黄柏提取物小檗碱对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生及炎性因子的影响

目的探讨黄柏提取物小檗碱对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增生及炎性因子的影响。方法采用体质量350~400 g雄性Wistar大鼠制备颈动脉球囊损伤模型,将40只成模大鼠随机分为模型组和小檗碱组各20只,其中小檗碱组给予小檗碱2.5 mg/kg腹腔注射,每天1次,连续14 d。另取20只雄性Wistar大鼠仅行颈部切开作为假手术组。实验结束后处死各组大鼠并取左侧颈动脉,经石蜡包埋后进行HE染色,观察病理形态并比较各组血管内膜面积、中膜面积及内膜与中膜面积的比值(I/M),采用酶联免疫吸附法检测各组血清炎症因子[单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、C反应蛋白(CRP)、转化生长因子-β(TGF-β)和前列腺素E2(PGE2)]水平,同时采用实时定量PCR法检测左侧颈动脉标本中炎症反应限速酶环氧化酶-2(COX-2)mRNA和磷脂酶A2mRNA水平。结果假手术组血管无内膜增生,且光滑完整;模型组出现严重血管内膜增生,且发生严重管腔狭窄;小檗碱组血管内膜增生受抑制,管腔狭窄获显著缓解。模型组新生血管内膜面积、I/M及血清MCP-1、CRP、TGF-β、PGE2水平和左侧颈动脉COX-2 mRNA和磷脂酶A2mRNA水平均明显高于假手术组(P均0.05);小檗碱组上述指标均明显低于模型组(P均0.05),但除CRP与假手术组比较差异无统计学意义外(P0.05),其余指标水平均明显高于假手术组(P均0.05)。结论黄柏提取物小檗碱可抑制大鼠颈动脉球囊损伤后血管内膜增生及炎性反应,可能与其抑制炎症反应限速酶的表达水平有关。     

解毒活血方调控NF-κB/NLRP3/Caspase-1促进大鼠胸主动脉损伤血管再内皮化

目的：探讨解毒活血方调节核转录因子（NF）-κB/NOD样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶（Caspase）-1介导细胞焦亡促进损伤血管再内皮化的可能机制。方法：通过球囊损伤的方法建立大鼠胸主动脉损伤模型，36只大鼠分为假手术组、模型组、解毒活血方低、中、高剂量组、阿托伐他汀钙片组，在术后28 d采集主动脉损伤段，苏木素-伊红（HE）染色观察血管结构形态学变化、伊文思蓝染色观察血管再内皮化情况，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中炎症相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)及内皮相关因子一氧化氮（NO）的变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测血管组织中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、NF-κB p65、磷酸化（p-）NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1的表达。结果：模型组血管内膜增厚，组织血管壁平滑肌细胞增生且排列紊乱，组织可见明显炎症细胞浸润，管腔面积狭窄，解毒活血方各剂量组和阿托伐他汀钙片组胸主动脉血管病理损伤均有不同程度改善。球囊损伤后，模型组内皮覆盖率明显下降，解毒活血方高剂...     

人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究人参皂苷Rg_3对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生及平滑肌细胞凋亡的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rg_3低、高剂量(5、10 mg/kg)组,各10只,用球囊制备大鼠颈动脉损伤模型,术后次日ig给药,假手术组和模型组给予等量的生理盐水;14 d后取损伤的颈总动脉血管,用苏木精-伊红(HE)染色观察新生内膜组织形态学改变;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法检测平滑肌细胞凋亡;Western blotting和qRT-PCR法检测损伤血管凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血管新生内膜明显增厚,内膜与中膜面积比明显增加,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率显著增加,Fas、Bcl-2基因表达明显增加;与模型组比较,人参皂苷Rg_3低、高剂量组血管内膜增生明显减轻,内膜与中膜面积比明显下降,新生内膜区平滑肌细胞凋亡率明显增加,损伤血管Fas基因表达水平明显升高,Bcl-2基因表达水平明显降低。结论人参皂苷Rg_3可能通过促进平滑肌细胞的凋亡,从而减轻球囊损伤后血管内膜的增生。     

