤霉素筛选,构建稳定转染sh-HER-3 或vector 的SKOV3/H 细胞,将2 株细胞分别注射到裸鼠皮下,复制卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察体内成瘤情况。结果成功构建卵巢癌SKOV3耐赫赛汀细胞株SKOV3/H,且SKOV3/H的群体倍增时间为SKOV3 细胞的1.4～1.9倍。HER-3在耐药卵巢癌组织中的表达水平高于非耐药癌组织（p <0.05）,且HER-3 在耐药细胞株SKOV3/H中的表达水平也高于非耐药卵巢癌细胞株SKOV3（p <0.05）。转染sh-HER-3后,SKOV3/H细胞的增殖能力低于阴性对照组（p <0.05）。转染sh-HER-3后,耐药细胞株SKOV3/H的裸鼠体内成瘤能力降低（p <0.05）。结论HER-3参与卵巢癌的赫赛汀耐药,并正向影响耐药细胞株SKOV3/H的增殖和体内成瘤能力。     

LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞A2780和SKOV3增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的影响及机制研究.方法 将A2780和SKOV3细胞分为正常对照组、LY294002组、顺铂组和LY294002+顺铂组,采用CCK-8法检测不同浓度的LY294002(10、20、40、60)μmol/L和顺铂(5、15、25、40)μmol/L处理...     

秦皮乙素对SKOV3细胞增殖、干样特性及凋亡的作用

目的 探究秦皮乙素(Esc)对卵巢癌SKOV3细胞增殖、肿瘤细胞干性和凋亡的调节作用.方法 0、0.2、0.4、0.8μmol/L剂量Esc和阿霉素0.5μmol/L处理SKOV3细胞,将细胞随机分为5组:Control组、Esc 0.2μmol/L组、Esc 0.4μmol/L组、Esc 0.8μmol/L组和阿霉素...     

小檗碱调节ERK/NF-κB信号通路改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖

目的探讨小檗碱(BBR)对高糖(HG)诱导的系膜细胞(MCs)异常增殖的调节作用及可能的机制。方法体外培养MCs,实验分为对照、高糖模型和BBR给药组(30、60、90μmol/L);CCK-8法检测细胞增殖活力;高内涵系统成像法检测细胞的增殖能力;激光共聚焦法检测细胞外基质沉积蛋白(ECM)Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)表达情况;Western blot法检测细胞上细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、磷酸化促分裂原激活激酶1(p-MSK1)、IκB、p-IκB、p65、p-p65的蛋白表达情况。结果 CCK-8法结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)均可抑制MCs的增殖活力;高内涵系统成像结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)可抑制HG诱导的MCs的异常增殖;激光共聚焦实验结果显示,BBR(90μmol/L)能降低ECM上的Col-Ⅳ、FN的表达水平;Western blot实验结果显示,BBR(30、60、90μmol/L)能降低MCs上p-ERK、p-MSK1、p-IκB、p-p65蛋白的表达水平。结论 BBR可能调节MCs上的ERK/...     

沉默ADRB2基因对卵巢上皮性癌细胞生物学特性及顺铂敏感性的影响

目的 探讨下调β2型肾上腺素受体(beta-2 adrenergic receptor,ADRB2)基因表达对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性以及细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 以人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP为研究对象,采用小RNA干扰技术沉默ADRB2的表达,实验分为4组:ADRB2 shRNA1感染组、ADRB2 shRNA2感染组、阴性对照shRNA感染组、未感染的SKOV3/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)顺铂作用后,采用CCK-8法检测4组卵巢癌细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,Western blot法检测4组卵巢癌细胞中caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白的表达,采用单因素方差分析进行比较。 结果 不同浓度的顺铂处理后,4组细胞的生长抑制率均逐渐升高,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的顺铂耐药IC50分别为(29±8)μmol/L和(32±11)μmol/L,明显低于阴性对照组[(104±15)μmol/L,P<0.01]和空白对照组[(112±10)μmol/L,P<0.01];4组细胞的凋亡率逐渐增加,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01)。4组细胞的caspase-9、Bax蛋白的表达水平逐渐增加,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的caspase-9、Bax蛋白水平均明显高于阴性对照组(均P<0.05)。4组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平逐渐降低,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的Bcl-2蛋白水平均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。 结论 顺铂诱导可使ADRB2基因下调的顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖减少、凋亡增加,其可能机制为通过调节caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡家族蛋白的表达,从而增加细胞对顺铂的敏感性。      

小檗碱抑制类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞的自噬并促进其凋亡：基于下调ROS/mTOR信号通路

目的 探究小檗碱（BBR）对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）凋亡/自噬失衡的调控作用及机制。方法 CCK-8法检测BBR对RA-FLSs的增殖抑制作用,实验设空白对照组、TNF-α(25 ng/mL)组、TNF-α+BBR(10、20、30、40、50、60、70、80μmol/L)组,Annexin V/PI双染流式法和JC-1免疫荧光染色检测BBR对RA-FLSs凋亡的影响,Western blot检测BBR对RAFLSs自噬和凋亡相关蛋白表达水平的影响。进一步增加自噬诱导剂RAPA和自噬抑制剂氯喹（CQ）作为对照,激光共聚焦检测mCherry-EGFP-LC3B观察自噬流变化;并设置活性氧（ROS）模拟物H2O2和ROS抑制剂NAC观察BBR对ROS、mTOR、p-mTOR水平的影响。结果 CCK-8结果显示BBR可呈时间和浓度依赖性抑制RA-FLSs增殖活力,流式和JC-1染色结果显示BBR(30μmol/L)可显著增加RA-FLSs凋亡率（P<0.01）,降低线粒体膜电位（P<0.05）。Western blot结果显示BBR处理后Bcl-2/Ba...