化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏NLRP3、Caspase1、IL-1β表达的影响

目的观察化瘀解毒方对梗阻性肾病大鼠肾脏核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3[NOD(nucleotide-binding oligomerization domain)-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、IL-1β表达的影响。方法将40只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(10只)、造模组(30只),采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)手术复制梗阻性肾病模型,成功后随机分为模型组、西药组和中药组,每组各10只。西药组给予依普利酮100 mg/(kg·d),中药组给予化瘀解毒方13.7 g/(kg·d),假手术组和模型组给予等量生理盐水,连续给药10天。检测各组血清IL-1β含量,检测肾脏NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,检测肾脏TUNEL阳性细胞率。结果假手术组NLRP3表达不明显,Caspase-1及IL-1β呈弱表达,仅见少量TUNEL阳性细胞。与假手术组比较,模型组血清IL-1β含量升高(P0.01),肾组织NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达升高(P0.01);NLRP3主要表达于肾间质巨噬细胞及肾小管上皮细胞,Caspase-1及IL-1β主要见于肾小管上皮细胞胞浆;TUNEL阳性细胞增多,以间质扩张的远端小管上皮细胞为主(P0.01)。与模型组比较,两个给药组血清IL-1β含量降低(P0.01),NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白及mRNA表达降低,TUNEL阳性细胞率降低(P0.05,P0.01)。结论化瘀解毒方可下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表达,减轻肾组织炎症损伤。     

清热化痰解毒方对脑缺血再灌注大鼠肺组织TXNIP/NLRP3炎性通路的影响

目的:探究清热化痰解毒方对脑缺血再灌注大鼠肺组织的影响,并初步探讨相关分子机制。方法:将SD大鼠分为假手术组、模型组、阳性药组(灌胃尼莫地平200 mg·kg~(-1))、清热化痰解毒方低、高剂量组(100,200 mg·kg~(-1)),每组10只,除假手术组外,采用改良4动脉阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,造模后,给药3 d。肺湿/干重(W/D)分析,采用苏木素-伊红(HE)染色进行组织病理学分析;酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18水平;肺髓过氧化物酶试剂盒检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性;免疫组化分析核苷酸结合域样受体蛋白3(nucleotide-binding domain-like receptor 3,NLRP3)阳性细胞数;半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)比色测定试剂盒检测Caspase-1活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3,ASC,Caspase-1mRNA和蛋白表达,免疫共沉淀检测硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)-NLRP3蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组肺损伤评分,肺W/D,BALF中IL-1β和IL-18水平、总细胞和多形核白细胞数量,MPO活性均明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺损伤评分,肺W/D,BALF中IL-1β和IL-18水平、总细胞和多形核白细胞数量及MPO活性均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中NLRP3阳性细胞数,Caspase-1活性,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白和mRNA相对表达明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中NLRP3阳性细胞数,Caspase-1活性,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白和mRNA相对表达均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中ROS产生,TXNIP蛋白表达均明显增加(P0.05);与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中ROS产生,TXNIP蛋白表达均明显降低(P0.05)。与假手术组比较,模型组肺组织中TXNIP-NLRP3蛋白共沉淀增加。与模型组比较,尼莫地平组、清热化痰解毒方低、高剂量组肺组织中TXNIP-NLRP3蛋白共沉淀减少。结论:清热化痰解毒方对全脑缺血再灌注大鼠的炎症性肺损伤具有保护作用,且这种作用可能通过抑制ROS产生,从而抑制TXNIP-NLRP3炎症通路介导的促炎介质IL-1β和IL-18的分泌,最终抑制肺组织中炎性细胞浸润,缓解肺组织损伤。     

冠通方对大鼠心肌缺血/再灌注损伤心肌组织IL-8和IL-10蛋白表达的影响

目的:通过观察冠通方对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞炎症因子IL-8、IL-10蛋白表达的干预作用,探讨冠通方对缺血再灌注致心肌损伤的保护作用机理。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为模型组、冠通方预处理组(冠通方组)、缺血预适应组(预适应组)、假手术组,每组15只。预适应组、模型组和假手术组给予生理盐水灌胃,冠通方组给予冠通方灌胃,给药14 d后行心肌缺血再灌注实验。完成实验后取出各组大鼠心肌组织,运用蛋白质印迹法检测IL-8、IL-10蛋白表达。结果:冠通方组IL-8蛋白表达较模型组表达明显下降(P<0.05),而IL-10蛋白表达较模型组明显增高(P<0.05)。结论:冠通方对缺血再灌注心肌的保护作用可能与该方剂抑制炎症因子有关,通过下调IL-8、提高IL-10的活性来保护心肌组织,减轻缺血再灌注损伤。     

金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响

目的观察金刚藤颗粒对急性盆腔炎(APID)模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响。方法将雌性SD大鼠105只随机分为假手术组、模型组及金刚藤颗粒低、中、高剂量组,每组均15只,灌胃治疗15 d后,ELISA检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察子宫组织的病理形态;实时定量PCR及Western blotting分别检测NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平。结果 HE染色显示,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞脱落坏死,腔壁结构紊乱,全层炎性细胞浸润,有充血水肿;与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组症状较模型组有显著改善;与对照组、假手术组比较,模型组血清IL-1β、IL-18水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组IL-1β、IL-18水平显著降低(P 0.05);与对照组比较,模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著降低(P 0.05);模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达水平显著高于假手术组(P 0.05),金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Cas-pase-1蛋白表达水平较模型组显著降低(P 0.05)。结论金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠具有显著治疗作用,其可能通过抑制NLRP3炎症小体通路发挥免疫作用。     

穴位埋线对原发性痛经大鼠子宫组织核苷酸结合寡聚化结构域受体炎性小体的影响

目的:观察穴位埋线对原发性痛经(PD)大鼠子宫组织核苷酸结合寡聚化结构域受体3(NLRP3炎性小体及其下游因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)表达的影响,探讨穴位埋线治疗PD的可能机制。方法:雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、埋线组、西药组,每组10只。苯甲酸雌二醇联合缩宫素皮下注射建立PD大鼠模型。埋线组于造模第1天及造模第5天对"关元""三阴交"穴进行埋线治疗;西药组采用芬必得灌胃治疗,每日1次,共10d。于第11天比较各组大鼠30min内扭体次数;HE染色法观察大鼠子宫病理形态学的变化,并进行病理损伤评分;Western blot法检测子宫组织NLRP3、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶1(caspase-1)、IL-1β、IL-18的表达。结果:与正常组比较,模型组扭体次数增多(P<0.01);与模型组比较,埋线组、西药组30min内扭体次数均减少(P<0.01,P<0.05);与西药组比较,埋线组扭体次数明显减少(P<0.01)。模型组大鼠子宫内膜大范围剥脱并有较严重的水肿;埋线组及西药组子宫内膜损伤程度较模型组轻,子宫内膜剥脱少见且水肿程度较轻;与正常组比较,模型组病理评分明显上升(P<0.01);与模型组比较,埋线组和西药组病理评分显著降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠子宫组织NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,埋线组大鼠子宫组织NLRP3、caspase-1、IL-1β及IL-18蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),西药组大鼠子宫组织caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达显著降低(P<0.01);与西药组比较,埋线组子宫组织NLRP3蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论:穴位埋线可明显改善PD大鼠疼痛症状和病理损伤情况,其作用机制可能与抑制子宫组织中NLRP3炎性小体的活化有关。     

吴茱萸碱对大鼠颈总动脉球囊损伤致内膜增生的抑制作用

 目的 研究吴茱萸碱对球囊损伤所致大鼠颈总动脉内膜增生的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法 建立大鼠颈总动脉内膜球囊损伤模型,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吴茱萸碱低剂量(40 mg·kg^-1)和高剂量(80 mg·kg^-1)组。造模后第1天开始灌胃给药,每天1次,连续14 d。通过组织病理学观察颈动脉内膜增生状况,并计算颈动脉新生内膜面积(neointima area,NIA)、内膜/中膜(NIA/MA)比值;采用免疫组化法观察颈动脉增殖细胞核抗原(PCNA)的阳性表达、计算阳性率,评价吴茱萸碱抑制球囊损伤所致内膜增生效应;检测血浆一氧化氮(NO)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量,运用逆转录-聚合酶链反应检测颈动脉血管颈动脉增殖细胞核抗原 、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和平滑肌α-肌动蛋白(SM α-actin)mRNA的表达,探讨作用机制。结果 吴茱萸碱40和80 mg·kg^-1明显抑制球囊损伤所致血管内膜增生,降低内膜、内膜/中膜比值和颈动脉内膜颈动脉增殖细胞核抗原阳性表达率;明显升高球囊损伤所致大鼠血浆中一氧化氮和环磷酸尿苷含量的降低;下调颈动脉增殖细胞核抗原 mRNA表达,上调内皮型一氧化氮合酶和平滑肌α-肌动蛋白mRNA的表达。结论 吴茱萸碱具有明显抑制球囊损伤所致大鼠颈动脉内膜增生的作用,其抑制作用与促进内皮型一氧化氮合酶活性,增加一氧化氮的生成,抑制血管平滑肌细胞增殖有关。     

温阳振衰颗粒对肾间质纤维化模型大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响

目的 观察温阳振衰颗粒对肾间质纤维化大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响,从NLRP3/Caspase-1通路探讨其干预机制。方法 50只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、抑制剂组和温阳振衰颗粒组,每组10只。以结扎并剪断左侧输尿管建立肾间质纤维化大鼠模型,分别予相应药物干预,连续14 d。试剂盒检测血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）含量,HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾组织转化生子因子（TGF）-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）表达,Western blot和RT-PCR检测肾组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素（IL）-18、IL-1β蛋白和mRNA表达,免疫荧光双染法检测细胞焦亡。结果 与假手术组比较,模型组大鼠SCr、BUN含量显著增加（P<0.01）,肾小管扩张,炎性细胞浸润,间质纤维化明显,肾组织TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达显著升高（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白和mRNA表达显著升高（...     

金银花提取物对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠ROS-NLRP3炎症小体信号通路的影响

目的观察金银花提取物(HFE)对重症急性胰腺炎大鼠肺组织的保护作用,并初步探究可能的作用机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组及银花提取物低、中、高剂量组、地塞米松组,每组16只。评估大鼠生存状态;测定大鼠肺组织湿/干重比率(W/D)、动脉血氧分压;HE染色观察大鼠胰腺、肺组织病理形态学变化;酶联免疫法检测BALF中白细胞介素-1β(IL-1β)\白细胞介素-18(IL-18)水平,血细胞计数仪分析总细胞数量和多形核白细胞数量;氮蓝四唑光还原法检测肺组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)水平,比妥酸法检测丙二醛(MDA)水平,二氢乙啶(DHE)法检测活性氧(ROS);免疫印迹法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(Caspase-1)、IL-1β蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组生存状况评分降低,胰腺、肺组织病理评分降低,动脉血二氧化碳分压、胰腺、肺组织W/D升高,血氧分压降低;BALF中IL-1β、IL-18、总细胞数量、多形核白细胞数量升高;肺组织SOD水平降低,MDA、ROS水平升高,肺组织中NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达升高(P 0.05)。与模型组相比,金银花提取物各组以及地塞米松组生存状况评分升高,胰腺、肺组织病理评分升高,动脉血二氧化碳分压、胰腺、肺组织W/D降低,血氧分压升高,BALF中IL-1β、IL-18、总细胞数量、多形核白细胞数量降低,肺组织SOD水平升高,MDA,ROS水平降低,肺组织中NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达降低(P 0.05)。结论金银花提取物对重症急性胰腺炎大鼠的肺损伤具有保护作用,且这种作用可能通过抑制ROS产生,进而抑制NLRP3炎症小体通路介导的促炎因子IL-1β和IL-18的释放,缓解肺组织炎症损伤。     

芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响

目的观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、芍药苷低剂量组、芍药苷高剂量组,每组12只。采用线栓阻断法制作大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h后进行再灌注,再灌注后1 h腹腔注射芍药苷(2.5、5 mg/kg),每日1次,连续7 d。Zea Longa 5分评价方法对大鼠进行神经功能评分。ELISA检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。RT-PCR和Westernblot分别检测大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠神经功能评分各时点均降低,芍药苷低剂量组第7日和芍药苷高剂量组第3、5、7日神经功能评分差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1和NLRP3m RNA和蛋白表达均上调;与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.01)。结论芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症体信号通路分子的表达、减轻炎症反应相关。     

人参皂苷Re对球囊损伤大鼠血管内膜增殖及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的探讨人参皂苷Re(GS-Re)对球囊损伤后大鼠颈动脉内膜增殖及TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法 50只清洁级SD大鼠随机分为5组:假手术组,模型组,GS-Re低、中、高剂量(12.5、25.0、50.0 mg/kg)组。除假手术组外,其余组大鼠均采用2F球囊导管建立颈动脉球囊损伤模型,造模后次日开始ig给药,连续给药14 d后取损伤段颈动脉,行HE染色,观察血管形态学改变,用Leica光学显微镜测定血管腔面积(LA)、内膜面积(IA)、中膜面积(MA),并计算IA/MA。利用Real time RT-PCR法、免疫组织化学法分别检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3的mRNA表达及蛋白水平的变化。结果与假手术组比较,模型组血管腔变窄(P0.01);与模型组比较,GS-Re中、高剂量组血管内膜增生减轻(P0.05、0.01)。与假手术组比较,模型组血管壁TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA水平及其蛋白表达均增高(P0.01);与模型组比较,GS-Re中、高剂量组血管壁TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA水平下调,蛋白表达量也降低(P0.05)。此外,GS-Re低剂量组血管壁TGF-β1 mRNA水平及p-Smad2蛋白的表达也下调(P0.01)。结论 GS-Re可通过抑制TGF-β1/Smads通路发挥抑制血管内膜增殖的作用。     

辛温开窍中药对脑梗死大鼠NLRP3炎性反应通路的影响

目的观察辛温开窍中药对脑梗死大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18的影响,探讨脑卒中的炎性反应通道及辛温开窍中药对缺血大鼠脑组织炎症反应的影响。方法将健康成年雄性SD大鼠120只随机分为假手术组、缺血组、常规中药组和辛温开窍组,每组30只。除假手术组外,其余组均选择从颈总动脉插入线栓直达颈内动脉末端栓塞一侧大脑中动脉法制备脑梗死模型。在术前连续3 d(每天2次)及术后(每6 h 1次)给予各组大鼠灌胃,常规中药组灌胃常规中药方煎剂,辛温开窍组灌胃常规中药方煎剂和麝香0.5 g,假手术组和缺血组灌胃生理盐水。分别于术后24 h和48 h取缺血区脑组织,采用Western Blot检测NLRP3、Caspase-1表达水平,采用酶联免疫法(ELISA)检测IL-18、 IL-1β表达水平,采用组织免疫荧光染色法检测NLRP3表达情况。结果术后24 h和48 h,缺血组、常规中药组和辛温开窍组大鼠脑组织中NLRP3、Caspase-1、IL-18、 IL-1β表达水平均显著高于假手术组(P均0.05),但常规中药组和辛温开窍组均显著低于缺血组(P均0.05),且辛温开窍组均显著低于常规中药组(P均0.05)。结论脑组织缺血后存在炎性因子的表达和NLRP3炎性通道反应;辛温开窍中药可显著下调缺血脑组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平,可能与麝香快速通过血脑屏障,抑制缺血后脑组织NLRP3炎症通道有关。     

六味补气方对慢性阻塞性肺疾病细胞焦亡的 干预作用及机制研究

目的 研究六味补气方对慢性阻塞性肺疾病（COPD）细胞焦亡的影响。方法 按照随机数字表法将大鼠分为正常对照组、模型组、桂龙咳喘宁组和六味补气方低、中、高剂量组,每组10只。采用烟熏加脂多糖（LPS）气管滴入的方法建立COPD大鼠模型。药物干预后,检测大鼠肺功能;支气管肺组织形态学改变;同时检测肺组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）和Gasdermin D-N端（GSDMD-N）的改变;肺泡灌洗液（BALF）中炎症因子白介素18（IL-18）、白介素1β（IL-1β）水平;肺组织活性氧（ROS）水平;肺组织NLRP3、半胱天冬酶-1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）蛋白表达以及mRNA水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠肺功能降低（P<0.01）,肺组织损伤,细胞膜破裂,IL-18、IL-1β和ROS水平升高（P<0.01）,肺组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD、和ASC蛋白表达和mRNA水平显著升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组比较,各用药组肺功能改善,肺组织损伤和细胞焦亡减轻,IL-18、IL-1β和ROS水平下降（P<0.01）,肺组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD和ASC蛋白表达和mRNA水平降低（P<0.01）,其中以六味补气方高剂量组改变最为显著。结论 六味补气方可降低COPD大鼠IL-18、IL-1β和ROS水平,减轻气道炎症和氧化应激,阻抑肺组织损伤和细胞的焦亡,增加肺功能,其机制可能是通过调控ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路实现的。     

祛寒逐风颗粒对骨性关节炎大鼠炎症反应的影响

目的:观察祛寒逐风颗粒对膝骨性关节炎(KOA)大鼠炎症反应和NF-κB介导NLRP3炎性小体活化的影响。方法:建立骨性关节炎大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、祛寒逐风颗粒组(3,6,9 g/kg)和阳性药组,测量大鼠机械性痛阈值和膝关节直径,采用酶联免疫吸附实验测量大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-6的含量变化,采用RT-PCR法测量大鼠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA含量,采用苏木精-伊红染色和阿尔新蓝染色观察组织的病理学变化,采用蛋白免疫印迹法检测大鼠软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17的蛋白水平。结果:与模型组比较,祛寒逐风颗粒组和阳性药组大鼠的机械性痛阈值增大,膝关节直径变小,血清中IL-1β、TNF-α和IL-6含量减少,组织中IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA水平下调,软骨损伤和纤维化缓解,软骨组织中p-p65、p65、p-IκBα、NLRP3、Caspase-1 p20、IL-1βp17蛋白表达下调。结论:祛寒逐风颗粒可能通过抑制NF-κB介导的NLRP3炎性小体活化显着改善KOA大鼠的炎症反应并缓解疼痛,对骨关节炎发挥治疗作用。     

Ghrelin对球囊损伤大鼠颈动脉后狭窄的影响及机制

目的:观察Ghrelin对球囊损伤大鼠颈动脉狭窄的干预作用,初步探讨其作用机制。方法:选择健康雄性SD大鼠30只,建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型,制模后随机分为假手术组、模型组、Ghrelin组,各为10只。腹腔注射给药30 d后取损伤侧颈总动脉,行天狼星红染色并测量管腔面积以判定血管腔狭窄程度;Westernblot检测血管壁Mfn-2蛋白表达。结果:(1)术后30 d,模型组血管内弹力板断裂,内膜及中膜尤其是中膜增生严重,管腔狭窄(46.53±9.78)%,Ghrelin组中膜增生及狭窄程度为(75.62±10.08)%组间比较,差异具有统计学意义(P0.05)(2)球囊扩张损伤颈动脉可明显下调Mfn-2蛋白表达(1.243±0.129)vs(0.634±0.097)。Ghrelin则能明显上调Mfn-2的表达(0.824±0.049 vs 0.634±0.097),组间比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:Ghrelin可抑制球囊损伤大鼠颈总动脉所致的管腔狭窄,同时能上调颈动脉平滑肌Mfn-2的表达,Ghrelin可能是通过上调Mfn-2的表达来抑制再狭窄的。     

活血通督汤抑制脊髓损伤后炎症反应的实验研究

目的:观察活血通督汤对大鼠脊髓损伤后NLRP3,IL-1β及IL-18表达的影响,探讨该方对脊髓损伤后炎症的作用及其机制。方法:将24只成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血通督汤组(各8只)。假手术组行椎板切除术(不损伤脊髓),模型组和活血通督汤组采用NYU脊髓损伤打击器复制脊髓损伤模型。造模成功后,假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,活血通督汤组给予活血通督汤灌胃,给药剂量为12.6 mL/(kg·d),术后第3天取材。采用免疫组化法检测NLRP3炎症体的表达,尼氏染色法观察神经细胞形态,ELISA法检测炎症因子IL-1β和IL-18的表达。结果:尼氏染色显示活血通督汤组大鼠神经细胞的形态结构优于模型组。免疫组化法显示:与假手术组比较,模型组NLRP3炎症体表达较高,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,活血通督汤组NLRP3表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。ELISA法检测结果显示模型组血清中IL-1β和IL-18表达较假手术组高,差异有统计学意义(P0.05);活血通督汤组IL-1β和IL-18低于模型组。结论:活血通督汤能抑制脊髓损伤后炎症反应,其机制可能与其抑制NLRP3的表达有关。     

中药复方对兔再狭窄模型内膜增生时相变化的影响

目的:探讨中药复方对新西兰白兔实验性血管成形术后再狭窄模型内膜增生时相变化的影响。方法:将新西兰白兔54只随机分为假手术组、模型组、中药组,采用1次球囊导管损伤方法制备兔颈动脉球囊损伤模型,于术后1W、2W、4W动脉造影取材,HE染色进行定量组织形态学分析;电镜观察超微结构。结果:损伤后1W时平滑肌细胞增殖向内膜迁移,内膜开始增生,2W时平滑肌细胞增殖达到高峰,4W时血管内膜增厚,以胶原纤维增生为主。与模型组相比,中药组在2W、4W时管腔面积明显增大、管腔的狭窄程度、内膜与中膜面积之和明显降低。结论:益气温阳、活血化瘀方可能通过抑制平滑肌细胞的增殖和胶原的合成,从而改善血管成形术后再狭窄。     

益气活血解毒方对球囊损伤后大鼠颈动脉早期血管重构和炎性因子的影响

目的:观察益气活血解毒方对血管损伤后血管重构指标及炎性因子的干预作用。方法:采用球囊导管损伤大鼠左侧颈总动脉模型,动物随机分为假手术组、模型组、他汀组和益气活血解毒组。用药后7天行HE染色,观察血管壁各层面积和管腔内径,放免法检测血清单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、C反应蛋白(CRP)以及转化生长因子-β(TGF-β)的浓度。结果:与假手术组比,模型组内膜轻度增生(P<0.01),外膜明显增厚,面积变大(P<0.05),MCP-1、CRP、TGF-β含量显著升高(P<0.01);与模型组比,益气活血解毒方明显减少内膜面积(P<0.05),降低CRP、TGF-β的含量(P<0.01);阿托伐他汀显著降低TGF-β的含量(P<0.05)。结论:球囊损伤大鼠颈总动脉早期,外膜增生明显,内膜有轻度增生,但管腔内径无显著变化,血管重构主要表现为正性重构,并伴随MCP-1、CRP、TGF-β含量的显著上升。益气活血解毒方抑制新生内膜生成,可能与降低CRP、TGF-β的含量有关。